鹰嘴豆芽素A通过调节TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻卵清蛋白诱导哮喘大鼠的气道炎症

[目的] 探讨鹰嘴豆芽素A（BCA）通过调节Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）/NOD样受体蛋白3（NLRP3）信号通路对卵清蛋白（OVA）诱导哮喘大鼠气道炎症的影响。[方法] 将SD大鼠分为对照（CK）组、模型（Model）组、低剂量BCA组（BCA-L组,25 mg/kg）、高剂量BCA组（BCA-H组,100 mg/kg）、地塞米松阳性对照组（Dex组,1 mg/kg）、BCA-H+LPS（TLR4激活剂）组（100 mg/kg+0.1 mg/kg）,每组12只。除CK组,其他组均通过OVA诱导构建哮喘大鼠模型。建模成功24 h后,进行给药处理,给药每日1次,持续10 d。利用动物肺功能测定仪检测大鼠吸气阻力、呼气阻力、肺通气顺应性的变化;吉姆萨（Giemsa）染色检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数、淋巴细胞数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数;酶联免疫吸附剂测定（ELISA）检测BALF中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、干扰素-γ（IFN-γ）水平;苏木精-伊红染色法（HE）染色检测大鼠肺组织病理变化;免疫组化检测大鼠肺组织中嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）表达;蛋白质印迹法（Western Blot）检测大鼠肺组织中TLR4、p-NF-κB p65、NLRP3蛋白表达。[结果] 与CK组比较,Model组大鼠吸气阻力、呼气阻力、BALF中细胞总数、淋巴细胞数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数、TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平升高,肺组织中的支气管及血管周围炎性细胞浸润明显,肺组织中Eotaxin阳性染色面积百分数、TLR4、p-NF-κB p65、NLRP3蛋白表达升高,肺通气顺应性降低（P<0.05）;与Model组比较,BCA-L组、BCA-H组、Dex组对应指标变化趋势与上述相反（P<0.05）;LPS减弱了高剂量BCA对哮喘大鼠气道炎症的改善作用。[结论] BCA可能通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻OVA诱导哮喘大鼠的气道炎症。     

化州柚不同栽培品种总黄酮及柚皮苷含量的比较研究

目的通过对化州柚不同栽培品种总黄酮和柚皮苷的含量考察,分析比较不同品种间的质量差异,为进一步筛选优良品种,实现该药材资源的合理应用和规范化种植奠定坚实基础。方法以柚皮苷为对照品,利用紫外分光光度法测定总黄酮含量,HPLC法测定柚皮苷含量。结果大茶岭和凤尾中总黄酮分别为19.24%,18.06%;柚皮苷的含量分别为11.72%,12.38%,均明显高于其他栽培品种。结论不同栽培品种的化州柚中总黄酮和柚皮苷的含量均不相同,大茶岭和凤尾这两个品种的品质可能较其他品种好。     

基于NF-κB通路的芒果苷干预脂多糖诱导的细胞炎症作用机制研究

目的研究芒果苷对小鼠巨噬细胞RAW 264.7的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞炎症模型。实验分四步:(1)细胞存活率实验分5组,即:空白组、LPS组、LPS+不同浓度(50、100、150μg/mL)芒果苷组。MTT法检测细胞存活率。(2)一氧化氮(NO)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白介素6(IL-6)分泌实验分6组,即:空白组、LPS组、LPS和不同浓度芒果苷(50、100、150μg/mL)组、LPS+BAY 11-7082[核因子κB(NF-κB)抑制剂]组。Griess法检测NO分泌量,ELISA法检测IL-1β、TNF-α及IL-6分泌量。(3)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与环氧化酶-2(COX-2)mRNA及蛋白表达实验分组同细胞存活率实验。实时荧光定量PCR检测iNOS及COX-2 mRNA水平变化,Western blot检测iNOS及COX-2蛋白表达水平。(4)细胞质、细胞核中NF-κB表达实验分3组,即:空白组、LPS组、LPS+150μg/mL(终末浓度)芒果苷共处理组, Western blot检测细胞质、细胞核中NF-κB p65蛋白表达量。结果 (1)与空白组比较,LPS组显著降低RAW264.7细胞存活率(P0.05);与LPS组比较,50～150μg/mL芒果苷预处理对RAW264.7细胞增殖无显著影响(P0.05)。(2)与空白组比较,LPS组NO、IL-1β、TNF-α、IL-6分泌量显著升高(P0.05);与LPS组比较,除50μg/mL芒果苷预处理组NO、TNF-α分泌量无显著变化外(P0.05),其余各组NO、IL-1β、TNF-α、IL-6分泌量均显著降低(P0.05)。(3)与空白组比较,LPS组iNOS、COX-2 mRNA及蛋白表达量均显著升高(P0.05);与LPS组比较,50～150μg/mL芒果苷预处理组iNOS、COX-2 mRNA及蛋白表达显著下降(P0.05)。(4)与空白组比较,LPS组细胞质中NF-κB p65蛋白量减少,细胞核中则增多(P0.05);与LPS组比较,150μg/mL芒果苷预处理组细胞质中NF-κB p65蛋白量升高,细胞核中蛋白量减少(P0.05)。结论芒果苷可能通过抑制NF-κB信号通路,而抑制iNOS、COX-2表达及相关炎症因子的分泌,干预LPS诱导的RAW264.7细胞炎症。     

柚皮苷通过Fas膜受体通路调控髓核细胞凋亡的机制研究

[目的]观察中药骨碎补单体柚皮苷(Naringin)对人退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响,为治疗椎间盘退变提供理论依据。[方法]对体外培养的人退变椎间盘髓核细胞利用番红O染色和甲苯胺蓝染色进行鉴定,并对P3代细胞分别用柚皮苷0 g/m L(对照组)、柚皮苷20 g/m L、柚皮苷40 g/m L、柚皮苷80 g/m L的培养基培养人髓核细胞48 h,噻唑蓝(MTT)法选择其抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡的最佳浓度,并用流式细胞仪测定各组细胞凋亡率。实时定量聚合酶链锁反应(q RT-PCR)检测Fas、Fas L、Caspase-8基因表达。蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测Fas蛋白表达。[结果]MTT法和流式细胞检测均测定20 g/m L柚皮苷为抑制髓核细胞凋亡的最佳浓度(P0.05)。q RT-PCR检测20 g/m L柚皮苷能够抑制Fas、Fas L、Caspase-8 m RNA表达(P0.05)。Western-blot检测显示20 g/m L柚皮苷能够抑制Fas、Fas L、Caspase-8蛋白表达。[结论]柚皮苷可能通过调控Fas/Fasl死亡受体凋亡通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡。     

枳壳中柚皮苷提取工艺的研究

目的:研究枳壳中柚皮苷的提取工艺。方法:采用高效液相色谱法测定柚皮苷的含量,以柚皮苷含量为评价指标,以正交实验设计优选枳最佳提取工艺。结果:枳壳中柚皮苷的最佳提取条件为:用10倍量的90%乙醇提取3次,每次1 h。结论:该方法简单,数据可靠,可作为枳壳中柚皮苷提取的最佳工艺。     

柚皮苷对便秘小鼠排便的影响及作用机制初探

目的观察柚皮苷对便秘模型小鼠排便及小肠推进运动的影响。方法采用一次性灌胃复方地芬诺酯片(DC)10mg·kg-1制备小鼠便秘模型,一次性灌胃给予柚皮苷40,80 mg·kg-1,观察并记录给药后6 h内小鼠首次排黑便时间、排黑便粒数、粪便湿重及其对小肠推进运动的影响。结果柚皮苷40,80 mg·kg-1剂量组可缩短DC小鼠首次排黑便时间、增加排黑便粒数和粪便湿重、促进DC小鼠小肠推进率,与模型组比较,有显著性差异(P<0.01)。结论柚皮苷对便秘模型小鼠排便有正向调节作用,其作用机制可能与促进小肠运动有关。     

芒果苷对慢性炎症MAPK信号通路的影响

目的:探讨芒果苷调控MAPK信号通路而抑制脂多糖(LPS)诱导慢性炎症的机制.方法:60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药泼尼松5 mg·kg-1·d-1组与芒果苷200,100,50 mg·kg-1·d-1组.以LPS间断尾静脉注射建立慢性炎症模型,进行大鼠全血白细胞计数,ELISA测定血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1);RT-PCR检测白细胞MAPK信号通路p8,ERK,JNK基因表达.结果:与模型组比较,芒果苷200 mg·kg-1组全血白细胞总数与血清TNF-α,IL-6,sICAM-1水平明显降低(P＜0.05),白细胞ERK,JNK基因表达下调(P＜0.05),p38基因表达无统计学差异.结论:芒果苷显著抑制LPS诱导慢性炎症的作用机制与其下调MAPK信号通路中ERK,JNK基因表达而降低炎症因子水平有关.     

柚皮苷对豚鼠离体气管平滑肌作用的机制研究

目的考察柚皮苷对正常及多种致痉剂诱导的豚鼠气管平滑肌收缩功能的影响及其作用机制。方法采用离体气管恒温灌流的方法,取豚鼠气管,在K-H液中制备豚鼠离体气管环,在其静息张力状态下以及用乙酰胆碱(Ach)、组胺(His)、氯化钙(Ca Cl2)、无钙时Ach诱导细胞内钙释放和高钙时诱发细胞外钙内流条件下,通过BL-420S生物机能实验系统测定其张力的变化,考察柚皮苷对离体豚鼠气管平滑肌张力的影响。结果柚皮苷低剂量浓度(0.0172~0.5504)mmol·L-1时,对静息状态下的豚鼠离体气管平滑肌有一定的收缩作用,高剂量浓度(0.5504~1.3780)mmol·L-1时舒张气管平滑肌,且呈剂量依赖性;使致痉剂Ach、His、Ca Cl2收缩豚鼠离体气管平滑肌的量效曲线非平行性右移,最大效应降低;抑制加入高钙后引发细胞外钙内流导致的收缩。结论柚皮苷舒张气管平滑肌作用机制可能与抑制豚鼠气管平滑肌上M受体、H1受体和阻断Ca2+通道从而抑制细胞Ca2+内流有关。     

新橙皮苷对柚皮苷增溶作用及其机制的初步考察

目的 初步考察新橙皮苷增溶柚皮苷的作用机制.方法 基于柚皮苷在单一成分下(结晶粉末和水煎物)及新橙皮苷存在下溶解性的差异,对上述不同状态下的柚皮苷红外光谱及其微观外貌进行对比考察,探讨新橙皮苷对柚皮苷的增溶机制.结果 新橙皮苷存在下,柚皮苷在水中的溶解度远高于柚皮苷单一成分(结晶粉末和水煎物),其红外光谱和微观外貌相对...     

壮骨健膝方含药血清中药物成分骨碎补柚皮苷对IL-1β诱导兔退变软骨细胞“caveolin-p38MAPK”信号通路的影响

目的观察壮骨健膝方含药血清中药物成分骨碎补柚皮苷(简称柚皮苷)对IL-1β诱导退变软骨细胞中"caveolin-p38MAPK"通路相关信号因子小窝蛋白-1(caveolin-1)、磷酸化p38(p-p38)、磷酸化核转录因子-2(p-ATF-2)、IL-1β及TNF-α等的影响,进一步探讨该方保护关节软骨的机制。方法 (1)通过高效液相-飞行时间质谱联用(HPLC-TOF/MS)技术分析并获得壮骨健膝方含药血清中的原组方药物成分柚皮苷;(2)取4周龄新西兰兔双侧膝关节软骨,建立兔关节软骨细胞体外培养体系,取第二代软骨细胞用于后续实验。MTT法检测柚皮苷对软骨细胞增殖的影响;免疫组化方法检测柚皮苷对IL-1β诱导后的软骨细胞中Ⅱ型胶原表达的影响;Western blot法检测柚皮苷对IL-1β诱导后软骨细胞中caveolin-1、pp38与p-ATF-2蛋白表达的影响;RT-PCR检测柚皮苷对IL-1β诱导后软骨细胞中IL-1β及TNF-αmRNA表达的影响。结果 (1)柚皮苷标准品溶液及壮骨健膝方含药血清离子流图中柚皮苷的出峰时间均为23.5 min,分子量均在581.0~581.5 m/z之间;(2)柚皮苷能促进软骨细胞的增殖,抑制IL-1β对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响;(3)与模型组比较,柚皮苷能降低IL-1β诱导后软骨细胞中caveolin-1、p-p38、p-ATF-2等蛋白及IL-1β、TNF-αmRNA的表达(P<0.05),并接近正常组水平。结论壮骨健膝方含药血清中原组方药物成分柚皮苷不仅能够促进软骨细胞的增殖,还可保护软骨细胞的功能,其机制可能与柚皮苷降低诱导退变软骨细胞中caveolin-1、p-p38与p-ATF-2的表达,抑制"caveolin-p38MAPK"通路的活动,进而减少通路下游IL-1β及TNF-αmRNA表达有关。     

D 101型大孔吸附树脂对柚皮中柚皮苷的富集研究

目的:建立D 101型大孔吸附树脂富集纯化柚皮中柚皮苷的工艺.方法:以柚皮苷作为考察指标,对溶液的pH值、盐离子浓度、吸附时间、动态吸附因素进行研究.结果:D 101型大孔吸附树脂对柚皮苷最佳纯化工艺为溶液pH4,吸附时间1h,流速2BV·h-1,90%乙醇7BV洗脱.结论:该方法简单、可行,能够用来富集纯化柚皮中柚皮苷.     

柚皮苷药理作用及机制的研究进展

柚皮苷是骨碎补、枳实、枳壳、化橘红等中药的主要药效成分,具有抗骨质疏松、抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤、改善心肌损伤、改善肝损伤、防治糖尿病及并发症和调血脂等药理作用。通过分析归纳有关柚皮苷的大量文献,对其药理作用及其机制的研究进展进行综述,旨在为其合理应用和药物开发提供参考。     

化州柚幼果生长过程中柚皮苷含量的动态变化研究

目的:研究不同直径大小的化州柚幼果中活性成分柚皮苷含量的变化。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Welch Materials Column XB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃;以甲醇-醋酸-水(35∶4∶61)为流动相,流速1.0 mL/min;检测波长为283 nm。结果:随着化州柚幼果直径的增大,其柚皮苷百分含量呈下降趋势。结论:本研究为化州柚的合理采收和用药提供了依据。     

柚皮苷对大鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用

目的：观察柚皮苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法：大鼠灌胃柚皮苷14日,采用栓线法制作大鼠局灶性脑缺血再关注损伤模型,测定缺血2h再灌注24h脑含水量、脑梗死体积和脑组织中MDA含量、SOD活性。结果：柚皮苷可显著降低大鼠缺血再关注损伤侧脑组织含水量、显著缩小脑梗死体积、降低脑组织MDA含量,提高SOD活性。结论：柚皮苷对脑缺血再关注损伤具有明显的保护作用,其脑保护机制可能与清除自由基有关。     

微波辅助萃取枳壳中有效成分柚皮苷的研究

目的 建立乙醇微波辅助萃取枳壳中柚皮苷的提取方法 .方法 采用正交实验法分别考察了乙醇体积分数、微波功率、液固比和微波萃取时间对枳壳中柚皮苷提取的影响.结果 得出优化的微波萃取条件:乙醇体积分数为40%,微波功率为425 W,液固比为50 ml/g,微波萃取时间为4min.在此最佳条件下,进行了加样回收率实验,回收率为96.8%～102.4%,RSD为2.57%.结论 正交实验法优选出的枳壳中有效成分柚皮苷的微波提取工艺合理可行,微波辅助萃取与索氏提取、超声波萃取法相比具有快速,高效等特点.     

补阳还五汤苷类组分介导NF-κB通路抗动脉粥样硬化炎症反应的机制研究

探讨补阳还五汤苷类组分调节核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路对载脂蛋白E^-/-(apolipoprotein E^-/-,ApoE^-/-)小鼠及RAW264.7细胞炎症反应的影响。体内实验,采用高脂饲料连续喂养ApoE^-/-小鼠12周,建立动脉粥样硬化动物模型,75μg·mL^-1氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, Ox-LDL)孵育RAW264.7细胞24 h建立动脉粥样硬化细胞模型,利用全自动生化分析仪、苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色、酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、Western blot及droplets digital PCR方法,检测血脂水平、主动脉内膜厚度、炎症因子含量及NF-κB通路相关蛋白及mRNA表达水平,评价动脉粥样硬化病变情况、药物抗动脉粥样硬化作用机制。结果表明,...     

宣肺解痉方调控NF-κB信号通路改善支气管哮喘患者气道炎症水平的机制研究

目的：观察宣肺解痉方对支气管哮喘患者NF-κB信号通路表达的影响,探讨其改善哮喘患者气道炎症水平的作用机制。方法：以河北省中医院呼吸科门诊收治的80例支气管哮喘慢性持续期患者作为研究对象,按随机数字表法分为观察组和对照组各40例,对照组给予西医常规治疗,观察组在对照组治疗的基础上加用宣肺解痉方治疗,两组均连续治疗30天。观察两组患者治疗前后中医症状体征积分及ACT、AQLQ评分,检测肺功能(FEV₁、FEV₁%、FEV₁/FVC),检测两组患者治疗前后血清IL-4、TNF-α、NF-κB P65、IκB-α水平。结果：治疗后观察组临床总有效率显著高于对照组(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后两组患者临床症状体征积分及IL-4、TNF-α、NF-κB P65水平显著降低,ACT评分、AQLQ评分、FEV₁、FEV₁%、FEV₁/FVC、IκB-α水平显著升高(P<0.05),且观察组各项指标改善均显著优于对照组(P<0.05)。两组治疗均...     

当归多糖通过Wnt/β-catenin信号通路抑制骨关节炎软骨细胞氧化应激损伤与炎症反应

目的:研究当归多糖通过Wnt/β-catenin信号通路对骨关节炎软骨细胞的氧化应激损伤及炎症反应的影响。方法:在大鼠膝关节中注射碘乙酸建立关节炎模型,3 mg/只,对照组注射等量的0.9%氯化钠溶液; 将关节炎模型大鼠分为模型组和当归多糖组。给药3周后,采用酶联免疫吸附法测定SD大鼠血清中炎症因子水平、氧化应激参数水平[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]、膝关节软骨中基质金属蛋白酶-13(MMP-13)mRNA表达水平和c-Fos蛋白表达水平。采用酶标仪测定当归多糖处理48 h后的IL-1β,损伤SW1353细胞8 h后的细胞活性。通过PCR法检测MMP-13 mRNA、β-catenin mRNA、ADAMTS4 mRNA的表达水平。通过Western blot法测定β-catenin、MMP-13蛋白表达水平。结果:当归多糖治疗后,IL-1β、TNF-α、MDA、SOD、CAT水平及MMP-13 mRNA和c-Fos蛋白均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。在IL-1β刺激的SW1353损伤模型中,经过10、50、100 μg/ml当归多糖处理后,SW1353细胞活性较模型组增加,组间比较差异有统计学意义(均P<0.05); Wnt 4a、GSK-3β、β-catenin、ADAMTS4 mRNA和MMP-13 mRNA蛋白表达均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:当归多糖通过Wnt/β-catenin信号通路抑制骨关节炎软骨细胞的氧化应激损伤与炎症反应。     

柚皮苷对酒精诱导急性肝损伤的保护作用

目的 探究柚皮苷对酒精诱导的急性肝损伤小鼠的药效学作用,为柚皮苷开发为解酒保肝药物提供数据支撑。方法 根据体质量将60只Balb/C小鼠随机分为正常组、模型组、柚皮苷低、高剂量组（25、50 mg·kg^-1）,海王金樽片组（2 g·kg^-1）及纳洛酮组（2 mg·kg^-1）。各组小鼠灌胃或腹腔注射相应药物,正常组与模型组灌胃等体积0.5%羧甲基纤维素钠,每天给药1次,连续14 d。除正常组外,其他组在给药同时连续灌胃给予56°红星二锅头（13 mL·kg^-1）14 d诱导酒精性肝损伤模型。末次给药前1 d禁食不禁水12 h,末次灌胃白酒后2 h后摘眼球取血,解剖取得肝脏并称重。全自动生化仪检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性水平;苏木素-伊红（HE）染色检测比较小鼠肝脏组织病理变化;末端标记法（TUNEL）/二氨基联苯胺（DAB）双染法观察阳性细胞数的比例判断细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和细胞色素-C（Cyt-C）蛋白的表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠肝体比显著增加（P<0.01）,血清ALT和AST活性水平显著增加（P<0.01）,肝细胞胞浆显著疏松、水肿,脂肪变性较严重,有明显的出血现象,肝脏细胞凋亡增加,Bal-2表达水平与Bax表达水平比值降低（P<0.01）,促凋亡蛋白Cyt-C水平增加（P<0.01）。与模型组比较,柚皮苷低、高剂量组能明显降低肝体比（P<0.05,P<0.01）,柚皮苷高、低剂量组明显降低小鼠血清中ALT、AST活性（P<0.05,P<0.01）,肝细胞脂肪变性显著减轻,肝细胞水肿消失,出血得到改善;肝细胞TUNEL阳性率显著降低;柚皮苷高、低剂量组均能明显降低Bal-2/Bax水平（P<0.05,P<0.01）,提升了Cyt-C水平（P<0.05）。结论 柚皮苷通过调节血清中ALT和AST的表达水平、减少肝脏脂肪病变和肝细胞凋亡,改善酒精引起的急性肝损伤。     

从化州柚中提取的柚皮苷的杂质研究(英文)

目的:研究从化州柚中提取的柚皮苷中的杂质。方法:采用HPLC-PDA/ESI-MS/MS法,通过波谱分析鉴定化合物结构。采用加校正因子的主成分自身对照法对主要杂质进行含量测定。结果:柚皮苷样品中主要杂质为野漆树苷和新北美圣草苷,二者与柚皮苷的校正因子分别为1.82和1.02。对6批样品进行测定,野漆树苷的含量为0.742%～0.926%,新北美圣草苷的含量为0.335%～0.464%,总杂质含量小于1.5%。结论:该检测方法快速、准确,柚皮苷中杂质种类和含量稳定,为柚皮苷应用的安全性提供理论基础。