八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导RAW264.7细胞IL-1β、IL-6、IL-10表达的影响

目的 研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW 264.7细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6及抗炎性细胞因子IL-10的动态变化规律及八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK.-8)对其表达的影响.方法 LPS诱导RAW 264.7细胞不同时间(0、...     

脂多糖对RAW264.7细胞生长的影响

目的观察脂多糖对RAW264.7细胞生长的影响。方法体外培养单核巨噬细胞RAW264.7细胞株,分别用0.5、1.0、2.0、5.0、10g/mL脂多糖刺激RAW264.7细胞24、48h,采用MTT比色法检测细胞活力。结果脂多糖刺激RAW264.7细胞24、48h后,细胞生长均受到抑制,并且与浓度和时间呈正相关。结论 LPS在0.5、1、2、5、10μg/mL时,浓度依赖性地抑制RAW264.7细胞的生长。     

祛湿通络方对肺炎支原体感染的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6表达的影响

[目的]观察祛湿通络方含药血清对肺炎支原体(MP)感染的RAW264.7细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。[方法] 1)祛湿通络方含药血清的制备:SD大鼠随机分为空白对照组、中药低、中、高剂量组、阿奇霉素组,各组均连续给药7 d。2)MP感染的RAW264.7细胞炎症模型建立:模型组和各给药组分别加入MP菌液100μL,空白对照组加入100μL DMEM完全培养液,置于培养箱中培养2 h。3)酶联免疫吸附(ELISA)法检测祛湿通络方对MP感染的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6表达的影响。[结果]与空白对照组比较,MP感染的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6的分泌均显著上升(P0.05);与模型组比较,各给药组对TNF-α、IL-6均有不同程度的下调作用(P0.05),其中阿奇霉素组对TNF-α、IL-6的调节作用最优,中药低、中、高剂量组呈现剂量依赖性。[结论]祛湿通络方对MP感染的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6的高表达具有下调作用,且呈剂量依赖性,这可能是祛湿通络方减轻炎症反应的机制之一。     

稳定表达GFP-LC3的RAW264.7细胞系的建立

目的:建立稳定表达GFP-LC3的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞系.方法:构建pcDNA3.1-GFP-LC3真核表达载体,应用转染技术将该质粒导入RAW264.7细胞,用G418筛选稳定表达的细胞系.真核细胞中GFP-LC3的表达分别用荧光显微镜与Western blot方法检测,并利用该稳定表达细胞系观察内质网应激时细胞发生自噬的情况.结果:成功获得2株转染并经G418反复筛选的RAW264.7细胞系,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光的表达率在95%以上,Western blot结果证实了GFP-LC3融合蛋白的表达.激光共聚焦显微镜和Western blot均证明内质网应激可以诱导自噬的发生.结论:用peDNA3.1-GFP-LC3转染的RAW264.7细胞经G418筛选,可成功建立GFP-LC3稳定表达系,从而为后续功能实验提供有用的细胞研究模型. ern blot方法检测,并利用该稳定表达细胞系观察内质网应激时细胞发生自噬的情况.结果:成功获得2株转染并经G418反复筛选的RAW264.7细胞系,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光的表达率在95%以上,Western blot结果证实了GFP-L 3融合蛋白的表达.激光共聚焦显微镜和Western blot均证明内质网应激可以诱导自噬的发生.结论:用peDNA3.1-GFP-LC3转染的RAW264.7细胞经G418筛选,可成功建立GFP-LC3稳定表达系,从而为后续功能实验提供有用的细胞研究模型.     

YAP及P-YAP在RAW264.7细胞脓毒症模型中的表达

【摘要】 目的 探讨YAP及P YAP在RAW2647细胞脓毒症模型中的表达。方法 将对数生长期的RAW2647细胞用内毒素（LPS）刺激RAW2647细胞构建细胞脓毒症模型为实验组,未处理者为正常组。运用免疫荧光对YAP及P YAP进行定位,Western blot检测YAP及P-YAP的表达情况。结果 实验组YAP蛋白表达于胞核中,而P-YAP表达于胞质中。实验组YAP蛋白表达明显高于正常组(P＜0.05),P YAP蛋白表达明显低于正常组(P＜0.05)。结论 细胞脓毒症模型中YAP的高表达及P YAP的低表达可能参与了脓毒症的发生。     

IL-11对ITP患者Th1、Th2细胞及T-bet、GATA-3 mRNA的影响

目的：研究白细胞介素-11 （IL-11）对免疫性血小板减少症（ITP）患者Th1、Th2细胞亚群及其调控因子T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达的影响.方法：从10例ITP患者静脉中抽取外周血提取单个核细胞,加入不同浓度IL-11（0、25、50、100、200 ng/mL）培养4d后,应用流式细胞术和实时荧光定量反转录-多聚酶链反应法检测Th1、Th2细胞亚群比例及T-bet mRNA、GATA-3 mRNA表达水平.结果：当IL-11浓度为100 ng/mL时,与浓度为0的对照组差异最明显,表现为Th1比例及Th1/Th2比值下降,Th2比例升高,差异有统计学意义（P＜0.01）,同时T-bet mRNA表达下降,GATA-3 mRNA表达增加,T-bet/GATA-3比值显著下降,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论：一定浓度的IL-11在体外培养中能促使ITP患者Th1细胞向Th2细胞转化,同时GATA-3 mRNA表达增加、T-bet mRNA表达下降.     

IL-1β对兔下丘脑前列腺素受体EP3 mRNA表达的影响

目的 观察IL-1β对兔下丘脑前列腺素受体EP3 mRNA表达的影响.方法 用IL-1β复制新西兰免发热模型,在此基础上用原位杂交法观察EP3 mRNA的表达,并用图像分析系统进行定量分析.结果 静脉注射IL-1β后1 h,免体温升高达发热高峰,此时EP3 mRNA表达增强,iOD值高于对照组(P＜0.01),主要分布在内侧视前核区(MPO)和正中视前区(MnPO).结论 IL-1β能促进MPO和MnPO神经元内EP3 mRNA的表达,EP3 mRNA的表达增加是IL-1β诱导发热的可能机制之一.     

LPS诱导RAW264.7细胞内HMGB1转位及释放实验研究

目的:观察LPS诱导RAW264.7细胞内HMGBl转位及其释放.方法:用不同浓度的LPS处理小鼠RAW264.7细胞20 h,用荧光显微镜观察LPS诱导RAW264.7细胞HMGB1的分布情况.用West-ern blot方法检测HMGB1在胞核及培养上清中的水平.结果:LPS处理小鼠RAW264.7细胞20 h后,培养上清中的HMGB1水平明显增加,胞核HMGBl含量减少,并存在剂量依赖关系.结论:LPS能诱导RAW264.7细胞释放HMGB1,存在剂量依赖关系.     

LPS刺激对RAW264.7细胞p38蛋白激酶的细胞内定位的影响

探讨Ｐ３８蛋白激酶信号传导的过程及其在细胞中的特异性作用机制。方法应用间接荧光标记免疫探讨技术及共聚焦激光扫描技术观察单核细胞中Ｐ３８蛋白激酶的分布及ＬＰＳ对其分布的影响。结果Ｐ３８在未受刺激的卢核及皮生长因子（ＥＧＦ）刺激的单核细胞胞浆和胞核中荧光强度均呈弥散性分布：脂多糖（ＬＰＳ）刺激使细胞核区的荧光强度明显增强,而胞浆区域的荧光强度降低。激酶动力学的研究显示,。Ｐ３８激活先天于Ｐ３８移位。Ｌ     

整合素β1基因对RAW264.7细胞摄脂功能的影响

目的初步探讨整合素β1基因在RAW264.7细胞摄脂过程中的作用。方法针对整合素β1基因的不同靶点设计并化学合成3条具有阳性转染率的siRNA,用脂质体法转染RAW264.7细胞,并根据转染的方式将实验分为空白对照组、转染siRNA阴性对照组、脂质体对照组和转染筛选出的阳性转染率最高的siRNA组。用Cy3标记siRNA荧光显微镜下检测转染效率,Real-time PCR筛选沉默效率最高的siRNA,细胞黏附性实验检测细胞黏附性的改变,脂质油红O化学染色法检测细胞的脂质摄取量的变化,上述检测均重复测定3次。结果成功将siRNA转染入RAW264.7细胞,并成功筛选出沉默效率最高(65%)的siRNA为siRNA1,转染后实验组整合素β1mRNA表达明显低于其他组,细胞的黏附性从其他组的70%以上降低到53%,泡沫细胞转化率由其他组的90%以上显著降低到17%,摄脂能力显著降低,与其他组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论整合素β1基因明显影响RAW264.7细胞的摄脂功能,进而影响RAW264.7细胞向泡沫细胞的转化。     

不同相对分子质量一年生膜荚黄芪多糖对RAW264.7细胞炎症相关因子表达的影响

目的：观察不同相对分子质量的一年生膜荚黄芪多糖（APSⅠ）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7炎症模型分泌促炎因子和抗炎因子的影响,探讨APSⅠ的抗炎作用。方法：体外培养RAW264.7细胞,APSⅠ作用于未经刺激的RAW264.7细胞及LPS（1 mg/L）刺激后RAW264.7细胞,将细胞分为空白对照组、LPS模型组、APSⅠ组及LPS+ APSⅠ不同相对分子质量组(APSⅠ-A,APSⅠ-B,APSⅠ-C),采用CCK-8法检测不同相对分子质量、不同浓度的APSⅠ组RAW264.7细胞增殖活力,硝酸还原酶法测定细胞上清液中一氧化氮（NO）的含量,酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）的分泌量。结果：与空白对照组比较,APSⅠ单独处理组RAW264.7细胞增殖活性降低（P<0.05或P<0.01）,NO及IL-10表达水平明显增加（P<0.05）,TNF-α的分泌量降低（P<0.05）;与LPS模型组比较, LPS+APSⅠ组RAW264.7细胞增殖活力显著升高（P<0.05或P<0.01）,NO、TNF-α的表达明显降低（P<0.05或P<0.01）,IL-10的分泌增加（P<0.05或P<0.01）;3种不同相对分子质量APSⅠ之间比较,APSⅠ-C对NO、TNF-α的抑制更为明显,且APSⅠ-C促进IL-10分泌的作用强于APSⅠ-A及APSⅠ-B。结论：APSⅠ　可以拮抗LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应;不同相对分子质量APSⅠ的抗炎作用有差异,APSⅠ的生物活性与其相对分子质量存在一定的关联性。     

不同代数RAW264.7细胞分化为破骨细胞样细胞的能力研究

目的:观察不同代数RAW264.7细胞形成破骨细胞样细胞的能力是否改变.方法:以细胞核因子κB受体激活物的配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)为诱导剂,选用第6、9、13、18、24代RAW264.7细胞在体外诱导6天,固定细胞行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-...     

鼻咽癌患者血清VCAM-1表达及其与IL-1β、IL-4等细胞因子的关系

目的:观察鼻咽癌患者血清血管内皮细胞粘附因子-1(VCAM-1)和IL-Iβ、IL-2、IL-4、IL-10表达,了解鼻咽癌患者血清VCAM-1表达规律及其与诱导因子IL-1β、IL-4的关系;获得有关鼻咽癌免疫环境的信息.方法:用ELISA方法检测34例鼻咽癌患者和13例慢性鼻咽炎患者血清标本中VCAM-1、IL-lβ、IL-2、IL-4和IL-10浓度.结果:鼻咽癌患者血清VCAM-1水平明显高于慢性鼻咽炎组(P=0.045);临床晚期明显低于早期(P=0.045),且随肿瘤体积增大而降低(P=0.002);鼻咽癌患者血清VCAM-1水平与IL-Iβ、IL-4无明显相关(P-0.101和0.116);血清IL-1β、IL-4和IL-10水平在鼻咽癌和慢性鼻咽炎组间元显著性差异;鼻咽癌组血清IL-2水平明显高于慢性鼻咽炎组(P=0.037),且随肿瘤体积增大而升高(P-0.002),但当出现淋巴结转移时则明显降低(P=0.018).结论:鼻咽癌患者血清VCAM-I升高是一临床早期事件;鼻咽癌患者血清VCAM-1变化与IL-1B、IL-4无明显关系;IL-4和IL-10指标在鼻咽癌和鼻咽炎组间无明显变化,显示Th2主导的体液免疫在鼻咽癌形成和发展过程中无明显激活迹象;IL-2指标的变化提示鼻咽癌细胞可能有较强的刺激细胞免疫作用.     

胍丁胺对脂多糖诱导RAW264.7细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨胍丁胺(agmatine,AGM)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7氧化应激的抑制作用及其机制.方法 RAW264.7细胞经LPS(10 μg/mL)刺激发生氧化应激,同时AGM(1 mmol/L)对其进行干预.分为对照组、LPS组、LPS+AGM组、AGM组.药物作用24 h,以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯(2 ',7'-dichlorofluoresce in diacetate,DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Griess法检测细胞内一氧化氮(NO)水平;Western blot检测细胞内的iNOS蛋白及细胞质细胞核内Nrf2蛋白表达;RT-PCR检测Nrf2下游抗氧化酶血红素氧合酶(heme oxygenase-1,HO-1)mRNA的表达.结果 与对照组相比,LPS可显著增加RAW264.7细胞中ROS、NO以及iNOS蛋白水平,而AGM干预后上述指标含量均明显降低(P＜0.05).AGM干预组中细胞核的Nrf2表达及其下游分子HO-1 mRNA表达水平较LPS单独刺激组显著升高,表明Nrf2信号通路在AGM的作用下被活化.结论 AGM可通过活化转录因子Nrf2促进抗氧化酶HO-1的表达,进而减轻细胞内的氧化应激损伤.     

溃结宁合剂对溃疡性结肠炎大鼠IL-1β和IL-4的影响

目的:观察溃结宁合剂对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜病理组织学变化和对IL-1β和IL-4表达的影响。方法:将41只SD大鼠随机分为正常组、模型组和溃结宁低、中、高剂量组,用2,4-二硝基氯苯和乙酸制备UC大鼠模型。给药后第15d处死动物,取各组所得结肠标本,行HE染色,观察各组病理组织学变化,并用免疫组化法染色,观察各组IL-1β和IL-4表达的变化。结果:溃结宁各组均可明显改善UC大鼠结肠黏膜的病理组织学损伤改变,并能明显降低UC大鼠结肠黏膜IL-1β的表达和提高IL-4的表达。结论:溃结宁可能通过增加IL-4的释放和抑制IL-1β的释放而治疗UC,促进结肠黏膜恢复。     

氧化苦参碱对脂多糖诱导的RAW264.7细胞一氧化氮及其诱导型合酶表达的影响

目的：观察氧化苦参碱（OMT））对脂多糖（LPS）诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮（NO）释放量及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用LPS诱导RAW 264.7细胞建立细胞炎症反应模型。实验分组：空白对照组、LPS组（1μg/mL）、OMT组（100μmol/L）、LPS＋OMT小剂量组（20μmol/L）、LPS＋OMT中剂量组（50μmol/L）、LPS＋OMT大剂量组（100μmol/L）。采用Griess试剂法测定细胞培养液中NO释放量。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法测定RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达。结果：OMT显著减少LPS诱导的RAW 264.7细胞NO的释放（P〈0.05,P〈0.01）;同时减少LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论：OMT可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞iNOS mRNA表达,减少NO的释放量而发挥抗炎作用。     

当归补血汤对RAW264.7细胞的TNF-α、ICAM-1表达的作用

目的探讨当归补血汤抗动脉粥样硬化(As)损伤作用的机制。方法制备当归补血汤含药血清,台盼蓝染色法检测细胞活性,免疫印迹法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的蛋白活性变化。结果RAW264.7细胞培养3 d后,台盼蓝染色细胞活力95%。免疫印迹法检测结果显示,氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激RAW264.7细胞后TNF-α蛋白活性明显增强,当归补血汤含药血清组与ox-LDL组比较有差异(P0.05);ox-LDL刺激RAW264.7细胞后ICAM-1蛋白活性明显增强,当归补血汤含药血清组与ox-LDL组比较有差异(P0.05)。结论当归补血汤含药血清一定程度上能减少TNF-α、ICAM-1的蛋白表达,减少TNF-α、ICAM-1的表达可能是当归补血汤抗As损伤作用的机制之一。     

IL-1β反义RNA表达载体的构建及对肝癌细胞中IL-1β水平的影响

目的构建小鼠IL-1β反义RNA表达载体，观察对肝癌细胞中IL-1β表达的阻断效果。方法提取细胞总RNA，RT-PCR扩增IL-1β1和IL—1β2，将其反向连接到肝癌组织特异性表达载体PafpIRES2-EGFP，构建Pafp IRES2-antilIL-1β1和PafpIRES2-antiIL-1β2反义RNA表达载体，利用jetPEI转染H22肝癌细胞和YAC-1淋巴细胞，荧光显微镜下观察反义RNA载体的表达，RT—PCR方法分析H22细胞中IL-1β表达水平的变化。结果RT—PCR扩增到两条长度分别为264和284bp的片段，与IL-1β1和IL—1β2相符，将其反向与Pafp IRES2-EGFP连接，经菌落PCR和DNA序列分析证实，获得了PafpIRES2-antiIL-1β1和Pafp IRES2-antiIL-1β2反义RNA表达载体。上述载体转染H22细胞后，荧光显微镜下可见细胞表达出明亮绿色荧光，而YAC-1细胞则未见荧光。RT—PCR分析证实转染反义RNA后H22细胞中IL-1β表达水平明显下降，尤以IL-1β2反义RNA的阻断效果更为显著。结论成功构建了小鼠IL-1β肝癌细胞特异性反义RNA表达载体PafpIRES2-antiIL-1β1，PafpIRES2-antiIL—1β2，两载体能有效地阻断肝癌细胞中IL-1β的表达。     

IL-1β对小鼠垂体正常细胞和ACTH瘤细胞生长的影响

目的探讨垂体内自分泌、旁分泌因子IL1β是否参与垂体细胞和垂体瘤细胞的生长增殖过程.方法以体外原代培养的小鼠垂体正常细胞为对照,采用噻唑蓝(MTT)法观察10-9mol/L～10-13mol/LIL-1β对小鼠垂体ACTH瘤细胞(AtT20)生长增殖的影响.结果(1)IL1β刺激垂体原代培养细胞4～72h,不同浓度的IL-1β各组(n=9)与对照组(n=9)间的差异无显著性(P＞0.05),实验中培养细胞处于对数生长期状态.(2)IL-1S刺激AtT20细胞48、72h,IL-1β各浓度组(n=9)细胞生长分裂的增加与对照组(n=9)相比差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01).结论IL-1β参与了AtT20细胞生长增殖的调节,提示IL-18可能是参与垂体ACTH瘤发病的因素之一.     

转化生长因子β1对巨噬细胞纤溶酶原激活物抑制因子-1表达的影响

①目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)对RAW 264.7细胞纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)表达的影响。②方法以TGF-β1(5ng/m l)刺激RAW 264.7细胞,分别在作用0、12、24、48小时后,采用免疫细胞化学SP法、W estern印迹以及酶联免疫吸附实验(ELISA)观察细胞PAI-1表达的变化。③结果TGF-β1刺激RAW 264.7细胞,0小时组、12小时组、24小时组、48小时组的PAI-1免疫染色强度积分分别为36.23±7.35、62.23±11.18、98.58±4.98、130.42±8.56,PAI-1蛋白相对灰度值分别为0.85±0.05、1.21±0.06、1.56±0.08、2.43±0.02,细胞上清液中PAI-1含量(ng/mL)分别为15.23±1.98、26.35±2.93、40.21±1.54、69.32±3.21。④结论TGF-β1能够诱导RAW 264.7细胞PAI-1的表达,并存在明显的时效关系。