不同分子量尿毒血清组分对人肾小管上皮细胞CTGF基因和蛋白表达的影响

目的：探讨不同分子量尿毒血清组分对人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子（CTGF）基因和蛋白表达的影响。方法:无菌条件下收集40份尿毒症病人血清和20例正常人血清，应用Centricon Plus 20 Centrifugal Filter Devices将尿毒血清分离成分子量 >10 000 D，5 000-10 000 D，<5 000 D 3个组分。应用Western blotting方法检测CTGF的蛋白表达，RT-PCR方法检测CTGF mRNA表达。结果:2.5%-20%浓度尿毒血清组CTGF基因表达均明显高于正常对照组，以10%尿毒血清组最高；分子量 <5 000 D尿毒血清组CTGF基因表达与正常对照组差异无显著，而分子量 5 000-10 000 D和 >10 000 D尿毒血清组CTGF基因表达均高于正常对照组，以分子量 >10 000 D尿毒血清组最高。不同浓度尿毒血清组CTGF蛋白表达均高于正常对照组，且有随着尿毒血清浓度的升高而增高，在不同分子量尿毒血清组中，以分子量 >10 000 D组增高最为显著。结论：尿毒症毒素通过影响人肾小管上皮细胞致纤维化细胞因子CTGF基因和蛋白表达从而在人肾小管-间质纤维化中起重要作用，而以分子量大于 10 000 D的尿毒症毒素在其中起主要作用。     

SnoN对高糖诱导大鼠原代肾小管上皮细胞纤维连接蛋白合成的影响

目的: 观察核转录共抑制因子SnoN (Ski-related novel protein N)对高糖诱导大鼠原代肾小管上皮细胞(RTECs)纤维连接蛋白(FN)合成的影响。方法: 原代培养大鼠RTECs,免疫荧光细胞化学和Western blotting检测培养细胞的上皮性钙黏蛋白、 角蛋白-18和α-平滑肌肌动蛋白表达,鉴定培养细胞;正常糖(5.5 mmol/L)、高糖(25 mmol/L)和相同渗透压的甘露醇分别培养RTECs 30 min、2 h、12 h、24 h、48 h、72 h和96 h;SnoN siRNA转染RTECs,分为对照组、高糖组、control siRNA组和SnoN siRNA组;Western blotting和免疫细胞化学检测不同处理组RTECs中SnoN和FN蛋白的表达;RT-PCR检测FN mRNA。结果: 与正常糖培养组相比,高糖刺激能抑制 RTECs中SnoN蛋白表达,且呈时间依赖性;高糖刺激能使RTECs中FN蛋白和mRNA表达增加;与单纯高糖培养组相比,转染SnoN siRNA 能进一步促进高糖诱导的RTECs中FN蛋白表达(P<0.05)。结论: SnoN表达减少参与了高糖诱导的RTECs中FN合成过程。     

高钙离子诱导人肾小管上皮细胞表达MCP-1和HMGB1

 目的: 观察体外培养的人肾小管上皮细胞在高钙离子环境下细胞损伤及炎性因子MCP-1和HMGB1的表达。方法: 体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2细胞),使用CaCl₂配制成不同钙离子浓度的溶液作为刺激剂,实验分为正常对照组(正常培养液)、Ca I组(5 mmol/L Ca²⁺液)、Ca Ⅱ组(10 mmol/L Ca²⁺液)和Ca Ⅲ组(15 mmol/L Ca²⁺液)。各组细胞分别培养至3 h、6 h、9 h时,采用MTT法检测细胞活力。培养6 h时,采用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)进行细胞凋亡染色,观察各组细胞凋亡情况;同时收集细胞培养上清液,采用ELISA法分别检测各组细胞上清液过氧化氢(H₂O₂)和8-异前列烷(8-IP)浓度,微量酶标仪法检测各组细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性。此外,培养6 h时收集各组细胞,采用real-time PCR法检测细胞MCP-1和HMGB1的mRNA表达情况;并收集各组细胞上清液,采用ELISA法检测其MCP-1和HMGB1的含量。结果: 随着细胞培养液中钙离子浓度的增加,细胞活力抑制率和细胞凋亡明显增加。LDH活性、细胞上清液H₂O₂的浓度和8-IP的含量在Ca I组、Ca Ⅱ组和Ca Ⅲ组均较正常对照组高(P<0.05)。real-time PCR的结果显示,与对照组比较,3个钙离子诱导组细胞MCP-1和HMGB1的mRNA表达水平升高,差异有统计学显著性(P<0.05)。此外,3个钙离子诱导组细胞上清液MCP-1和HMGB1含量均较正常组高(P<0.05)。结论: 本研究结果提示,高钙离子可诱导人肾小管上皮细胞出现氧化应激损伤,同时细胞高表达MCP-1和HMGB1。由MCP-1和HMGB1引发的炎症反应可能是高钙尿参与结石形成的重要机制。     

PKCα参与高糖调节大鼠肾小管上皮细胞骨形态发生蛋白-7的表达

目的观察蛋白激酶Cα(PKCα)对糖尿病(DM)及高糖培养的大鼠肾小管上皮细胞骨形态发生蛋白-7(BMP-7)表达的影响。方法将大鼠分为对照组(control)和糖尿病组(DM),每组8只,饲养12周处死动物;将体外培养的原代肾小管上皮细胞,随机分为对照组(control)、高糖组(HG)、高糖+PKCα特异性抑制剂G6976 1μmol/L组(HG+G6976)和高渗组(HM),处理72 h后收集肾小管上皮贴壁细胞,免疫组化及免疫细胞化学观察肾小管上皮细胞BMP-7、PKCα、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和纤维连接蛋白(FN)蛋白表达;Western blot检测BMP-7蛋白的表达;RTPCR法检测BMP-7、PKCα和FN mRNA水平。结果对照组大鼠肾小管上皮细胞BMP-7蛋白及mRNA高表达,DM组或HG组BMP-7的表达明显低于对照组(P0.05),PKCα、AngⅡ和FN的表达较对照组明显增多(P0.05),BMP-7蛋白与PKCα呈显著负相关,HG+G6976组BMP-7蛋白及mRNA表达则较HG组增多(P0.05),AngⅡ和FN则较HG组减少(P0.05)。结论 PKCα可能参与高糖调节大鼠肾小管上皮细胞BMP-7的表达。     

瓜蒌皮提取物通过调控NQO1对高糖诱导的人肾小管上皮细胞炎症因子表达的影响北大核心CSCD

目的:探讨瓜蒌皮提取物(PT)通过调控NQO1对高糖诱导的人肾小管上皮细胞炎症因子表达的影响。方法:采用5.5 mmol/L和30 mmol/L的D-葡萄糖处理人肾小管上皮细胞HK-2,记为对照组和高糖(HG)组;分别用12.5、25、50μg/ml的PT处理细胞,进行高糖处理,记为HG+PT-L组、HG+PT-M组、HG+PT-H组;采用脂质体法将vector和NQO1转染至细胞后,进行高糖处理,记为HG+vector组和HG+NQO1组;si-NC和si-NQO1转染细胞后,用50μg/ml PT和高糖处理细胞,记为HG+PT+si-NC组和HG+PT+si-NQO1组。MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2、NQO1蛋白表达;ELISA检测IL-1β、IL-10、TNF-α表达水平。结果:HG组细胞活力、Bcl-2、NQO1蛋白表达明显低于对照组,细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-1β、IL-10、TNF-α水平明显高于对照组。HG+PT-L组、HG+PT-M组、HG+PT-H组细胞活力、Bcl-2、NQO1蛋白表达明显高于HG组,细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-1β、IL-10、TNF-α水平明显低于HG组。HG+NQO1组NQO1、Bcl-2蛋白表达、细胞活力明显高于HG+vector组,细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-1β、IL-10、TNF-α水平明显低于HG+vector组。HG+PT+si-NQO1组NQO1、Bcl-2蛋白表达、细胞活力明显低于HG+PT+si-NC组,细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-1β、IL-10、TNF-α水平明显高于HG+PT+si-NC组。结论:PT通过上调NQO1表达减轻高糖诱导的人肾小管上皮细胞凋亡和炎症损伤。     

MG132对高糖条件下肾小管上皮细胞SnoN蛋白表达及纤维化效应的影响

目的:观察蛋白酶体抑制剂MG132对高糖培养条件下肾小管上皮细胞核转录共抑制因子Sno N蛋白表达的影响,探讨MG132减轻高糖状态下肾小管纤维化病变的作用及可能机制。方法:将体外培养的NRK-52E细胞分为正常组(NG)、高糖组(HG)和不同浓度MG132预处理后高糖培养组(HG+MG132),采用免疫荧光双染的方法观察E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肾小管上皮细胞中的表达和分布,用Western blotting方法检测Sno N、Samd泛素化调节因子2(Smurf2)、Arkadia、E-cadherin、α-SMA和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)等目标蛋白的相对表达量。结果:与NG组相比,HG组肾小管上皮细胞E-cadherin和Sno N表达减少(P0.05),而α-SMA、Col-Ⅰ、Smurf2和Arkadia表达增多(P0.05);与HG组相比,不同浓度MG132预处理肾小管上皮细胞后高糖培养,可见肾小管上皮细胞中Sno N和E-cadherin蛋白表达显著上调(P0.05),而α-SMA和Col-Ⅰ蛋白的表达显著下调(P0.05),并且这种效应呈量效依赖性,但MG132预处理对Smurf2和Arkadia的表达无影响。结论:MG132可对抗高糖介导的肾小管上皮细胞的纤维化效应,其机制可能是通过减少Sno N蛋白的泛素化降解作用实现的。     

BMP-7对高糖环境下肾小管上皮细胞Id2和E2A蛋白表达的影响

 目的: 通过观察高糖环境下给予外源性骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对肾小管上皮细胞(NRK-52E)表达分化抑制因子2(Id2)和转录因子E2A的影响,探讨BMP-7减轻高糖诱导的肾小管纤维化病变的可能机制。方法: 将体外培养的肾小管上皮细胞NRK-52E分为3组:对照(control)组、高糖(HG)组和不同浓度BMP-7(10 μg/L和20 μg/L)干预组,HG组和干预组分别设12 h、24 h和48 h 3个时点。Western blot方法检测Id2、E2A、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)蛋白的表达,real-time PCR方法检测Id2 mRNA的表达。结果: 与control组相比,HG组Id2的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白水平明显下调,E2A、α-SMA和Col-Ⅰ的蛋白水平明显上调(P < 0.05);与HG组相比,20 μg/L BMP-7干预组Id2的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白水平均较同时点显著上调,E2A、α-SMA和Col-Ⅰ的蛋白水平显著下调(P < 0.05)。相关性分析结果显示,Id2蛋白与E2A蛋白表达呈显著负相关(P < 0.05)。结论: BMP-7可阻断高糖诱导的肾小管上皮细胞的纤维化,其机制可能与促进Id2蛋白并抑制E2A蛋白的表达有关。     

甲状旁腺素对人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1表达的影响

目的:通过观察甲状旁腺素(PIH)对体外培养的人肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,以探讨PTH在肾间质纤维化发病机制中的作用.方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分别用不同浓度的PTH(10-12、10-11、10-10、10-9、10-8 mol/L)作用于HK-2细胞48 h,以及10-8 mol /L作用于HK-2细胞不同时间(12、24、48、72 h).应用RT-PCR法检测HK-2细胞内α-SMA、TGF-β1 mRNA表达水平,免疫细胞化学法检测HK-2细胞表达α-SMA阳性细胞百分数,Western blot法检测细胞内α-SMA的蛋白表达水平.结果:(1)RT-PCR结果表明,PTH呈剂量和时间依赖性地促进HK-2细胞α-SMA、TGF-β1 mRNA的表达(P＜0.01),且两者之间呈正相关(P＜0.05).(2)免疫细胞化学结果表明,PTH可增加表达α-SMA阳性的HK-2细胞百分数,且呈剂量和时间依赖性(P＜0.05).(3)Western blot结果表明,PTH 可增加HK-2细胞α-SMA的蛋白表达量,也呈剂量和时间依赖性(P＜0.01).结论:PTH可通过促进肾小管上皮细胞转分化以及TGF-β1的表达促进肾小管间质纤维化.     

miR-377调控THEM4对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT的作用

目的:探讨微小RNA-377(miR-377)对硫酯酶超家族成员4(THEM4)的靶向作用及对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞上皮间充质转化(EMT)的影响.方法:将人近端肾小管上皮细胞HK-2分为正常葡萄糖组(NG组:5mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG 组:30 mmol/L葡萄糖)、HG+miR-NC 组(HG+转...     

Netrin-1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的:研究netrin-1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法:用高糖培养人肾小管上皮HK-2细胞,real-time PCR和Western blot测定细胞中netrin-1的表达水平。用过表达netrin-1慢病毒感染HK-2细胞,检测其对高糖环境下HK-2细胞中netrin-1表达的影响。流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定cleavedcaspase-3蛋白水平,2,4-二硝基苯肼法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸法检测培养液中丙二醛(MDA)含量,ELISA法测定培养液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。结果:高糖处理后的HK-2细胞中netrin-1的mRNA和蛋白水平均明显下调(P 0.05)。过表达netrin-1慢病毒能够上调高糖环境下HK-2细胞中netrin-1的表达水平(P 0.05)。高糖可促进肾小管上皮细胞分泌IL-1β和TNF-α,提高细胞培养液中LDH和MDA的水平(P 0.05),使肾小管上皮细胞的caspase-3活化并诱导细胞凋亡;上调netrin-1的HK-2细胞经高糖诱导后,细胞分泌的IL-1β和TNF-α减少,细胞中活化的caspase-3蛋白水平降低,培养液中LDH和MDA水平降低,细胞凋亡减少(P 0.05)。结论:上调netrin-1减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞氧化损伤和炎性损伤,减少细胞凋亡。     

STAT1的SUMO4修饰在高糖诱导的肾小管上皮细胞上皮-间叶性转化中的作用

目的 探讨STAT1的SUMO4修饰与人近端肾小管上皮细胞(HK-2)表型转化的关系.方法 将HK-2细胞分为空白对照组(NG,5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,30 mmol/L葡萄糖)、SUMO4-siRNA(转染SUMO4 siRNA)组、NC-siRNA(转染scrimble siRNA)组、UBC9...     

糖皮质激素诱导的蛋白激酶3种亚型在高糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达

目的：研究高糖环境下人近端肾小管上皮细胞（HKC）中血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶（SGK）3种亚型SGK1、SGK2和SGK3的表达，探讨SGK 3种亚型在介导高糖致肾小管上皮细胞过度合成细胞外基质（ECM）中的作用。 方法: 将细胞分为对照组、高糖组和渗透压对照组。分别采用RT-PCR方法和Western blotting方法检测SGK1、SGK2和SGK3 mRNA水平和SGK1蛋白水平的表达，ELISA方法和间接免疫荧光方法检测培养液中和HKC胞内纤连蛋白（FN）含量。 结果: HKC细胞中存在SGK1、SGK2和SGK3的表达。高糖刺激下， SGK1、SGK2和SGK3 mRNA和SGK1蛋白表达明显升高（P<0.01）；同时伴有HKC FN合成和分泌的增加，这与SGK上调存在一定联系。 结论: 高糖能促进近端肾小管上皮细胞SGK1、SGK2和SGK3的表达，并可能通过SGK1、SGK2和SGK3介导的信号转导途径促进细胞外基质积聚，可能在糖尿病肾病的发生和发展中发挥致病作用。     

Snail1 siRNA 对高糖诱导肾小管上皮细胞表型转变的影响

目的： 观察Snail1 siRNA对高糖诱导的肾小管上皮细胞向间充质细胞转变（TEMT）的影响。方法: 原代培养肾小管上皮细胞分为5组：（1）对照组（含糖5.5 mmol/L）;（2）高糖组（含糖25 mmol/L）;（3）Snail1 siRNA处理组,转染Snail1 siRNA,6 h后更换为高糖（含糖25 mmol/L）培养;（4）control siRNA处理组,转染control siRNA作为siRNA阴性对照,6 h后换为高糖（含糖25 mmol/L）培养;（5）高渗组（含D-manntio19.5 mmol/L）;72 h后收集细胞,用Western blotting和半定量RT-PCR检测Snail1、TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、vimentin和E-cadherin蛋白和mRNA表达。结果: 与高糖组比较,肾小管上皮细胞转染Snail1 siRNA后,Snail1 mRNA和蛋白表达水平分别下降62%和68%（P<0.01）。同时,Snail1 siRNA处理组α-SMA和vimentin蛋白和mRNA表达显著下调（P<0.01）,而E-cadherin蛋白和mRNA表达显著上调（P<0.01）。结论: Snail1参与了高糖诱导TEMT的调节。     

仙茅苷调控miR-1247-3p表达对高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症反应的影响北大核心CSCD

目的:探讨仙茅苷对高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症反应的影响及分子机制。方法:肾小管上皮细胞HK-2随机分为正常对照组(Con)、高糖组(HG)、HG+仙茅苷低、中、高剂量组、HG+miR-NC组、HG+miR-1247-3p组、HG+仙茅苷+antimiR-NC组、HG+仙茅苷+anti-miR-1247-3p组;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-1247-3p水平。结果:仙茅苷低、中、高剂量处理后,高糖诱导的肾小管上皮细胞培养液中IL-6、TNF-α水平随药物浓度的增加逐渐降低,细胞凋亡率逐渐降低,miR-1247-3p表达水平逐渐升高(P<0.05)。与HG+miR-NC组相比,miR-1247-3p过表达肾小管上皮细胞培养液中IL-6、TNF-α水平降低,细胞凋亡率降低(P<0.05)。下调miR-1247-3p表达可逆转仙茅苷对高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症反应作用。结论:仙茅苷通过上调miR-1247-3p表达抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症损伤。     

干扰维生素D3上调蛋白1通过调控Shh影响高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡

目的:探讨维生素D3上调蛋白1(VDUP-1)对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响及机制。方法:人近端肾小管上皮HK-2细胞用高糖处理后,real-time PCR和Western blot检测细胞中VDUP-1的水平。HK-2细胞转染VDUP-1小干扰RNA,real-time PCR和Western blot检测抑制效果。高糖条件培养VDUP-1表达下调的HK-2细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中caspase-3和caspase-9的活性,ELISA法测定培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,Western blot检测细胞中音猬因子(Shh)信号通路关键蛋白Patched 1 (Ptch1)、Smoothened (Smo)、锌指蛋白Gli2和Shh的水平。用外源性Shh处理HK-2细胞,Western blot检测Ptch1、Smo和Gli2的水平。用外源性Shh处理VDUP-1表达下调的HK-2细胞,高糖处理后,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中caspase-3和caspase-9的活性,ELISA法测定培养液上清中TNF-α含量。结果:高糖处理后,HK-2细胞中VDUP-1的mRNA和蛋白水平升高(P 0. 05)。转染VDUP-1小干扰RNA后,HK-2细胞中VDUP-1的mRNA和蛋白水平下降(P 0. 05)。与正常培养的细胞相比,高糖处理后HK-2细胞凋亡率显著升高,细胞中caspase-3和caspase-9活性明显升高,TNF-α含量亦明显升高(P 0. 05);下调VDUP-1表达后的HK-2细胞经高糖处理后细胞凋亡率显著降低,细胞中caspase-3和caspase-9活性也明显降低(P 0. 05)。高糖培养后细胞中Ptch1、Smo、Gli2和Shh的蛋白水平下降,而下调VDUP-1表达部分拮抗高糖对HK-2细胞中Ptch1、Smo、Gli2和Shh表达的影响。外源性Shh可以促进细胞中Ptch1、Smo和Gli2的表达,抑制高糖诱导的HK-2细胞凋亡和分泌TNF-α,与下调VDUP-1共同抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡。结论:干扰VDUP-1表达可能通过激活Shh信号通路抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡和分泌TNF-α。     

罗格列酮对高脂喂养大鼠肾小管上皮细胞SREBP-1、TGF-β1表达和细胞外基质沉积的影响

目的： 探讨高脂饮食对大鼠肾小管上皮细胞固醇调节元件结合蛋白-1（SREBP-1）、转化生长因子-β1（TGF-β1）表达和细胞外基质（ECM）沉积的影响以及罗格列酮的干预治疗。方法: 给予Wistar大鼠高脂饲料喂养并进行罗格列酮灌胃治疗3个月,进行血液生化检测。油红O检测肾脏脂质沉积情况,Masson染色检测肾脏细胞外基质沉积,SREBP-1、TGF-β1和FN蛋白表达检测采用免疫组织化学和Western blotting,原位杂交用于检测SREBP-1 mRNA的表达。结果: 罗格列酮有效避免了高脂饮食导致的大鼠血糖、血胰岛素和血甘油三酯的升高;高脂喂养组大鼠肾脏小管上皮细胞内出现了明显脂滴,小管外间质细胞外基质沉积增多,罗格列酮干预减少了脂滴和基质沉积;SREBP-1蛋白和RNA在高脂喂养组均呈高表达,明显强于正常对照组,经罗格列酮处理表达有显著下降,蛋白前体和成熟片段分别下降了27.39%和27.32%;致纤维化因子TGF-β1和细胞外基质成分之一的纤维黏连蛋白（FN）在高脂喂养大鼠肾脏的高表达均被罗格列酮干预治疗所避免,TGF-β1表达在罗格列酮干预组较高脂组降低了19.14%。结论: 罗格列酮可有效避免高脂饮食造成的大鼠肾小管上皮细胞SREBP-1、TGF-β1高表达、脂质沉积和细胞外基质堆积。     

IFN-γ对培养的人近端肾小管上皮细胞表达PD-L1的影响

目的　了解培养的人近端肾小管上皮细胞株HK2细胞程序性死亡配体 (PD L1)的表达及其影响因素。方法　RT PCR、流式细胞计数和免疫细胞化学染色法。结果　正常的HK2细胞表达少量PD L1mRNA和蛋白,2 0 0ng mLIFN γ刺激2 4h后其表达升高,并持续至72h ;不同质量浓度的IFN γ(5 0、10 0、2 0 0ng mL)刺激HK2细胞2 4h后,PD L1表达呈剂量依赖性升高,与对照组比较差异显著(P <0 .0 1)。结论　IFN γ刺激培养的HK2细胞表达PD L1升高,推测HK2细胞上表达的PD L1有可能和T细胞上的受体PD 1结合,影响肾小管间质的发病。     

银杏叶提取物对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响及其机制

目的：研究银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba, EGB)对转化生长因子β₁(transforming growth factor-β₁ TGF-β₁)诱导的人肾小管上皮细胞HK2(human tubular epithelial cells)转分化的影响及其机制。方法:复苏并传代培养HK2细胞，应用10 μg/L TGF-β₁诱导HK2细胞向间充质的转分化，给予EGB干预。应用Western印记法检测HK2细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α- 平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、NADPH氧化酶p67phox以及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）的表达，检测细胞培养液上清中丙二醛（malondialdehyde, MDA）的含量。结果:EGB显著抑制TGF-β₁诱导的E-cadherin下调(P＜0.05)和α-SMA上调(P＜0.05)； EGB显著抑制TGF-β₁诱导的p67phox表达增加(P＜0.05)，显著抑制TGF-β₁诱导的SOD表达降低(P＜0.05);同时，TGF-β₁显著促进了MDA的产生(P＜0.05),EGB可以部分抑制TGF-β₁刺激的MDA浓度的升高(P＜0.05)。结论:EGB显著抑制TGF-β₁诱导的HK2细胞转分化，其机制可能是EGB 抑制了TGF-β₁诱导的p67phox上调并上调SOD的表达。     

PPARγ通过PTEN调控AKT/FAK通路影响高糖条件下肾小管上皮细胞转分化

目的:探讨在高糖培养的肾小管上皮细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)对PTEN/AKT/FAK通路的调控机制及对肾小管上皮细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:以高糖培养的肾小管上皮细胞NRK52E为研究对象,采用过表达及shRNA干扰技术分别上调和下调肾小管上皮细胞中PPARγ的表达,并培养48 h,应用细胞免疫荧光、Western blot和RT-qPCR方法检测PTEN及EMT相关蛋白的表达变化;然后,在过表达及敲减PTEN的情况下,分别给予PPARγ抑制剂GW9662及激动剂罗格列酮干预,进一步观察PPARγ对AKT/FAK通路的调节是否通过PTEN实现的。结果:过表达PPARγ组PPARγ和PTEN的mRNA及蛋白表达增加,E-cadherin的表达明显上调,而vimentin和α-SMA蛋白表达显著下调(P<0.05);PPARγ敲减组PPARγ及PTEN的mRNA及蛋白表达水平明显降低,E-cadherin的表达也明显下调,而vimentin和α-SMA蛋白表达显著升高(P<0.05)。GW9662干预组PTEN的表达减少,而p-AKT(Th...     

过表达Sirt3通过Keap1/Nrf2通路调控高糖应激诱导的肾小管上皮细胞衰老

目的：本研究拟观察过表达沉默信息调节因子3(silent information regulator 3, Sirt3)对高糖（high glucose, HG）诱导的肾小管上皮细胞应激性衰老的影响,并进一步探究过表达Sirt3对Kelch样ECH关联蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1)/核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2, Nrf2)通路活性的影响,探讨其可能的作用机制。方法：本研究以HK-2细胞为模型,应用质粒转染过表达Sirt3,采用ML385(Nrf2特异性抑制剂)阻断Keap1/Nrf2通路,按照预定细胞分组给予不同刺激,Western blot法检测Sirt3、Keap1、Nrf2、衰老相关蛋白P16和P21蛋白的表达,DCHF-DA标记法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）的积聚,衰老相关β-半乳糖苷酶（senescence-associated β-galactosidase, SA-β-Gal）染色法检测细胞衰老状况...