氩激光对体外培养牛视网膜色素上皮细胞损伤及其防护的实验研究

目的:观察不同功率激光对体外培养的牛视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞的损伤以及地塞米松(Dexamethasone,DXM)对激光损伤的保护作用。方法:采用甲基噻唑基四唑(Methylthiazolyte-trazolium,MTT)方法测定不同功率激光照射对RPE细胞的损伤率。并观察在激光照射前后应用3种浓度的DXM后,0.8W功率的激光对RPE细胞的不同损伤率。结果:激光输出功率越大RPE细胞损伤越重。激光照射前应用DXM可减轻激光对RPE细胞的损伤,而照射后应用则无明显作用。结论:激光对RPE细胞的损伤率与激光输出功率成正相关,激光照射前应用DXM对RPE细胞有保护作用     

bFGF对体外培养牛视网膜色素上皮细胞激光损伤的实验研究

目的:观察激光损伤后不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)对RPE细胞修复的作用。方法:采用甲基噻唑基四唑(Methylthiazolyte-trazolium,MTT)方法测定100mW功率的激光损伤后分别应用6种浓度的bFGF,不同时间RPE细胞的损伤修复情况。结果:激光照射后应用bFGF24小时可明显增加RPE细胞的再生,并呈剂量相关。结论:激光照射后应用bFGF对RPE细胞修复有促进作用。     

锌盐对培养的人视网膜色素上皮细胞增生的影响

目的 探讨硫酸锌盐对体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞增生及Caspase-3表达的影响。方法 采用MTT法检测不同浓度硫酸锌盐对RPE细胞生长的影响，用TUNEL技术检测RPE细胞凋亡，免疫细胞化学染色观察Caspase-3表达。结果 锌盐浓度高于0．001μmol／L就可抑制RPE细胞的增生；当锌盐浓度高于10μmol／L后对RPE细胞的增生抑制率与药物剂量成正比。不同浓度锌盐均可诱导RPE细胞表达Caspase-3增加，且当锌盐浓度高于0．01μmol／L就可诱导RPE细胞凋亡。结论 锌盐可诱导RPE细胞表达Caspase-3增加，从而可引发RPE细胞的凋亡。因此对于不缺乏锌的年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration，ARMD)患者锌剂治疗未必有益。     

表没食子儿茶素没食子酸酯影响慢性紫外线辐射诱导的人皮肤成纤维细胞凋亡和突变的研究

目的 研究紫外线(UV)照射对人皮肤成纤维细胞的细胞凋亡率、细胞周期变化和次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)基因位点突变频率的影响以及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的干预作用.方法 采用一定剂量的中、长波紫外线(UVA和UVB)慢性照射培养的新生儿包皮成纤维细胞.通过流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,HPRT突变分析法检测突变频率.结果 慢性UVA组引起的细胞凋亡率低于UVB组(P<0.05),而HPRT基因位点突变的频率是UVB组的4.79倍.EGCG干预组与单纯UV辐射组相比,成纤维细胞的凋亡率增加,HPRT基因位点突变的频率降低.结论 慢性照射日常剂量UVA,其损伤性高于UVB.EGCG可以升高慢性UV照射引起的细胞凋亡率,降低UV照射引起的突变频率,提示EGCG可以诱导不可逆损伤细胞的凋亡,从而减少突变细胞.     

胎兔视网膜色素上皮移植的初步研究

目的:观察受体Bruch膜和视网膜色素上皮(retrial pigment epithelial,RPE)受损情况下供体RPE细胞的增殖、分化和凋亡状况。方法:制备有色素胎兔RPE细胞悬液,移植至破坏了Bruch膜和RPE细胞的12只成年新西兰大白兔的视网膜下腔。左眼作为实验组,右眼作为对照,于术后3、7和14d, 采用Ki-67免疫组化和TUNEL染色,并提取RPE细胞DNA作琼脂糖凝胶电泳,观察Ki-67阳性RPE细胞及移植的RPE细胞和受体ONL细胞的凋亡百分率,行统计学分析。结果:术后随着时间的延长,实验组或对照组Ki-67阳性RPE细胞数显著增加(P<0.05);术后14 d实验组或对照组的TUNEL染色ONL核阳性百分率较术后3 d显著减少(P<0.05);术后实验组TUNEL染色阳性和细胞核深染的RPE细胞无显著增加(P>0.05);细胞核深染的RPE细胞百分率明显高于TUNEL阳性的细胞(P<0.01)。对照组未见TUNEL阳性的RPE细胞。术后14d,移植的RPE细胞DNA电泳出现典型的凋亡带。结论:在受体Bruch 膜、RPE受损状态下,供体的RPE细胞具有良好的增殖和分化能力。     

反义寡核苷酸对视网膜色素上皮细胞中端粒酶逆转录酶表达及细胞增殖的作用

目的:研究视网膜色素上皮(RPE)细胞中端粒酶逆转录酶(TERT)的表达及其反义寡核苷酸(ASODN)对其表达和细胞增生的抑制作用,为增生性玻璃体视网膜病变(PVR)探索基因治疗新途径. 方法:体外培养兔眼RPE细胞,在不同时间采用链霉亲合素-生物素化过氧化物酶复合物(SABC)免疫组织化学法检测TERT的表达;不同浓度的TERT ASODN和正义寡核苷酸(SODN)分别作用于体外培养的RPE细胞,采用免疫组织化学方法检测TERT的表达;四唑盐比色法(MTT)检测在不同浓度的TERT ASODN和SODN作用下RPE细胞生长活性及其生长抑制率. 结果:体外培养兔眼RPE细胞可表达TERT,在5,10 μmol/L ASODN作用下,TERT的表达明显受抑制;TERT ASODN能明显抑制RPE细胞增生活性,并呈剂量依赖性. 结论:一定浓度TERT ASODN能序列特异性地抑制RPE细胞TERT表达和增生活性,有望进一步用于PVR的治疗实验研究.     

中波紫外线致16HBE细胞损伤及其机制

目的探讨中波紫外线(UVB)照射对人支气管上皮细胞(16HBE)的生物学效应及其机制。方法细胞分为不同照射剂量同一观察时间组(剂量分别为0、10、30、50、70、100 J/m2,观察时间为照后12 h)和同一剂量不同观察时间组(剂量为50 J/m2,观察时间为照后2、4、8、12、24 h)以观察UVB对16HBE细胞的存活率的影响;琼脂糖凝胶电泳观察细胞接受50 J/m2照射后其DNA的断裂情况、流式细胞术检查细胞周期、Western blot检查NF-kB的表达情况。结果 UVB照射后,可使16HBE细胞的存活率下降;DNA出现明显的"梯状条带";细胞发生S期阻滞以及NF-kB蛋白的表达增强。结论 UVB照射能引起16HBE细胞生长抑制和凋亡;其作用机制可能与NF-kB蛋白的表达增强有关。     

转化生长因子β1对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响及其作用机制

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法用线栓法建立局灶脑缺血再灌注模型，立体定向下侧脑室内注入。TGF—β1，观察不同剂量TGF—βl对局灶脑缺血再灌注损伤及对细胞凋亡、肿瘤坏死因子(TNF—α)表达的影响。结果TGF—β1小剂量、高剂量治疗组TNF—a表达及细胞凋亡较对照组均明显降低，神经功能缺陷评分明显下降，小剂量与高剂量组比较无明显差异。结论TGF—β1对脑缺血再灌注损伤具有保护作用，且与剂量无明显关系；其机制可能为抑制TNF-α表达及细胞凋亡。     

生长激素对盐酸致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的保护

目的 观察不同剂量生长激素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响。方法 建立体外培养AT-Ⅱ细胞盐酸损伤模型，采用不同剂量的生长激素干预，行流式细胞仪检测AT-Ⅱ细胞凋亡和坏死率。以2，3-二苯基溴化四唑(MTT)染色记数法记细胞生长曲线。结果 盐酸可导致AT-Ⅱ细胞损伤，表现为肺泡Ⅱ型上皮细胞坏死和凋亡率增高；GH可促进AT-Ⅱ细胞增殖并降低其凋亡率，在10ugml-1至500ugml-1范围内，其抗凋亡和促增殖作用呈剂量依赖性。结论 GH对盐酸致肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡可能有保护作用。     

紫外线致成纤维细胞损伤及VitE保护作用的研究

目的观察UVB辐射对体外培养的真皮成纤维细胞的损伤作用及VitE对细胞的光保护作用。方法由健康人皮肤中分离培养成纤维细胞,用紫外线以一定时间(1、5、10、15分钟)进行照射,并加入VitE进行干预处理。MTT法检测细胞增殖活性,荧光显微镜检测各受试组细胞凋亡率。结果UVB照射后24h,上述细胞均出现增殖活性下降,活性下降程度与照光时间成正比;加入VitE处理后,细胞活性可有一定程度恢复。UVB照射可诱导真皮成纤维细胞产生凋亡,其凋亡率随UVB照射时间延长而增加。加入VitE处理后,各组HeLa上皮细胞和成纤维细胞凋亡率均明显下降。结论紫外线辐射可引起真皮成纤维细胞损伤,VitE可抑制紫外线辐射的损伤效应。     

肾上腺素诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的实验研究

目的　观察肾上腺素对体外培养人视网膜色素上皮 (RPE)细胞凋亡的影响 ,探讨细胞凋亡与中心性浆液性脉络膜视网膜病变的关系。方法　通过流式细胞技术 (FCM )、光镜、TUNEL细胞凋亡原位末端标记法检测肾上腺素和 β 受体阻滞剂普萘洛尔对体外培养的人RPE细胞凋亡的作用。 结果　人RPE细胞对低浓度的肾上腺素有一定耐受作用 ,10 pg/ml～ 10 4pg/ml肾上腺素组无明显凋亡的发生 ;10 5pg/ml～ 10 8pg/ml肾上腺素诱导RPE细胞 72h可以检测到凋亡峰 ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 0 1) ;加入 10 3 pg/ml普萘洛尔可以提高RPE细胞对肾上腺素毒性作用的耐受 ,未检见RPE细胞凋亡的发生。TUNEL法光镜下观察到细胞核被蓝色染料标记的凋亡细胞。结论　肾上腺素可以诱导培养的人RPE细胞凋亡 ,这可能是中心性浆液性脉络膜视网膜病变早期病理改变的机制之一。     

环孢菌素A对兔视网膜色素上皮细胞光损伤防治作用的观察

目的研究环孢菌素A（cyclosporine A）对兔视网膜色素上皮光损伤的防治应用。方法取兔眼的视网膜色素上皮细胞作培养。分为4组,一组阳性对照,一组阴性对照,另外两组分别于不同时间给予环孢菌素A。光照后,应用吖啶橙染色观察各个组别的细胞凋亡情况。结果光照后,阳性对照组出现明显的凋亡,细胞吖啶橙染色出现凋亡的形态学改变。光照前加药组凋亡不明显。而后加药组则出现明显凋亡,和阳性对照组相比并无差别。结论环孢菌素A可以预防视网膜色素上皮细胞光损伤所致的凋亡,其机制可能是与细胞线粒体相结合而预防凋亡。     

The Effect of Zinc on the Apoptosis of Cultured Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Age relatedmaculardegeneration (ARMD ) ,orsenilemaculardegeneration (SMD) ,hasbecomeamoreimportantsightlessdisease .The precisepathogenicmechanismofARMDiscurrentlyun known .Sotheeffectivetreatmentsand preventivemeasureshavenotbeenavailableuntilnow .Ithasbeenprovedthattheretinalpigmentepithelia (RPE)wasthemaincelltypeaffectedbyARMD .Zincdefi ciencyhasbeensuspectedasapotentialriskfactor.Inthisstudy ,theinfluenceofzincontheapoptosisofRPEwasstudied .1　MATERIALSANDMETHODS1 1　MAT…     

Long-term studies on allotransplantation of rabbit retinal pigment epithelial cells double-labelled with 5-bromodeoxyuridine and natural pigment

Ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ（ＲＰＥ）ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ,ａｔｒｏｐｈｙａｎｄｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｈａｖｅｂｅｅｎｉｍｐｌｉｃａｔｅｄａｓｔｈｅｃａｕｓｅｏｆｍａｎｙｒｅｔｉｎａｌｄｉｓｅａｓｅｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇａｇｅ?..     

兔视网膜色素上皮细胞培养方法的改进

目的：寻求一种更好的培养兔视网膜色素上皮(RPE)细胞的方法。方法：在无菌滤纸上剪开眼球，固定眼杯，用胰酶直接消化视网膜色素上皮面，收取RPE细胞。将初次换液时间由取材后48h延长至72h，记录改变换液时间对细胞数量及细胞形态等的影响。用多巴(DOPA)染色和免疫组织化学对细胞鉴定。结果：采用改进后方法收取的细胞呈分散均匀生长。延长初次换液时间为72h后获得的细胞增多，原代细胞长至融合状态需要的时间缩短，色素颗粒脱失现象减轻。结论：采用该方法更适于RPE细胞的收获和培养。     

黄斑颗粒含药血清预处理对人RPE细胞缺氧损伤的保护作用

目的:观察中药黄斑颗粒含药血清预处理后对人视网膜色素上皮(hRPE)细胞缺氧损伤的保护作用。方法:制备不同剂量中药黄斑颗粒含药血清,用含药血清预处理hRPE细胞,分不同时间段建立化学缺氧损伤模型,培养24h后,用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果:黄斑颗粒含药血清组细胞活力较空白血清组与模型组细胞活力显著提高,其中高剂量含药血清组细胞活力高于低剂量含药血清组,但仍低于正常对照组,有显著性差异;各含药血清组细胞活力抑制率均明显降低,其中高剂量组低于低剂量组。此外,含药血清能促进缺氧条件下RPE细胞由G0/G1期进入S期,促进RPE细胞的增殖。结论:中药黄斑颗粒含药血清预处理对人视网膜色素上皮细胞缺氧损伤具有一定的保护作用。     

条件培养液对人视网膜前体细胞分化的诱导

目的:研究各种培养液对人视网膜前体细胞(RPC)的诱导分化作用.方法:分离培养3～5个月人胚胎RPC,分别用胎牛血清(FBS组)、视网膜组织培养上清(RE组)、视网膜色素上皮培养上清(RPE组)诱导分化.采用免疫组化SP法检测细胞诱导前后Nestin、微管相关蛋白-2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、视紫红质(Rho-dopsin)及蛋白激酶C(PKC)和钙结合蛋白(Calbindin)的表达情况,流式细胞术检测诱导后MAP-2、GFAP及Rhodopsin阳性细胞数.结果:原代及传代培养的RPC表达Nestin,能分裂增殖,形成子代细胞团.RE组和FBS组细胞诱导分化后形态多样,连接广泛;RPE组细胞呈圆形,不贴壁.诱导分化后RE组细胞MAP-2的表达高于RPE组和FBS组(P＜0.01),而Rhodopsin的表达低于RPE组(P＜0.01);GFAP的表达在RPE组最低,RE组较高,FBS组最高(P＜0.05).结论:不同培养基诱导可使人RPC的分化产生差异.     

汉防己甲素对兔视网膜色素上皮细胞Bax、Bcl-2表达的影响

目的：评价汉防己甲素（Tet）对兔视网膜色素上皮（RPE）细胞增殖的抑制作用及对凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。方法：MTT法检测Tet对体外培养兔RPE细胞增生的影响,流式细胞仪检测Tet对兔RPE细胞增殖周期、凋亡率及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果：Tet对兔RPE细胞的抑制率均随作用时间的延长而增高,各时间点之间差异均有统计学意义（P〈0.05）;抑制率均随药物质量浓度的增高而增高,除Tet10μg/ml、15μg/ml外,各质量浓度之间差异有统计学意义（P〈0.05）;Tet10μg/ml作用72 h后,出现G0/G1期细胞明显增多,S期与G2/M期细胞降低,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达下降,Bcl-2/Bax比值下降,以上与对照组相比均有显著性差异（P〈0.05）。结论：Tet可能通过干预RPE细胞Bax与Bcl-2蛋白的表达而对其增殖产生抑制作用。     

牛磺酸对TGF-β1诱导的人RPE细胞凋亡的抑制作用

目的:研究牛磺酸对TGF-β1诱导体外培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的抑制效应及其机制。方法:体外原代培养正常RPE细胞。设置正常对照组(无药物处理);损伤组(1μg/L TGF-β1处理RPE细胞);牛磺酸保护组(10 mmol/L和20 mmol/L牛磺酸预先处理RPE细胞后再加入1μg/L TGF-β1)。利用流式细胞仪检测RPE凋亡率;RT-PCR检测RPE细胞Fas mRNA表达情况;通过Fur-2/AM测量细胞内游离钙离子浓度。结果:TGF-β1能够诱导RPE细胞凋亡,细胞Fas mRNA表达明显增高,而且细胞内钙离子浓度升高;牛磺酸可以显著地降低TGF-β1诱导的RPE细胞的凋亡率,呈浓度依赖性,Fas mRNA的表达随细胞内钙离子浓度的降低而减少。结论:牛磺酸可以抑制TGF-β1所致体外培养RPE细胞的凋亡;其作用机制可能与降低细胞内钙离子浓度进而影响Fas通路发挥诱导细胞凋亡效应有关。