染料木黄酮对成骨细胞I型胶原表达及转化生长因子β_1的影响

目的染料木黄酮(genistein,GEN)与新生SD大鼠颅骨成骨细胞(osteoblast,OB)共同孵育,研究GEN对OBI型胶原表达及转化生长因子β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)的影响。方法采用第二继代OB进行实验,实验分为对照组,GEN各浓度组(10-8,10-7,10-6,10-5mol/L),雌激素组(17-βestradiol,E2,10-10mol/L)。测定指标包括四甲基偶氮唑盐(methythiazolyltetrazoliumbromide,MTT)、胞浆内蛋白、碱性磷酸酶活性(activityofalkalinephosphatase,ALP)、以及I型胶原与TGFβ1表达。结果体外培养48h及72h,GEN各剂量组和E2组的MTT(OD)值均有显著性增高。与培养48h相比,对照组、10-8、10-7、10-6mol/LGEN剂量组72h后细胞增殖有所增加,差异有显著性。10-6、10-5mol/LGEN剂量组和E2组可增高OB内蛋白含量,差别有显著性。GEN各组和E2组均可增高OB内ALP活性,差别有显著性。上述指标与GEN剂量呈显著相关。10-7、10-6、10-5mol/LGEN组和E2组OB内I型胶原的表达及TGFβ-1的合成高于对照组。I型胶原表达和GEN剂量呈显著相关。结论GEN可刺激OB增殖、分化,增加OB内I型胶原的表达及TGFβ-1的分泌,在10-8M～10-5M范围内与剂量相关;高浓度GEN与E2相比作用相似。     

染料木黄酮对成骨细胞活性的影响

目的研究染料木黄酮对成骨细胞活性的影响,探索预防骨质疏松的机制。方法胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分步消化法获得乳鼠颅盖骨成骨细胞,二代细胞用于实验。在成骨细胞培养基中加入染料木黄酮(×10-5、×10-6、×10-7mol/L)培养48 h和72 h后,采用MTT和3H-TdR测定成骨细胞增殖,原位杂交方法测定c-fos表达。结果培养48 h后,×10-5、×10-6、×107mol/L染料木黄酮组MTT吸光度值与对照组比较,分别增加了105%、136%、143%;培养72 h后,染料木黄酮3个剂量组与对照组比较,分别增加了93%、113%、146%,差异均有显著性(P<0.05)。同时3H-TdR掺入量均显著增加(P<0.05),各组c-fos表达差异无显著性。结论染料木黄酮可促进成骨细胞的增殖与分化。     

染料木黄酮对人成骨细胞凋亡的影响

目的: 观察染料木黄酮(Gen)对人成骨细胞凋亡的影响。方法: 将体外分离到的人骨膜成骨细胞在高糖DMEM(含10 %小牛血清)中进行纯化扩增至第三代,然后接种于无酚红高糖DMEM培养液中(含10 %经活性碳-葡聚糖苷处理的胎牛血清,CDT-FBS),4 d后用0.25 %的胰蛋白酶消化、收集细胞,用PBS洗涤2次后,用于各项实验。指标包括:流式细胞仪分析细胞凋亡比例,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂条带,免疫组化观察Gen对Bax、Bcl-2及caspase-3表达的影响。结果: 无雌激素(E2)血清培养可诱导成骨细胞发生凋亡(45.7 %),加入10-8 mol/L E2、10-6 mol/L 和10-5 mol/L Gen对细胞处理48 h,成骨细胞凋亡率分别降低到15.3 %、36.3 %及28.4 %(P<0.05)免疫组化结果表明,同E2类似,Gen可抑制Bax和capsase-3的表达,而促进Bcl-2蛋白的表达。结论: 染料木黄酮可能是通过影响雌激素受体途径而发挥其骨保护作用的。     

染料木黄酮对人成骨细胞增殖及分化影响

目的 研究大豆异黄酮主要成分染料木黄酮(genistein)对人成骨细胞增殖和分化的影响,以及影响的剂量效应关系.方法 取材成人松质骨,采用胶原-胰蛋白酶消化法,经纯化和传代培养获得人成骨细胞作为研究细胞来源,设二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组,雌二醇(1×10-8mol/L)阳性对照组,染料木黄酮1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6mol/L 4个剂量组.干预时间分别为24,48,72 h.用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,碱性磷酸酶活性测定检测细胞的分化.结果 成功获得人成骨细胞,低浓度染料木黄酮(10-9mol/L)在各时间点对成骨细胞增殖无明显影响,而10-7mol/L染料木黄酮作用72 h可以明显刺激成骨细胞增殖和分化.Spearman相关分析发现,染料木黄酮刺激成骨细胞增殖分化的作用呈时间和剂量效应关系.结论 染料木黄酮能够促进人成骨细胞的增殖和分化,其促进作用存在时效和量效关系.     

染料木黄酮对胃癌细胞侵袭转移的抑制作用

目的:研究染料木黄酮(genistein)对胃癌细胞侵袭转移的影响,并初步探讨其作用机制。方法:运用MTT法观察染料木黄酮对人胃癌细胞系SGC-7901细胞粘附能力的影响;用BoydenChamber膜侵袭系统,观察对SGC-7901游走和侵袭的影响;免疫细胞化学法观察对SGC-7901细胞TGF-β1表达的影响。结果:染料木黄酮作用后,SGC-7901细胞粘贴率降低(P<0.05),游走穿膜细胞数(83±4)和侵袭穿膜细胞数(35±3)均明显低于对照组(114±7,60±4,P<0.05),并且能降低TGF-β1的表达。结论:染料木黄酮能有效抑制胃癌侵袭转移。其作用机制可能与通过降低TGF-β1的表达,抑制胃癌细胞异质粘附、运动能力有关。     

阿魏酸钠对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子-β1及Ⅳ型胶原表达的影响

目的探讨阿魏酸钠（SF）对糖尿病（DM）大鼠肾脏转化生长因子-β1（TGF-β1）和Ⅳ型胶原表达的影响。方法Wistar大鼠随机分为正常对照组、DM对照组、SF治疗组,制备链脲佐菌素（STZ）诱导的DM大鼠模型,SF治疗组灌胃给予SF110mg／（kg·d）,治疗8周。分别测定各组大鼠肾重／体重、肌酐清除率（Ccr）、24h尿蛋白定量,观察肾脏病理改变并用免疫组织化学方法检测肾脏TGF-β1和Ⅳ型胶原的表达。结果与正常对照组相比,DM组大鼠肾重／体重、Ccr及24h尿蛋白均显著升高（P〈0．05）;肾小球体积显著增大,系膜区增宽（PAS红染区扩大）,且TGF—β1和Ⅳ型胶原表达明显增高（P〈0．05）。SF治疗组上述指标的异常改变均有显著改善（P〈0．05）。结论SF对DM大鼠的肾脏损害具有一定的保护作用,有效的抑制DM大鼠肾脏TGF—β1和Ⅳ型胶原的高表达是其可能的机制。     

染料木黄酮对MDA-MB-453乳腺癌细胞VEGF表达的影响

目的:观察染料木黄酮(genistein,Gen)对MDA-MB-453乳腺癌细胞血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的影响,探讨Gen抗HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的分子机制。方法:5×10-5mol/LGen处理MDA-MB-453细胞24、48、72h后,应用免疫组织化学、Westernblot及RT-PCR法检测MDA-MB-453乳腺癌细胞VEGF的表达变化。结果:Gen处理MDA-MB-453细胞24、48、72h后,VEGF的mRNA和蛋白表达量随着处理时间的延长逐渐下降。结论:Gen能在转录和翻译水平下调HER-2/neu高表达乳腺癌细胞VEGF的表达,这可能是Gen抑制HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的机制之一。     

染料木黄酮对骨形成的促进作用研究

目的:用成年人成骨细胞体外培养的方法,观察染料木黄酮(genistein,GS)对骨形成的影响。方法:将生长状态良好的第三代成骨细胞用PBS洗涤后接种于无酚红高糖DMEM培养液中(含5%经活性碳-葡聚糖苷处理的胎牛血清),实验设二甲基亚砜溶剂对照、雌二醇对照(E2)、抗雌激素它莫西芬对照(TAM)及三个GS剂量组,观察指标包括细胞增殖,碱性磷酸酶活性及细胞骨钙蛋白合成量。结果:与溶剂对照组相比,10-8mol/L E2、10-7mol/L GS和10-6mol/L GS对人成骨细胞处理48h,能够明显促进成骨细胞的增殖作用,使细胞骨钙蛋白合成量显著增加,细胞内碱性磷酸酶活性明显提高;同时,GS可保护因雌激素耗尽所造成的成骨细胞内Ⅰ型胶原蛋白降低。10-7mol/L TAM可拮抗GS对成骨细胞所产生的这些生物学效应。结论:GS具有雌激素效应,可模拟E2而刺激骨形成并保护成骨细胞因雌激素缺乏所造成的细胞内Ⅰ型胶原蛋白降低。由于这一效应可被TAM拮抗,此结果提示,GS的促进骨形成作用是通过与雌激素受体结合产生的。     

姜黄素对肺纤维化大鼠I型胶原蛋白和转化生长因子β1mRNA表达的影响

目的 探讨姜黄素对肺纤维化大鼠I型胶原蛋白和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠96只,随机分为正常对照组、模型组、泼尼松治疗组(泼尼松组)、姜黄素治疗组(姜黄素组),每组24只.除正常对照组外,其余各组大鼠气管内一次性注入博莱霉素诱导肺纤维化.造模后第15天起,姜黄素组和泼尼松组分别给予姜黄素(300 mg/kg)和泼尼松(5 mg/kg),每日灌胃1次,其余2组每日给予质量分数为1%的羧甲基纤维素钠(10 ml/kg)灌胃1次,直至处死动物.各组动物分别于造模后第21、28、42、56天随机处死6只.HE、Masson染色观察肺组织病理变化,免疫组化(EnVision二步法)测定肺组织中I型胶原蛋白表达,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织mRNA的表达.结果 第42、56天姜黄素组肺纤维化程度明显低于模型组和泼尼松组,差异有统计学意义(P＜0.05);第28、42、56天姜黄素组肺组织I型胶原蛋白表达水平明显低于模型组和泼尼松组,差异有统计学意义(P＜0.05);姜黄素组21、28 d肺组织TGF-β1mRNA表达水平分别为0.61±0.09、0.48±0.16,明显低于同期模型组,差异有统计学意义(均P＜0.05);21 d姜黄素组肺组织TGF-β1mRNA表达水平明显低于泼尼松组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化形成阶段应用姜黄素干预,抑制肺纤维化的发展,疗效优于传统治疗药物泼尼松.姜黄素可抑制I型胶原蛋白的合成与沉积,降低肺组织TGF-β1mRNA的表达.     

平喘汤对哮喘大鼠气道转化生长因子-β1 mRNA和Ⅲ型胶原表达的影响

目的:探讨平喘汤对哮喘大鼠模型气道壁厚度及转化生长因子-β1 mRNA(TGF-β1 mRNA)和Ⅲ型胶原表达的影响及可能的作用机制。方法:将40只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、哮喘组、地塞米松组、平喘汤组,每组10只。用卵白蛋白(OVA)致敏吸入激发制备哮喘模型。在哮喘激发4周后测量肺组织的TGF-β1 mRNA和气道壁Ⅲ型胶原的表达。结果:模型组TGF-β1mRNA、Ⅲ型胶原表达明显高于正常对照组(P<0.05);平喘汤组和地塞米松组TGF-β1 mRNA、Ⅲ型胶原表达显著低于模型组(P<0.05);气道壁厚度模型组明显高于正常对照组(P<0.05);平喘汤组和地塞米松组显著低于模型组(P<0.05)。结论:平喘汤通过降低TGF-β1 mRNA的过度表达,抑制Ⅲ型胶原的沉积,减轻气道重塑的发生。     

染料木黄酮对乳鼠颅骨成骨细胞增殖分化的影响及其与c-jun的关系

目的研究染料木黄酮对成骨细胞活性的影响及其相关机制。方法胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分步消化法获得乳鼠盖骨成骨细胞,Ⅱ代细胞用于实验。MTT和3H-TdR测定成骨细胞增殖和DNA合成,原位杂交的方法测定c-jun表达。结果成骨细胞培养基中加入(10-5、10-6和10-7mol/L)染料木黄酮或10-9mol/L和10-10mol/L雌激素培养48h和72h后,MTT的吸光度值与对照组相比均明显升高,48h和72h后对照组、染料木黄酮组和雌激素组MTT值分别为0.19、0.15;0.39、0.45、0.46;0.29、0.32、0.37和0.35、0.38;0.50、0.49。3H-TdR掺入量均显著增加,对照组、染料木黄酮组和雌激素组3H-TdR掺入量分别为68.47;101、844、512和1108.8、1204.2。c-jun表达各组差异无显著性。结论染料木黄酮不是通过促进c-jun表达来促进成骨细胞增殖与分化。     

p38/ERK激酶调控TGF-β1诱导的HLF-02细胞Ⅰ型胶原表达及MMP-2活力

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路在调控人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原表达、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活力中的作用.方法 以人肺成纤维细胞HLF-02细胞系为研究对象,给予10 ng/ml的TGF-β1刺激不同时间;阻断实验以P38激酶特异性抑制剂(SB203580)、ERK激酶特异性抑制剂(PD98059)分别阻断p38通路和细胞外调控激酶(ERK)通路;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内Ⅰ型胶原mRNA的表达;运用Western印迹检测细胞上清液中Ⅰ型胶原蛋白表达;酶谱分析细胞上清液中MMP-2、MMP-9的活力.结果 (1)TGF-β1刺激HLF-02细胞,24、48、72 h组的Ⅰ型胶原mRNA表达水平分别为1.33±0.07、2.46±0.09、2.39±0.08;Ⅰ型胶原蛋白表达水平分别为114.89±8.95、208.16±6.75、211.46±8.05;MMP-2的活力分别为190.33±5.86、214.33±8.39、212.67±11.59.(2)SB203580对TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原mRNA水平、蛋白水平及MMP-2活力的抑制率分别为51%、24%、20%.(3)PD98059对TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原mRNA水平、蛋白水平以及MMP-2活力的抑制率分别为42%、13%、16%.结论 TGF-β1可促进HLF-02细胞Ⅰ型胶原的转录和蛋白表达,上调MMP-2活力;p38、ERK激酶通路在此过程中具有重要的调控作用.     

染料木黄酮对去势大鼠骨代谢的影响

目的:研究染料木黄酮(Gen)对去势大鼠骨代谢的影响。方法:雌性Wistar大鼠47只,随机分为假手术组,去势对照组、去势+雌激素组[己烯雌酚20μg/(kgbw?d)]、去势+Gen组[剂量分别为25、50、100mg/(kgbw?d)]。饲养3个月后处死,测定骨密度(BMD)、股骨形态学参数和血清骨钙素(BGP)及尿中羟脯氨酸(HYPRO)和吡啶酚(PYR)含量。结果:大鼠去势后,股骨BMD降低,骨小梁体积减少、密度降低、间隙增加。与假手术组比均有显著差异,血清BGP与尿中PYR排出量明显高于假手术组,尿中HYPRO含量也有所增加;补充Gen后,股骨BMD有改善的趋势,骨小梁体积增加、厚度和密度增大,BGP含量降低、尿中HYPRO有降低的趋势,而尿中PYR含量明显降低。结论:染料木黄酮可通过抑制骨转换和破骨细胞活性,减少去势大鼠骨量丢失,预防骨质疏松的发生。     

染料木黄酮对γ射线损伤小鼠免疫功能的影响

目的研究染料木黄酮（Genistein，Gen）对^137Cs γ射线照射提高小鼠的免疫功能。方法雄性昆明小鼠补充不同剂量的Gen饲料2周前后经4．0Gy^137Cs γ射线照射，测定其细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫功能指标的变化。结果辐射小鼠的免疫功能明显低于正常小鼠，补充0．8％。Gen可以提高辐射小鼠免疫功能，与照射对照组比，耳廓肿胀率提高49．3％；淋巴细胞增殖指数提高86．8％；血清溶血素提高90．9％；脾脏指数提高23．6％；脾结节数提高32．1％，以上差异均有统计学意义（P〈0．05）。补充Gen可以提高辐射小鼠碳粒廓清指数，但差异不显著；对胸腺指数的影响亦不明显。结论染料木黄酮可以提高辐射小鼠免疫功能。     

染料木黄酮雌激素效应对辐射损伤小鼠生存率及免疫功能的影响

目的研究染料木黄酮(genistein,Gen)的雌激素效应对辐射损伤的防护作用。方法观察应用他莫西芬和Faslodex阻断受照小鼠雌激素受体活化情况下,Gen对接受全身致死剂量γ射线照射(7.5Gy)小鼠30d存活率、平均存活时间的影响,对接受4.0Gy全身照射小鼠非特异性和体液免疫的影响。结果Gen可以提高受照小鼠的存活率和平均存活时间,增强免疫功能,他莫西芬对小鼠生存率及免疫功能无明显影响,Faslodex降低受照小鼠的存活率和平均存活时间,抑制免疫功能。结论Gen通过激活ERβ途径,增强小鼠的抗辐射能力。     

补体片段C3f对人胚肺成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原及转化生长因子p1的影响

目的 观察补体片段C3f对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)表达和分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原及转化生长因子(TGF)-β1的影响.方法 将人工合成的17肽片断C3f加入培养基中刺激MRC-5细胞,通过细胞免疫组化和ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1细胞内、外表达情况.结果 随着C3f浓度的增加,MRC-5细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1的表达量逐渐降低,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).MRC-5胞质中TGF-β1的表达量随C3f浓度增加降低趋势,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 C3f能够抑制MRC-5细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1的形成,减轻肺组织的纤维化程度.     

染料木黄酮的雌激素活性对辐照小鼠免疫功能的影响

目的研究染料木黄酮(genistein,Gen)的雌激素效应对辐射损伤的防护作用,为抗辐射功能食品的开发和对原有辐射防护剂的改进提供实验依据。方法观察应用他莫西芬(ERα阻断剂)和Faslodex(ERβ阻断剂)阻断受照小鼠雌激素受体(ER)活化情况下,Gen对接受4Gy全身照射小鼠血白细胞和淋巴细胞计数、血清溶血素及迟发型变态反应的影响。结果Gen可以降低辐照小鼠的血白细胞和淋巴细胞的减少幅度,增强免疫功能;他莫西芬与Gen合用对小鼠血白细胞和淋巴细胞计数及免疫功能无明显影响,表明他莫西芬不能阻断Gen对辐照的保护作用。Faslodex与Gen合用则仍降低受照小鼠血白细胞和淋巴细胞数量,也抑制免疫功能。表明Faslodex能阻断Gen的保护作用。结论Gen通过激活ERβ途径,增强辐射小鼠的免疫功能。     

染料木黄酮对NIH/3T3细胞体外短期转化实验的影响

目的 通过观察染料木黄酮对NIH/3T₃细胞体外恶性转化的影响,研究染料木黄酮在癌症起始阶段的预防作用.方法 体外短期转化实验.结果 染料木黄酮在对细胞无明显毒性的浓度下,对MNNG所诱发NIH/3T₃细胞恶性转化有明显的抑制作用,其最低抑制浓度为37μmol/L.结论 染料木黄酮可能是化学致癌过程的抑制剂.     

叶酸配伍染料木黄酮对神经细胞早期凋亡的影响

目的:观察叶酸和染料木黄酮的单独及联合作用下对神经细胞早期凋亡的影响,并对其可能机制进行探讨。方法:在原代培养的神经细胞中加入环磷酰胺8μg/ml诱导其发生凋亡,在早期凋亡阶段以高、中、低三个浓度的叶酸和染料木黄酮进行单独及联合干预。用流式细胞仪和扫描电镜对凋亡的情况进行观察。结果:1.流式细胞仪检测结果提示:叶酸和染料木黄酮在一定浓度下均可对神经细胞的凋亡产生明显的抑制作用,且在一定的配伍下二者进行联合干预的效果要优于单独干预;2.由扫描电镜对神经细胞早期凋亡阶段所发生膜变化的观察也支持流式细胞仪检测的结果。结论:染料木黄酮可能通过增强叶酸对神经细胞早期凋亡的抑制作用而达到增强叶酸对神经管畸形的预防作用。