黏脂贮积症Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β家系的溶酶体酶学分析CSCD

目的分析总结黏脂贮积症(mucolipidosis,ML)Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β溶酶体酶酶学检测的特点,为选择酶学检测指标提供依据。方法检测两例确诊为MLⅡ型α/β和Ⅲ型α/β患者及10例健康个体血浆及白细胞中的多种溶酶体酶活性,比较患者与健康个体的差异;分别以"mucolipidosis"及"黏脂贮积症"为关键词,检索PubMed、CNKI、万方数据库,分析总结已报道的MLⅡ型α/β和Ⅲ型α/β的酶学检测结果。结果两例患儿血浆中多种溶酶体酶活性与健康个体相比均明显增高,程度由高至低分别为:芳基硫酸酯酶A(arylsulphatase A,ASA)和α-L-艾杜糖醛酸酶(α-iduronidase,IDUA)(20倍以上)、β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,GUSB)(10倍以上)、β-D半乳糖苷酶(β-galactosidase-1,GLB1)和α-半乳糖苷酶(α-galactosidase A,GLA)(5倍以上)、α-N-乙酰葡萄糖胺酶(α-N-acetylglucosaminidase,NAGLU)(2倍),葡萄糖脑苷酯酶(glucocerebrosidase,GBA)(无明显变化)。两例患儿白细胞中多种溶酶体酶的活性与健康个体相比无差异,均在正常范围。筛选出22篇文献,共报道了15个溶酶体酶学指标,血浆中升高最明显的是总己糖胺酶(hexosaminidase A and B,Hex A+B)(平均升高24.4倍)和α-甘露糖苷酶(α-mannosidase,α-man)(24.7倍),其次是ASA(22.4倍),GUSB为18.8倍;选用较多的指标分别是Hex A+B(12篇)、α-man(11篇)和GUSB(10篇)。结论溶酶体酶学分析是MLⅡ型α/β和Ⅲ型α/β不可或缺的辅助诊断手段,通过对两例患儿的血浆酶学的分析和文献复习,推荐选用ASA、GUSB、Hex A+B和α-man为二者的血浆溶酶体酶学分析指标。     

11例中国人粘多糖贮积症Ⅰ型轻型患者的基因突变检测

目的 对经酶学确诊的粘多糖贮积症Ⅰ型患者进行α-L-艾杜糖苷酸酶(α-L-iduronidase,IDUA)基因突变检测,了解中国北方地区粘多糖贮积症Ⅰ型轻型患者基因突变特点.方法 应用PCR扩增技术及直接测序技术对11例中国北方地区经酶学确诊的粘多糖贮积症Ⅰ型患者IDUA基因14个外显子及相邻区域进行突变筛查,同时进行亲本来源分析.结果 11例患者中检测出7种基因突变:A79V、R89Q、R89w、E178K、G197S、L346R和W626X.7种突变均为已报道过子,11例中6例患者为纯合改变,1例为无义突变杂合子;发现了9种已知多态性位点.结论 中国北方地区粘多糖贮积症Ⅰ型轻型患者IDUA基因的突变特点可能不同于其他国家和地区.

Abstract：

Objective Mucopolysaccharidosis type Ⅰ (MPS Ⅰ ) is an autosomal recessive diseaseresulting from the deficiency in the lysosomal enzyme α-L-iduronidase (IDUA). The present study was conducted to identify IDUA gene mutations in attenuated (MPS Ⅰ H/S and MPS Ⅰ S) patients with MPS Ⅰin northern China. Methods Fourteen exons with adjacent intronic sequences of the IDUA gene in 11 MPS Ⅰ patients were amplified by polymerase chain reaction (PCR), and the PCR products were sequenced directly and origin analysis was conducted. Results Seven mutations were detected in the 11 MPS Ⅰ patients, i.e., c. 236 C＞T(p. A79V), c. 266 G＞A(p. R89Q), c. 265 C＞T(p. R89W), c. 532G＞A(p.E178K), c. 589G＞A(p. G197S), c. 1037T＞G(p. L346R), and c. 1877 G＞A(p. W626X). All of them were known mutations. Six patients were homozygotes and 1 was heterozygote with nonsense mutation. In addition, 9 reported single nucleotide polymorphism (SNP) were detected, i. e., p. A8, p. A20, p. H33Q,p. R105Q, p. A314, p. A361T, p. T388, p. T410 and p. V454I. Conclusion The mutation spectrum of the IDUA gene in attenuated MPS Ⅰ Chinese patients may be different from that in patients from other countries.     

应用串联质谱技术进行新生儿高苯丙氨酸血症79205例筛查结果分析

目的探讨串联质谱技术在怀化市新生儿高苯丙氨酸血症(HPA)筛查中的应用价值,了解怀化市新生儿高苯丙氨酸血症的检出率。方法选择出生72h后经充分哺乳的新生儿,采集足跟血,制成干血滤纸片,应用串联质谱技术(MS/MS)测定血苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)浓度及其比值(Phe/Tyr)进行HPA筛查,筛查原标本血Phe浓度120μmo L/L,或同时伴有Phe/Tyr2.0为阳性,初筛阳性者立即召回复查,复查阳性者应用气相色谱-质谱进行尿有机酸分析及下一代测序技术(NGS)检测阳性患儿的突变基因。结果怀化市2015年3月-2017年12月共筛查新生儿79 205例,其中男性42 592例,女性36 613例,确诊HPA患儿6例,HPA检出率为1/13 201。结论应用串联质谱技术进行新生儿HPA筛查的检出率为1/13 201,明显高于之前报道的应用茚三酮荧光法进行新生儿HPA筛查的检出率1/40 758。应用串联质谱技术进行新生儿HPA筛查是一种准确、可靠的方法。     

4819例遗传代谢病检测结果分析

目的 为了解遗传代谢病的发病率,以便推动遗传代谢病的全面筛查,应用液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测血氨基酸和酰基肉碱,联合气相色谱-串联质谱(gas chromatography-tandem mass spectrometry,GC-MS)技术检测尿液中有机酸,对氨基酸、有机酸代谢病及脂肪酸β氧化障碍进行筛查和诊断.方法 收集4819例(包括1388例新生儿及3431例疑似遗传代谢病高危儿童)血氨基酸和酰基肉碱检测结果及尿有机酸检测结果,分别利用LC-MS/MS检测了4778例干滤纸片和GC-MS检测了3004例尿标本.结果 通过遗传代谢病筛查共确诊88例(占所检测样本的1.83%,这88例均行LC-MS/MS和GC-MS检测),其中氨基酸代谢病9种,37例;有机酸代谢病7种,40例;脂肪酸β氧化障碍5种,11例.结论 联合LC-MS/MS及GC-MS能快速对遗传代谢病进行筛查和诊断.     

一个糖原累积病Ⅱ型家系的酸性-α-葡萄糖苷酶及其产前基因诊断

目的 为1个糖原累积病Ⅱ型(glycogen storage disease typeⅡ,GSDⅡ)家系进行酶学和产前基因诊断.方法 用酸性-α-葡萄糖苷酶(acid-alpha-glucosidase,GAA)特异性水解荧光底物4-甲基伞型酮-α-D-吡喃葡萄糖苷(4-methylumbelliferyl-α-D-glucopyranoside,4-MUG)和阿卡波糖抑制其同工酶的方法检测外周血白细胞和羊水细胞GAA酶活性,聚合酶链反应扩增GAA基因外显子编码区序列,直接测序分析GAA基因突变情况.结果 先证者外周血白细胞与胎儿羊水细胞GAA酶活性均明显低于正常参考值范围,分别为正常对照平均值的12.3% 和1.1%.先证者和胎儿均携带新无义突变 p.W738X 和已报道的无义突变p.E888X;先证者、母亲和胎儿均携带假性缺陷等位基因[c.1726G>A; c.2065G>A].结论 通过GAA酶活性检测结合GAA基因分析对1个GSDⅡ家系进行了产前诊断.由于假性缺陷等位基因可引起GAA酶活性降低,故GAA基因分析应作为亚洲人群GSDⅡ产前诊断的常规手段.

Abstract：

Objective To carry out prenatal diagnosis for a glycogen storage disease typeⅡ(GSDⅡ) affected family. Methods The acid-α-glucosidase (GAA) activity was measured in whole leukocytes and cultured amniocytes with 4-methylumbelliferyl-α-D-glucopyranoside as substrate and with acarbose as inhibitor. The coding regions of GAA gene were amplified by polymerase chain reaction and analyzed by direct DNA sequencing. Results The proband and the fetus had low GAA activity (12.3% and 1.1% of the average normal range, respectively). Mutation analysis of the GAA gene revealed a novel nonsense mutation p.W738X and a reported nonsense mutation p.E888X in both the proband and the fetus; the reported pseudodeficiency allele c.[1726G>A;2065G>A] was found in the proband, the mother and the fetus. Conclusion The proband and the fetus were both GSDⅡaffected. A combination of GAA activity analysis and mutation analysis is efficient for the prenatal diagnosis of GSDⅡ. Mutation analysis should be a routine method in the prenatal diagnosis of GSDⅡ in Asian population, where pseudodeficiency allele can cause low GAA activity in normal individuals which is relatively common in Asian.     

Gaucher病:产前诊断的思考

Gaucher病 ( GD)是一种最常见的溶酶体贮积症 ,白种人群体发病率为 1 / 5万活产儿。其表型特征与酸性β-葡萄糖苷酶活性缺乏 ,葡萄糖苷酰鞘氨醇及其他葡萄糖鞘类脂物在多器官内贮积有关。目前本病分为 4种临床亚型 : 型最常见 ,即非神经元病变异型 ,在内脏组织的单核 /巨噬细胞中有大量上述底物贮积。 型和 型为神经元病变异型 ,另有上述底物贮积的毒性作用所致活产儿中枢神经系统 ( CNS)神经元缺陷。 型罕见 ( <1 / 5 0万活产儿 ) , 型相对常见 (约 1 / 1 0万活产儿 ) ,上述三型的主要区别在于有无神经元受累及严重程度。 型新近才被…     

宝鸡地区281672例新生儿TSH、Phe筛查结果分析

目的分析宝鸡市新生儿疾病筛查中心2007年7月~2015年12月间新生儿筛查情况,探讨当地苯丙酮尿症(PKU)及先天性甲状腺功能减低症(CH)的发病情况。方法采用时间分辨免疫荧光法(DELFIA)检测滤纸干血斑中苯丙氨酸(Phe)和TSH浓度,回顾分析PKU及CH检测情况。结果 2007年7月~2015年12月共筛查新生儿281 672例,筛查率逐年上升,2010年已达92.19%。PKU发病率为1∶3275(86/281 672),BH4缺乏症为2.33%,CH发病率为1:2184(129/281 672)。PKU、CH发病率均高于邻近的宁夏、新疆及全国发病率。本资料对部分PKU患儿进行了突变基因分析,因检测例数少未发现新的突变,有待进一步加强该项工作,并对部分PKU患儿进行了血、尿MS/MS,GS/MS测定。结论通过新生儿筛查可做到早诊断、早治疗,避免因PKU、CH导致的智力低下,有利于提高我市出生人口质量。     

潮州地区7293例新生儿α-地中海贫血筛查分析

目的了解潮州地区新生儿α-地中海贫血(α-地贫)的基因携带率情况。方法对2013年12月至2015年6月所有在本院出生的新生儿进行α-地贫筛查。对采血标本进行Hb电泳,Hb A22.5%阳性者电话联系患儿家长带患儿复诊,抽全血2.0ml(EDTA或枸橼酸钠抗凝)送广州金域医学检验中心有限公司(广州金域)行α-地贫基因分型检查。结果 (1)血红蛋白电泳Hb A22.5%阳性率为3.36%(245/7293)。(2)广州金域确诊试验阳性率为3.24%(236/7293)。其中静止型、轻型、中间型、重型分别为1.66%,1.54%,0.04%,0%。结论 (1)潮州地区α-地贫发生率较广东省(8.53%)的平均水平低,仍应大力加强地贫筛查并加强防治;(2)血红蛋白电泳作为常规筛查方法,普遍开展新生儿脐血血红蛋白病筛查,对优生优育,提高人口素质具有重要意义。     

新生儿听力筛查联合遗传性耳聋基因检测在NICU新生儿听力障碍筛查中的应用价值

目的探讨新生儿听力筛查联合遗传性耳聋基因检测在NICU新生儿听力障碍筛查中的应用价值。方法选取2015年8月至2017年8月我院妇产科正常分娩出生的及NICU收治住院的新生儿2000例,在其出生48 h和72h后行常规听力筛查及遗传性耳聋基因筛查。常规听力筛查采用耳声发射法(OAE)和自动听性脑干反应(AABR)法,初筛未通过的新生儿在出生后42 d复筛,复筛仍未通过的新生儿则于出生后3个月行听力学诊断,确诊其是否存在听力障碍。遗传性耳聋基因筛查采用微阵列芯片法,对4个耳聋易感基因9个突变位点进行检测。统计筛查结果。结果 2000例NICU新生儿中遗传性耳聋基因突变携带率为4.20%(84/2000),其中GJB2基因突变携带率为1.85%(37/2000)、GJB3基因突变携带率为0.35%(7/2000)、SLC26A4基因突变携带率为1.70%(34/2000)、线粒体12S rRNA基因突变携带率为0.30%(6/2000)。听力筛查未通过且携带耳聋基因突变的新生儿16例,经听力学诊断确诊为听力障碍的新生儿8例(分别为GJB2 299 del AT杂合型突变2例、GJB2 235 del C杂合型突变5例、SLC26A4 IVS 7-2 AG纯合型突变1例),诊断符合率为50.00%。结论新生儿听力筛查联合遗传性耳聋基因检测可相互弥补筛查范围的局限性,遗传性耳聋基因筛查可以作为NICU新生儿听力功能筛查的重要补充,以利于发现潜在性、迟发性耳聋患儿,提高新生儿听力障碍检出能力,并对其进行早期干预,具有一定的临床应用价值。     

应用串联质谱技术进行河南省新生儿甲基丙二酸血症的筛查结果分析

目的探讨串联质谱技术(MS/MS)在河南省新生儿甲基丙二酸血症(MMA)筛查中的作用和意义,统计并了解我省MMA的发病情况。方法收集2012年12月至2018年12月的河南省出生72h后经充分哺乳的新生儿820 337例,采足跟血,制成干燥血滤纸片,MS/MS法检测血片丙酰基肉碱(C3)、游离肉碱(C0)、乙酰基肉碱(C2)、蛋氨酸(MET)、C3/C2、C3/C0、C3/MET。尿GC-MS检测尿液甲基丙二酸(MMA)、3-羟基丙酸、甲基枸橼酸的水平变化,结合血同型半胱氨酸(HCY)及基因检测以明确诊断。结果新筛共确诊174例MMA。其MS/MS结果显示C3增高的有144例,C3/C2增高的有171例。C3/MET增高的有148例。C3正常的为30例。尿MMA增高的有174例,甲基枸橼酸增高的有104例,3-羟基丙酸增高的有69例。HCY增高的有156例。基因检测显示156例为MMACHC型,即为B12有效型,其中c.609GA突变出现频率最高。18例为MUT型,为B12无效型,其中c.1663GA突变出现频率最高。结论 MMA是河南省新生儿遗传代谢病筛查中最常见的有机酸血症,其发病率为1/4714。且血C3/C2及尿MMA增高,对诊断MMA更具有特异性。MMA大部分为B12有效型,且MMACHC型MMA是MMA中最主要的类型,C3/MET和HCY的增高可以很好的提示MMA的基因分型为MMACHC型。通过MSMS筛查,多数患儿在无症状前就能被筛查出来,且可以在基因结果出来之前即可进行有效的治疗,是提高患者存活率和治疗效果的有效途径。     

保定市新生儿遗传性耳聋基因筛查联合听力筛查对耳聋检出及防控的意义

目的探究保定市新生儿遗传性耳聋基因筛查联合听力筛查对耳聋检出及防控的意义。方法选取2018年1月-2019年3月于保定市妇幼保健院出生并接受听力及耳聋基因筛选的新生儿8446例,其中包括新生儿病房1067例,母婴同室新生儿7379例,男4351例,女4095例。出院前或出生48h后按照相关流程对新生儿进行耳聋基因筛查和听力筛查,使用自动听性脑干反应法(AABR)和耳声发射法(OAE)对新生儿进行常规听力筛查,使用荧光定量PCR法对新生儿遗传性耳聋基因进行筛查,并统计筛查结果。结果通过对新生儿遗传性耳聋基因将结果进行分析,共检测出332例易感基因携带者,携带率占全部人数的3.93%(332/8446);其中c.235 delC杂合型突变在总易感基因携带者中的比例为43.07%(143/332),其次c.IVS7-2 AG的突变频率在新生儿突变频率中占29.82%(99/332)。通过对新生儿各检测位点的突变频率进行比较分析,235delC的突变频率在新生儿突变频率中占有43.07%,其次IVS7-2AG的突变频率在新生儿突变频率中占有29.82%。对所有新生儿进行听力筛选,初步筛选通过率为92.30%,初步筛选未通过率为7.70%,复筛未通过人数为52人,复筛未通过率为0.62%。结论对新生儿进行遗传性耳聋基因和听力联合筛查,有利于发现迟发性和药物敏感性耳聋,提高新生儿听力障碍的检出率,能够对新生儿进行及时的早期干预。     

山西省新生儿苯丙酮尿症筛查苯丙氨酸切值初探

目的建立山西省妇幼保健院新生儿遗传代谢病筛查中心实验室苯丙酮尿症筛查苯丙氨酸切值。方法新生儿出生72h后,采足跟血,制成滤纸干血片,采用荧光分析法测定血片中苯丙氨酸浓度,进行分析统计。结果共检测100 000例,确定山西省新生儿苯丙酮尿症筛查苯丙氨酸切值为2.0mg/dl(120μmol/L)。结论苯丙氨酸切值的确定为保证我筛查中心新生儿苯丙酮尿症筛查工作质量提供依据。     

余姚地区11848例新生儿G6PD缺乏症筛查结果分析

目的通过对新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的筛查,了解余姚市新生儿G6PD缺乏症的发病情况。方法用荧光斑点法(FST)对2014年出生的新生儿的筛查滤纸干血片进行检测,召回可疑阳性新生儿,抽静脉血以G6PD/6PGD比值法进行确诊。结果 2104年出生新生儿11 848例,初筛新生儿11 776例,筛查率99.39%,发现G6PD缺乏新生儿276例,初筛阳性率2.34%;召回265例,召回率96.01%;确诊G6PD缺乏新生儿42例,确诊阳性率为3.54‰;确诊男性37例,发病率为5.94‰(37/6228),女性5例,发病率0.90‰(5/5548),男女比例7.4:1。结论 G6PD缺乏症筛查是先天性G6PD缺乏症三级预防的重要且有效的方法,继续科学规范管理,通过多途径提高G6PD缺乏症筛查筛查率和召回率。     

比较四种检测方法在高苯丙氨酸血症诊断中的应用

目的探讨化学荧光法、尿蝶呤谱分析、红细胞二氢喋呤还原酶活性(DHPR)分析、串联质谱法在高苯丙氨酸血症诊断中的应用。方法运用茚三酮荧光法检测142516例新生儿phe血值,初筛可疑阳性者行茚三酮荧光法、串联质谱法检测,通过卡方检验统计比较茚三酮荧光法、串联质谱法的复筛可疑阳性率;同时对复筛可疑阳性的患儿行尿蝶呤谱分析、红细胞二氢喋呤还原酶活性(DHPR)分析并对HPA确诊情况及发病率进行统计。结果 1.通过分析2010年-2016年新生儿疾病筛查量动态数列表,发展速度和增长速度都呈现逐年上升的趋势;2.2010-2016年我院筛查中心管辖区域活产218843例,HPA筛查率、不合格血片补采率、HPA可疑阳性召回率上升幅度分别为62.88%、52.75%、40.43%,不合格血片率基本持平;3.142516例标本初筛可疑阳性224例,初筛可疑阳性率1.57‰;4.通过配对卡方检验χ2=48,P0.005,茚三酮荧光法和串联质谱法复筛情况差异具有统计学意义;5.对复筛可疑阳性29例患儿行红细胞二氢蝶啶还原酶活性(DHPR)分析检测、尿蝶呤谱分析检测鉴别确诊经典型苯丙酮尿症(PKU)24例,轻度高苯丙氨酸血症(HPA)3例,四氢生物蝶呤缺乏症(BH4)2例;6.高苯丙氨酸血症检出率:1:4914。结论 1.新生儿疾病筛查量的发展速度和增长速度在2010-2016年筛查量都是呈现上升趋势;2.HPA筛查的血片量、不合格血片召回、HPA可疑阳性召回都有大幅度的提升;3.串联质谱法的复筛阳性率远低于茚三酮荧光法;4.串联质谱法中用phe/Tyr可明显降低假阳性率。5.HPA检出率远高于全国平均水平;6.结合红细胞二氢喋呤还原酶活性(DHPR)分析、尿蝶呤谱分析可以有效的鉴别诊断HPA并加以分型。     

江西省新生儿先天性甲状腺功能低下症筛查结果分析

目的总结1997年～2004年12月期间江西省进行新生儿先天性甲状腺功能低下症(CH)的筛查结果及体会.对象我省地(市)及部分县级医院出生的新生儿.方法检测指标为血促甲状腺激素(TSH)水平,测定采用时间分辨荧光免疫分析法(DELFIA). 结果 (1)1997年～2004年共筛查新生儿189827例,全省筛查覆盖率为6.23%,明显低于周边各省;(2)7年共检出CH 123例,发病率为1/1543. 结论 (1)我省CH发病率明显高于全国平均水平.(2)加大宣传力度,提高全民对新生儿疾病筛重要性、必要性的认识;强化政府行为,制订出当地的新生儿筛查管理办法,健全网络,进一步提高新生儿筛查的覆盖率.     

广西崇左地区新生儿G6PD缺乏症的筛查结果分析

目的了解崇左地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏症筛查结果情况。方法采用NADP+氧化还原酶法,对2015年7月至2018年6月在我院产科分娩的11 681例新生儿进行红细胞G6PD活性检测,并对不同性别、民族的新生儿G6PD缺乏情况进行分析。结果筛查的11 681例新生儿中,有1158例G6PD缺乏,阳性率9.91%(1158/11 681),男性阳性率13.29%(843/6343),女性阳性率5.90%(315/5338)。不同民族新生儿中:壮族8398例(男4613例,女3785例),阳性率10.69%(男14.33%,女6.26%);汉族2990例(男1573例,女1417例),阳性率8.13%(男10.68%,女5.29%);其他少数民族293例(男157例,女136例),阳性率5.80%(男8.92%,女2.21%)。结论本市为新生儿G6PD缺乏症的高发区,有性别和民族差异,筛查有利于为该病提供早期诊断及预防。     

高效液相色谱-串联质谱技术在886例高危婴幼儿遗传性代谢疾病筛查的研究

目的研究高效液相色谱-串联质谱技术在高危婴幼儿遗传性代谢疾病筛查中的意义。方法留取886例临床疑似遗传代谢病新生儿的干血滤纸片,进行液相串联质谱分析。结果 886例高危婴幼儿中检测出患儿47例,检出率5.3%(47/886),包括脂肪酸代谢病14例(29.8%),氨基酸代谢病24例(51.1%),有机酸代谢病9例(19.1%)。结论高效液相串联质谱检测技术是筛查遗传性代谢疾病的有效手段,婴幼儿遗传性代谢疾病的筛查应尽早进行,扩大新生儿遗传性代谢疾病筛查的覆盖面,对于遗传代谢病高危新生儿的临床诊断具有重要的价值。     

氟伐他汀对醛固酮诱导的系膜细胞SGK1及CTGF表达的影响

目的:观察氟伐他汀对醛固酮(Ald)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)血清与糖皮质激素诱导蛋白激酶1(SGK1)和结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法:以大鼠系膜细胞为实验对象,分为:(1)对照组;(2)不同浓度及时间Ald组;(3)Ald(10-7mol/L)+SPI(安体舒通10-9mol/L)组;(4)Ald(10-7mol/L)+LY294002(PI3K抑制剂20μmol/L)组;(5)Ald(10-7mol/L)+SB203580(P38MAPK抑制剂20μmol/L);(6)Ald(10-7mol/L)+F(氟伐他汀10-7、10-6、10-5mol/L)组;(7)Ald(10-7mol/L)+F(氟伐他汀10-5mol/L)+MVA(甲羟戊酸10-4mol/L)组;(8)Ald(10-7mol/L)+F(氟伐他汀10-5mol/L)+FPP(法尼酯焦磷酸10-5mol/L)组;(9)Ald(10-7mol/L)+F(氟伐他汀10-5mol/L)+GGPP(焦磷酸牛儿基牛儿酯10-5mol/L)组。Western印迹方法检测SGK1、CTGF蛋白表达水平。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养液中细胞外基质成分纤维连接蛋白(FN)、单核细胞趋化因子(MCP-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白含量。结果:Ald呈剂量依赖性上调SGK1和CTGF蛋白表达(P0.05)。醛固酮刺激6h即可增加SGK1蛋白表达(P0.05),12h达高峰,CTGF蛋白水平呈时间依赖性增加。安体舒通和PI3K特异性抑制剂LY294002可阻断Ald对SGK1的激活作用(P0.01)。氟伐他汀可呈剂量依赖性下调Ald诱导的系膜细胞内SGK1和CTGF蛋白表达,以及其下游趋化因子MCP-1和ICAM-1表达(P0.05)。甲羟戊酸和GGPP可逆转氟伐他汀的作用(P0.05)。结论:醛固酮可通过抑制盐皮质激素受体(MR)和PI3K信号转导通路诱导大鼠系膜细胞内SGK1和CTGF蛋白的表达,氟伐他汀可通过SGK1信号转导通路缓解Ald的致纤维化作用。甲羟戊酸可部分逆转氟伐他汀的作用,可能与甲羟戊酸通路中的Rho蛋白活化有关。     

新生儿遗传性耳聋基因携带筛查及结果分析

目的对柳州地区1026例听力筛查正常的新生儿进行遗传性耳聋基因筛查,检出携带者。方法选取听力筛查正常的新生儿72h后采集足跟血,滴于规定滤纸上,采用PCR与通用芯片相结合技术,检测滤纸干血斑基因组DNA中与遗传性耳聋相关的9个突变位点。结果检出携带者17例,检出率1.66%(17/1026)。其中GJB2基因235del C携带者10例(0.97%),299 del AT杂合突变型1例(0.09%);SLC26A4基因IVS7-2AG杂合突变型5例(0.48%),2168AG杂合突变型1例(0.09%)。结论听力筛查正常新生儿有耳聋基因携带风险,建议出生时行耳聋相关基因检测,以预防聋病的发生。     

苏州地区GSP~(TM)检测17α-羟孕酮的性能验证及切值建立

目的评估全自动荧光免疫分析仪GSP~(TM)检测17α-羟孕酮(17α-OHP)的分析性能,并初步建立应用于先天性肾上腺皮质增生症(CAH)筛查的17α-OHP切值。方法通过检测试剂盒自带标准品B/D/E三个浓度、试剂盒自带高、低水平质控品,和试剂盒自带的A-E六个浓度的标准品,分析GSP~(TM)系统的精密度、正确度和线性范围。检测临床新生儿血片样本3063例,以99.5%百分位数的17α-OHP水平暂定为初始切值。结果 GSP~(TM)筛查系统检测B/D/E中17α-OHP批内变异系数为3.98%~5.97%,均小于厂家声明的8.7%;批间变异系数为4.32%~8.52%,均小于厂家声明的9.2%。GSP~(TM)系统检测的低、高质控品浓度平均值分别为20.65 nmol/L和140.67 nmol/L,都在试剂盒声明的允许范围之内。线性标本的检测值和理论值的线性方程为y=1.1196x-1.7049,相关系数的平方(R2)为0.9998。GSP~(TM)系统TSH测定浓度值与1235系统的测定值之间呈现显著的正相关,Spearman r=0.615,P0.001。GSP~(TM)筛查系统检测结果99.5百分位数的17α-OHP水平为15.50nmol/L。结论GSP~(TM)系统对17α-OHP的定量性能符合厂家声明的要求,应用于新生儿CAH筛查是可行的。本中心初步采用的GSP~(TM)筛查新生儿CAH的17α-OHP切值为15.50nmol/L。