aFGF对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的 探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对β淀粉样肽25-35(Aβ25-35)诱导凋亡PC12细胞凋亡的保护作用.方法 采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst 332582-PI荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR方法 检测PC12细胞Bax和Bcl-2基因mRNA的表达,Western印迹检测PC12细胞Bax和Bcl-2蛋白表达.结果 不同剂量(10、20、30 mg/L)aFGF预处理PC12细胞1 h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡,提高PC12细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂,降低Bax基因mRNA表达及蛋白表达,增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达.结论 aFGF可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因Bax和上调抗凋亡基因Bcl-2表达有关.     

原花青素对β-淀粉样肽(25-35)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的 探讨原花青素(pmcyanidins，PC)对β-淀粉样肽(25-35)[βamyloid pepfide-(25-35)，Aβ25-35]诱导PC12细胞凋亡的保护作用。方法 采用MTT比色法分析细胞存活率，Hoechst 33258-PI荧光染色法检测凋亡，流式细胞仪检测分析细胞凋亡率变化情况。结果 不同剂量PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的PC12细胞凋亡，提高细胞的存活率，减少Aβ25-35引起的核固缩、凝聚和碎裂，降低细胞凋亡率。结论 PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用。     

原花青素对Aβ25-35诱导PC12细胞周期紊乱的保护作用

目的 观察原花青素(PAC)对β-淀粉样肽(25-35) (Aβ25-35)诱导体外血清饥饿培养的PC12细胞周期紊乱与凋亡的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法 采用血清饥饿培养使PC12细胞同步于G0期,PAC预处理后加入Aβ25-35,通过流式细胞仪分析细胞周期与凋亡,RT-PCR和Western印迹从mRNA及蛋白水平检测p21、Cyclin D1、pRb和E2F1基因表达的变化.结果 与Aβ25-35诱导组比较,PAC保护组S期细胞百分率明显减少,凋亡率明显降低(P＜0.05);p21 mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05),Cyclin D1、E2F1 mRNA和Cyclin D1、pRb蛋白表达降低(P＜0.05).结论 PAC对Aβ25-35诱导的PC12细胞周期紊乱与凋亡起保护作用,其机制可能与上调p21表达,下调Cyclin D1、pRb、E2F1表达有关.     

琐琐葡萄多糖对β淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的影响

目的探讨琐琐葡萄多糖(VTP)对β淀粉样蛋白(Aβ25~35)诱导PC12细胞凋亡的影响及作用机制。方法 Aβ25~35诱导PC12细胞建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,VTP(20、40、80 mg/L)作用于细胞模型,CCK-8法检测各组细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Real-time PCR检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达。结果 VTP可提高PC12细胞活性,降低细胞凋亡率,增强Bcl-2 mRNA表达,抑制Bax mRNA表达。结论VTP对Aβ25~35诱导的PC12细胞凋亡具有明显的保护作用,其机制可能是通过增强Bcl-2 mRNA表达、降低Bax mRNA表达,抑制细胞凋亡。     

雌激素减轻Aβ25-35所致PC12细胞毒活性的机制探讨

目的 观察1713-雌激素对Aβ25-35所致PC12细胞毒活性影响的可能机制。方法 用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术，观察雌激素对Ap25-35损伤的PC12细胞的Bcl-2 mRNA及Bax mRNA表达的影响。结果 用Aβ25琊处理PC12细胞24h，与对照组相比，Bcl-2 mRNA的表达水平降低，Bax mRNA的表达水平升高；而Aβ25-35加17β-雌激素引起Bcl-2 mRNA的表达水平较单纯Aβ处理组增高，Bax mRNA的表达水平较单纯Aβ处理组降低。结论 17β-雌激素在Aβ25-35所致PCl2细胞毒性的神经保护作用中，其机制是通过上调Bcl-2基因的表达与下调Bax基因的表达来实现的。     

促红细胞生成素对Aβ25～35诱导神经细胞损伤保护作用的体外实验

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对β淀粉样肽(Aβ)诱导神经细胞毒性的保护作用.方法 取对数生长期的PC12细胞分为3组:空白对照组、模型组、EPO预处理组.细胞培养24 h后,EPO预处理组加入终浓度为25 U/ml的EPO预处理8 h,再与模型组同时加入终浓度为10 μmol/L Aβ25～35,继续培养48 h收集细胞检测指标.采用MTT比色法分析细胞存活率,碘化丙啶(PI)流式细胞仪检测凋亡,免疫组化检测细胞色素C(CytC)和Bcl-2表达.结果 MTT显示EPO处理组细胞存活率明显高于模型组(P<0.05),并且中剂量存活率最高;凋亡率较模型组明显下降(P<0.05);免疫组化显示:EPO处理组Bcl-2阳性表达细胞较Aβ25～35处理组明显增加(P<0.05),而EPO处理组CytC阳性染色细胞较模型组明显减少(P<0.05).结论 EPO可以提高细胞存活率,降低凋亡率,对Aβ诱导神经细胞毒性起保护作用,其机制主要通过上调Bcl-2的表达,从而抑制CytC释放,阻止细胞凋亡,促进PC12细胞存活.     

β-淀粉样肽(25-35)对PC12细胞Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F1基因表达的影响

目的 观察β-淀粉样肽(25-35)[β-amyloid peptide (25-35),Aβ25-35]对体外血清饥饿培养PC12细胞的Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F1基因表达的影响.方法 用终浓度为25 μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,流式细胞仪检测分析细胞周期的改变,通过RT-PCR检测Cyclin D1、CDK4、E2F1基因mRNA表达变化,Western印迹检测Cyclin D1、CDK4、pRb蛋白表达的变化.结果 流式细胞仪分析表明血清饥饿培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25 μmol/L Aβ25-35诱导组8、16、24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P＜0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);Aβ25-35浓度诱导血清饥饿培养的PC12细胞0～20 h,Cyclin D1、CDK4、pRb 、E2F1 mRNA和蛋白表达增高.结论 Aβ25-35诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与增加Cyclin D1、CDK4、pRb 、E2F1 mRNA和蛋白的表达有关.     

核转录因子-κB对β-淀粉样肽25-35诱导下PC12细胞周期的影响

目的 探讨核转录因子κB(NF-κB)在β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)肽段诱导的PC12细胞周期异常中的机制.方法 应用流式细胞仪检测技术及Western印迹方法,在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中检测NF-κB的活性和细胞周期相关蛋白周期蛋白A(cyclin A)、周期蛋白D1(cyclin D1)、周期蛋白E(cyclin E)、周期蛋白依赖性激酶2(CKD2)、周期蛋白依赖性激酶4(CKD4)、周期蛋白依赖性激酶6(CKD6)表达量的变化.分别将PC12同步化于G0期和S期,再检测Aβ25-35诱导对上述指标的影响.抑制NF-κB活性后,进一步检测上述细胞周期相关蛋白在Aβ25-35诱导下的变化.结果 Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中NF-κB活性增加(P＜0.05),同时细胞周期相关蛋白量升高;细胞同步化于G0期,Aβ25-35处理PC12细胞,细胞凋亡率下降,NF-κB活性的增加和细胞周期相关蛋白量升高均受抑制;而同步化于S期,则细胞凋亡率、NF-κB活性的增加和细胞周期相关蛋白量升高均无显著性变化;Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中,抑制NF-κB活性则会引起细胞周期相关蛋白表达受抑制.结论 NF-κB主导了Aβ25-35诱导PC12细胞周期的异常变化,异常发生在G0期到G1期的过渡以及G1期到S期过渡,而不是S期到G2期以及G2期到M期的过渡.     

玉郎伞多糖对Aβ25-35所致PC12细胞损伤细胞内钙离子浓度的影响

目的观察Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡损伤模型胞内钙浓度的变化及YLSP的影响。方法采用Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡损伤模型,石杉碱甲作为对照药,给予YLSP预处理后,加入Flu-3/AM,用流式细胞仪（FCM）测定各组细胞的平均荧光强度。结果各组PC12细胞内钙离子含量存在显著性差异（F=14.051,P〈0.01）,其中,Aβ25-35作用PC12细胞后,PC12细胞内钙离子含量显著升高（P〈0.01）,经YLSP处理后,PC12细胞内钙离子含量较模型组细胞显著降低（P〈0.01）,其中,YLSP高剂量组的PC12细胞内钙离子含量显著低于石杉碱甲组（P〈0.01）。结论 YLSP能对抗Aβ引起的细胞内钙离子浓度升高,防止钙超载的发生。     

原花青素对β-淀粉样肽（25—35）诱导PC12细胞bax和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素（Procyanidins，PC）对β-淀粉样肽（25-35）（hi325弗）诱导凋亡PCI2细胞bax和bcl-2基因表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率，Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变，RT—PCR检测bax和bcl-2基因mRNA表达，Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量PC预处理PC12细胞1h，可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡，增加细胞存活率，减少Aβ25-35引起的细胞核固缩、核碎裂，降低baxmRNA及Bax蛋白表达，增加bcl-2mRNA及Bcl-2蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35诱导的PCI2细胞凋亡，其机制可能与下调凋亡基因bax和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。     

银杏叶提取物对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的研究银杏叶提取物（Extracts of ginkgo biloba leaves,EGB）对β淀粉样蛋白（Aβ25-35）诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法用Aβ25-35处理诱导体外培养的PC12细胞损伤,并用EGB进行保护,显微观察细胞形态的改变,LDHH法和MTT法检测细胞膜的损伤情况.结果EGB处理组细胞数比损伤组显著增多,受损变圆的细胞数较少,细胞形态明显改善,EGB处理组上清液LDH活性显著低于Aβ25-35处理组（P＜0.01）,MTT值显著高于Aβ25-35处理组（P＜0.01）.结论EGB对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤具有显著的保护作用.     

刺五加皂苷对Aβ_(25~35)诱发PC12细胞毒性及细胞凋亡的保护作用

目的研究刺五加皂苷对Aβ25³5处理PC12细胞毒性及细胞凋亡的保护作用。方法将神经细胞生长因子(NGF)诱导的PC12细胞用10 mol/L Aβ2535处理PC12细胞毒性及细胞凋亡的保护作用。方法将神经细胞生长因子(NGF)诱导的PC12细胞用10 mol/L Aβ25³5处理,建立体外老年性痴呆模型。采用线粒体琥珀酸脱氢酶活性测定、乳酸脱氢酶(LDH)测定法、丙二醛(MDA)含量检测法、流式细胞仪检测法、Western印迹方法检测活化的Caspase-3蛋白水平。结果 Aβ2535处理,建立体外老年性痴呆模型。采用线粒体琥珀酸脱氢酶活性测定、乳酸脱氢酶(LDH)测定法、丙二醛(MDA)含量检测法、流式细胞仪检测法、Western印迹方法检测活化的Caspase-3蛋白水平。结果 Aβ25³5损伤组与对照组比较噻唑蓝(MTT)代谢率下降,LDH释放量增多(P<0.05或P<0.01),MDA含量增高,细胞凋亡率明显增高,活化的Caspase-3蛋白水平明显增高;刺五加皂苷组可不同程度地保护Aβ2535损伤组与对照组比较噻唑蓝(MTT)代谢率下降,LDH释放量增多(P<0.05或P<0.01),MDA含量增高,细胞凋亡率明显增高,活化的Caspase-3蛋白水平明显增高;刺五加皂苷组可不同程度地保护Aβ25³5的细胞毒性及细胞凋亡。结论刺五加皂苷对Aβ2535的细胞毒性及细胞凋亡。结论刺五加皂苷对Aβ25³5处理PC12细胞毒性及细胞凋亡有较好的保护作用。     

二苯乙烯苷对Aβ1-42诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对Aβ1-42诱导损伤的PC12细胞生长、分化的保护作用。方法实验分为对照组、Aβ1-42组和TSG高(10μmol/L)、中(1μmol/L)、低(0.1μmol/L)剂量组,测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,采用硫代巴比妥酸比色法测定丙二醛(MDA),黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,噻唑兰(MTT)法检测细胞活力,免疫组化检测bcl-2表达。结果 TSG能明显减少Aβ1-42引起细胞损伤。TSG处理后能明显提高细胞活力,降低LDH漏出和细胞凋亡率。结论 TSG能明显减少Aβ1-42对PC12细胞损伤,可能与抗氧化、抗自由基和脂质过氧化有关。     

褪黑素对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤的保护作用

目的研究褪黑素（MT）对β淀粉样蛋白片段（AB25书）诱发PC12细胞损伤的神经保护作用。方法将培养的PC12细胞分为三组：正常对照组，Aβ损伤组和MT保护组。Aβ损伤组用Aβ25-35处理细胞，MT保护组在用AB25-35处理前2h加入褪黑素。使用细胞形态学方法、LDH法、MTT法及Western印迹法观察MT的神经保护作用。结果形态学观察发现MT保护组细胞数显著比Aβ损伤组多，受损变圆的细胞数较少。MT保护组LDH活性显著低于损伤组（P〈0．01）；OD值显著高于损伤组（P〈0．01）。Western印迹结果表明Aβ25-35损伤组中Bcl-2的表达比正常对照组低；MT保护组Bcl-2的表达比Aβ25-35损伤组升高。结论褪黑素对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤有保护作用。     

亲环素A保护PC12细胞对抗β-淀粉样蛋白诱导的氧化应激损伤和凋亡

目的 探讨亲环素A(CyPA)对Aβ25 ～35诱导PC12细胞氧化应激损伤和凋亡的影响.方法 用不同浓度的CyPA预处理PC12细胞,再加入Aβ25 ～35继续培养,采用MTT法分析细胞存活率.用10 nmoL/LCyPA预处理PC12细胞,再加入Aβ25 ～35继续培养,碘化丙啶(PI)单染后流式细胞仪进行凋亡的定量检测;罗丹明123(Rd 123)染色流式细胞仪检测线粒体跨膜电位;二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色,倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量.结果 CyPA可提高细胞的存活率,减少Aβ25 ～35引起的细胞凋亡,CyPA还可以改善由Aβ25 ～35引起的线粒体跨膜电位的下降,降低Aβ25 ～ 35诱导产生的大量ROS.结论CyPA可对抗Aβ25 ～ 35对PC12细胞的毒性作用,并通过增加线粒体跨膜电位和降低ROS产生从而减少细胞凋亡.     

JNK信号转导通路在β-淀粉样蛋白25-35诱导PC12细胞凋亡中的作用机制

目的研究β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡的机制以及c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125的保护作用，探讨在Aβ25-35细胞毒性中JNK—c-Jun信号转导通路的可能作用机制。方法在培养的PC12细胞中加入Aβ25-35共孵育，用磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V)方法和流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡，用免疫印迹法检测不同时间点的JNK及c-Jun蛋白活性。结果PC12细胞经过Aβ25-35处理后发生凋亡，呈时间依赖性细胞生存率下降，免疫学方法检测显示细胞在Aβ25-35处理早期出现磷酸化JNK和磷酸化c-Jun的表达增高，且这一过程可被SP600125抑制。流式细胞仪检测显示在使用SP600125后，细胞生存率上升，差异具有统计学意义。结论体外PC12细胞培养显示Aβ25-35可诱导细胞凋亡，SP600125对Aβ25-35的细胞毒性具有保护作用，JNK—c-Jun信号转导通路可能参与了上述细胞毒作用机制。     

Carnosine对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤的神经保护作用

目的　研究 Carnosine对 β淀粉样蛋白片段 (Aβ2 5- 3 5)诱发 PC1 2细胞损伤的神经保护作用。方法　将培养的 PC1 2细胞分为三组 :正常对照组、损伤组和保护组。损伤组用 Aβ2 5- 3 5处理细胞 ,保护组在用 Aβ2 5- 3 5处理前 30 min加入 Carnosine。使用细胞形态学方法、LDH法、MTT法观察 Carnosine的神经保护作用。结果　通过形态学方法 ,保护组细胞数显著比损伤组多 ,受损变圆的细胞数较少。保护组 LDH活性显著少于损伤组(P<0 .0 1 ) ;MTT显著高于损伤组 (P<0 .0 1 )。结论　 Carnosine对 Aβ2 5- 3 5诱发 PC1 2细胞损伤有显著的保护作用。     

黑逍遥散含药血清对Aβ_(25～35)诱导阿尔茨海默病细胞模型的影响

目的观察黑逍遥散含药血清对由Aβ25~35片段毒性诱导的PC12细胞阿尔茨海默病(AD)模型凋亡的影响。方法利用细胞计数、MTT及流式细胞术测定观察黑逍遥散含药血清处理由Aβ片段诱导的PC12细胞活力、形态学及细胞凋亡的改变。结果黑逍遥散含药血清能增加Aβ25~35导致的升高PC12细胞的活力,降低LDH释放,流式细胞术分析显示,黑逍遥散含药血清能降低增加细胞凋亡率。结论黑逍遥散含药血清能升高PC12细胞的活力,降低LDH释放,对Aβ25~35诱导的PC12细胞凋亡有明显的保护作用。     

知母总皂苷对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的探讨知母总皂苷对于β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法采用10、20、30、40μmol/L Aβ25～35分别刺激PC12细胞24、36、48、72 h,通过MTT法测定出最佳的刺激浓度为20μmol/L和时间为48 h用于后期的实验。用0.05、0.25、0.5、2.5、5、10、15、20 mg/L的知母总皂苷和20μmol/L Aβ25～35共同作用PC12细胞48 h,MTT测定出其细胞活力的改变,选定最佳知母总皂苷浓度0.5 mg/L用于实验。实验分为:空白组,正常组,模型组,知母治疗组。通过倒置相差显微镜观察各组细胞的形态和成长情况,MTT比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞凋亡的形态变化。结果 MTT法显示不同时间,不同浓度的Aβ25～35处理细胞后细胞均有不同程度的凋亡,并成剂量依赖关系。不同浓度的Aβ25～35其最大抑制率均在48 h。用不同浓度的知母总皂苷预保护PC12细胞,可抑制Aβ25～35诱导的凋亡,0.5 mg/L效果最为显著,与模型组有显著性差异(P<0.01),流式细胞仪检测凋亡率和荧光显微镜观察均能显著抑制Aβ25～35对于PC12细胞的凋亡的作用(P<0.01)。结论 Aβ25～35能诱导PC12细胞凋亡,知母总皂苷对其诱导的细胞凋亡具有明显的保护作用。     

氯通道阻滞剂在β_(25-35)淀粉样多肽诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨氯通道阻滞剂(DIDS)对β25-35淀粉样多肽(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的影响。方法PC12细胞按实验不同分为对照组(DMEM培养液)、Aβ25-35组(Aβ25-35 40μmol/L)、DIDS组(Aβ25-35 40μmol/L+DIDS 50μmol/L)。MTT法测细胞存活率,Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态学改变,流式细胞技术测细胞凋亡率。结果Aβ25-35组与对照组和DIDS组比较,PC12细胞的存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显增高(P<0.05),不同DIDS浓度依赖性升高PC12细胞存活率,DIDS 50μmol/L能显著下调Aβ25-35诱导的细胞凋亡(P<0.05)。结论DIDS对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤有保护作用。