粘红酵母酪氨酸解氨酶在大肠杆菌中的异源表达

酪氨酸解氨酶是苯丙氨酸代谢途径的关键酶之一。酪氨酸经其催化生成对香豆酸,可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。作者选取来源于粘红酵母(Rhodotorula glutinis)的酪氨酸解氨酶,对其基因进行大肠杆菌(Escherichia coli)密码子偏好性优化,合成基因后于E.coli BL21(DE3)中成功表达。经过硫酸铵分级沉淀、QFF阴离子交换层析、分子筛纯化后得到了纯化的酪氨酸解氨酶,比酶活达到1.78 U/mg。在相同的培养条件下,以不同的质粒作为表达载体,获得了不同的对香豆酸产量。其中以酪氨酸为底物发酵24 h,当以p ET-32a(+)作为表达载体时,获得最高的对香豆酸产量196.3 mg/L。经密码子优化后的酪氨酸解氨酶基因可更好地应用于苯丙素类物质的合成途径构建,不同载体的应用也为生物法生产对香豆酸提供了更多的选择依据。     

苯丙氨酸解氨酶的研究进展

对苯丙氨酸解氨酶的分布、基本特性、分子结构、各种因子对其活性的影响和生理功能方面作了简要的概述,旨在为该酶的进一步研究提供参考。     

植物苯丙氨酸解氨酶的生物学研究进展

苯丙氨酸解氨酶(phenylanlanine ammonialyase,PAL, E.C.4.3.1.5)作为植物次生代谢特别是苯丙烷途径的关键酶,与植物抵抗病原菌入侵有密切关系,具有重要的植物生理意义.本文综述了植物PAL的存在与分布、分子结构、酶学性质和作用机制,应用酶学和分子生物学知识阐述了其表达调控机理,并在基因水平上对PAL的分子生物学研究进行了展望,旨在为今后PAL在植物抗病应用上提供基础数据.     

苯丙氨酸解氨酶(PAL)的研究进展

对苯丙氨酸解氨酶的分布、特点进行了概括,并分别对植物、微生物苯丙氨酸解氨酶的研究情况进行了综述.重点介绍了生产苯丙氨酸解氨酶的微生物选育方法以及提高酶活性、酶稳定性的研究进展,旨在为该酶的进一步研究提供参考依据.     

冬枣果实苯丙氨酸解氨酶酶学特性的研究

研究了冬枣果实苯丙氨酸解氨酶(PAL)的酶学特性。L-苯丙氨酸为枣果实PAL的反应底物,结果表明,最适底物浓度为1.0 mmol/L。枣果实PAL属于别构酶,具有2个米氏常数,Km分别为0.115×10-4、8.177×10-4 mol/L。枣果实PAL最适温度为50℃,最适p H为8.8。在浓度为0~4.0 mmol/L范围里,L-半胱氨酸、酪氨酸、色氨酸、组氨酸均对枣果实PAL活性有一定的抑制作用,而抗坏血酸和蔗糖对PAL有激活作用。金属离子对PAL激活作用由强到弱依次为:Cu2+Fe3+Fe2+Na+;金属离子对PAL抑制作用由强到弱依次为:Al3+Mg2+Mn2+Ca2+Zn2+K+。研究结果揭示了冬枣果实PAL酶学特性,为通过调控枣果实PAL酶活性改善果实贮藏特性提供了理论依据。     

苯丙氨酸解氨酶(PAL)的研究进展

对苯丙氨酸解氨酶的分布、特点进行了概括,并分别对植物、微生物苯丙氨酸解氨酶的研究情况进行了综述。重点介绍了生产苯丙氨酸解氨酶的微生物选育方法以及提高酶活性、酶稳定性的研究进展,旨在为该酶的进一步研究提供参考依据。      

荔枝果肉苯丙氨酸解氨酶特性的研究

研究了荔枝果肉中苯丙氨酸解氨酶（L-phenylalanine ammonia-lyase,PAL）的酶学特性。荔枝PAL动力学曲线并不遵循米氏方程,其最适底物浓度为2 mmol/L。在硼砂-硼酸缓冲液中,荔枝PAL的最适反应p H为8.7。PAL不耐酸碱,尤其不耐酸。荔枝PAL的最适反应温度为45℃,高于75℃则易于钝化,具有较强的耐热性。L-酪氨酸和L-半胱氨酸对荔枝PAL均有明显的抑制作用;金属离子中,Fe2+和Fe3+对荔枝PAL活性具有明显的促进作用,而Ca2+、Cu2+、Co2+、Ag+离子则对其活性有明显的抑制作用。      

山药苯丙氨酸解氨酶特性的研究

本文研究了山药苯丙氨酸解氨酶(PAL)的动力学特性。结果表明,PAL最适底物浓度为1mmol/L,底物浓度过高或过低都对酶活力不利。PAL在硼酸-氢氧化钠缓冲液中适宜的pH范围为7.6～9.2,最适pH有2个:pH8.0和pH8.8。PAL不耐酸碱,尤其不耐碱。PAL适宜的温度范围为35～55℃,最适反应温度为45℃,超过70℃则容易钝化。L-酪氨酸和L-半胱氨酸对PAL活性都有抑制作用,抑制程度随抑制剂浓度增加而增强。L-酪氨酸的抑制作用较强,是PAL的竞争型抑制剂。L-胱氨酸对PAL的活性无影响。     

苯丙氨酸解氨酶重组大肠杆菌的培养

为了提高苯丙氨酸解氨酶的产量和活力,对高效表达圆红冬孢酵母苯丙氨酸解氨酶基因的重组大肠杆菌JM109进行培养,优化了发酵培养基成分、培养条件以及发酵工艺,结果表明,最佳葡萄糖浓度为20 g/L,碳氮比为7.86,添加5 g/L酵母粉和蛋白胨有利于菌体产酶,最佳发酵液初始pH为7.5,接种量为10 %.通过以上优化,重组大肠杆菌培养18 h时酶活可达到70 U/g(DCW),酶活比原工艺提高了1.6倍.     

鸡肉酶解工艺及其产物功效研究进展

鸡肉蛋白在适宜的工艺条件下与蛋白酶发生酶促水解反应,从而使肽键断裂生成分子质量较小的肽及游离氨基酸。因而,鸡肉酶解产物中含有丰富的氨基酸和肽类物质,具有抗氧化、抗疲劳、免疫调节等多种生物活性,用于研发相关天然功能性产品、调味料等,可大幅度地提高鸡肉的附加价值和利用率。本文主要对鸡肉酶解工艺、酶解产物功效及其应用进行综述,以期促进对鸡肉酶解产物的深入研究,为鸡肉酶解产物的开发利用提供理论参考。     

序列结构对酪氨酸酚裂解酶耐热性的贡献

为了解酪氨酸酚裂解酶（TPL）热稳定性与序列之间的关系,为突变产生耐热性的酪氨酸酚裂解酶提供参考,利用生物信息学对来源于Symbiobacterium toebii的耐热酪氨酸酚裂解酶StTPL、来源于Fusobacterium nucleatum的耐热酪氨酸酚裂解酶FnTPL和来源于Citrobacter freundii的中温酪氨酸酚裂解酶CfTPL进行进化树、一级结构、二级结构和三级结构的比较。随着TPL中一级结构中脯氨酸含量增多,最适反应温度的增加,StTPL、FnTPL和CfTPL的脯氨酸含量分别为5.02%、3.70%、2.85%,二级结构中β-折叠和转角较多,分别为25.51%、25.00%、23.91%,这些特征符合文献报道的耐热酶和中温酶的区别。将StTPL、FnTPL和CfTPL的三维结构叠加比对发现,310-313残基区域、残基13、82-88残基区域叠加效果差,313残基突变有利于CfTPL提高热稳定性,StTPL中的Ala13、Glu83、Thr407突变有利于StTPL热稳定性,推测以上残基区域和热稳定性相关,也符合已有文献报道的情况。此外,有关生物信息学分析为进一步理解超稳酶的超稳机制以及筛选改造新的超稳酶提供了初步参考。     

酪氨酸酚解酶高产菌株快速筛选模型的建立与应用

以甲酚红作指示剂 ,在加有酪氨酸的固态培养基上 ,根据甲酚红由黄变红所形成的变色圈的大小筛选酪氨酸酚解酶高产突变株是一种平板快速筛选方法。弗氏柠檬酸细菌ATCC80 90菌株经紫外线和亚硝基胍诱变处理后 ,经该法筛选得到突变株C37 30 ,该菌株产酪氨酸酚解酶达 12 5U/ g干菌体 ,较出发菌株提高 2 32 %。连续 5代传代试验表明 ,突变株C37 30产酶稳定     

液氨整理综述

液氨整理可以提高纯棉等天然纤维及其混纺产品的穿着服用性能．因结合树脂整理新技术而进一步提高免烫效果,从而引起各方面的关注。文章记述了我国自1982年上海引进美国液氨整理设备以来．到1992年河南新乡印染厂自制首台液氨整理样机．以及2000年初江阴澄江纺机厂自行设计制造的液氨整理机和氨回收装置的历程,并介绍了其有关技术设备。     

大豆苯丙氨酸解氨酶(PAL)在大肠杆菌中的重组表达及活性鉴定

利用基因重组技术,克隆了大豆(Glycinemax(L.)Merr.)的苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineammonialyase,PAL)全基因,构建pET-GMPAL工程表达质粒,在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达,并利用细胞裂解液得到的粗酶液转化L-苯丙氨酸生成肉桂酸。通过8%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,获得了分子量在77.9kD的一条蛋白质特异表达带,特异蛋白质表达量达到总蛋白质含量的8%左右。通过初步发酵,获到具有PAL活性的粗酶液裂解液,粗酶的比活力达到211.7μmol/gpro·min(3529μkat/kg),高于红酵母PAL和欧芹重组PAL表达的比活力。结果表明克隆重组的大豆PAL基因通过表达质粒pET-GMPAL在E.coli中能高效地表达为有催化功能的高活力酶。     

Microbulbifer salipaludis褐藻胶裂解酶的酶学性质研究

为获得可高效生产褐藻寡糖的褐藻胶裂解酶,该文筛选出一种来源于Microbulbifer salipaludis的褐藻胶裂解酶（Microbulbifer salipaludis alginate lyase,Misa-aly）,并在大肠杆菌 Escherichia coli BL21（DE3）异源表达,分离纯化后进行酶学性质鉴定。结果表明,该酶最适pH值为8.5（Tris-HCl缓冲液）,最适温度为45℃,偏好底物为聚甘露糖醛酸,40℃下保温1 h酶活下降约50%。Misa-aly对Na+依赖性较低,以海藻酸钠为底物通过3,5-二硝基水杨酸（3,5-dinitrosalicylic acid,DNS）法测定酶活为（53.0±1.2）U/mg,反应产物是聚合度为2～4的寡糖,24 h后酶解转化率达到94.7%,底物海藻酸钠几乎全部酶解。     

定量PCR技术在食源性致病微生物检测中的应用

食源性致病微生物是影响食品质量和安全的主要因素之一,建立和完善食品中致病微生物快速定量检测技术具有重要的现实意义。定量PCR能快速、敏感、特异而准确定量,深入有效地利用该技术,必将有力促进食源性致病微生物快速检测工作的发展。     

广东饲料微生物污染状况的研究

对从广东省饲料厂采集的 45个样品进行了微生物污染状况的分析。结果表明 :霉菌检出率最高 ,达10 0 % ,带菌量为 3.6 4× 10 4 cfu/g ;细菌带菌量最高 ,达 5 .33× 10 4 cfu/g。在霉菌中 ,曲霉属检出率最高 ,达 97.8% ,带菌量为 1.36× 10 4 cfu/g ;青霉和芽枝霉也是饲料中常见菌 ;在曲霉属中 ,以灰绿曲霉和白曲霉最常见 ,带菌量高 ;杂色曲霉也较常见 ,带菌量低 ;黄曲霉检出率和带菌量都较低。不同原料中 ,玉米污染严重 ,饼粕类原料比鱼粉、玉米蛋白粉菌相复杂 ,带菌量高 ;国产豆粕和玉米蛋白粉比进口污染较重 ,不同批次间差异较大。