DNA指纹技术

ＤＮＡ指纹技术丁志山（杭州大学生物科学与技术系，３１００１２）ＤＮＡ指纹术是分于生物学各种新兴技术的一种，它融合了ＲＦＬＰ、ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转移等先进技术。用它可检测出大量ＤＮＡ位点的差异性，成为继ＲＦＬＰ后当今最先进的分子水平上的遗传标记系...     

DNA指纹图谱在乳酸菌分类鉴定中的应用

目的 探讨DNA指纹图谱在乳酸菌分类鉴定中的应用。方法 选用S23随机引物,对乳酸菌基因组DNA进行RAPD随机扩增,获得能够区分不同菌株的DNA指纹图谱,依据图谱DNA条带的多态性,对10株乳酸菌菌株进行分类与鉴定。结果 实验室保藏菌株LAP2、LAT、LAM、LAC和LAO之间的基因组DNA相似性达80%,亲缘关系最为相近,而LAB菌株与所有菌株的亲缘关系最远。结论 DNA指纹图谱技术与常规方法结合使用,将使乳酸菌的分类、鉴定更为准确、便捷。     

小小卫星DNA阳性克隆的鉴定及DNA指纹分析

提取四种近交系小鼠的肝脏ＤＮＡ,分别用ＨｉｎｆＩ和Ｈａｅ　Ⅲ酶切。用３３．１５和本课题组克隆的小鼠小卫星阳性克隆ＤＮＡ片断作探针,用［α－３２Ｐ］ｄＣＴＰ随机引物标记,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,获得了理想的小鼠ＤＮＡ指纹图谱。初步确定阳性克隆ＤＮＡ片断Ｖ２具有较好的多态性,可作为小鼠基因组小卫星探针,用于实验动物的遗传监测、基因连锁分析和小鼠遗传图谱的研究。     

DNA指纹技术新进展

DNA指纹技术从原理上可以分为两大类:即传统的以Southern杂交为基础的RFLP技术和以聚合酶链式反应(PCR)为基础的一系列分子标记技术。RFLP需要样品DNA的量较大,对微量被测样品无能为力。至于与PCR相结合的RAPD、AP-PCR和DAF等技术则由于引物相对较短,对实验条件非常敏感,每一轮实验都需要筛选最合适的反应体系,增加了实验周期和复杂度。近几年新出现的AFLP(Am-pilified Fragment Length Polymorphism)、LP-RAPD(Long Primer RAPD)和DALP(Direct     

DNA指纹图谱法及其应用

DNA指纹图谱法是利用卫星DNA作探针,探测不同生物的卫星区,产生相应的DNA指纹图谱的杂交方法。它是八十年代中期发展起来的最新技术。短暂几年,该法得到迅速发展和完善,并在法医学、人类遗传学以及鸟类和其它哺乳类的遗传研究中得到广泛应用。     

DNA指纹术的研究进展

ＤＮＡ指纹术的研究进展奇云一、ＤＮＡ指纹图的发现与发展遗传分析需要有遗传标记。遗传标记是指生物体的某些性状或物质,它们能够稳定地遗传且遗传方式简单,可用以反映生物个体或群体的特征。直到７０年代后期,利用的遗传标记主要为生物的各种外部表现性状、生理缺陷...     

大熊猫DNA指纹分析材料的初步研究

以圈养大熊猫４个家系,１３只个体的３１份粪便,尿液以及甲醛固定的睾丸组织等作材料,输出血液,被毛进行ＤＮＡ指纹分析,结果表明,同一个体的血液,被毛,粪便,尿液,以及甲醛固定的睾丸组织材料的ＤＮＡ指纹图谱完全一致。     

DNA杂交与DNA指纹技术

Southern印迹杂交和DNA指纹技术在分子生物学研究以及疾病的诊断、亲缘关系鉴定、犯罪分子确认等过程中发挥了重要作用。回顾了2种技术的发明、发展历程和在生命科学研究中的作用,并探讨了可能的发展方向,从中可以从一个侧面了解分子生物学的发展历程和体会科学家的智慧在科学技术发展中所起的重要作用。     

莲藕品种DNA指纹图谱的绘制

采用RAPD技术对14个莲藕品种进行遗传多态性分析,用5个Operon引物和80个SBS的RAPD引物进行筛选,从中选出来自SBS的RAPD-C13和RAPD-D15扩增出的8条多态性条带,绘制了14个品种的DNA指纹图谱,在该图谱中每个品种均有各自特异的DNA指纹。     

5个生姜品种的蛋白电泳指纹图谱研究

目的：研究5个生姜品种的鉴定。方法：利用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）指纹图谱分析、鉴别5个生姜品种。结果：5个样品的蛋白质PAGE指纹图谱具有一定差异。结论：PAGE指纹图谱可用于生姜品种鉴定与质量评价。     

梨不同DNA提取方法的效果研究

以7个梨品种为实验材料,比较分析了SDS法、CTAB法、SDSCTAB法、改良的CTAB法、高盐低pH值法、分步离心法对梨总DNA提取的效果。结果表明:利用以上6种方法提取的梨总DNA在纯度和量上有很大的差别。所得到的平均DNA量从大到小依次为:分步离心法、SDS法、SDSCTAB法、改良的CTAB法、CTAB法、高盐低pH值法。DNA提取纯度依次为分步离心法、SDSCTAB法、改良的CTAB法、高盐低pH值法、CTAB法、SDS法。RAPD和自交不亲和基因(S基因)特异性引物扩增实验结果都比较理想,但分步离心法和SDSCTAB法提取的DNA双酶切效果较好。分步离心法提取的梨总DNA更适用于后续的分子生物学实验操作。     

鸭梨及其变异类型的RAPD分析

鸭梨为梨属白梨系统优良资源,生产中其变异类型较多。本文首次对鸭梨及其9个鸭梨变异类型进行RAPD分析,并初步筛选出3个多态性引物即S28、S32、S176。研究发现:芽变品种垂枝鸭梨增加了1条特异带(S32-600)。在芽变品种魏县巨鸭梨、甜鸭梨、垂枝鸭梨的扩增产物中均少1条特异带(S28-400)。魏县巨鸭梨扩增产物中缺少2条特异性条带(S176-900和S176-1150)和阎庄自花结实鸭梨缺少1条特异性条带(S176-1150)。可见魏县巨鸭梨、甜鸭梨、垂枝鸭梨与阎庄自花与其他类型能区分开。     

福建栽培大豆品种RAPD标记多样性分析

利用RAPD分子标记技术对福建18份栽培大豆品种遗传多样性进行研究.结果表明,12个引物共扩增出91条带,其中多态条带65条,多态性程度为71.43%.D=0.62时,聚类分析结果可以将供试材料分为3个大类群,即菜用大豆品种、杂交育成品种和地方品种、有半野生血缘的品种各聚成1类,揭示了福建省栽培大豆品种间的亲缘关系,同时还反映出品种间关系与地理起源有一定的相关.     

白梨和砂梨S基因型确定及S34新基因的分离

梨是配子体型自交不亲和植物,确定不同品种的S基因型是科学杂交授粉及提高梨产量和品质的基础。本文根据砂梨S1-9等位基因一级结构特征,设计特异引物PF和PR,以白梨（Pyrus bretschneideri）种鹅梨（Pyrus bretschneideri‘Eli’）和砂梨（Pyrus pyrifolia）品种博多青（Pyrus pyrifolia‘Hakataao’）的叶片基因组DNA为模板,通过PCR·RFLP系统检测、克隆测序以及生物信息学分析,分离鉴定了它们的片段大小相似的2条S等位基因,从中获得1条新的S基因,命名为S34-RNase基因,并确定了这2个梨品种的S基因型,分别为鹅梨S13S34和博多青S22S34。     

白梨和砂梨S基因型确定及S34新基因的分离

梨是配子体型自交不亲和植物, 确定不同品种的S基因型是科学杂交授粉及提高梨产量和品质的基础。本文根据砂梨S1-9等位基因一级结构特征, 设计特异引物PF和PR, 以白梨(Pyrus bretschneideri)品种鹅梨(Pyrus bretschneideri ‘El i’) 和砂梨(Pyrus pyrifolia)品种博多青(Pyrus pyri folia ‘Hakataao’) 的叶片基因组DNA为模板, 通过 PCR-RFLP系统检测、克隆测 序以及生物信息学分析, 分离鉴定了它们的片段大小相似的2条S等位基因, 从中获得1条新的S基因, 命名为S34-RNase基因, 并确定了这2个梨品种的S基因型, 分别为鹅梨S13S34和博多青S22S34。     

甘蓝品种'争春'和'寒光2号'的DNA指纹图谱构建

用SDS法提取甘蓝（Brassfca oleraceavat．capitata）品种‘争春’、‘寒光2号’及其各自亲本的基因组DNA,通过SRAP、RAPD两种分子标记方法,构建其DNA指纹图谱,用于种子纯度鉴定。利用30对SRAP引物组合和200个RAPD随机引物,以各品种及其亲本的基因组DNA为模板组进行筛选,结果显示：多数SRAP引物组合对模板组的扩增带型一致,少数组合扩增出差异,但未能找到具有互补差异的引物组合;通过RAPD标记方法筛选出能鉴定2个品种纯度的引物分别为S42、S103、S193和S42、S89、S151,其中引物S42对2组材料均能扩增出特异的RAPD指纹图谱,并将RAPD指纹图谱转变为相应的数字指纹。     

用形态与分子标记研究石刁柏种质资源遗传多样性

采用RAPD分子标记结合形态学指标对43份石刁柏种质资源的遗传多样性进行评价。田间试验相关分析表明,茎粗、林高、茎数与产量呈极显著正相关,三者是影响石刁柏产量的主要因素。茎粗、株高、产量与一级笋率呈显著正相关。花梗全紫的石刁柏一级笋率相对较高。根据形态学指标将材料分为7大类。在分子标记中,从60个随机引物中筛选出12个能产生清晰、稳定可重复DNA片段的引物,对供试材料进行RAPD扩增。在供试材料中共获得183条扩增产物,产生的DNA片段大小主要分布在200～1600bp之间,其中170条具有遗传多态性,约占总数的92．92％。各基因型间的Nei氏相似性系数分布在0．407～0．931之间,平均相似性为0．765,可见石刁柏各基因型之间的遗传多态性较为丰富。经UPGMA方法建立的树状图,可将参试品种划分为8大类群。形态学指标与遗传多样性指标的相关分析结果显示：分枝节间距、花梗颜色、每簇拟叶数、最长分枝长度、茎粗5个形态学指标与遗传多样性指标之间存在一定的相关性。     

Identification of strain specific markers in Bacillus anthracis by random amplification of polymorphic DNA

Classification and differentiation of Bacillus anthracis isolates by genetic markers play an important role in anthrax research. We used a PCR based method--Random Amplification of Polymorphic DNA (RAPD)--to identify genetic markers in B. anthracis strains. Twenty-five differential genetic markers were identified which divided the strains into five different groups. Three selected RAPD-markers were cloned and sequenced. The five RAPD-derived genotypes could be defined by integration of these three markers. This system offers a simple non-expensive method to classify B. anthracis strains in laboratories involved in the research of this bacterium.