耐氟喹诺酮类药大肠杆菌gyrA和parC基因的突变研究

目的:研究大肠杆菌耐药菌株蓄积亲水性氟喹诺酮药物氧氟沙星和疏水性药物托氟沙星的     

志贺菌临床株喹诺酮类耐药与gyrA和parC基因点突变

近年来,肠杆菌科细菌对喹诺酮类耐药不断增加,国内外均有报道对喹诺酮类耐药的志贺菌,本文以志贺菌为例,一是了解和掌握杭州市志贺菌临床分离株喹诺酮耐药的流行趋势,对1998-2007年杭州地区分离到的202株志贺菌进行药敏实验,与2005年全国志贺菌药敏监测点进行比较[余华丽,常昭瑞,张立实,等.国家监测点2005年志贺菌菌型分布和药敏结果 分析.中华流行病学杂志,2007,28(4):370-373],分析志贺菌耐喹诺酮类分布情况,预测志贺菌耐喹诺酮类药物的发展趋势.二是探讨志贺菌临床分离株喹诺酮类耐药机制.     

临床分离耐喹诺酮类铜绿假单胞菌gyrA基因单点突变研究

目的 研究临床分离铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物的分子机制，对PCR－RFLP－SSCP分析铜绿假单胞菌gyrA基因突变的可行性评价。方法 以铜绿假单胞菌gyrA基因序列为靶序列，用PCR、PCR－SSCP、PCR－RFLP、DNA测序、OMIGA软件分析等方法，对铜绿假单胞菌gyrA基因突变进行研究。结果 在铜绿假单胞菌10株耐药突变株中，有8株的gyrA基因的83位表现出高频的单点突变，其突变方式全为ACC→ATC。gyrA的PCR扩增产物Sac Ⅱ酶切片段与测序结果一致。SSCP带谱与测序结果比较，除1株（PSA2）其SSCP带谱与标准株相同，但测序结果有点突变外，其余菌株与测序结果一致。结论 临床分离的铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物分子机制主要表现为gyrA基因83位氨基酸密码子突变（Thr-83→Ile)，利用PCR－SSPC－RFLP系统，可快速、准确地检测耐喹诺酮类药物的铜绿假单胞菌gyrA中至少1个碱基的差异。     

伤寒沙门菌DNA旋转酶gyrA及拓扑异构酶Ⅳ parC基因与耐喹诺酮类关系研究

目的 研究DNA旋转酶、拓扑异构酶Ⅳ在伤寒沙门菌耐喹诺酮类药物的作用.方法 对临床分离喹诺酮类敏感伤寒沙门菌275及其自发耐药变异菌RG1的gyrA、parC基因喹诺酮类耐性决定区进行PCR DNA直接测序分析.结果 表明伤寒沙门菌275 gyrA、parC与大肠埃希菌相应DNA序列分别有92.51%与97.01%同源性,推定氨基酸序列仅有3与6个的差异.伤寒沙门菌gyrA及parC也有较好同源性,相应区段氨基酸有60.92 %相同.伤寒沙门菌RG1与275相比,gyrA第247位T→G变异,致Ser 83 Ala氨基酸替换,两者parC完全相同.喹诺酮类药物对RG1 MIC较对伤寒沙门菌275上升32倍或以上.结论 DNA旋转酶、拓扑异构酶Ⅳ为喹诺酮类药物作用靶位,但以DNA旋转酶为主,该酶变异为伤寒沙门菌耐药的主要原因.     

体外构建喹诺酮耐药肺炎克雷伯菌模型及gyrA、parC基因突变与耐药性关系

目的 体外构建喹诺酮耐药肺炎克雷伯菌模型并研究其gyrA、parC基因突变与唪诺酮耐药的关系.方法 运用亚抑菌浓度的左旋氧氟沙星与肺炎克雷伯菌在培养基中共培养,并倍比增加诱导药物的浓度,直至肺炎克雷伯菌能够在含高浓度的左旋氧氟沙星培养基上良好生长.收集耐药菌株,用PCR扩增和DNA测序法榆测gyrA、parC基因喹诺酮耐约决定区域(QRDR)的突变情况.结果 体外成功构建喹诺酮高浓度耐药肺炎克雷伯菌模型,所有耐药菌株QRDR均发生了变异,绝大部分为gyrA和parC双重突变.gyrA基因以Ser83、Asp87突变为主,Ser83→Ile,Asp87→Arg、Gly,也有菌株86位氨基酸发生了突变,由Tyr86→Ser.几乎所有菌株parC基因80位氨基酸的突变均为Ser80→Ile.结论 长期低浓度用药可以诱导喹诺酮耐药性的产生.QRDR突变与喹诺酮耐药性有关,gyrA及parC的双重突变可以导致高水平耐药,同时町能存在其他耐药机制.     

氟喹诺酮类抗菌药研究的新进展

喹诺酮类第一代和第二代抗感染药的缺点抗菌谱狭,主要对革兰氏阴性细菌有较强的抗菌作用,临床上仅应用于G~-菌的肠道和尿路感染,限制了临床应用范围。第三代喹诺酮类抗菌药的新品种在化学结构的母环上在6位引入氟原子或其他部位进行修饰,扩大了抗菌谱,增强了抗菌活性,目前国际上广泛应用于临床的该类药物有诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、依诺沙星和氧氟沙星等。不但对G~-杆菌有较强抗菌活性,对G~+菌和绿脓杆菌的活性有明显改善,口服改善了生物利用度。其中氧氟沙星,培氟沙星和依诺沙星     

氟喹诺酮类在动物的药动学与药效学研究

氟喹诺酮类药物具有抗菌谱广、杀菌力强、与其他抗菌药无交叉耐药性和毒副作用小等特性,十多年来在国内外兽医临床和畜牧业生产上已经得到广泛的应用。本室自1989年以来先后对诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、氧氟沙星、二氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、单诺沙星等9种氟喹诺酮类药物在动物体内外的抗菌作用或药物动力学进行了研究,现把试验结果综合报告如下。     

大肠杆菌对氟喹诺酮药物耐药机制的研究

目的:研究大肠杆菌耐药菌株对亲水或相对疏水性的氟喹诺酮类药物的耐药机制有无差异。方法:测定亲水性药物环丙沙星、氧氟沙星和洛美沙星及相对疏水性药物托舒沙星在菌体内的蓄积量和主动外排泵的作用(荧光测定法):检测细菌膜孔蛋白OmpF有无缺失(SDS-PAGE法);检测细菌DNA回旋酶A亚基编码基因gyrA常见突变点(Ser-83)是否突变(3’BS-PCR法和PCR产物测序)。所研究的大肠杆菌菌株包括野生株Ecs及其实验室诱变耐药株R2、R256,临床分离耐药株R5、R6和膜孔蛋白标准株JF701     

合肥地区淋球菌流行株gyrA和parC基因突变位点的分析

淋球菌gyrA和parC基因突变与喹诺酮类药物耐药密切相关。本文用测序法对 2 0 0 2年合肥地区分离的 5 0株淋球菌流行株进行gyrA和parC基因突变位点检测 ,并与 4种喹诺酮类药物的药敏结果比较分析。5 0株淋球菌来源于 2 0 0 2年安徽医科大学附属医院皮肤性病门诊。纸片扩散法药敏试验按美国国家临床实验室标准化委员会 (NCCLS)标准进行。PCR扩增gyrA和parC基因喹诺酮类药物耐药决定区相关片段 (QRDR) ,扩增产物经1 5 %琼脂糖凝胶电泳 ,美国EAGEREYETM 图象分析系统扫描并照相。 5 0份DNA样本扩增产物由上海博亚生物技作者单位 :…     

氟喹诺酮类抗菌药的药效学研究新进展

自80年代后期以来,化学家和医学家互相配合针对以往喹诺酮类抗菌药物对G~ 球菌和厌氧菌的活性较弱的缺点,开发成功一系列氟喹诺酮类各有特点的新衍生物,除保留原有抗G~-菌的活性外,对G~ 球菌、厌氧菌、衣原体,分枝杆菌等均有良好抗菌作用。有些新衍生物对寄生虫,钩端螺旋体有一定的活性,有些文献报道了新衍生物对动物拓扑异构酶和体内肿瘤起作用的苗头。这一系列新衍生物中,抗细菌药物进展迅速,部分新药处于临床前药理阶段,     

氧氟沙星和托氟沙星在氟喹诺酮耐药大肠杆菌中的蓄积研究

目的:研究大肠杆菌耐药菌株蓄积亲水性氟喹诺酮药物氧氟沙星和疏水性药物托氟沙星的机制有无差异.     

耐氟喹诺酮类药物阴沟肠杆菌GyrA变异的研究

目的 :研究阴沟肠杆菌DNA促旋酶A亚单位(GyrA)变异与其耐氟喹诺酮类药物的相关性。评估PCR RFLP分析在研究阴沟肠杆力GyrA突变中的作用。方法 :采用PCR扩增、PCR RFLP分析及DNA测序的方法对阴沟肠杆力GyrA基因突变进行研究 ,并比较PCR RFLP与DNA测序的结果。结果 :1 0株耐氟喹诺酮类阴沟肠杆菌中 ,8株存在GyrA变异 ,同氟喹诺酮类药物耐药性相关的变异有Ser83(TCC)→Phe(TTC)、Ile(ATC)、Tyr(TAC)和Thr(ACC) ;Asp87(GAC)→Ala(GCC)、Asn(AAC)。GyrAPCR RFLP分析结果与DNA测序结果一致。结论 :耐氟诺酮阴…     

氟喹诺酮类药的药理学特性、不良反应及应用注意

本类药物为合成抗菌药,是DNA螺旋酶抑制剂。其药理学特点:(1)抗菌谱,与其它抗菌药较少交叉耐药性。(2)抗菌作用强,抗菌范围新一代的左氟沙星抗菌活性比消旋的氧氟沙星强一倍,其他如司帕沙星、妥舒沙星等抗菌谱广,具有抗革兰氏阳性、厌氧菌、衣原体、支原体以及抗结核分枝杆菌作用,另有克林沙星,DU-6859a具有超广谱、高效特点。(3)药代动力学特性,口服吸收好,分布于体液和组织,V_d>21L/kg,远高于β-内酰胺类与气炎甙类,分布于支气管粘膜,骨、皮肤、前列腺,以及肺巨噬细胞内浓度高。若干品种如洛美沙星、司帕沙星、氟罗沙星口服芦氟沙星具有长半衰期(7～35h)给药次数明显减少,每日仅需1～2次,便于患者服用。后一药物除有效血药浓度持久外,还有增强机体免疫功能作用。(4)多种药物均可作注射剂使用,且不增加毒副反应,对急、重症患者的序贯疗法已在临床推广应用。     

神经外科手术患者应用氟喹诺酮类药抗感染疗效的影响因素

目的对影响神经外科手术中氟喹诺酮类药抗感染疗效的影响因素进行分析,为该类药临床合理应用提供参考。方法对133例使用氟喹诺酮类药治疗的神经外科手术患者制定抗感染疗效影响因素调查量表,并根据患者临床病例提供的数据填写,对包括年龄、性别、肝肾功能等在内的11个因素进行多因素Logistic回归分析,确定影响抗感染疗效的主要因素。结果在133例患者中,有16例（12．03％）微生物试验培养出致病菌。影响氟喹诺酮类药物疗效的主要因素包括年龄、性别、血清肌酐、内氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶等,Logistic回归分析表明,OR值为0．029-5．317,P值为0．005-0．026。结论老年和肝肾功能不良的患者使用氟喹诺酮类药抗感染治疗效果欠佳。此类患者使用氟喹诺酮类药抗感染治疗时,应根据药敏试验和病情变化进行个体化治疗。     

氟喹诺酮类抗菌剂帕珠沙星

1　临床疗效及不良反应　　甲磺酸帕珠沙星 ( pazufloxacin ,简称帕珠沙星 )是第三代喹诺酮类抗菌药 ,国外于 2 0 0 2年 4月 1 2日上市。帕珠沙星对革兰氏阳性和阴性菌的活性同其它的喹诺酮类药物相当。许多微生物学研究显示 ,帕珠沙星抗革兰氏阳性和阴性细菌的活性优于氧氟沙星、环丙沙星和诺氟沙星 ,而对哺乳动物细胞的毒性更小 ;许多临床研究结果也表明 ,帕珠沙星的临床疗效优于第二代喹诺酮类药物如氧氟沙星、环丙沙星和左旋氧氟沙星 ,同第三代头孢类药物头孢他啶相当 ,但是随着原有喹诺酮类抗感染药物耐药菌株的出现 ,新的喹诺酮类产品…     

耐喹诺酮类铜绿假单胞菌的耐药机制研究

目的探讨广州地区铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物的耐药机制。方法对喹诺酮耐药株的gyrA和parC基因进行限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）,并对其中的高水平耐药株gyrB和parE基因进行测序;用琼脂稀释法测定加入碳酰氰基-对-氯苯腙（CCCP）前后环丙沙星的最小抑菌浓度（MIC）;同时用SDS-PAGE对高水平耐药株的外膜蛋白进行电泳分析。结果有72.7%（72/99）的菌株发生gyrA突变,主要为Thr-83-Ile;25.3%（25/99）的菌株发生parC突变,主要为Ser-87-Leu,且均是gyrA和parC双基因突变;gyrB和parE突变较少见。53.3%（53/99）的菌株的MIC可被CCCP逆转,其MIC能明显降低;7%（7/10）的高水平耐药株的外膜蛋白在43～67kDa间条带增多,其蛋白含量有差异。结论抗菌药物作用靶位的改变和外排泵机制是本地区铜绿假单胞菌对喹诺酮类耐药的重要机制。     

成都地区几种常用氟喹诺酮类药体外及体内抗菌活性比较

六种氟喹诺酮类药 (司帕沙星、妥舒沙星、环丙沙星、氧氟沙星、氟罗沙星及诺氟沙星 )对成都地区 780株临床分离的致病菌 ,其中革兰阳性菌 3 45株 ,革兰阴性菌 40 0株 ,厌氧菌 3 5株 ,进行体外抑菌试验 ,对其中体外抗菌作用强的三种药物进行感染小鼠败血症体内保护试验。体外MICs测定结果表明对MSSA与MSSE及MRSA与MRSE均以司帕沙星与妥舒沙星为最强 ,他们的MICs范围分别为 0 .0 0 4～ 2mg/L及 0 .0 1 5～ 1 6mg/kg ,大多敏感。对化脓性链球菌、粪肠球菌、乙型溶血性链球菌及肺链球菌亦呈现强抗菌活性MICs为 0 .0 0 88mg/L ,抗菌活…     

氟喹诺酮类抗菌药物的CNS毒副作用分析研究方法

氟喹诺酮类抗菌药物由于具有抗菌谱广,抗菌活性强组织渗透性好的特点。而成为临床上应用最广泛的抗菌药物之一,但有关它们毒副反应的报道也逐渐增多。我们根据药物毒理学研究指导原则对其CNS毒副反应进行了研究,发现:1 全身给药: 1.1 给小龄组大鼠iv诺氟沙星(NFLX),5.3mg/100g,癫痫样放电发生率分别为100％,87.5％和62.5％,癫痫样放电持续时间有明显差异;10mg/kg组动物有行为等改变而另二个     

氟喹诺酮类抗菌药物不良反应的前瞻性观察

氟喹诺酮类 (fluoroquinolones,FQs)的不良反应(adversedrugreaction ,ADR)报告日渐增多。因此 ,为指导临床合理选择该类药物和新品种的开发 ,亟待对FQs进行安全性评价。　　本研究通过多中心的医院内集中监测对临床常用的FQs抗菌药物进行安全性评价。监测期 (2 0 0 1年 5月～ 2 0 0 2年 6月 )有 2 0 0 3例住院患者入选 ,其中2 62人发生ADR 2 79次 ,发生率为 1 3 .93 %。 82次为中、重度ADR ,2 2 2次属A型不良反应。按卫生部ADR监测中心颁发的标准进行因果关系评价 ,肯定的ADR有 2 2次 ,占 2 4.0 1 %。以左氧氟沙星、环丙沙星和氟…