成人接种乙型肝炎疫苗后细胞免疫应答的动态变化

目的探讨人体接种乙型肝炎(乙肝)疫苗后细胞免疫的动态变化,了解疫苗介导的细胞免疫应答与体液免疫应答的关联。方法8例成人按0、1、2月程序接种乙肝疫苗,于首针免疫后3、8、21、34和65 d采静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMC),对PBMC进行细胞分选,获得纯度95%以上的CIM~ 和CD8~ T淋巴细胞,应用酶联免疫斑点法(ELISPOT)测定PBMC、CD4~ 和CD8~ T淋巴细胞体外刺激后所产生的细胞因子IFN-γ、IL-2和IL-4的斑点数(SFC),并收集乙肝疫苗免疫前(0 d)和免疫后3、8、21、30、34、60、65和150 d血样,测定乙肝表面抗体(抗-HBs)。同时设立阴、阳性对照各2例。结果人接种乙肝疫苗后,CD4~ 、CD8~ T淋巴细胞产生不同细胞因子趋势和强度不同: IFN-γ(由CD8~ 、CIM~ T淋巴细胞产生)出现较早,且较为稳定,而CD4~ T淋巴细胞产生的IL-2和IL-4出现较晚,但其升高与第2、3针乙肝疫苗免疫有关;免疫后IL-4阳转率与抗-HBs阳转率呈显著正相关,IL-2、IL-4的SFC与抗-HBs滴度也呈显著正相关。结论成人接种乙肝疫苗后可早期检测出以IFN-γ为主的细胞免疫,IL-4和IL-2阳转与抗-HBs升高有关。     

不同种类乙型肝炎重组疫苗诱导免疫应答特点比较

目的 比较三种乙型肝炎重组疫苗(rHB)[乙型肝炎汉逊酵母重组疫苗(rHP)、酿酒酵母重组疫苗(rSC)和CHO重组疫苗(rCHO)]诱导小鼠细胞和体液免疫应答特点.方法 给3组小鼠(BALB/c,H-2d)分别皮下接种3种r}HB 3μg,于免疫后第4、7、10、14、25和35 d分离脾单个核细胞(MNC),应用酶联斑点法(ELISPOT)测定MNCs体外刺激后所产生的细胞因子IFN-γ、IL-2斑点形成细胞数(SFC).刺激物为多肽或HBsAg.同时测定免疫后不同时间的细胞毒T淋巴细胞反应(CTL)活性和小鼠血清抗-HBs水平.结果 应用ELISPOT法,不同种类rHB免疫小鼠后诱导分泌IFN-γ和IL-2峰值均为10-14 d;rHP诱导CTL活性(P=0.000<0.05)和分泌IFN-γ水平(P<0.05)均显著高于rCHO和rSC,且rHP于免疫后第10天诱导CTL杀伤率最高(39.8%);rHP组诱导分泌IL-2水平均显著高于其他两种疫莆组(P<0.05),第7和14天时,rSC组诱导产生IL-2水平均显著高于rCHO组(第7天t=4.595,P=0.001<0.05;第14天t=5.721,P=0.000<0.05);免疫后第7天3种疫苗诱导细胞免疫应答强度依次为rHP最强,rSC其次,rCHO最弱;小鼠血清抗-HBs阳转率和抗体滴度随免疫时间而逐渐上升,第7天时rCHO组抗体显著高于rHP组(P=0.044<0.05),第14天时rCHO组抗体显著高于rHP组(P=0.009<0.05)和rSC组(P=0.012<0.05).结论 3种疫苗免疫小鼠的应答特点不同,酵母重组疫苗早期诱导细胞免疫应答优于rCHO;rCHO的优势是诱导产生抗-HBs早,且滴度较高.     

乙型肝炎疫苗细胞免疫应答检测用参考品的制备和初步应用研究

目的通过研究重组乙型肝炎表面抗原（HBsAg）免疫小鼠诱导细胞免疫应答的特点，制备一批细胞免疫应答检测用参考品，规范乙型肝炎疫苗细胞免疫实验条件和操作。方法背部皮下分别免疫小鼠（BALB／c，H-2^d）0．5、1、2、4和8鹏的HBsAg，于免后7d，检测小鼠脾单个核细胞（MNC）体外刺激诱生IFN-γ的水平。分别免疫小鼠2、4μgHBsAg，免后7d，检测MNC分泌IFN-γ水平。结果1μg组可检测小鼠IFN-μ阳转；免疫剂量与IFN-γ阳转率存在剂量效应关系（r=0．951，P=0．049），IFN-γSFC与免疫剂量也存在剂量效应关系（r=0．996，P=0．000）。2μgHBsAg组IFN-1阳转率在50％-75％之间；4μg组IFN-γ阳转率均为75％。结论制备一批乙肝疫苗细胞免疫参考品，用于规范疫苗诱导细胞免疫应答的方法检测。     

三种不同方法检测乙型肝炎表面抗原的临床应用及比较

目的结合临床实践经验,探讨3种不同方法检测乙型肝炎表面抗原的准确性、稳定性,为以后检测乙型肝炎提供依据。方法选择132例乙肝患者作为观察组,138例非乙肝患者作为对照组,分别对两组用荧光免疫分析法、酶联免疫吸附法、胶体金法对乙型肝炎表面抗原进行检测,检测完毕后记录检测结果,对比三种方法的监测结果,探讨其临床应用价值。结果三种方法的准确度由高到低分别为,时间分辨荧光分析法〉酶联免疫吸附法〉胶体金法;三种方法的灵敏度与特异度为,辨荧光分析法〉酶联免疫吸附法〉胶体金法,差异有统计学意义‘P〈0．05）。结论时间分辨时间荧光分析法能准确的检测出乙型肝炎表面抗原,误差小,无放射性污染,是目前公认的最好的检测方法,值得临床进一步推广和研究。     

CpG-ODN刺激HBV免疫清除期及耐受期患者PBMCs分泌IFNɑ的研究

目的研究免疫清除期、免疫耐受期HBV感染者外周血单个核细胞(PBMCs)对寡核苷酸CpG-ODN刺激的差异。方法 HBV感染免疫清除期与免疫耐受期患者32例,常规分离PBMCs,体外用CpG-ODN刺激,用酶联免疫斑点(ELISPOT)方法检测PBMCs分泌的IFNɑ。结果 100.0%的免疫清除期HBV感染者PBMCs受CpG-ODN刺激、IFNɑ分泌实验阳性,而免疫耐受期的HBV感染者PBMCs受CpG-ODN刺激,只有40.0%IFNɑ分泌实验阳性,二者之间差异有统计学意义(P0.01)。结论免疫清除期、免疫耐受期HBV感染者PBMCs对CpG-ODN刺激的免疫反应不同。     

胶体金与酶联免疫法检测乙型肝炎表面抗原效果对比探讨

目的:在乙肝表面抗原检测操作中分别实践胶体金法、酶联免疫法的效果对比探究.方法:选取2015年6月-2016年4月因患乙型肝炎而入本院施行检测及相应诊治的病人75例,分别胶体金检测试纸条与酶联免疫吸附测定对其实施表面抗原的同期检测以及集中性研讨,评估两种检测法的效果情况.结果:胶体金法检出阳性病例分别是54例,占比为72.00%.酶联免疫法检出阳性病例是52例,占69.33%.经统计及x2检验发现,两种检测法的HbsAg阳性数据组间差异不显著(P>0.05).结论:胶体金法、酶联免疫法使用在HbsAg测定操作中时,各具独特运用优势以及缺点,检测工作者需按照具体工作选用适宜的检测方法.     

酶联免疫吸附试验和电化学发光免疫法检测孕妇乙型肝炎表面抗原结果的比较

目的 比较ELISA和电化学发光免疫法（ECLIA）检测HBsAg的一致性,探讨其相关的因素和基因进化特征。方法 2014年1月1日至2015年1月31日连续招募安庆市市立医院产科初次住院活产孕妇2 296例,收集其人口学特征,并对采集的血清应用ELISA和ECLIA检测HBsAg,采用Kappa检验评价两种方法检测结果的一致性;对HBV S基因片段进行巢式PCR扩增、测序及进化分析。结果 两种方法具有一致性,Kappa=0.71。共获得123株HBV S基因片段序列,其中113株为B基因型（adw2血清型112株,adw3血清型1株）,10株为C基因型（全为adr血清型）。两种方法检测不同基因型或血清型病毒株的结果显示,ECLIA对B基因型和adw2血清的检测明显优于ELISA,差异有统计学意义。113株B基因型序列进化分析显示,两种检测方法或不同阳性组别在各位点替换率的差异均无统计学意义。发生于HBsAg主要亲水区域（MHR）的氨基酸变异显示,ELISA/ECLIA单纯阳性组出现完全不相同的替换位点。结论 两种方法检测HBsAg具有高度的一致性,但在ELISA/ECLIA单纯阳性组中仍获得34株（32.4%）HBV S基因片段,且存在MHR的氨基酸替换位点互补。因此在控制HBV传播中应考虑ELISA/ECLIA单纯阳性的感染者在人群中可能的静默传播作用,还需优化临床检测程序。     

ELISPOT及ELISA鉴别HBV感染免疫状态的研究

目的比较酶联免疫斑点法(ELISPOT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴别乙型肝炎病毒(HBV)感染免疫状态。方法临床诊断的慢性HBV感染者免疫清除期、免疫耐受期患者各16例,常规分离外周血单个核细胞(PBMC),体外用HBcAg或培养液刺激,分别用ELISPOT及ELISA方法,检测两组患者PBMC分泌的r-干扰素(INFr)。结果用ELISA方法,两组患者PBMC受HBcAg刺激分泌IFNr,分别为(655.25士3.80)、(578.37±7.73)ng/L,阳性率分别为68.81%、12.50%,差异有统计学意义(P<0.01);用ELISPOT方法,两组患者PBMC受HBcAg刺激分泌IFNr,阳性率分别为87.50%、0,二者差异有统计学意义(P<0.01)。结论免疫清除期、免疫耐受期HBV感染者,PBMC对HBcAg刺激的免疫反应不同,鉴别二者,ELISPOT优于ELISA。     

不同免疫程序成人重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母)接种免疫效果比较研究

目的采用不同免疫程序,评价成人接种重组乙型肝炎(乙肝)疫苗(汉逊酵母)[Recombinant Hepatitis B Vaccine(Hansenula polymorpha),Hep B]的免疫效果。方法选择柯桥区年龄在16~49岁的健康成人且无Hep B接种史和接种禁忌,实验室筛检乙肝病毒(Hepatitis B Virus,HBV)标志物乙肝病毒表面抗原(HBV Surface Antigen,Hbs Ag)、抗乙肝病毒表面抗原抗体(Antibody to Hbs Ag,Anti-HBs)、抗乙肝病毒核心抗原抗体(Antibody to HBV Core Antigen,Anti-HBc)均阴性。所有研究对象均进行问卷调查。3个乡镇分别选用"0-1-3月"、"0-1-6月"、"0-1-12月"免疫程序,接种完成1个月后检测Anti-HBs阳性率、抗体滴度水平进行评价。比较不同免疫程序免疫后的Anti-HBs阳性率、抗体滴度水平。采用多因素分析方法确定排除其他因素影响后,免疫程序对抗体应答的影响。结果 "0-1-3月"、"0-1-6月"、"0-1-12月"各组Anti-HBs阳转率分别为98.01%、98.43%、93.65%,差异有统计学意义(χ~2=7.70,P0.05)。各组Anti-HBs几何平均浓度(Geometric Mean Concentration,GMC)分别为807.89 m IU/ml、930.68 m IU/ml、720.28 m IU/ml,差异无统计学意义(K=0.32,P=0.85)。多因素分析显示,在排除性别、年龄等影响因素后,抗体水平与免疫程序无关。结论成人Hep B"0-1-3月"、"0-1-6月"、"0-1-12月"免疫程序均可获得较好的抗体应答,"0-1-3月"和"0-1-6月"组阳转率略高于"0-1-12月"组,其长期效果需进一步随访。     

接种不同剂量重组乙型肝炎疫苗(酵母、汉逊酵母)的血清抗体应答

目的观察乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原[Hepatitis B Virus(HBV)Surface Antigen,HBsAg]、抗乙肝病毒表面抗原抗体[Antibody to HBsAg,Anti-HBs]、抗乙肝病毒核心抗原抗体(Antibody to HBV Core Antigen,Anti-HBc)阴性人群,全程接种不同剂量重组乙肝疫苗(酵母)[Hepatitis B Vaccine(HepB)Made by RecombinantDeoxyribonucleic Acid(DNA)Techniques in Yeast,HepB-Y]、重组乙肝疫苗(汉逊酵母)(HepB Made by RecombinantDNA Techniques in Hansenula Polymorpha Yeast,HepB-HPY)后的血清抗体应答。方法采集受种者接种后28～45d的静脉血,用固相放射免疫方法检测Anti-HBs。结果<16岁HBsAg、Anti-HBs、Anti-HBc均阴性人群,接种5μg HepB-Y后,Anti-HBs阳转率和几何平均浓度(Geometrical Mean Concentrat...     

The Influence of Therapeutic HBsAg Vaccine on Immune Responses in Mice

Objective To investigate the effect of various doses of HBsAg vaccine on cellular immune responses in mice. Methods Mice were immunized with one or two low, medium or high doses of HBsAg vaccine. T cell proliferation was tested by [^3H] thymidine incorporation. Secretion of IL- 2 and IFN - γ into culture supematants, and the concentration of serum anti - HBsAg IgG2a, were determined by ELISA. The lactate dehydrogenase method was used to detect the cytolytic activity of antigen - specific T cells. Results Primary immunization with medium- or high - dose HBsAg significantly enhanced T cell proliferation （ P 〈 0.01 ）, secretion of IL - 2 and IFN - γ/（ P 〈 0.05 for each ）, and anti - HBsAg IgG2a （ P〈 0.05）. Booster immunization further enhanced ＇all of these parameters. Booster, but not primary, immunization with low - dose HBsAg significantly enhanced all of these markers of cell - mediated immunity. Significant CTL activity was observed in all three groups of immunized mice and was independent of dose. Conclusion In mice, HBsAg vaccine induces cellular immune responses, boosts production of Thl - specific cytokines, and upregulates both cytolytic and noncytolytic immune responses. These findings suggest that this vaccine may be useful in treating patients with chronic hepatitis B.     

两种协同过筛法检测细菌β-内酰胺酶的比较研究

目的比较以EDTA-Na2或2-巯基乙醇为酶抑制剂的协同过筛法检测细菌金属酶的敏感性,为临床筛选金属酶,探究细菌的耐药机制提供依据。方法收集68株产金属酶耐亚胺培南（IPM）或三代头孢的细菌,以EDTA-Na2或2-巯基乙醇为酶抑制剂,头孢他啶（CAZ）、头孢噻肟（CTX）和亚胺培南（IPM）为底物在MH平板上用纸片扩散法进行抗生素协同敏感性检测。结果 2-巯基乙醇筛选法检出金属酶的阳性率为77.9%（53/68）;EDTA筛选法阳性率为57.4%（39/68）;两种方法联合使用阳性率为92.6%（63/68）。结论两种方法阳性率差异无统计学意义（χ2=3.12,P〉0.05）,联合应用对金属酶的检出率更高。     

三种HBsAg检测方法检测377份血清样本结果比较

目的对检测HBsAg的三种方法酶联免疫吸附法（ELISA）、胶体金免疫层析试验法（GICA）、化学发光微粒子免疫分析法（CMIA）进行比较分析。方法 221份乙肝患者血清作试验组及156份非乙肝患者血清作对照组,分别用以上三种方法检测HBsAg,对结果进行分析比较。结果ELISA和GICA的灵敏度和特异度均低于CMIA,差异有统计学意义。结论 ELISA、GICA操作简便,成本低廉,灵敏度亦不低,适宜基层单位普及;CMIA虽然灵敏度和特异度均高,但试剂成本高且仪器昂贵,可用作对可疑标本必要时行复查。     

两种白喉IgG抗体酶联免疫吸附试验检测试剂盒的评价

目的 对IBL公司和Virion公司白喉IgG抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒进行评价,以获得试剂盒的稳定性和准确度的相关数据.方法 购买IBL和Virion公司的白喉IgG抗体 ELISA 检测试剂盒,检测标本来自31份健康从业人员体检血清以及试剂盒内标准品.标准品同时进行10孔检测.血清样品双孔检测,标准品每天检测1次,共检测3次.分析试剂盒检测结果的批内差异及批间差异以检测其稳定性,将标准品的测得浓度与实际浓度相比较,评价试剂盒的准确度.结果 IBL 试剂盒标准品检测的批内变异系数(Coefficient of Variation,CV)为13.550 7%,批问CV为9.989 0%;血清样品检测的批内CV为14.527 0%,批间CV为11.003 9%.Virion试剂盒标准品检测的批内CV为5.9541%,批间CV为2.472 8%;血清样品检测的批内CV为11.0612%,批间CV为8.030 0%,标准品的测得浓度与实际浓度之间的CV:IBL试剂盒为17.688 9%,Virion试剂盒为1.396 6%.IBL和Virion试剂盒检测结果与间接血球凝集试验(IHA)检测结果的符合率均为65%.结论 两公司试剂盒的检测结果均满足试剂盒自身的质量控制标准,CV满足 ELISA 的常规质量控制标准(CV<20%).标准品的测得值和实际值之间比较,Virion试剂盒的CV较小.与IHA相比,两种试剂盒的符合率相同.     

应用白介素-2诱导乙肝疫苗免疫无应答者特异性免疫反应的研究

乙肝疫苗全程免疫后有１０％－１５％的免疫无应答者,目前尚无有效办法使其产生免疫保护,白介素－２具有佐剂作用,可激发机体的免疫应答,本研究筛选了６０例乙肝疫苗免疫无应答者作为研究对象,随机分为观察组和对照组,观察了白介素－２与乙肝疫苗联合使用后特异性免疫反应效果,结果表明观察组的抗－ＨＢｓ阳转率为６２．０７％,明显高于对照组的２６．６７％（Ｘ２＝７．４９８,０．０１＞Ｐ＞０．００５）,男女之间无明显差异,说明白介素－２可有效诱导乙肝疫苗免疫无应答者产生特异性免疫反应。     

酶免法手工检测与全自动检测HBsAg结果的比较

目的了解酶免法手工检测与全自动检测HBsAg结果之间的总体及个体差异，为规范酶免检测提供实验数据。方法手工与全自动同时对同一组样本进行检测，运用统计学方法对获得的检测数据进行分析。结果手工检测变异系数为6.65％-21.38％，仪器检测变异系数为9.99％；结论各实验个体之间存在较明显差异，手工操作需要规范。     

检测百日咳抗毒素免疫球蛋白G的酶联免疫吸附试验试剂盒的稳定性评价

目的对目前国内市场上销售的国产和进口的、针对百日咳毒素（Pertussis Toxin,PT）免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）G的酶联免疫吸附试验（Enzyme—linked Immunosorbent Assay,ELISA）试剂盒,即抗-PTIgGELISA检测试剂盒进行稳定性评价,为中国百曰咳监测中抗-PTIgG检测试剂盒的选择提供部分参考。方法选用8份不同浓度的抗-PT IgG血清,对1种国产试剂盒（A）和2种进口试剂盒（B-1、B-2）分别进行批内稳定性、批间稳定性、日间稳定性三方面评价。结果A、B-1、B-2三个试剂盒对不同浓度代表血清检测的批内变异系数（Coefficient of Variability,CV）均值,分别为5．44％、14．35％、19．5％;批间cv均值分别为16．15％、12．48％、29．66％。A、B-1、B-2三个试剂盒日间检测CV均值分别为13．10％、8．68％、26．31％。结论在各自试剂盒检测范围内,国产试剂盒A批内检测CV值最小,稳定性最高,试剂盒B-2批内稳定性较差。试剂盒A与B-1检测的批间稳定性基本满足质量控制范围（7／8,7／8）,日间稳定性较好。不同的试剂盒采用了不同的测量单位和判断标准,如ELISA单位／毫升（Unitper Milliliter,EU／m1）和国际单位（International Unit,IU）／ml等。在抗-FvFIgG监测中应统-判定标准。     

SureStrip HBsAg试剂条法检测乙肝表面抗原

[目的] 评价SureStrip HBsAg试剂条法对乙肝表面抗原的检测效果。[方法] 用SureStrip HBsAg试剂条法和酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清标本。[结果] SureStrip HBsAg试剂条法 HBsAg阳性率为5.24％(98/1869);ELISA法为5.19％(97/1869),两法比较差异无显著性(P>0.05)。溶血、脂血对检测结果无影响。[结论]SureStrip HBsAg试剂条法检测HBsAg具有快速、敏感、特异、简便、无污染等特点,值得推广应用。     

化妆品中真菌检测方法的比较

目的 在化妆品中运用真菌检测技术对两种培养基进行比较。方法 取112份化妆品分别用Sabouraud琼脂培养基和盂加拉红培养基进行真菌检测。结果 用Sabouraud琼脂培养基检测，有15份样品出现真菌菌落，阳性率为13．4％；使用孟加拉红培养基检测，有16份检出真菌，阳性率为14．3％。结论 使用2种培养基检测结果差异没有显著性，使用孟加拉红培养基作真菌检测，检测方法简单，准确，快捷。     

Aberrant Immune Responses Cited for Two Common Drugs

If the victim reaches the hospital alive, the outlook is quite optimistic, provided that the field team and ER physicians correctly make some crucial distinctions about type, number, and location of wounds, as well as hemodynamic status.