肝外胆管癌组织中HBV DNA的检测及意义

1　材料和方法1 1　材料　 5 1例肝外胆管癌 (血清ＨＢｓＡｇ阳性率 3 9% )来自解放军总医院 ,常规石蜡包埋。引物 :5′ＧＣＣＴＴＧＧＧＴ ＧＧＣＴＴＧＧＧＧＣ3′ ,5′ＣＣＴＧＡＧＴＧＣＴＧＴＡＴＧＧＴＧＡ 3′。探针 :5′ＧＡＧＡＴＣＴＣＣＴＴＧＡＣＡＣＣＧＣＣＴＣＴＧＣ 3′,生物素标记 ,上海生物工程公司合成并标记。Ｓ Ａ/ＨＲＰ购自中山生物技术有限公司。原位ＰＣＲ扩增仪为美国ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公司产品 :ＧｅｎｅＡｍｐＳｙｓｔｅｍ 10 0 0。1 2　方法　切片脱蜡 ,蛋白酶Ｋ消化 ,加扩增反应液每片5 0 μｌ(Ｍｇ2 2…     

石蜡包埋肝组织中乙型肝炎病毒DNA的检测

石蜡包埋肝组织中乙型肝炎病毒ＤＮＡ的检测骆抗先，梁炽森，何海棠，侯金林，陈伟华，章廉检测肝内乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（ＨＢＶＤＮＡ），一般从组织匀浆中提取ＤＮＡ，用斑点或Ｓｏｕｔｈｅｒｍ吸印转移杂交。我们曾报告１０９例慢性无症状ＨＢＶ携带者（ＡｓＣ）...     

乙型肝炎患者血清HBV DNA 水平与肝功能关系分析

目的 分析乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝功能关系。方法 收集传染科同日测定HBV DNA水平和主要肝功能指标的274例乙肝患者的资料，比较各型乙肝患者HBV DNA水平和阳性率，比较HBV DNA阴性和阳性患者的肝功能指标，并分析HBV DNA与肝功能指标的相关性。结果 各型乙肝病例的DNA阳性率差异无显著性，病情轻重不同的患者、急性和慢性病例DNA阳性率差异也无显著性。各组HBV DNA水平差异无显著性。各组病例HBV DNA阳性和阴性者ALB、TBIL、PT差异均无显著性。各组病例HBV DNA水平与TBIL、PT无统计学相关性。但多种类型患者HBV DNA阳性者AIT水平高于阴性者，且HBV DNA水平与ALT有一定相关性，另外慢性重度患者HBV DNA水平与ALB有一定相关。结论 HBV复制水平与肝功能状态无明显相关性，但在部分患者HBV复制水平对肝功能可能有一定影响。     

原位杂交检测HBV相关性肾炎患者肾组织HBV DNA

目的 探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）对肾脏的致病作用。方法 应用地高辛素标记的ＨＢＶ ＤＮＡｘ＋ｃ段探针原位杂交,检测１３例ＨＢＶ相关性肾炎患者肾活检组织石蜡包理切片ＨＢＶ ＤＮＡ的存在状况。结果 ＨＢＶ ＤＮＡ阳性７例（５３．８％）。阳性信号主要见于肾小管上皮细胞和肾小球系膜细胞,其次是肾小球上皮细胞。呈核型或浆核型。其病理类型均为膜性肾病。结论 ＨＢＶ相关性膜性肾病患者肾组织内存在ＨＢＶ ＤＮＡ,     

基因芯片检测肝炎肝硬化患者肝组织中HBVDNA

目的 :研究病毒性肝炎基因芯片的制备 ,用肝炎基因诊断芯片 ,免疫组织化学法和原位分子杂交法 ,检测 99例乙型肝炎后肝硬化肝组织中 HBV DNA,比较各种方法优缺点。方法 :将 PCR扩增的 HBVDNA探针用点样仪点于玻片介质上 ,并经过点样处理后制备成基因芯片 ;收集肝炎后肝硬化肝组织标本 99份 ,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法检测 HBVDNA和 HBc Ag。结果 :5 3例 HBc Ag、HBVDNA阳性组织中基因芯片检测阳性 40例 ;HBc Ag阳性 2 2例中基因芯片检测阳性 6例 ;32例 HBc Ag HBVDNA阴性组织中基因芯片检测均阴性。结论 :肝炎基因诊断芯片可以检测肝组织中 HBVDNA,准确率可达 75 % ,假阳性率低。     

HBV侵犯外周血单个核细胞对干扰素-γ表达的影响

目的:探讨HBV侵犯外周血单个核细胞(PBMCs)对干扰素-γ(IFN-γ)表达和分泌水平的影响。方法:巢式PCR检测120例慢性HBV感染者PBMCs中HBVDNA;采用实时定量RT-PCR和ELISA法分别检测PBMCs中IFN-γmRNA的表达及血清IFN-γ的分泌水平。结果:120例慢性HBV感染者PBMCs中HBVDNA阳性率为62.5%,且HBeAg阳性组PBMCs中HBVDNA阳性率(80.0%)明显高于HBeAg阴性组(45.0%);慢性HBV感染者IFN-γmRNA的表达和分泌水平均低于健康对照组;慢性HBV感染者PBMCs中HBVDNA阳性组IFN-γmRNA的表达和分泌水平均明显低于HBVDNA阴性组;HBeAg阳性组IFN-γ表达和分泌水平均明显低于HBeAg阴性组。结论:慢性HBV感染者IFN-γ的表达和分泌水平与HBV侵犯PBMCs有关,亦与不同疾病状态相关。     

病毒性肝炎基因芯片检测肝炎肝硬化患者肝组织中HBV DNA的研究

目的:研究病毒性肝炎基因芯片的制备及其检测HBV DNA的准确性.方法:将PCR扩增的HBV DNA探针用点样仪点于玻片介质上,并经过点样处理后制备成基因芯片;收集肝炎后肝硬化肝组织标本99份,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法检测HBV DNA和HBcAg,比较各种方法的优缺点.结果: 53例HBcAg、HBV DNA阳性组织中基因芯片检测阳性40例; HBcAg阳性22例中基因芯片检测阳性6例; 32例HBcAg HBV DNA阴性组织中基因芯片检测均阴性.结论:肝炎基因诊断芯片可以检测肝组织中HBV DNA,准确率可达75%,假阳性率低.     

慢性乙肝患者血清及外周血单个核细胞HBV DNA的检测

乙型肝炎病毒 (HBV)因其对人类的危害重大而受到重视 ,慢性乙肝 (CHB)患者肝脏存在不同程度的炎症 ,有的甚至发展为肝硬变乃至肝癌 [1 ,2 ] 。笔者于 2 0 0 1年 2～ 9月期间 ,采用荧光定量 PCR(FQ - PCR)技术对 6 6例 CHB患者血清、外周血单个核细胞 (PBMC)的 HBV DNA含量进行检测 ,以探讨 HBV在 CHB患者血清及 PBMC的分布情况及意义。1　临床资料1.1　对象　我院临床确诊的住院及门诊 CHB患者共 6 6例 ,男性 38例 ,女性 2 8例 ,年龄 31± 10岁 (19～ 6 7岁 )。所有CHB患者均 HBs Ag(+) ,而甲型、丙型、丁型、戊型肝炎病…     

单细胞凝胶电泳法检测HBV患者外周血淋巴细胞DNA损伤

目的 探讨乙型肝炎病毒与DNA损伤的关系以及不同感染模式慢性乙型肝炎患者（大三阳和小三阳患者）DNA损伤情况.方法 应用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术检测对照组和不同感染模式慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞DNA的损伤情况,采用彗星分析软件对实验结果进行淋巴细胞损伤率、彗星尾长（Tail Extent）、彗星尾DNA百分含量（Tail %DNA）、彗星尾惯量（Tail Inertia）、Olive尾距（Olive Tail Moment）等指标进行分析.结果 经SCGE技术后得HBV感染与DNA损伤断裂关系有统计学意义（P〈0.05）;大小三阳组间DNA损伤断裂有统计学差异（P〈0.05）. 小三阳组经SCGE技术后所得彗星图像可见有少量彗星尾.大三阳组经SCGE技术后所得彗星图像可见有明显彗星尾.慢性乙型肝炎组外周血淋巴细胞DNA损伤与对照组比较彗星尾长、尾惯量在统计学上有显著性差异（P〈0.05）;不同感染模式的乙型肝炎外周血淋巴细胞DNA损伤比较,尾长、尾DNA百分含量和尾惯量在统计学上有统计学差异（P〈0.05）.结论 HBV感染可能造成外周血淋巴细胞DNA损伤,且不同感染模式的损伤情况不同.     

乙肝病毒血清标志物与DNA定量联合检测的临床应用价值

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）两对半抗原抗体系统、前S1蛋白（Pre-S1）和HBV脱氧核糖核酸（HBV-DNA）之间的关系及临床意义。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清标志物,用荧光定量PCR检测HBV-DNA。结果A组（HBsAg^＋HBeAg^＋抗HBc^＋）HBV-DNA、Pre-S1阳性率为98.63%、86.30%;B组（HBsAg^＋抗HBe＋抗HBc^＋）HBV-DNA、Pre-S1阳性率为48.37%、22.22%;C组（其它模式）HBV-DNA、Pre-S1阳性率为4.96%、0.83%。HBV-DNA定量结果A组显著高于B、C两组（P〈0.01）;B组显著高于C组（P〈0.05）。结论正确合理地分析HBV血清学指标出现的类型,与HBV-DNA的联合动态检测有助于临床诊断、疗效观察及预后判断。     

血清HBV DNA含量在乙型肝炎诊治中的临床价值

目的 :了解乙型肝炎 (乙肝 )患者血清HBVDNA含量在乙肝诊治中的临床价值。方法 :采用荧光定量PCR技术定量检测 13 9例乙肝患者血清中HBVDNA含量 ,比较不同病变程度患者血清中HBVDNA含量的差异 ,同时检测其病毒标志物和丙氨酸转氨酶 (ALT)水平并进行比较分析。结果 :急性乙肝 (AH)患者血清中HBVDNA含量〔(2 .14± 2 .96)拷贝·ml-1〕显著低于慢性乙肝 (CH)〔(5 .3 6± 2 .3 4)拷贝·ml-1〕和活动性肝炎肝硬化 (LC)患者〔(4 .96± 2 .3 3 )拷贝·ml-1〕 ;HBeAg阳性组患者血清中HBVDNA含量显著高于HBeAg阴性组 ,而且HBeAg、HBeAb阴性组仍可检出较高水平的HBVDNA ;血清HBVDNA含量与ALT无相关关系。结论 :血清HBVDNA含量与不同类型肝病和病毒标志物有一定相关性 ,与ALT无相关关系 ,对乙肝的诊治有很高的临床价值     

慢性乙型肝炎患者血清HBeAg、HBV DNA定量与肝组织炎症的相关性

目的探讨HBeAg阳性和阴性慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA定量与肝组织炎症的相关性。方法 150例慢性乙型肝炎患者分为HBeAg阳性83例,HBeAg阴性67例,对比分析两组血清HBV DNA定量与肝组织炎症分级。结果 HBeAg阳性组年龄、病程均显著小于HBeAg阴性组(P<0.05),HBeAg阳性组血清ALT水平及HBVDNA定量显著高于HBeAg阴性组(P<0.05)。HBeAg阳性CHB患者不同炎症分级血清HBV DNA定量范围及平均值之间差异有统计学意义(P<0.05),但经无相关性(P>0.05),HBeAg阴性CHB患者血清HBV DNA定量与肝组织炎症分级之间呈正相关(P<0.05)。结论 HBeAg阳性和阴性慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA定量与肝组织炎症特点存在差异,血清HBV DNA定量有助判断HBeAg阴性慢性乙型肝炎病变程度。     

外周血HBV cccDNA检测的临床应用

目的通过对乙型肝炎患者外周血单个核细胞及血浆中共价闭合环状DNA（cccDNA）的检测,初步探讨其外周血检测对乙型肝炎诊治的价值。方法将86例确诊为乙型肝炎患者根据病情分为3组,急性乙型肝炎（AHB1、慢性乙型肝炎（CHB）及HBsAg无症状携带者（ASC）组。采集外周血,分别检测ALT、AST、总胆红素（TBIL）、cccDNA、HBV—DNA。结果三组血浆cccDNA检测结果有显著性差异（P〈0．01）。单个核细胞cccDNA7个标本阳性,血浆cccDNA与HBV—DNA、ALT、AST、TBIL相关系数分别为0．817、0．402、0．450、0．221。结论血浆cccDNA在乙型肝炎患者的各个病程有显著性差异,单个核细胞cccDNA储存池确实存在但浓度较低难以检测。血浆cccDNA．与HBV—DNA、ALT、AST相关,但与TBIL无明显相关。     

乙型肝炎病毒滴度与血清标志物的关系

目的探讨乙型肝炎病毒的滴度与血清标志物及肝功能的关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和ELISA法同时检测420份血清的HBV-DNA和血清标志物(HBV-M),并用全自动生化分析仪测定其肝功能ALT,对结果进行分析。结果105例HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+组的血清HBV-DNA平均拷贝数为3.16×1010/m l,检出率为95.23%,显著高于其他组(P<0.01);HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+组ALT异常率为64.76%(68/105),显著高于HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+组ALT异常率36.96%(34/92)(P<0.01)。45例HBsAb+组血清HBV-DNA检出率为0,38例HBV-M全阴性组血清HBV-DNA检出率为7.89%。HBV-DNA阳性组ALT异常率为57.84%(107/185),显著高于HBV-DNA阴性组ALT异常率31.06%(73/235)(P<0.01)。结论定量PCR方法可以作为确认乙肝病毒感染不同状态的一种有效手段,血清标志物HBV-M阴性患者仍可有HBV-DNA阳性,HBV-DNA与HBV-M、肝功能同时检测,对乙肝的临床诊断、治疗方案的选择以及疗效判断有一定的指导意义。     

免疫阻断治疗对外周血单个核细胞感染HBV孕妇宫内感染率的影响

目的:探讨孕妇HBV感染外周血单个核细胞时,免疫阻断治疗对新生儿宫内感染率的影响。方法:HBsAg阳性孕妇34例,以套式PCR法测定治疗前外周血单个核细胞(PBMC)中HBVDNA,其中阳性14例(A组),阴性20例(B组),所有孕妇行乙肝免疫球蛋白少量多次肌注,测定新生儿血清HBsAg,血清HBVDNA,PBMC HBV-DNA。结果:A组新生儿宫内感染率为57.1%(8/14),B组新生儿宫内感染率为5%(1/20),两者比较有显著性差异(P<0.01)。结论:孕妇PBMC中HBVDNA阳性是新生儿宫内感染的高危因素,PBMC中HBVDNA是否阳性直接影响孕期免疫阻断治疗,降低宫内感染率的疗效。     

荧光定量PCR检测HBV DNA及其与Pre-S1和HBeAg关系探讨

目的探讨慢性乙肝患者HBVDNA与血清标志物前S1抗原(Pre-S1)和HBeAg的相互关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应技术(FluorescencequantitativePCR,FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对931份HBV-M不同阳性模式及35份HBV-M全阴模式血清进行HBVDNA及其标志物检测。结果在931例不同阳性模式乙肝患者中,HBeAg阳性总检出率为20.7%,Pre-S1抗原阳性总检出率为30.2%,HBVDNA阳性总检出率为45.3%。在422例HBVDNA(+)乙肝患者中,Pre-S1抗原阳性检出率为57.3%,HBeAg阳性检出率为44.1%。在281例Pre-S1(+)乙肝患者中,HBVDNA阳性符合率达86.1%,在Pre-S1(-)组HBVDNA阳性率仅为27.7%。结论HBVDNA检测是反映HBV复制最直接的分子生物学指标;Pre-S1抗原和HBeAg是反映HBV复制的血清学指标,Pre-S1抗原甚至比HBeAg更灵敏地反映HBV复制。