单纯性肾病综合征患儿外周血单个核细胞病毒分子表达的研究

目的　探讨外周血单个核细胞 (PBMC)呼吸道病毒感染与糖皮质激素敏感型单纯性肾病综合征 (SSNS)的发生和反复的关系。方法　采用免疫组化、原位杂交、酶联免疫吸附和病毒分离技术 ,对青岛大学医学院附属医院儿科和滨州医学院附属医院 2 0 0 0年 1月至 2 0 0 2年 12月收治的 36例初发组、15例反复组和 2 1例缓解组SSNS患儿检测了PBMC病毒分子表达和血清中病毒特异性IgM抗体水平。结果　初发组与反复组比较 ,PBMC中呼吸道合胞病毒抗原和肠道病毒基因表达的阳性率差异均无显著性 ;而初发组与缓解组和对照组比较及反复组与缓解组和对照组比较 ,PBMC中两种病毒感染的阳性率差异均有显著性 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。初发组与其他各组比较 ,不同病毒的特异性IgM抗体阳性率明显增高 ( P <0 0 5 ) ;而反复组与缓解组和对照组比较 ,多种病毒的特异性IgM抗体的阳性率差异均无显著性。 结论　初发和反复SSNS患儿的PBMC均易被病毒感染 ,糖皮质激素的应用并不影响细胞内病毒抗原和基因的表达 ,但可使病毒特异性IgM抗体的产生明显减少 ;PBMC内病毒抗原或基因表达阳性可做为SSNS有反复倾向的重要分子标志之一。     

小儿肾病综合征激素治疗前后与外周血单个核细胞凋亡关系

为观察小儿肾病综合征(NS)泼尼松治疗前后外周血单个核细胞(PBMC)的凋亡变化,探讨泼尼松诱导细胞凋亡关系及其临床意义,对50例肾病综合征患儿分别在泼尼松治疗前和治疗后第2、4、6、8周采血,进行细胞凋亡形态观察,计算百分率。结果:治疗前凋亡率为(9.94±6.27)％;第2周为(17.30±5.83)％,第4周为(15.60±4.58)％,第6周为(13.60±6.06)％,第8周为(10.18±4.01)％。治疗前与治疗后2、4、6周比较,均P<0.01,差异有显著性;与第8周(减药2周后)比较,P>0.05,差异无显著性。提示NS患儿使用足量泼尼松治疗可诱导外周血PBMC细胞凋亡增加,也诱导大部分患儿病情缓解,当泼尼松减量后诱导细胞凋亡随之减少。观察外周血单个核细胞的细胞凋亡变化对观察NS的激素治疗有一定的临床意义。     

激素敏感型肾病综合征儿外周血单个核细胞凋亡的临床研究

目的 观察肾病综合征(NS)在强的松治疗前后激素敏感者外周血单个核细胞(PBMC)的细胞凋亡变化,以探讨PBMC凋亡在激素治疗中的意义及与尿蛋白的关系。方法37例激素敏感型NS儿分别于强的松治疗前和治疗后第2、4、6、8周采血,进行细胞凋亡形态学观察,计算百分率。结果 治疗前后2、4、6周比较差异均有显著性(P均<0.01);治疗后外周血PBMC与尿蛋白变化呈正相关关系。结论 激素敏感型NS儿使用足量强的松治疗可诱导外周血PBMC细胞凋亡增加,也诱导其病情缓解,当尿蛋白转阴后诱导细胞凋亡随之减少。     

激素敏感型肾病综合征患儿血清、外周血单个核细胞白细胞介素-18表达的意义

目的探讨小儿激素敏感型肾病综合征(SSNS)与白细胞介素-18(IL-18)的关系及地塞米松(DEX)对外周血单个核细胞(PBMC)体外培养表达IL-18的抑制作用。方法单纯型SSNS23例。采用ELISA测定患儿治疗前后血清、尿液IL-18水平和PBMC体外培养上清液中IL-18表达。对照组为相应年龄健康儿童15例;另18例年龄相似的呼吸道感染病例作为感染对照组。结果治疗前后血清、尿液IL-18水平有显著性差异(t=15.072,16.149Pa<0.001)。治疗前PBMC在植物血凝素(PHA)刺激下体外培养上清液中IL-18表达明显高于治疗后和正常对照组(t=6.526,5.585Pa<0.001)。培养液中加入DEX后PBMC表达IL-18水平明显低于未加DEX组(t=4.217P<0.001)。血、尿IL-18与24h尿蛋白定量呈显著正相关(r=0.768,0.638P<0.05)。血清IL-18与PBMC体外培养上清液中IL-18水平呈正相关(r=0.574P<0.05)。结论SSNS的发病与IL-18密切相关;PBMC高表达IL-18可能是其血清IL-18增高原因之一。     

哮喘患儿外周血单个核细胞趋化因子的分泌及意义

为探讨外周血单个核细胞 (PBMC)分泌的正常T细胞活化后所表达和分泌的调节蛋白 (RANTES)与哮喘临床表型的关系 ,选择不同发病状况的哮喘患儿45例 ,取外周血分离单个核细胞 ,进行细胞培养 ,用酶联免疫吸附 (ELISA)方法测定细胞培养上清的RANTES含量。结果缓解期与发作期哮喘患儿外周血单个核细胞均能分泌一定水平的RANTES ,经植物血凝素 (PHA)刺激后RANTES分泌水平显著增加 (P<0.05) ;特应性哮喘患儿PBMC经PHA刺激后分泌RANTES水平显著高于非特应性哮喘患儿(P<0.05) ,以血清总IgE增高患儿更为明显 ;哮喘患儿PBMC经刺激后分泌RANTES与血清总IgE水平及吸入性过敏原皮肤点刺检查阳性数呈显著相关(P<0.05)。表明除趋化作用外 ,RANTES可能促进IgE合成 ,从而在特应性哮喘发病中发挥重要作用     

肾病综合征患儿转化生长因子β基因表达与激素反应的关系

目的探讨肾病综合征(NS)患儿血清中转化生长因子β(TGF-β)的浓度和外周血单个核细胞 (PBMC)TGF-β mRNA的表达与激素反应类型的关系。方法将21例NS患儿分为激素敏感型(13例)和激素耐药型(8例),应用ELISA方法检测NS患儿血清和PBMC上清液TGF-β的浓度,采用原位逆转录多聚酶链反应(In Situ-RT PCR)方法检测PBMC中TGF-β mRNA的表达。结果①临床各项指标与激素疗效无关;激素疗效与治疗前血肌酐(SCr)的水平有关。②NS激素耐药型病理以MsPGN为主(57．1％)。③血清TGF-β浓度组间比较差异无显著性(P>0．05)。④PBMC上清液TGF-β浓度在激素敏感型与激素耐药型组间比较差异有显著性(P<0．01); 激素敏感型与对照组比较差异无显著性(P>0．05)。⑤PBMC中TGF-β mRNA表达在激素耐药型组明显增强,激素敏感型组仅有微弱表达,对照组无表达。结论儿童NS中FGF-β产生和mRNA表达与激素反应类型有关,NS 早期检测TGF-β浓度可作为对激素反应的一个预测指标。     

原发性肾病综合征患儿外周血单个核细胞核因子-κB活性变化及黄芪的干预作用

目的探讨核因子-κB（NF-κB）在儿童原发性肾病综合征（PNS）发病机制中的意义及黄芪对PNS患儿外周血单个核细胞（PBMC）NF-κB活性的影响。方法选取25例PNS患儿（PNS组）和20例健康儿童（健康对照组）作为研究对象。抽取所有研究对象5mL静脉血并提取PBMC，分别加入NF-κB刺激剂IL-1β、NF-κB抑制剂对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基酮（TPCK）及黄芪注射液。经培养后离心，留细胞沉渣提取核蛋白，采用ELISA检测其NF-κB活性。结果PNS组PBMC的NF-κB活性较健康对照组明显增高（P〈0．05）。在常规培养状态下黄芪明显降低PNS组NF-κB活性（P〈0．05），但不影响健康对照组NF-κB活性（P〉0．05）。经IL-1β刺激后，PNS组和健康对照组NF-κB活性均增高，黄芪可降低IL-1作用后的NF-κB活性（P〈0．05）；经TPCK抑制后，PNS组和健康对照组NF-κB活性均降低，黄芪提高TPCK作用后的NF-κB活性（P〈0．05）；黄芪对PNS组PBMC NF-κB活性的影响较健康对照组明显（P〈0．05）。结论PNS患儿PBMC的NF-κB活性上调，黄芪降低PNS患儿PBMC的NF-κB活性，NF-κB可能是黄芪治疗PNS的作用环节之一，黄芪对PBMC的NF-κB信号途径具有双向调节作用。     

原发性肾病综合征患儿外周血单个核细胞多药耐药基因1及P-糖蛋白170的表达

目的检测原发性肾病综合征(PNS)患儿不同时间点外周血单个核细胞(PBMC)多药耐药基因1(MDR1)及其产物P-糖蛋白170(P-gp170)的表达,探讨MDR1及P-gp170在PNS患儿糖皮质激素(GC)耐药中的作用及介导耐药的可能机制。方法选择在苏州大学附属儿童医院住院的30例PNS患儿为研究对象,根据随访结果分为2组:激素耐药型肾病综合征(SRNS)组和激素敏感型肾病综合征(SSNS)组,每组各15例。选取10名健康体检儿童作为健康对照组。分3个时间点采集其外周血标本:发病初未用GC时,足量GC治疗4周后,病情缓解停用GC 2个月后或病情不缓解但泼尼松减量至<0.5 mg.kg-1.d-1时。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PNS患儿不同时间点PBMC MDR1 mRNA的表达。流式细胞仪(FCM)检测PNS患儿不同时间点PBMC P-gp170的表达水平。结果健康对照组儿童和PNS患儿PBMC均有MDR1 mRNA及P-gp170表达。PBMC MDR1 mRNA与P-gp170的表达呈高度正相关(r=0.853,P<0.05)。SRNS组患儿3个时间点的PBMC MDR1 mRNA及...     

肾病综合征患儿外周血单个核细胞内地塞米松浓度与细胞膜表面P-糖蛋白170表达的相关性研究

目的分析对糖皮质激素（GC）敏感（SS）和耐药（SR）的原发性肾病综合征（NS）患儿的外周血单个核细胞（PBMC）内地塞米松浓度和P-糖蛋白170（P-gp170）表达与GC耐药的关系,探讨P-gp170在GC耐药NS患儿中的作用及介导耐药的可能机制。方法收集2006年1至10月在中南大学湘雅二医院儿科诊断为原发性NS的初治患儿为研究对象,依据对GC的反应分为SSNS亚组和SRNS亚组,并设同期行查体的健康儿童为对照组。应用地塞米松刺激SSNS和SRSS亚组患儿的PBMC并进行培养,以高效液相色谱法测定培养前（0 h ）及培养后12、24和36 h时PBMC内地塞米松浓度;蛋白质免疫印迹检测培养各时间点PBMC膜表面P-gp170的表达量;分别对不同培养时间点PBMC内地塞米松浓度与P-gp170的表达量行相关性分析。结果研究期间SSNS亚组纳入16例,SRNS亚组纳入8例,对照组纳10例。①PBMC内地塞米松浓度随培养时间延长SSNS亚组呈增高趋势（P<0.05）, SRNS亚组变化不显著（P>0.05）;各培养时间点PBMC内地塞米松浓度SSNS亚组和SRNS亚组均高于对照组（P<0.05）。②SSNS亚组P-gp170表达随培养时间的延长而逐渐降低,各培养时间点差异有统计学意义（P<0.05）,且均高于对照组（P<0.05）。SRNS亚组各培养时间点P-gp170表达差异无统计学意义（P>0.05）,但高于SSRN亚组（P<0.05）。③对照组不同培养时间点PBMC内地塞米松浓度与P-gp170表达呈显著负相关（12 h：r＝-0.852,24 h：r＝-0.794,36 h：r＝-0.847;P均<0.05）;SSNS亚组也呈显著负相关（12 h：r＝-0.728,24 h:r＝- 0.785,36 h:r＝-0.842;P均<0.05）; SRNS亚组无显著相关性。结论①PBMC膜表面P-gp170表达增高与NS患儿GC耐药有,P-gp170表达增高介导了部分NS患儿的GC耐药;②应用GC可诱导NS患儿PBMC膜表面P-gp170的表达增高,部分GC耐药患儿与GC应用所致P-gp170增高有关;③NS患儿PBMC膜表面P-gp170的表达增高为GC耐药标志之一。     

肾病综合征患儿激素治疗前后转化生长因子β1和血管内皮细胞生长因子的变化

目的研究血清转化生长因子-β1(TGF-β1)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)在不同类型原发性肾病综合征(PNS) 患儿激素治疗前后的变化。方法用双抗体ELISA法检测单纯性肾病、肾炎性肾病各16例糖皮质激素治疗前后血清TGF-β1、VEGF水平变化。同期14例健康儿童作为对照组。结果PNS单纯型患儿用激素治疗,TGF-β1、VEGF由病初高水平较快下降,而肾炎型患儿激素治疗前后两者变化不明显。肾炎型治疗前后均明显高于单纯型。结论TGF-β1、VEFF参与肾病综合征病理生理过程,监测两者变化有助于临床分型,早期对预后做出评估。     

外周血单个核细胞冻存后诱导为CIK细胞及其抗肿瘤效应的研究

目的研究低温冻存对处周血单个核细胞(PBMNCs)诱导为CIK(cytokine-inducedkiller)细胞及抗肿瘤效应的影响。方法采用非程控降温方法冻存外周血单个核细胞,复苏后诱导为CIK细胞,与新鲜的未经冻存的外周血单个核细胞诱导的CIK细胞进行扩增能力、细胞纯度、细胞毒活性等比较。结果冻存后的外周血单个核细胞诱导生成的CIK细胞在扩增能力、细胞纯度、细胞毒活性等方面与新鲜细胞直接诱导生成的CIK细胞无显著性差异。结论冻存后的外周血单个核细胞可以诱导生成具有抗肿瘤活性的CIK细胞,研究结果对CIK细胞的应用具有重要意义。     

川崎病患儿外周血单个核细胞基质细胞衍生因子-1和其受体的变化及意义

目的：观察川崎病(KD)患者血浆基质细胞衍生因子1(SDF1)水平及外周血单个核细胞(PBMC)中SDF1的受体CXCR4mRNA表达变化,并分析其与KD及冠状动脉损害的相关关系。方法：采用ELISA方法及荧光定量PCR技术分别测定12例合并冠脉损害和44例无冠脉损害KD患者的急性期与缓解期血浆SDF1浓度及PBMC中CXCR4mRNA表达变化,并与60例正常人比较。结果：KD患者急性期血浆SDF1蛋白水平为1833±395ng/L;PBMC中CXCR4mRNA表达水平为6.57±2.81较对照组升高(P<0.05,P<0.01);缓解期血浆SDF1蛋白和CXCR4mRNA表达水平较急性期下降(P<0.01),但仍显著高于对照组。KD患者合并冠脉损害者PBMC中CXCR4mRNA表达为8.19±2.39,显著高于无冠脉损害者的6.13±2.77(P<0.01)。结论：KD患者血浆SDF1水平及PBMC中CXCR4mRNA表达是增高的,有可能作为判断KD病情活动状态及冠脉损害的免疫学指标。     

细胞因子对脐血单个核细胞端粒酶活性的影响

目的研究集落刺激因子对脐血单个核细胞(CBMC)端粒酶活性的影响。方法体外培养3例足月正常新生儿的CBMC,并加入集落刺激因子IL?3、SCF、GM?CSF及其组合,培养5d后用TRAP?ELISA法测定每份标本的端粒酶活性。结果CBMC培养前有较弱的端粒酶活性,加入集落刺激因子体外培养后端粒酶活性均有不同程度的上调,以加入IL?3、SCF、GM?CSF组最为显著;CBMC与PBMC培养前端粒酶活性差异无显著性,培养后比较差异有显著性(P<0.01)。结论IL?3、SCF、GM?CSF的组合对CBMC端粒酶活性有明显影响;集落刺激因子对CBMC和PBMC均有扩增作用,但CBMC具有更高扩增潜能。     

原发性肾病综合征患儿外周血单个核细胞IL-13的表达及意义

白细胞介素 13(ＩＬ 13)是新近发现的一种主要由Ｔｈ2 细胞产生的抗炎性细胞因子 ,能有效地抑制单核巨噬细胞、中性粒细胞及Ｔｈ1细胞合成炎性细胞因子 ,在脓毒性休克和类风湿性关节炎中发挥着重要的抗炎作用[1] 。我们应用逆转录 -多聚酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)及ＥＬＩＳＡ法检测了 5 0例原发性肾病综合征 (ＰＮＳ)患儿外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)在ＰＨＡ刺激下ＩＬ 13ｍＲＮＡ及培养上清中蛋白水平的变化 ,以探讨其在ＰＮＳ发病机制中的作用。对象ＰＮＳ患儿 5 0例 ,男 30例 ,女 2 0例 ,平均年龄 7.8岁(3～ 13岁 )。其中单纯性肾病 (ＳＮ…     

肾病患儿外周血单个核细胞产物对大鼠肾小球上皮细胞的影响

为了从细胞水平探索循环的免疫物质在蛋白尿发生中的作用，应用（３５）￣Ｓ和３￣Ｈ－亮氨酸双同位素标记技术，观察１５例激素敏感型肾病综合征（简称肾病）患儿的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）培养上清液对大鼠肾小球上皮细胞（ＧＥＣ）合成含硫化合物的影响，结果表明：肾病极期未经激素治疗组（９例）培养上清明显促进ＧＥＣ掺入（３５）￣Ｓ（Ｐ＜０．０１），激素治疗组（６例）与正常对照组比较无显著差异。提示激素敏感型肾病患儿ＰＢＭＣ的产物可影响ＧＥＣ的生物活性。     

急性肾小球肾炎患儿外周血单个核细胞白细胞介素10的表达及意义

目的 探讨白细胞介素10（IL－10）在急性肾小球肾炎（AGN）发病机制中的作用及其临床意义。方法 应用逆转录－多聚酶链反应（RT－PCR）及双抗体夹心ELISA法检测了33例AGN患儿外周血单个核细胞（PBMC）IL－10mRNA和蛋白水平。结果 1．AGN急性期IL－10 mNRA和蛋白水平较恢复期和正常对照组显著升高,恢复期降至正常水平。2．IL－10mRNA和蛋白水平与血清补体C3呈显著负相关。结论 AGN患儿存在Th1/Th2细胞免疫功能的失衡。PVMC IL－10可作为观察病情活动状态的免疫学指标之一。     

肾病患儿免疫细胞对大鼠肾小球上皮细胞粘附的影响

为探讨肾病患儿外周血单个核细胞培养上清液对大鼠肾小球上皮细胞粘附的影响，应用同位素标记方法检测肾小球上皮细胞粘附率。结果显示：未治疗组初发肾病患儿外周血单个核细胞培养上清液明显的抑制大鼠肾小球上皮细胞与胶原的粘附，细胞粘附率显著低于激素治疗组、缓解组肾病患儿及正常对照组（P均＜0.01）；初发肾病患儿激素治疗后的肾小球上皮细胞粘附经与激素治疗胶相比显著升高（P＜0.001）。提示肾病患儿外周血单个核细胞培养上清液能抑制大鼠肾小球上皮细胞对胶原基质的粘附作用。     

肺炎支原体感染患儿外周血单个核细胞CD40L的表达及其临床意义

目的 了解CD40L在肺炎支原体(MP)肺炎及支气管哮喘患儿致病中的作用。方法 采用流式细胞仪对26例MP肺炎患儿、24例支气管哮喘合并MP感染患儿、23例支气管哮喘非MP感染患儿和25例正常对照组儿童外周血单个核细胞CD40L的表达进行了研究。结果 所有MP肺炎组和支气管哮喘组患儿CD40L表达在PMA和离子霉素(ionomycin)刺激前后均显著高于正常对照组。结论 外周血单个核细胞表面CD40L的表达与支气管哮喘的发病有重要关系，MP感染后外周血单个核细胞高表达CD40L可能促进支气管哮喘的发病。     

肾病综合征患儿外周血单个核细胞糖皮质激素受体β表达

目的　探讨原发性肾病综合征 (NS)患儿外周血单个核细胞 (PBMC)内糖皮质激素受体 β(GRβ)mR NA表达与激素 (GC)治疗效应的关系。方法　RT PCR法检测NS患儿PBMC糖皮质激素受体α(GRα)和GRβmRNA表达水平。结果　GC不敏感NS组PBMC内GRβmRNA表达显著高于GC敏感组 (P <0 .0 1) ;GC敏感性与GRβmRNA表达之间呈明显负相关 (r=2 2 .75　P <0 .0 1)。结论　NS患儿外周血PBMC内GRβmRNA不适当表达增加 ,可能是GC治疗不敏感的原因之一     

紫癜性肾炎患儿外周血单个核细胞白细胞介素-13的变化

目的　探讨白细胞介素１３（ＩＬ－ １３） 在紫癜性肾炎（ＨＳＰＮ） 的变化。方法　应用逆转录－ 多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ） 及双抗体夹心ＥＬＩＳＡ 法,分别检测了３０ 例健康儿童和２０ 例ＨＳＰＮ 患儿活动期和恢复期外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ） 在植物血凝素（ＰＨＡ） 刺激下ＩＬ－ １３ ｍＲＮＡ和蛋白水平的变化。结果　①ＨＳＰＮ 活动期ＰＢＭＣ中ＩＬ－１３ ｍＲＮＡ 和蛋白水平均显著高于正常对照组（０ ．４８ ±０ ．１１ ｖｓ０．３６±０．１６ 和４７ ．８９ ±１１ ．６７ ｐｇ／ｍｌｖｓ３５．２２±４．４２ ｐｇ／ｍｌ, Ｐ均＜ ０．０１） ,恢复期与正常对照组相比无显著差异（０．３８±０．１２ ｖｓ０．３６±０ ．１６ 和３５ ．９４ ±５．６０ ｐｇ／ｍｌｖｓ ３５ ．２２±４ ．４２ ｐｇ／ｍｌ,Ｐ均＞ ０．０５）;②临床上表现为蛋白尿型、肾病综合征型及急性肾炎综合征型者,活动期ＰＢＭＣ中ＩＬ－ １３ ｍＲＮＡ和蛋白水平均显著高于正常对照组,而表现为单纯血尿型者与正常对照组相比无显著差异。结论　ＨＳＰＮ 患儿活动期ＩＬ－ １３ 表达异常,且与临床类型有一定的相关关系。