远志皂苷+β-细辛醚对阿尔茨海默病细胞模型Akt/GSK-3β信号途径的影响

目的:通过观察远志汤有效成分即远志皂苷+β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导的海马神经元损伤的影响,探讨远志汤对阿尔茨海默病(AD)氧化应激损伤的保护作用和可能机制。方法:通过Aβ_(25-35)诱导原代培养的C57BL/6J小鼠海马神经元建立Aβ毒性损伤细胞模型,把神经元分为正常对照组,Aβ_(25-35)诱导组,Aβ_(25-35)与远志皂苷+β-细辛醚共同孵育3个剂量组(5、10、20μmol·L~(-1)),采用WST-1比色法、流式细胞术、荧光显微镜和Western blot方法检测远志皂苷协同β-细辛醚对原代培养的海马神经元细胞活性、细胞凋亡率和ROS含量,以及AKt、GSK-3β和磷酸化蛋白表达的影响。结果:成功复制了Aβ_(25-35)致海马神经元氧化应激损伤模型;远志皂苷协同β-细辛醚可以提高Aβ_(25-35)损伤的海马神经元细胞活力,降低Aβ_(25-35)所致的细胞凋亡率,同时降低ROS含量,诱导Akt表达,抑制GSK-3β活化。结论:远志皂苷+β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导的海马神经元氧化应激损伤发挥保护作用,可能是通过调控Akt/GSK-3β信号途径。     

β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的探讨β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞凋亡的抑制作用。方法以Aβ25-35建造体外PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞存活率、细胞形态、乳酸脱氢酶(LDH)的含量和Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达的影响。结果 10μmol/L的Aβ25-35与PC12细胞共培养24 h出现明显损伤,细胞活力下降,培养液中LDH含量增多,Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平增高。15 mg/L、30 mg/L、60 mg/Lβ-细辛醚可有效改善Aβ25-35引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少LDH渗漏,明显降低Aβ25-35引起的PC12细胞Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平。结论β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞损伤有保护作用。     

β-细辛醚对谷氨酸所致脑皮层神经元损伤的保护作用

目的:研究β-细辛醚对谷氨酸所诱导的离体培养皮层神经细胞损伤的保护作用。方法:运用新生乳鼠皮层神经细胞体外原代培养技术建立神经细胞谷氨酸损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞形态、损伤程度、存活力、细胞内钙离子浓度和细胞凋亡的影响。结果:40 mmol/L谷氨酸作用皮层神经细胞16h,出现明显损伤,凋亡率和死亡率升高,培养上清液中LDH含量增加;7.5、15、30μg/mlβ-细辛醚可有效改善谷氨酸损伤引起的神经细胞形态改变,提高细胞存活力、减少LDH渗漏、降低细胞凋亡率;15、30μg/mlβ-细辛醚能降低由谷氨酸引起的细胞内钙离子含量。结论:β-细辛醚对谷氨酸所致的皮层神经细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与钙拮抗作用有关。     

远志皂苷对β淀粉样蛋白1-40诱导的体外培养皮层神经细胞损伤的保护作用

目的:研究远志皂苷(TEN)对β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)诱导的原代培养神经细胞损伤的保护作用.方法:以原代培养大鼠皮层神经细胞,用25 μmol·L-1聚集状的Aβ1-40建立神经细胞损伤模型.将培养的神经细胞分为Aβ1-40模型组和Aβ1-40+远志皂苷(50,100,200 μmol·L-1)处理的低、中、高剂量组,同时设立正常组.在倒置显微镜下观察远志皂苷给药前后神经细胞的形态学变化,用MTT比色法检测神经细胞活性,采用LDH比色法检测神经细胞膜的损伤程度.结果:与正常组相比,25 μmol·L-1 Aβ1-40处理24 h,可使神经细胞的形态发生改变和活力显著下降,在显微镜下可见神经元失去贴壁能力或易脱落,突起变短.远志皂苷中、高剂量组均能显著降低神经细胞的坏死百分率,减少LDH的释放,明显提高神经细胞的存活率.结论:凝聚态Aβ1-40对培养的皮层神经细胞有一定的毒性效应,而远志皂苷对Aβ1-40引起的神经细胞毒性有明显的保护作用.     

基于DKK3调控探讨藏红花素对Aβ25-35诱导神经元损伤的保护作用

目的:探究藏红花素通过调控dickkopf WNT信号通路抑制因子3 (Dickkopf3,DKK3)对Aβ25-35诱导神经细胞损伤的保护作用及机制。方法:Aβ25-35诱导小鼠海马神经细胞系HT22细胞模拟细胞损伤,CCK8增殖实验检测藏红花素最佳干预浓度。qPCR检测DKK3沉默质粒(DKK3 siRNA)以及DKK3过表达质粒(DKK3-OE)的DKK3 mRNA表达,随后进行细胞转染。细胞分为正常组、Aβ25-35组、Aβ25-35+藏红花素组(1.0μmol/L)、Aβ25-35+DKK3 siRNA组、Aβ25-35+siRNA对照组、DKK3-OE组、空白质粒对照组、DKK3-OE+藏红花素组(1.0μmol/L)组。采用流式细胞数检测细胞凋亡,Tubulin β染色观察细胞神经突触形态,Western blot检测细胞Aβ、DKK3、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:0.5～2.0μmol/L藏红花素可显著上调HT22细胞活力(P<0.05)。与正常组相比,Aβ25-35组和DKK3-OE组...     

Aβ25-35体外诱导海马神经元及石菖蒲、远志有效成分合用对其SOD、MDA的影响

目的研究石菖蒲挥发油(α-细辛醚)与远志皂苷合用对海马神经元丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响。方法通过Aβ25-35诱导体外培养的海马神经元,建立AD模型,采用黄嘌呤氧化酶法测定检测各组用药前后海马神经元SOD的含量,采用硫代巴比妥酸法(TBA)测定检测各组用药前后海马神经元MDA的含量。结果模型组MDA含量显著高于空白组且SOD活力明显低于空白组,差异显著;脑复康组、α-细辛醚组、远志皂苷组、α-细辛醚联合远志皂苷组MDA含量均低于模型组且SOD活力明显高于模型组,差异显著;α-细辛醚联合远志皂苷组在降低MDA含量及提高SOD活性方面的效果显著强于二者单用。结论Aβ25-35诱导海马神经元存在自由基损伤,α-细辛醚、远志皂苷能抗自由基损伤,对神经元具有保护作用,且二者合用在抗自由基损伤上具有协同作用。     

石菖蒲有效成分配伍对Aβ损伤PC12细胞的保护作用

目的观察石菖蒲有效成分β-细辛醚和丁香酚组合对β-淀粉样蛋白毒性损伤PC12细胞的保护作用,探讨中药有效成分配伍的优越性。方法观察给药后PC12细胞形态、细胞存活率、细胞内Ca2 浓度和NO的变化。结果β-细辛醚10μmol/L 丁香酚3μmol/L组合能有效减少细胞内Ca2 浓度,抑制NO的产生,提高细胞存活率。结论石菖蒲有效成分的配伍,能更好地发挥保护PC12细胞免受β淀粉样蛋白毒性损伤的作用。     

知母皂苷对Aβ25-35引起小脑颗粒细胞损伤的保护作用及其机制探讨

目的 观察知母皂苷对淀粉样β蛋白25-35( Aβ25-35)激活小鼠巨噬细胞引起小脑颗粒细胞损伤的保护作用及探讨其作用机制.方法 小鼠小脑颗粒细胞与腹腔巨噬细胞联合培养及腹腔巨噬细胞单独培养,损伤组加入Aβ25-35( 20μmol/L),保护组同时加入不同质量浓度知母皂苷(10、30、100μmol/L).联合培养的细胞通过免疫组化染色观察微管相关蛋白-2( MAP-2)的表达和测定乳酸脱氢酶(LDH).单独培养的巨噬细胞用ELISA法和Griess法分别测定培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和一氧化氮(NO).Western blot检测巨噬细胞磷酸化p38MAPK表达水平.结果 知母皂苷组可使MAP-2表达阳性的小脑颗粒细胞数目较Aβ25-35组明显增加,LDH漏出量减少;巨噬细胞培养液中IL-1β和NO生成量减少以及巨噬细胞磷酸化p38MAPK表达水平明显降低.SB203580也能抑制Aβ25-35引起的IL-1β和NO生成量增加.结论 知母皂苷通过抑制Aβ25-35激活巨噬细胞p38MAPK通路,使IL-1β和NO表达水平降低,从而对小脑颗粒细胞起到保护作用.     

黄芪总苷对地塞米松和β-淀粉样蛋白联合诱导大鼠海马神经元损伤的影响

目的探讨黄芪总苷(astragalosides)对地塞米松(Dexamethasone,DEX)与β-淀粉样蛋白(Amyloidβ-peptide protein,Aβ)联合诱导大鼠海马神经元损伤的影响。方法通过检测海马神经元细胞活性,探讨黄芪总苷能否抑制Aβ和DEX引起海马神经元活力下降;通过检测海马神经元胞内Ca2+浓度([Ca2+]i),探讨黄芪总苷是否通过降低[Ca2+]i抑制海马神经元凋亡;通过检测P-tau-Thr231蛋白水平,进一步探讨黄芪总苷抗Aβ和DEX引起的海马神经元毒性机制。结果 黄芪总苷(10、20、40μg/mL)对体外DEX(10μmo/L)+Aβ25-35(5μmol/L)引起胎鼠海马神经元的损伤有保护作用(P0.01);黄芪总苷能明显降低DEX(10μmol/L)+Aβ25-35(5μmol/L)升高的海马神经元[Ca2+]i、P-tau蛋白水平(P0.05)。结论黄芪总苷对Aβ和DEX诱导的大鼠海马神经元损伤有一定的保护作用。     

二苯乙烯苷、远志皂苷元2∶1配伍抗Aβ_(25-35)损伤PC12细胞作用的最适浓度研究

目的:研究不同浓度下二苯乙烯苷(TSG)、远志皂苷元(TEN)2∶1配伍抗Aβ25-35损伤PC12细胞的作用,以筛选最适配伍浓度。方法:采用MTT比色法筛选Aβ25-35最适造模浓度,在所得最适Aβ25-35浓度基础上采用MTT比色法筛选TSG-TEN合用抗Aβ25-35损伤PC12细胞作用的最适浓度。结果:与正常组比较,模型组的细胞存活率明显降低(P0.01);与模型组比较,合用4组(100μmol/L TSG+50μmol/L TEN)的细胞存活率最高(P0.01)。结论:在本实验所选取的浓度范围内,TSG与TEN 2∶1配伍抗Aβ25-35损伤PC12细胞以"100μmol/L TSG+50μmol/L TEN"合用浓度为最佳。     

β-细辛醚对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用

目的研究β-细辛醚对谷氨酸所诱导的PC12细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机理。方法用谷氨酸造成PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞形态、损伤程度、存活力、钙离子浓度和细胞凋亡的影响。结果10mmol/L谷氨酸作用PC12细胞16h,出现明显损伤,凋亡率和死亡率升高,培养上清液中LDH含量增加;7.5、15、30μg/mLβ-细辛醚可有效改善谷氨酸损伤引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少乳酸脱氢酶渗漏;15、30μg/mLβ-细辛醚能明显降低谷氨酸引起的PC12细胞内钙离子浓度和细胞凋亡率。结论β-细辛醚对谷氨酸所致PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与钙拮抗作用有关。     

人参皂苷Rg1及Rb1对Aβ25-35诱导CHO细胞毒性影响

目的:观察人参皂苷Rg1及Rb1对β-淀粉样蛋白25-35片段(A β25-35)诱导中国仓鼠卵巢瘤(CHO)细胞损伤的保护作用。方法:利用MTT法和Annexin ⅴ-FITC染色流式细胞仪检测法,依次观察人参皂苷Rg1及Rb1对40μM的Aβ25-35多肽诱导CHO细胞24h后细胞活性和细胞凋亡的干预作用。结果:加入Aβ25-35多肽模型组细胞较未加用对照组细胞活性低(P<0.05),加入Aβ25-35多肽模型组细胞凋亡数高于未加用对照组(P<0.05),模型组细胞加用人参皂苷Rg1及Rb1组细胞损伤和凋亡数均较未加用组细胞有不同程度减少(P<0.05)。结论:天然药单体人参皂苷Rg1及Rb1在一定剂量范围内均能抑制Aβ25-35诱导的神经细胞损伤。     

β-细辛醚对PC12细胞和乳鼠皮层神经细胞形态学及细胞活力的影响

目的:观察β-细辛醚对PC12细胞和乳鼠皮层神经细胞形态学及细胞活力的影响。方法:用免疫细胞化学方法检测皮层神经细胞特异性标志物NSE、GFAP的表达;在体外将不同浓度β-细辛醚与PC12细胞和皮层神经细胞各作用24 h,用相差显微镜观察细胞形态的改变,并用MTT比色法检测细胞活力的变化。结果:原代培养的乳鼠皮层神经细胞大多数NSE呈阳性表达,少量GFAP呈阳性表达;β-细辛醚与PC12细胞作用24 h,低浓度β-细辛醚(7.5、15、30、60μg/ml)有促增殖作用,高浓度β-细辛醚(120、140、2480μg/ml)则可抑制其增殖,且随药物浓度的增加而增强;β-细辛醚与皮层神经细胞作用24 h,7.5、15、30、60、120μg/mlβ-细辛醚对其细胞形态和活力无明显影响,240μg/mlβ-细辛醚对其有促增殖作用,而480μg/mlβ-细辛醚对其则有损伤作用。结论:β-细辛醚可能有抗肿瘤和保护神经细胞的作用。     

β-细辛醚对于AD细胞模型的作用及对神经元突触功能可塑性的影响

目的 探索β-细辛醚对于阿尔茨海默病（AD）细胞模型的作用及其可能机制。方法 选用Aβ1-42的浓度为10umol/L作为建模条件,以NG108-15细胞为研究对象,建立体外AD细胞模型,并给予不同剂量的β-细辛醚进行干预,通过四唑盐（MTT）法检测细胞活力、并探讨β-细辛醚对细胞形态学的影响以及细胞突触的相关功能蛋白突触前蛋白(SYP) 、以及AMPA受体亚单位(GluR2)的表达。结果 MTT结果显示：β-细辛醚25umol/L干预24h后能显著减轻Aβ1-42的毒性损伤(p<0.05)。从细胞形态上看,细辛醚三个剂量组跟模型组差异显著,跟正常组没有明显差别。SYP相对表达量比较,正常组、β-细辛醚12.5 umol/L组以及β-细辛醚25umol/L组与模型组有显著性差异(p<0.05)。β-细辛醚12.5 umol/L组以及高剂量浓度25umol/L组的SYP表达量显著上调。GluR2相对表达量比较,实验各组两两比较都没有显著性差异(p>0.05)。结论β-细辛醚25umol/L组能显著改善细胞形态以及提高细胞活力,具有一定的神经保护作用,可能是通过上调SYP的表达,从而影响突触功能,改善认知。     

人参皂苷Rgl对Atβ25-35诱导的BT325细胞株脑啡肽酶表达的影响

目的：本研究拟探讨人参皂苷Rgl对Atβ25-35诱导的BT325细胞株脑啡肽酶表达的影响。方法：应用MTT比色法检测一定剂量Atβ25-35(25μmol／L)和不同浓度人参皂苷Rgl(5、10、20μmol／L)对BT325细胞存活率的影响，应用RT-PCR观察细胞中NEP基因表达的变化。结果：25μmol／L的Atβ25-35作用于BT325细胞株，BT325细胞存活率下降，细胞内NEP的表达降低。人参皂苷Rgl能提高Atβ25-35处理的BT325细胞存活率，使细胞内NEP表达增高。结论：一定剂量的Atβ25-35能造成细胞损伤和细胞内NEP表达降低的模型，人参皂苷Rgl对Atβ25-35造成的细胞毒性具有拮抗作用，增高细胞内NEP的表达。     

β-细辛醚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞炎症因子表达的影响

目的:探讨β-细辛醚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞炎症因子表达的影响。方法:(1)将对数生长期PC12细胞随机分为正常对照组、Aβ_(1-42)3.3μM、Aβ_(1-42)10μM、Aβ_(1-42)30μM。采用实时无标记动态细胞分析技术(Real Time Cell Analusis,RTCA)和MTT法检测各组PC12细胞存活率;Western blotting检测PC12细胞的IL-1β和TNF-α蛋白表达的变化。(2)将对数生长期PC12细胞随机分为正常对照组、Aβ_(1-42)模型组、β-细辛醚18.5μg·mL~(-1)、β-细辛醚55.5μg·mL~(-1)、β-细辛醚166.7μg·mL~(-1)。采用Western blotting检测PC12细胞的IL-1β和TNF-α蛋白表达的变化。结果:(1)3.3μM Aβ_(1-42)能显著增加PC12细胞IL-1β和TNF-α的蛋白表达(P<0.05),对PC12细胞的存活率无显著影响(P>0.05)。(2)与正常对照组相比,Aβ_(1-42)模型组细胞的IL-1β和TNF-α的表达明显增加(P<0.01)。与Aβ_(1-42)模型组相比,β-细辛醚(55.5μg·mL~(-1)、166.7μg·m L~-1)能显著降低PC12细胞IL-1β、TNF-α的表达(P<0.01),β-细辛醚(18.5μg·mL~(-1))能降低PC12细胞IL-1β的表达(P<0.05),但对TNF-α的表达无显著影响(P>0.05)。结论:β-细辛醚可以有效地抑制Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞分泌IL-1β、TNF-α的蛋白表达。     

独活香豆素对Aβ25-35损伤神经元的保护作用及机制研究

目的:研究独活香豆素对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)损伤神经元的保护作用及可能机制。方法:从新生乳鼠大脑皮层中分离纯化神经元,与Aβ25-35、不同浓度独活香豆素和丹酚酸B共同孵育24 h,用噻唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)测定法检测细胞存活率与LDH释放量,用Hoechst 33258染色检测Aβ25-35诱导的神经元凋亡,用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达量。结果:独活香豆素(10、50、100、150μg/ml)能明显提高Aβ25-35(30μM)损伤神经元的存活率,降低LDH释放量,抑制神经元凋亡,以浓度为100μg/ml时作用最显著,作用强度与丹酚酸B相当;独活香豆素能提高神经元Bcl-2 mR-NA、降低Caspase-3 mRNA的表达量。结论:独活香豆素对Aβ25-35损伤神经元具有保护作用,其机制可能与抑制促凋亡基因Caspase-3、促进抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达有关。     

参知健脑方组分对淀粉样β蛋白β25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的:探讨SZJ对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用机制。方法:以Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡,采用MTT比色分析测定细胞存活率,应用Western blot检测Aβ25-35以及SZJ/APP17肽对SH-SY5Y细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响。结果:25μmol/L的Aβ25-35减低SH-SY5Y细胞存活率,SZJ/APP17肽预处理24h可提高SH-SY5Y细胞存活率,相同浓度Aβ25-35 SZJ预处理组与非处理组比较差异显著(P<0.05);25μmol/L Aβ25-35处理的SH-SY5Y细胞Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Caspase-3的表达增高,SZJ/APP17肽预处理能抑制其表达升高,与非预处理组比较差异显著(P<0.05)。结论:SZJ可对抗Aβ25-35对SH-SY5Y细胞的毒性作用,其机制可能与抑制Bax、Caspase-3的表达,促进Bcl-2的表达有关。     

石菖蒲对缺血再灌注脑损伤大鼠神经细胞凋亡的影响

目的 :观察石菖蒲对缺血再灌注脑损伤大鼠神经细胞凋亡影响的有效部位。方法 :提取石菖蒲 (去油水提液、含油水提液、挥发油、β -细辛醚 ) ,灌胃给药 7d ,1次 /d ,观察大鼠脑皮质和海马神经细胞凋亡的情况。结果 :β -细辛醚有明显抑制大鼠脑皮质神经细胞凋亡的作用 ,石菖蒲组分 (含油水提液、挥发油、β -细辛醚 )也有减少大鼠海马神经细胞凋亡的作用。β -细辛醚能抑制大鼠脑皮质和海马神经细胞Bax基因表达。石菖蒲挥发油和 β -细辛醚能增强大鼠脑皮质神经细胞Bcl -X基因的表达。结论 :石菖蒲挥发油尤其是 β -细辛醚有抑制大鼠神经细胞凋亡的作用     

人参皂苷Rg1对Aβ25-35诱导的BT325细胞株脑啡肽酶表达的影响

目的 :本研究拟探讨人参皂苷Rg1对Aβ2 5 - 35诱导的BT32 5细胞株脑啡肽酶表达的影响。方法 :应用MTT比色法检测一定剂量Aβ2 5 - 35 (2 5 μmol/L)和不同浓度人参皂苷Rg1(5、 10、 2 0 μmol/L)对BT32 5细胞存活率的影响 ,应用RT -PCR观察细胞中NEP基因表达的变化。结果 :2 5 μmol/L的Aβ2 5 - 35作用于BT32 5细胞株 ,BT32 5细胞存活率下降 ,细胞内NEP的表达降低。人参皂苷Rg1能提高Aβ2 5 - 35处理的BT32 5细胞存活率 ,使细胞内NEP表达增高。结论 :一定剂量的Aβ2 5 - 35能造成细胞损伤和细胞内NEP表达降低的模型 ,人参皂苷Rg1对Aβ2 5 - 35造成的细胞毒性具有拮抗作用 ,增高细胞内NEP的表达。