鹿气管硫酸软骨素的提取分离与抗氧化活性研究

分别采用稀碱-酶解法和稀碱-浓盐法提取鹿气管中的硫酸软骨素,通过比较提取率、提取时间等对2种方法进行考察,最终选取提取率高、耗时短的稀碱-浓盐法提取其中的硫酸软骨素。采用高效液相色谱法对鹿气管中硫酸软骨素含量进行测定,并探讨鹿气管硫酸软骨素及硫酸软骨素寡糖的抗氧化活性。结果发现,稀碱-浓盐法提取鹿气管中硫酸软骨素的得率为21.88%;鹿气管中总硫酸软骨素含量为35.31 g/kg,硫酸软骨素A、B和C含量分别为19.54、2.06 g/kg和13.71 g/kg;鹿气管硫酸软骨素及其寡糖均具有一定的抗氧化活性,且硫酸软骨素寡糖的抗氧化活性显著高于硫酸软骨素。     

硫酸软骨素在药品和保健食品中的应用

根据近年来硫酸软骨素(chondroitin sulfate)的相关研究和应用资料,对其在药品和保健食品中的应用进行概述。1 硫酸软骨素简介 硫酸软骨素是广泛存在于人和动物软骨组织中的一类黏多糖,主要由动物喉骨、鼻中隔、气管等软骨组织分离纯化而得。其结构是由D—葡糖醛酸与2—乙酰氨基—2—脱氧—硫酸—D—半乳糖组成。其分子约含50～70个双糖基本单位,分子量为1万～5万。根据结构中硫酸基的位置不同,主要有两种异构体。若分子中半乳糖上的硫酸基在4位上,称为硫酸软骨素A或4—硫酸软骨素;如果分子中半乳糖上的硫酸基     

鳐鱼硫酸软骨素提取工艺优化及其性质表征

以孔鳐加工的副产物软骨为原料,利用响应面方法优化鳐鱼硫酸软骨素提纯工艺,并对获得的鳐鱼硫酸软骨素进行质量及结构的表征。结果表明,最优提取工艺为碱液浓度2.3%、提取温度43℃、酶添加量0.7%时,硫酸软骨素提取率为43.32%。提取的鳐鱼硫酸软骨素符合国药标准,其重均分子量、数均分子量和多分散系数分别为40 752、38 257和1.065 2,经红外光谱分析,鳐鱼硫酸软骨素与鲨鱼硫酸软骨素具有相同结构组织,均由β-1,3糖苷键连接的β-D-葡萄糖醛酸和N-乙酰基-β-D-氨基半乳糖组成,该研究结果不仅可大幅度增加鳐鱼加工产业的附加值,也可为硫酸软骨素的工业生产提供一定的技术支持。     

鲟鱼软骨硫酸软骨素降解产物的结构分析

以鲟鱼软骨为原料,采取碱提-酶解-醇沉的方式提取硫酸软骨素后,采用普通粉碎、超微粉碎联合辐照技术分别对硫酸软骨素样品进行降解后,再利用离子色谱法、紫外-可见光光谱扫描法、红外吸收光谱法、核磁共振波谱法研究硫酸软骨素的化学结构。单糖分析表明,粗样中的鼠李糖经超微粉碎加辐照共处理后含量从56.16%增加到59.31%,粗样中的葡萄糖醛酸经超微粉碎加辐照共处理后含量由33.69%降低到31.84%;而纯化样品中葡萄糖醛酸含88.77%。紫外光谱分析表明硫酸软骨素经超微粉碎与辐照的共处理方式使硫酸软骨素的分子结构发生断裂即糖苷键的分裂及产生C=O基团。红外光谱结果表明普通粉碎及经超微和辐照降解共处理的硫酸软骨素均呈现4-硫酸软骨素和6-硫酸软骨素的典型特征。核磁共振分析得出经超微粉碎和辐照的处理使硫酸软骨素上的乙酰半乳糖胺和葡萄糖质子信号增强,且推测鲟鱼硫酸软骨素包含GlcA (β1→3) GalNAc-4SO3和GlcA (β1→3) GalNAc-6SO3重复单元结构。     

罗非鱼加工副产物不同部位硫酸软骨素的制备、理化性质及结构表征

采用双酶酶解、氯化十六烷基吡啶法从罗非鱼副产物不同部位（鱼头、鱼脊骨、鱼鳍、鱼尾）制备硫酸软骨素,利用紫外光谱、醋酸纤维电泳、红外光谱和高效液相色谱对其理化性质和结构特征进行分析。结果表明,鱼头、鱼尾所含硫酸软骨素主要为C型（Δdi6S）,含量分别为46.10%和41.01%;鱼脊骨、鱼鳍所含硫酸软骨素主要为A型（Δdi4S）,含量分别为71.86%和69.59%。纯度从高到低依次为鱼头90.37%、鱼尾83.33%、鱼脊骨59.76%、鱼鳍52.01%。鱼头、鱼脊骨、鱼鳍、鱼尾硫酸软骨素的单糖组成主要由不同比例的葡萄糖醛酸、葡萄糖和氨基半乳糖构成,mn依次为51 422、18 402、19 481、76 371。不同部位提取的硫酸软骨素的种类和组成有明显差异,其中罗非鱼头、鱼尾提取的硫酸软骨素与鲨鱼软骨来源硫酸软骨素结构相似,有望作为代替鲨鱼硫酸软骨素的潜在来源。     

鱿鱼硫酸软骨素糖蛋白的分离纯化和鉴定

目的:研究鱿鱼软骨硫酸软骨素的主要成分.方法:以鱿鱼喉软骨为材料,经提取、分离和纯化等步骤得到一酸性粘多糖组分C-S2:用高效凝胶过滤色谱和比旋光度鉴定其纯度,并用化学和光谱法研究其组成和结构.结果:C-S2为均一性较好的粘多糖,为硫酸软骨素C糖蛋白,其重均相对分子质量(Mw)149 595,比旋光度-25.3.软骨素含量95.31%,蛋白含量2.59%,葡萄糖醛酸(GlcA)含量35.02%,己糖胺含量34.02%,总硫酸基含量9.54%,并存在少量中性单耱,由鼠李糖(Rha)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glu)和半乳糖(Gal)组成;β-消去反应说明C-S2中糖链以O-糖肽键连接到苏氨酸上.结论:鱿鱼软骨硫酸软骨素的主要成分为硫酸软骨素C糖蛋白.     

评《硫酸软骨素》

正硫酸软骨素是一种传统生化药物,有多种生物活性,硫酸软骨素/氨基葡糖在欧洲作为处方药或非处方药用于治疗骨关节炎已有多年历史,美国药典-处方集将硫酸软骨素列为膳食补充剂。我国对硫酸软骨素的应用除作为调血脂药物外,还用于骨关节炎、眼科、组织工程等方面。中国药典2010年版收载了"硫酸软骨素钠"及其制剂。随着研究的深入,硫酸软骨素在医药领域的潜在应用也受到人们重视,如用于抗病毒感染、抗肿瘤、药物载体等方面,又将为硫酸软骨素开拓更广泛的用途。虽然硫酸软骨素基础研究取得了较大进展,但其结构和功能的关系、生理作用机制、生物利用度等仍不明确。     

USP34标准——硫酸软骨素钠

软骨素,硫酸氢,钠盐[9082-07-9]。硫酸软骨素钠是从牛、猪、禽等家畜软骨组织中提取制得的硫酸化线形糖胺聚糖钠盐。主要由N-乙酰半乳糖胺(2-乙酰胺-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖)和D-葡糖醛酸的共聚物的硫酸酯钠盐组成,共聚物内己糖通过β-1,4及β-1,3糖苷键交替连接。在普遍的糖胺聚糖中,半乳糖胺部分主要为4-位单硫酸盐,较少为6-位。按干燥品计算,含硫酸软骨素     

不同来源和制备工艺硫酸软骨素的二糖分析

从猪、牛、鸡、鸭和鲨鱼软骨中提取分离硫酸软骨素,采用酶解-高效液相色谱法对不同来源和制备工艺获得的硫酸软骨素进行了二糖分析。结果表明,来源于猪、牛、鸡和鸭软骨的硫酸软骨素由非硫酸化二糖、4-硫酸化二糖和6-硫酸化二糖组成,而来源于鲨鱼软骨的硫酸软骨素还含有2, 6-硫酸化二糖、2, 4-硫酸化二糖和4, 6-硫酸化二糖,且各二糖单位的百分含量也不同;高温、强酸、强碱及双氧水的强氧化性均可降低硫酸软骨素中硫酸化二糖的百分含量。说明硫酸软骨素的组成与其来源和制备工艺密切相关,实际生产中可根据不同需求来选择合适的原料和制备工艺。     

鮟鱇鱼硫酸软骨素的提取及性质研究

建立了从鮟鱇鱼骨中提取硫酸软骨素的方法,并对提取工艺进行了优化.样品用20%氯化钠碱溶液浸提,pH7.8条件除去中性蛋白,pH2.5除去酸性蛋白,然后用70%(v/v)乙醇沉淀获得鮟鱇鱼硫酸软骨素.本方法硫酸软骨素的得率为3.47%,所得鮟鱇鱼硫酸软骨素产品为白色粉末,纯度为90.94%.对鮟鱇鱼硫酸软骨素的理化性质研究表明,其水分含量为8.88%,氮含量为2.86%,氨基己糖含量为30.12%,葡萄糖醛酸含量为31.40%.从鮟鱇鱼骨中提取出的硫酸软骨素产品电泳实验显示为单点,表明其为单一糖胺聚糖,红外光谱吸收特征显示其为硫酸软骨素C.     

C4ST-1在大肠杆菌中的可溶性表达

软骨素-4-O-硫酸转移酶-1 (Chondroitin-4-O-sulfotransferase-1,C4ST-1,EC 2.8.2.5)催化软骨素N-乙酰半乳糖胺(N-Acetylgalactosamine,GalNAc)4号位羟基硫酸化生成硫酸软骨素A(chondroitin sulfate A,CSA)。C4ST-1含3对二硫键,在Escherichia coli细胞质内二硫键难以正确形成,故在E. coli中表达时主要以包涵体形式存在。为提高胞内可溶性蛋白质的表达水平,共表达了催化二硫键从头形成的巯基氧化酶(Erv1p)或/和促进二硫键正确折叠的二硫键异构酶(DsbC)。结果表明共表达DsbC可使C4ST-1融合蛋白的胞内可溶性表达水平显著提高,但C4ST-1和Erv1p共表达对胞内可溶性蛋白质的表达影响相对较小。C4ST-1和Erv1p或C4ST-1和DsbC共表达菌株的酶活分别为原始菌株的1.30和2.33倍,活力达到(12.32±0.76) U/L和(21.99±0.42) U/L。挑取同时共表达C4ST-1、Erv1p和DsbC的菌株进行摇瓶水平和3 L发酵罐放大培养,酶活分别达到(29.12±0.66) U/L和49.97 U/L。本研究为C4ST-1的大规模应用奠定了一定的基础。     

鮟鱇鱼皮硫酸皮肤素的二糖组成及结构研究

目的:获取鮟鱇鱼皮中硫酸皮肤素的二糖结构信息。方法:以硫酸软骨素ABC酶酶解硫酸皮肤素样品,得到二糖;对酶解时间进行优化,进而以毛细管液相色谱法和毛细管液相-质谱联用法分析二糖结构及含量。结果:鮟鱇鱼皮硫酸皮肤素在硫酸软骨素ABC酶作用下,37℃反应4h,可酶解完全。其糖链是以艾杜糖醛酸-[1→3]-N-乙酰氨基半乳糖-4硫酸(△Di-4S(Ido))为主要二糖重复单位,此外,还含有少量的艾杜糖醛酸-[1→3]-N-乙酰氨基半乳糖-6硫酸(△Di-6S(Ido))和葡萄糖醛酸-[1→3]-N-乙酰氨基半乳糖(△Di-0S)二糖单位。△Di-4S(Ido)、△Di-0S与△Di-6S(Ido)3种不饱和二糖的摩尔比为171∶1∶1。     

高产洛伐他汀红曲菌的选育及其在红腐乳中的应用

硫酸软骨素酶（ChSase）是一类能将硫酸软骨素（CS）催化裂解为小分子多糖的酶,根据结合的底物种类可分为ChSase ABC,ChSase AC,ChSase B和ChSase C。将普通变形杆菌（Proteus vulgaris）KCTC 2579的硫酸软骨素酶ABC I（ChSase ABC I）与麦芽糖结合蛋白（MBP）融合表达,构建了pMAL-c2x-ChSase ABC I重组载体,并成功在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21(DE3)宿主中高效表达。将麦芽糖结合蛋白-硫酸软骨素酶（MBP-ChSase）ABC I固定在聚苯胺载体上,制备生物传感器,并利用循环伏安法对其进行检测。结果表明,MBP-ChSase ABC I酶活和比酶活分别为3 180 IU/L发酵液和76 IU/mg蛋白。选择硫酸软骨素A（CS A）作为酶的反应底物,在最适反应条件下,反应的峰值电流与CS A在浓度0.1 nmol/L～0.1 μmol/L范围内呈线性关系。该生物传感器对底物反应迅速,具有较高的灵敏度,可以进行有效检测。     

高效液相色谱法测定食品中硫酸软骨素

采用高效液相色谱法,通过检测被软骨素酶ABC酶解释放的2种不饱和双糖来测定食品中硫酸软骨素(ChS)。软骨素酶ABC水解ChS产生2种不饱和双糖(6-磺化和4磺化双糖),其在氨基相柱中保留时间分别为6.2和7.3 min。这些双糖产生的峰被用来确定样品中ChS的总量。此方法成功用于市售蛋黄酱、调味料和鱼肉肠的分析。     

评《硫酸软骨素》

硫酸软骨素是一种传统生化药物,有多种生物活性,硫酸软骨素／氨基葡糖在欧洲作为处方药或非处方药用于治疗骨关节炎已有多年历史,美国药典一处方集将硫酸软骨素列为膳食补充剂。我国对硫酸软骨素的应用除作为调血脂药物外,还用于骨关节炎、眼科、组织工程等方面。中国药典2010年版收载了“硫酸软骨素钠”及其制剂。随着研究的深入,硫酸软骨素在医药领域的潜在应用也受到人们重视,如用于抗病毒感染、抗肿瘤、药物载体等方面,又将为硫酸软骨素开拓更广泛的用途。虽然硫酸软骨素基础研究取得了较大进展,但其结构和功能的关系、生理作用机制、生物利用度等仍不明确。     

高效液相色谱法测定食品中硫酸软骨素

采用高效液相色谱法,通过检测被软骨素酶ABC酶解释放的2种不饱和双糖来测定食品中硫酸软骨素(ChS).软骨素酶ABC水解ChS产生2种不饱和双糖(6-磺化和4磺化双糖),其在氨基相柱中保留时间分别为6.2和7.3min.这些双糖产生的峰被用来确定样品中ChS的总量.此方法成功用于市售蛋黄酱、调味料和鱼肉肠的分析.     

秘鲁巨鱿软骨硫酸软骨素理化性质研究

探索一种新的硫酸软骨素来源。以秘鲁巨鱿软骨为原料,经过酶解、超滤浓缩和乙醇沉淀的方法获得硫酸软骨素。秘鲁巨鱿硫酸软骨素得率为3.2%,比旋度为-25.2°,黏均分子量为157 000,硫酸软骨素E型二糖占总二糖比例的17%。秘鲁巨鱿软骨可以作为一种硫酸软骨素新原料。     

硫酸软骨素药理学活性研究进展

硫酸软骨素是一种糖胺聚糖,主要由N-乙酰氨基半乳糖和葡糖醛酸组成。目前,硫酸软骨素作为一种安全有效的抗骨关节炎药物和功能性食品在世界范围内得到了广泛应用。最新研究发现,硫酸软骨素不仅具有良好的抗炎活性,还具有降血脂、降血糖、抗肿瘤、抗病毒、促进伤口愈合、调节肠道微生态、神经保护等多种药理活性。本文对硫酸软骨素的新颖药理学活性进行综述并对其应用前景进行展望,为其进一步药用开发提供参考。     

海参硫酸软骨素的荧光标记方法

海参硫酸软骨素是海参体壁的重要组成物质之一,已被证实具有多种生理调节功能,在功能食品开发方面 展现出良好的应用前景。与其他碳水化合物类似,海参硫酸软骨素缺乏特异的发色及发光基团。基于此背景,本研 究旨在对海参硫酸软骨素进行荧光标记。以6-氨基荧光素为荧光染料并配合溴化氢活化法成功对该多糖进行了荧光 衍生,每分子标记产物中约含4.4分子荧光染料,其最佳荧光激发波长为495 nm、发射波长为520 nm。分子质量测 定、硫酸根质量分数测定及傅里叶变换红外光谱比较分析的结果表明,标记前后多糖的结构特征未发生明显变化, 标记产物在中性及碱性环境中展现出较强的荧光强度及稳定性,溶液环境中的NaCl对标记产物的影响有限。海参 硫酸软骨素荧光标记方法的建立为后续研究该多糖的吸收代谢过程、功能机理、生物分子间相互作用等科学问题提 供了有利条件。     

不同硫酸软骨素对口腔癌KB细胞的抑制作用

以鲟鱼软骨和鸡软骨为原料,采用碱提-酶解-醇沉的工艺流程提取硫酸软骨素后,利用Sephadex G-50凝胶色谱及Sephacryl S-300 HR凝胶色谱对硫酸软骨素进行纯化,并通过高效凝胶渗透色谱法进行分子质量测定与纯度鉴定。采用MTT法检测硫酸软骨素对口腔癌KB细胞增殖活性的影响,并采用流式细胞术检测口腔癌KB细胞凋亡情况。研究结果表明鲟鱼及鸡软骨硫酸软骨素粗制品得率分别为23.80%和25.23%。经高效液相凝胶渗透色谱分析可得纯化的鲟鱼及鸡软骨硫酸软骨素均为高纯度多糖,且鲟鱼软骨硫酸软骨素的平均分子量比鸡软骨硫酸软骨素的大。以体外抗肿瘤的方法研究硫酸软骨素粗提物和纯化样品对口腔癌KB细胞的抑制作用,结果所得鲟鱼软骨硫酸软骨素粗制品和纯化样品的IC50值分别为80.18μg/m L和58.78μg/m L;鸡软骨硫酸软骨素粗制品和纯化样品的IC50值分别为68.55μg/m L和53.71μg/m L。流式细胞术表明硫酸软骨素能够诱导KB细胞发生凋亡,细胞凋亡率与药物的浓度呈剂量依赖关系,且鸡软骨硫酸软骨素诱导KB细胞凋亡率高于鲟鱼软骨硫酸软骨素。