三氧化二砷对膀胱癌BIU-87细胞增殖及生存素表达的影响

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对膀胱癌BIU-87细胞增殖及生存素表达的影响。方法:用As2O3处理膀胱移行细胞癌株BIU-87后,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖;用细胞流式仪检测细胞周期及凋亡,生存素(Survivin)表达的变化。结果:三氧化二砷作用BIU-87细胞后,细胞生长受到明显的抑制,Survivin的表达明显减少,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,且均具有浓度依赖性。结论:As2O3对人膀胱癌细胞株BIU-87有抑制其生长、增殖和诱导凋亡的作用,且呈现浓度依赖性。     

三氧化二砷对膀胱癌细胞耐药性的影响

目的探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）对膀胱癌细胞株BIU-87耐药性的影响。方法用As2O3与羟基喜树碱联合处理耐药膀胱移行细胞癌株BIU-87后,用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和生存素（survivin）表达的变化。结果三氧化二砷与羟基喜树碱联合处理耐药膀胱移行细胞癌株BIU-87细胞后,细胞生长受到明显的抑制s,urvivin表达明显减少,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,且均具有浓度依赖性。结论 As2O3可增强化疗药物作用,部分逆转膀胱癌的耐药性,并促进凋亡,且呈现浓度依赖性。     

三氧化二砷对膀胱癌细胞BIU-87耐药相关基因的影响

目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）对耐羟基喜树碱的膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT耐药性逆转的机制。方法：用As2O3与羟基喜树碱联合处理BIU-87/HCPT细胞后,用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、P-gp、MRP1、GST-π和生存素（survivin）表达的变化。结果：As2O3与羟基喜树碱联合处理耐药膀胱移行细胞癌株BIU-87/HCPT细胞后,细胞生长受到明显抑制。单独应用As2O3的凋亡率为11.07%,As2O3联合羟基喜树碱后的凋亡率为18.23%,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,As2O3明显增加羟基喜树碱的作用（P〈0.05）。As2O3使P-gp、MRP 1、GST-π和sur-vivin的表达明显减少,且均具有浓度依赖性（P〈0.05）。结论：As2 O3可减少耐药相关基因的表达,部分逆转膀胱癌细胞的耐药性,促进凋亡,且呈现浓度依赖性。     

三氧化二砷对膀胱癌细胞BIU-87耐药相关基因的影响

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对耐羟基喜树碱的膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT耐药性逆转的机制.方法:用As2O3与羟基喜树碱联合处理BIU-87/HCPT细胞后,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、P-gp、MRP1、GST-π和生存素(survivin)表达的变化.结果:As2O3与羟基喜树碱联合处理耐药膀胱移行细胞癌株BIU-87/HCPT 细胞后,细胞生长受到明显抑制.单独应用As2O3的凋亡率为11.07%,As2O3联合羟基喜树碱后的凋亡率为18.23%,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,As2O3明显增加羟基喜树碱的作用(P<0.05).As2O3使P-gp、MRP 1、GST-π和survivin的表达明显减少,且均具有浓度依赖性(P<0.05).结论:As2O3可减少耐药相关基因的表达,部分逆转膀胱癌细胞的耐药性,促进凋亡,且呈现浓度依赖性.     

三氧化二砷对人膀胱癌细胞BIU-87作用的体外研究

目的观察三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人膀胱癌细胞株BIU-87的作用,并探讨其作用机制.方法采用四氮唑蓝(MTT)法检测As2O3不同浓度、不同时间对BIU-87细胞的生长抑制率,同时流式细胞仪检测不同浓度As2O3作用72 h后细胞中与凋亡有关蛋白Fas、Bcl-2的表达.结果As2O3可有效抑制BIU-87细胞的生长,具有浓度、时间依赖性特点.Fas、Bcl-2的表达分别与浓度增加呈正、负相关,P<0.05,且二者随浓度增高呈负相关,P<0.05.结论As2O3可有效抑制膀胱癌细胞生长,其作用机制与凋亡有关.     

三氧化二砷对人肺腺癌A549细胞株生长及对Survivin基因表达的影响

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌细胞株A549的生长抑制作用和对Survivin基因表达的影响,探讨As2O3抑制肺癌细胞增殖的机制。方法:体外培养A549细胞,通过不同剂量的As2O3与A549细胞株共培养,以台盼兰染色后鉴定活细胞计数,计算细胞生长抑制率及存活率;进一步应用Western blot方法检测Survivin表达情况;分析三氧化二砷抑制Survivin的表达水平与A549细胞存活的相关性。结果:As2O3能明显抑制A549细胞株的生长,具有浓度和时间依赖性;As2O3能明显下调Survivin蛋白的表达水平,亦具有浓度和时间依赖性;且Survivin蛋白的表达下调与肿瘤细胞存活率成负相关。结论:As2O3在体外可以明显抑制A549细胞株的生长,并显著抑制Survivin基因的表达。     

As2O3对人膀胱癌细胞凋亡和MDR1表达及细胞周期的影响

目的：观察三氧化二砷(As2O3)对人膀胱癌细胞株BIU-87的凋亡诱导作用及对多药耐药基因(MDR1)蛋白表达、细胞周期的影响。方法：采用四氮唑蓝(MTT)法检测As2O3不同浓度、不同作用时间对BIU-87细胞的生长抑制率；流式细胞术(FCM)检测不同浓度As2O3作用72h后细胞中与凋亡有关蛋白Fas、bcl-2及MDR1蛋白表达、细胞周期变化。结果：As2O3可有效抑制BIU-87细胞的生长增殖，与浓度、时间相关，P＜0．05；Fas、bcl-2的表达分别与浓度增高呈正、负相关，P＜0．05，且二者随浓度增高呈负相关，P＜0．05；MDR1蛋白表达与对照组相比As2O3 1 μmol／L作用后升高，P＜0．05，2、5 μmol／L作用后降低，P＜0．05；随As2O3浓度升高，细胞周期被阻滞在G0／G1期。结论：As2O3可有效抑制人膀胱癌细胞的生长增殖，诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期可能起了重要作用。     

三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡效应及抑制细胞ERK的活性

目的：初步探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）促进HL-60细胞凋亡及其可能机制。方法：不同浓度的As2O3（0、2.5、5、10μmol/L）作用于HL-60细胞24h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3活化、ERK活性和cyclinD1蛋白的表达,RT-PCR法检测cyclinD1mRNA的表达。结果：As2O3可抑制HL-60细胞增殖,诱导HL-60细胞的凋亡,并呈浓度依赖性（P〈0.05）;As2 O3可使HL-60细胞Caspase-3激活,并抑制ERK活性,但不能下调cyclinD1的表达（P〉0.05）。结论：As2 O3能抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡,其效应可能与As2 O3抑制HL-60细胞ERK活性有关。     

亚砷酸联合阿米福汀对HL-60细胞中Survivin表达的影响

 目的　探讨亚砷酸（As2O3）联合阿米福汀（AMI）诱导人髓系白血病细胞HL-60凋亡的可能机制。方法　不同浓度As2O3单用和联合AMI对HL-60细胞进行不同时间干预,用MTT比色法检测细胞的生长抑制作用,用半定量RT-PCR法检测抑凋亡基因Survivin mRNA的表达水平。结果　As2O3组和联合组均可显著抑制HL-60细胞的增生,呈浓度依赖性,联合组对其抑制作用明显大于As2O3组。联合组降低Survivin的表达作用比As2O3组更明显。结论　As2O3通过下调抑凋亡基因Survivin的表达诱导HL-60凋亡;AMI可增强As2O3对Survivin的下调作用,增强HL-60细胞对As2O3的敏感性,发挥促凋亡效应。     

As2O3对人膀胱癌细胞株BIU-87作用的体外研究

目的　观察三氧化二砷 (As2 O3 )对人膀胱癌细胞株BIU 87的作用 ,并探讨其作用机制。方法　采用四氮唑蓝(MTT )法检测As2 O3 不同浓度、不同作用时间对BIU 87细胞株的生长抑制率 ;流式细胞术 (FCM )检测不同浓度As2 O3 作用 72h后细胞中凋亡相关蛋白Fas、bcl 2的表达及细胞周期变化。结果　As2 O3 可有效抑制BIU 87细胞株的生长 ,具有浓度、时间依赖性特点。Fas、bcl 2的表达与As2 O3 浓度增高分别呈正、负相关 (P <0 .0 5 ) ,且随As2 O3 浓度增高Fas、bcl 2的表达呈负相关 (P <0 .0 5 )。随As2 O3 浓度增高细胞周期被阻滞在G0 /G1期。结论　As2 O3 可有效抑制人膀胱癌BIU 87细胞株的生长增殖 ,阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡可能起了重要作用     

Survivin基因siRNA真核表达载体的构建及其对转染膀胱癌细胞Survivin表达的抑制作用

目的构建针对Survivin基因的siRNA(smallinterferenceRNA)真核表达载体,并观察其对转染的膀胱癌细胞中Survivin基因表达和细胞凋亡的影响。方法应用siRNA设计软件设计针对Survivin基因的特异性短链寡核甘酸,化学合成后经退火形成双链siRNA模板,通过克隆到质粒pSilencer1.0-U6构建siRNA真核表达载体并用酶切和测序鉴定;然后将其转染人膀胱癌细胞株BIU-87,以反义Survivin寡核甘酸(ASODN)抑制效果为对照,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法和DNA原位末端标记(TUNEL)法检测BIU-87细胞生长抑制率(IR)和凋亡指数(AI),半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot检测BIU-87细胞中SurvivinmRNA及其蛋白的表达。结果酶切和测序证实siRNA真核表达载体构建成功。siRNA对BIU-87细胞的IR和AI(62.14%和33.77%)均分别显著高于ASODN(39.33%和23.98%)和空白对照组(1.98%和3.75%),P均<0.05,SurvivinmRNA及其蛋白相对表达水平均显著低于ASODN和空白对照组。结论构建的siRNA真核表达载体能有效地抑制Sur-vivinmRNA的转录和表达,诱导BIU-87细胞凋亡和抑制细胞生长,为膀胱肿瘤的基因治疗提供新的方法和手段。     

三氧化二砷诱导Raji细胞凋亡与Survivin基因关系的研究

Objective:To investigate the apoptosis induction by arsenic trioxide (As2O3) in Raji cells and its correlation with cell cycle arrest and expression of the Survivin gene.Methods:After Raji cells were treated with As2O3 in different concentrations (1,2,4 and 8 μM),for 24,48 and 72 h,respectively,and cell proliferation was tested by MTT assay.Apoptosis was observed with electron microscope end DNA electrophoresis.The distribution of cell cycles and cell apoptosis were detected by flow cytometry.Expression of the Survivin gene was determined by real-time quantitative RT-PCR.Results:As2O3 (1-8 μM) inhibited Raji cells growth effectively in a dose- and time-dependent manner.As2O3 at 2-8μM could induce cell apoptosis and cell cycle arrest.However,As2O3 (1 μM) inhibited Raji proliferation only by cell cycle arrest,without any symptoms of cell apoptosis.At the same time,Survivin gene expression was down-regulated after the treatment.Conclusion:As2O3 could induce substantial proliferation inhibition,cell cycle arrest and apoptosis in Raji cell.Cell cycle arrest might be a reason why apoptosis occurs.As2O3 can markedly down-regulate expression of the Survivin gene in a dose- and timedependent manner.The down-regulated Survivin gene might be leading to cell apoptosis by As2O3.     

脂质体转染survivin反义寡核苷酸对K562细胞增殖及凋亡的作用

目的:观察脂质体转染survivin反义寡核苷酸(ASODN)对白血病细胞K562的增殖及凋亡的影响。方法:人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染K562细胞,倒置显微镜下观察细胞形态学变化;用MTT法观察转染前后对细胞增生的影响;用细胞凋亡检测法(POD)观察细胞凋亡;RT-PCR检测survivin mRNA的表达。结果:(1)survivin ASODN抑制K562细胞增殖呈时间和剂量依赖性;(2)survivin ASODN可诱导K562细胞的凋亡,凋亡指数呈浓度依赖性;(3)survivinASODN处理组K562细胞survivin mRNA的表达水平显著下降。结论:脂质体转染survivin ASODN能够明显抑制K562细胞增殖,且能诱导细胞凋亡。survivin可能成为肿瘤基因治疗的一个新靶点。     

三氧化二砷联合抗坏血酸抑制人肾癌 786 -0 细胞增殖及相关蛋白表达的研究

目的：观察三氧化二砷（As2O3）联合抗坏血酸（AA）对786-0人肾透明细胞癌细胞增殖的影响,并通过其对bcl-2和bax蛋白表达的影响探讨相关机制.方法：将体外培养的786-0人肾透明细胞癌细胞分为对照组（N）和实验组,实验组分为AA组、As2O3组、As2O3与AA联合组.用CCK-8细胞增殖-毒性检测试剂盒检测药物对细胞增殖的影响,TUNEL试剂盒检测细胞凋亡,Western blot方法测定bcl-2基因和bax基因的蛋白表达.结果：以0μmol/L或50μmol/L AA分别联合0、1、2、4、8、16μmol/L As2O3作用786-0细胞24h,与As2O3单独应用相比,AA与不同浓度As2O3联合应用都可显著提高As2O3对786-0细胞的抑制率,其作用具有剂量依赖性（P＜0.05）.0μmol/L或8μmol/L As2O3分别联合0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L AA作用786-0细胞24h,与As2O3单独应用相比,AA与As2O3联合应用能够显著下调bcl-2表达,上调bax表达,联合组与其他组比较有明显差异,并具有剂量依赖性.结论：抗坏血酸（AA）联合三氧化二砷（As2O3）可以明显协同抑制786-0人肾透明细胞癌细胞的增殖,且具有剂量依赖性,其机制可能与下调bcl-2基因表达,上调bax蛋白表达从而诱导肾癌细胞的凋亡有关.     

PIWIL 2 在人类膀胱尿路上皮癌中的表达及其功能研究

 目的 研究PIWIL2在人类膀胱尿路上皮癌（BTCC）中的表达及siRNA对人类膀胱癌细胞PIWIL2表达的影响。方法 采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测BTCC 46例、腺性膀胱炎21例、癌旁组织17例、正常膀胱组织14例中PIWIL2 mRNA的表达;设计合成针对PIWIL2的3个特异性siRNA,转入人类膀胱癌BIU-87细胞,分别采用四甲基偶氮唑蓝、DNA原位末端标记法、RT-PCR和Western blot检测siRNA对BIU-87细胞生长抑制率（IR）、凋亡指数（AI）和PIWIL2 mRNA及其蛋白表达的影响。结果 BTCC 组织中PIWIL2 mRNA的表达率为76.08 %（35／40）,均显著高于腺性膀胱炎组织[42.86 %（9／21）]、癌旁组织[41.17 %（7／17）]和正常膀胱组织[7.14 %（1／14）]（P＝0.008,P＝0.010,P＝0.000）。BTCC组织中PIWIL2的高表达与肿瘤淋巴结转移、病理分级均密切相关。siRNA1～3组细胞的IR[（37.52±8.84）%、（64.36±9.64）%、（62.94±8.43）%]和AI[（26.18±5.42）%、（38.75±6.19）%、（40.02±5.64）%]均分别显著高于对照组[（1.97±0.02）%、（3.35±0.47）%]（均P＝0.000）,PIWIL2 mRNA及其蛋白表达水平均显著低于对照组;其中siRNA 2、3组细胞的IR、AI和对PIWIL2表达的抑制作用均显著高于siRNA 1组。结论 PIWIL2在BTCC中的高表达,提示其与膀胱癌的发生、发展密切相关;体外转录合成的siRNA可抑制BIU-87细胞PIWIL2的表达,诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞生长,提示PIWIL2可作为膀胱肿瘤基因治疗的重要靶点。