阪崎克罗诺杆菌标准物质研制

目的采用冷冻干燥技术制备均匀性和稳定性符合要求的阪崎克罗诺杆菌标准物质,用于实验室内部质量控制。方法对使用菌株阪崎克罗诺杆菌(45403)的生化特征、16SrRNA序列、质谱特征进行确认。采用冷冻干燥技术制备含量为103 CFU/样品的菌球。参照CNAS-GL29《标准物质/标准样品定值的一般原则和统计方法》,对20件样品进行均匀性检验,采用单因素方差分析对结果进行统计分析。将样品分别于-20、2、37℃条件下保藏,对其储藏稳定性和运输稳定性进行评价。组织5家实验室进行协同标定。使用20件婴儿配方乳粉作为基质对阪崎克罗诺杆菌标准物质的使用效果进行确认。结果阪崎克罗诺杆菌(45403)生化鉴定结果、16SrRNA序列的NCBIGenebank比对结果、质谱鉴定结果均为阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)。采用单因素方差分析进行均匀性检验, F=1.067, P=0.442,符合标准物质的要求。于-20℃保藏170 d,于25、37℃保藏14d后,样品仍然稳定。经5家实验室协同标定,样品含量均为103 CFU/样品。20件婴儿配方乳粉作为基质加入阪崎克罗诺杆菌标准物质进行检验,均可以检出。结论阪崎克罗诺杆菌(CMCC45403)的生化特征、16SrRNA序列分析、蛋白飞行质谱特征均符合克罗诺杆菌属的典型特征。均匀性、储藏稳定性、运输稳定性及适用性的验证实验结果均符合标准物质的要求。     

阪崎肠杆菌质控样品的研制与验证

目的:研究制备适用于验证、评价实验室检测能力的阪崎肠杆菌质控样品,并对其性能进行测试。方法:对三种保护剂方案进行比较,筛选出效果最优的方案作为保护剂;冻干样品采用西林瓶包装,4℃冷藏保存,并检验样品均匀性和稳定性。结果:最优冻干保护剂组合为:奶粉+玉米淀粉+磷酸氢二钠混合液,冻干保护率达到64.9%;制备好的阪崎肠杆菌质控样品的均匀性结果为F=1.828相似文献   

奶粉中阪崎肠杆菌的风险评估

阪崎肠杆菌能引起脑膜炎、NEC和菌血症等，约2．5％～14％婴儿配方奶粉含有阪崎肠杆菌，0％～12％的普通奶粉含有阪崎肠杆菌，含量从0．36-66．0cfu／100g。婴幼儿奶粉中的阪崎肠杆菌问题已受到了全世界的普遍关注。本文基于大量研究和调查数据，从奶粉中阪崎肠杆菌的危害识别、奶粉中阪崎肠杆菌的暴露评估、奶粉中阪崎肠杆菌危害特性以及阪崎肠杆菌的检测方法等方面客观地对奶粉中阪崎肠杆菌进行风险评估，并对降低我国婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌风险提出建议。     

婴幼儿配方食品中阪崎肠杆菌的计数结果不确定度评定

[目的] 了解专项抽查的婴儿配方食品中的阪崎肠杆菌指标状况,并探讨阪崎肠杆菌的计数结果的不确定度评定方法。[方法] 按照GB 4789.1-2010 《食品微生物学检验 总则》和GB 4789.40-2016 《食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验》进行了抽样和检测, 依据JJF1059.1-2012 《测量不确定度评定与表示》及贝塞尔统计学方法对计数结果进行不确定度评定。[结果]22批次婴儿配方食品中有1批次检出阪崎肠杆菌,检出率为4.55%, 该批次样品中阪崎肠杆菌平均计数为25.5MPN/100g,计数结果扩展标准不确定度为2.72MPN/100g。[结论] 本次评估依据阪崎肠杆菌检计数检验国家标准,对4次保温培养节点进行了分析,结果表明固液混合过程,酵液取样体积,阪崎肠杆菌显色平板上可疑菌落选择和MPN法重复计数的四个不确定度较大,是记数检验过程中的重要环节。     

LAMP法检测乳粉中的阪崎肠杆菌

据WHO最新报告显示,乳粉中的阪崎肠杆菌是导致婴幼儿感染和死亡的主要原因之一。FDA于2002年公布了婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌检测的推荐方法,但检测周期长达1周左右,而且操作复杂,难以满足控制该疾病暴发和传播的需要。DNA环介导等恒扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种特异性、灵敏度高、检测时间短的新型基因扩增技术。本文以阪崎肠杆菌为研究对象,建立了一套应用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测方法。针对阪崎肠杆菌16s RNA基因设计4条引物特异性识别靶基因的六个特殊区域,并在63℃进行恒温扩增。实验结果表明,使用该方法能够在5h之内检测出复原乳样品中101CFU/mL的阪崎肠杆菌。灵敏度可以达到100fg阪崎肠杆菌基因组DNA。应用环介导等温扩增法,克服了传统检测周期长、操作复杂的缺点,不仅能够用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的检测,而且满足了对于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测的迫切需要。     

新型阪崎肠杆菌选择性分离培养基的研制

目的:筛选一种新型、特异性高的阪崎肠杆菌选择性培养基.方法:通过药敏实验,筛选出对阪崎肠杆菌耐药而对其他杂菌敏感的抗生素;利用抑菌浓度实验、抗生素组合平板实验,筛选出最佳的抗生素组合方式及浓度.将抗生素组合与显色剂添加到基础培养基中,配制成阪崎肠杆菌的新型选择培养基.结果:组合抗生素(4μg/mL万古霉素、0.1μg/mL头孢噻吩)和显色剂(0.1g/L 5-溴-4氯-3-吲哚-a-葡萄糖苷)添加到脑心培养基中,制成阪崎肠杆菌VC选择性显色培养基,能最大限度地抑制杂菌生长,而对阪崎肠杆菌的生长没有影响.经灵敏性实验,对接种的奶粉样品中的阪崎肠杆菌的检出限达到lcfu.结论:制得的新型阪崎肠杆菌选择性培养基特异性强、灵敏度高,可用于奶粉样品的分离检测.     

新型阪崎肠杆菌选择性分离培养基的研制

目的:筛选一种新型、特异性高的阪崎肠杆菌选择性培养基。方法:通过药敏实验,筛选出对阪崎肠杆菌耐药而对其他杂菌敏感的抗生素;利用抑菌浓度实验、抗生素组合平板实验,筛选出最佳的抗生素组合方式及浓度。将抗生素组合与显色剂添加到基础培养基中,配制成阪崎肠杆菌的新型选择培养基。结果:组合抗生素（4μg/mL万古霉素、0.1μg/mL头孢噻吩）和显色剂（0.1g/L5-溴-4氯-3-吲哚-a-葡萄糖苷）添加到脑心培养基中,制成阪崎肠杆菌VC选择性显色培养基,能最大限度地抑制杂菌生长,而对阪崎肠杆菌的生长没有影响。经灵敏性实验,对接种的奶粉样品中的阪崎肠杆菌的检出限达到1cfu。结论:制得的新型阪崎肠杆菌选择性培养基特异性强、灵敏度高,可用于奶粉样品的分离检测。      

食品中阪崎肠杆菌分析及其检测

阪崎肠杆菌是G^-杆菌,属于肠杆菌属中的一个种,是食源性的条件致病菌。主要危害免疫力低下的婴幼儿,导致脑膜炎、败血症和坏死性小肠结肠炎等疾病。依据FDA提供的“三管”增菌法和DFI改进法,均可以检测出样品中微量的阪崎肠杆菌。该菌具有一定耐热性,广泛分布于食品和周围环境中。通过提高原料质量、改善环境卫生和加大检测力度．可有效降低阪崎肠杆菌的污染．确保婴幼儿的身心健康。     

冰激凌中阪崎肠杆菌的检测

目的 对市售冰激凌中的阪崎肠杆菌进行抽样检测。方法 按照《食品安全国家标准 食品微生物学检验 (GB 4789.40- 2010)》进行检验。结果 从冰激凌中检出阪崎肠杆菌,经过染色和生化试验, 在29份样品中有3份样品分离出阪崎肠杆菌,检出率为10.34%。结论 市售冰激凌样品中存在一定比例的阪崎肠杆菌,有较大的安全隐患。质检系统应加强对市售的冰激凌的卫生预防与控制。     

辣椒粉中检出阪崎肠杆菌

目的—验证辣椒粉中阪崎肠杆菌存在状况.方法—采用国家标准GB 4789.40-2010,应用VITEK 32全自动微生物鉴定及药敏系统进行检验.结果—从辣椒粉中检出阪崎肠杆菌.结论—阪崎肠杆菌存在于辣椒粉调味品中,存在较大的安全隐患.     

乳粉中坂崎肠杆菌的快速检验

采用一种选择性显色培养基开展了乳粉中坂崎肠杆菌的检测，该培养基针对坂崎肠杆菌产生α-葡萄糖苷酶活性的特点．在显色培养基中添加了一种底物5-溴-4-氯-吲哚-α-D-吡喃葡萄糖苷（XαGlc），α-葡萄糖苷酶水解XαGlc,使菌落呈现蓝绿色．与传统检测方法相比，该检测方法选择性更强，操作更为简便，检测时间明显缩短，是一种较为理想的检测乳粉中坂崎肠杆菌的方法．     

乳粉中三聚氰胺标准物质的制备

目的制备乳粉中的三聚氰胺标准物质。方法将三聚氰胺标准溶液与乳粉复溶液通过均质、冷冻干燥、粉碎、过筛、混合等步骤制得标准物质,经均匀性与稳定性研究,由8家实验室进行协同定值,并进行不确定度评估。结果制得的标准物质的特性值为(5.19±0.37) mg/kg,均匀性良好,稳定性大于12个月。结论通过该方法制得的标准物质,均匀性与稳定性良好。可用于检测方法的开发、检测过程的质量控制、实验室能力验证、实验室间比对等领域。     

乳粉中阪崎肠杆菌的检测方法

为乳品企业开展阪崎肠杆茵出厂检验寻找更加便捷、准确,且检测费用低廉的检测方法.参照SN/T1632.1-2005标准,在定性检测基础上有所改进.选择3种基础肠道分离培养基伊红美蓝、麦康凯、山梨醇麦康凯分离培养及生化鉴定阪崎肠杆菌,对两种修复培养基灵敏度进行比较及阪崎肠杆菌在5种肠道分离培养基上生长情况比较.结果表明.A和B两组修复培养对婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌均能起到修复作用,B组使用BP修复培养比A组蒸馏水修复培养灵敏度高出1个稀释度(10倍).阪崎肠杆菌在5种肠道分离培养基上均能生长.选择上述3种基础肠道分离培养基分离鉴定阪崎肠杆茵,费用低廉,用于乳品企业对每批次产品进行自检,有更大的经济效益和社会效益.     

乳粉中克罗诺杆菌属阪崎肠杆菌能力验证样品制备及应用

目的 制备均匀性及稳定性均满足要求的克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验能力验证样品,用于组织能力验证考核.方法 通过生化及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱方法鉴定背景菌株及所使用的克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)菌株.采用冷冻干燥技术制备均匀性及稳定性均满足要求且各种菌含量为104 CFU/瓶的能力验证菌球.依据CNAS-GL0...     

奶粉中沙门氏菌和阪崎肠杆菌的测定能力验证结果分析

目的 提高实验室用传统生化方法检测沙门氏菌和克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的能力和水平。方法 用空白添加法和交叉试验检查培养基性能后,以奶粉样品为材料,用传统生化培养方法进行检测。结果 发现在传统生化检测技术中,对于排除非沙门氏菌来说,BS板作用突出,XLD和沙门氏菌显色平板容易受干扰菌影响。W样品检出沙门氏菌,Q样品未检出沙门氏菌;V样品检出阪崎肠杆菌,G样品未检出阪崎肠杆菌。结论 通过该研究,本实验室的沙门氏菌和克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的传统生化检测技术水平和能力得到了提高。     

Enterobacter sakazakii in food and beverages (other than infant formula and milk powder)

The ubiqitous microorganism Enterobacter sakazakii is a rare contaminant of infant formula and may cause severe systemic infection in neonates. So far, other food is not known to cause E. sakazakii-infections. The scarce information about the ecology of E. sakazakii and the uncertainty concerning the source of infection in children and adults warrant a summary of the current knowledge about the presence of this opportunistic microorganism in food other than infant formula. This review systematizes publications on the presence of E. sakazakii in food and beverages until June 2006. Food other than infant formula has been rarely investigated for the presence of E. sakazakii. Nevertheless, this microorganism could be isolated from a wide spectrum of food and food ingredients. E. sakazakii was isolated from plant food and food ingredients like cereal, fruit and vegetables, legume products, herbs and spices as well as from animal food sources like milk, meat and fish and products made from these foods. The spectrum of E. sakazakii-contaminated food covers both raw and processed food. The kind of processing of E. sakazakii-contaminated food was not restricted to dry products. Fresh, frozen, ready-to-eat, fermented and cooked food products as well as beverages and water suitable for the preparation of food, were found to be contaminated by E. sakazakii. Although E. sakazakii-contaminated food do not have general public health significance, measures for prevention should consider the presence of E. sakazakii in food, food ingredients, their processing and preparation as possible source of contamination, colonization or infection.     

探究乳粉中阪崎肠杆菌活菌检测方法灵敏度和检出限

摘要：目的 研究出乳粉中阪崎肠杆菌活菌检测的灵敏度和最低检出线的实时荧光RT-PCR方法。方法 将羊奶粉作为基质,根据GB4789.40-2016中第一法中规定的增菌方法,一组加入10cfu阪崎肠杆菌,另一组加入等量的阪崎肠杆菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、普通变形杆菌、粪肠球菌,培养时间分别设置为15h和18h,将不同培养时间的培养物分别取1ml进行RNA提取,以cDNA为模板进行扩增。结果 增菌培养18h后,提取RNA采用实时荧光RT-PCR技术,结果显示扩增曲线良好,Ct值稳定。结论 乳粉中阪崎肠杆菌活菌检测,增菌培养18h后,采用实时荧光RT-PCR,最低可检出10cfu的阪崎肠杆菌。     

奶粉中一株阪崎肠杆菌的鉴定及其挥发性产物分析

目的鉴定奶粉中一株阪崎肠杆菌分离菌株F2-1,采用顶空气相色谱-质谱联用法(headspace gas chromatography-mass spectrometry,HS-GC-MS)分析分离菌株F2-1在液态培养中产生的挥发性代谢产物。方法应用VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定系统分析分离菌株的生理生化特征;利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)特异性扩增检测分离菌株的16S rDNA,通过HS-GC-MS分析分离菌株F2-1代谢的挥发性产物。结果分离菌株F2-1为革兰氏阴性菌,生理生化特征与阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii,ES)的相似性为99%,LAMP检测进一步确认为阪崎肠杆菌,分离菌株F2-1在营养肉汤中代谢的挥发性产物主要有异戊醛、乙醇、异戊醇、3-羟基-2-丁酮、乙酸、正十五烷、正十六烷、正十七烷、1-癸醇。结论奶粉中分离菌株F2-1鉴定为阪崎肠杆菌,该菌产生的挥发性产物为阪崎肠杆菌的快速鉴定提供参考。     

婴儿配方粉中阪崎肠杆菌荧光定量PCR检测方法的建立

建立奶粉中阪崎肠杆菌荧光定量PCR检测方法,为准确、快速地定量检测阪崎肠杆菌奠定基础。根据阪崎肠杆菌16S rDNA基因序列,设计特异引物和荧光标记探针并合成,用PCR扩增产物克隆的重组质粒作为阳性对照,经紫外分光光度计测定重组质粒浓度．梯度稀释后作为标准品绘制标准曲线,其Ct值与模板浓度有良好的线形关系,相关系数R^2值为：0．997,可以用于阪崎肠杆菌浓度鉴定。用该方法检测阪崎肠杆菌样品21份,阳性4份,阳性检出率为19％,与常规检测方法结果完全符合。本文建立的检测阪崎肠杆菌的荧光定量PCR方法,较常规技术更为简便、快速,有很好的应用前景和研究价值。     

柳江县市售国产婴幼儿配方粉中阪崎肠杆菌污染监测分析

目的 了解市售国产婴幼儿配方粉中阪崎肠杆菌污染状况,为消费预警提供科学依据。方法 分别按2011、2012年版国家食源性致病菌监测工作手册对市场上11家国内生产的32份婴幼儿配方粉进行检测。结果 32份样品检出2株阪崎肠杆菌,检出率为6.25%。其中婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌检出率4.35%(1/23);婴幼儿谷物食品中阪崎肠杆菌检出率11.11%(1/9)。结论 柳江县市售部分婴幼儿配方粉中存在阪崎肠杆菌污染,食用安全隐患不容忽视,应加强监测力度,预防和控制阪崎肠杆菌引起的食物中毒事件发生。