NADH-细胞色素b5还原酶缺陷与隐性先天性高铁血红蛋白血症

NADH－细胞色素b5还原酶（简称b5R），是一种在体内广泛分布，具有重要生理功能的氧化还原酶类。bSR基因突变可导致bSR酶活性的降低，而bSR缺陷将导致隐性先天性高铁血红蛋白血症（RCM）。本文就bSR研究的某些进展及与RCM的关系作一介绍。     

遗传性高铁血红蛋白血症患者NADH—细胞色素b5还原酶基因估…

为了探讨中国遗传性高铁血红蛋白血症患者的基因突变类型和建立相应的基因诊断方法，从已发现的１例１型患者的外周血白细胞中提取ＲＮＡ，应用反转录ＰＣＲ法分析了Ｃｙｔｂ５ＲｃＤＮＡ的全部编码序列的９２１ｂｐ片段。结果显示：Ｃｙｔｂ５Ｒ ｃＤＮＡ基因第５７位密码子存在有Ａｒｇ→Ｇｌｎ（ｃｇｇ→ＣＡＧ）的错义突变。针对这一突变，用套式ＰＣＲ的方法对已有的３个家系共６名患者进行了基因诊断。结果表明其中两个家系的     

先天性高铁血红蛋白血症——细胞色素b5还原酶缺乏症的分子发病机理

先天性高铁血红蛋白血症──细胞色素ｂ_５还原酶缺乏症的分子发病机理凌光鑫，程爽１红细胞内的还原系统红细胞的酶和非酶系统能使氧化生成的高铁血红蛋白（ＭＨｂ）还原。主要通过ＮＡＤＨ－ＭＨｂ还原酶，又称黄递酶，现证实为细胞色素ｂ５还原酶（ＮＡＤＨ－ｃｙｔｏ?..     

RNA干扰法建立人NADH-细胞色素b5还原酶缺陷的细胞表型

目的 探索经载体介导的RNA干扰法建立人NADH-细胞色素b5还原酶(EC1.6.2.2,NADH-cytochrome b5 reductase,b5R)缺陷细胞系的可行性.方法 设计并构建b5R的两种小干扰RNA(small inter-ference RNA,siRNA)表达载体,脂质体转染法瞬时转染BEL-7402细胞,半定量逆转录-PCR分析重组载体的干扰效应;G418筛选两种表达载体稳定转染的BEL-7402细胞,并通过稳定转染的细胞克隆在b5R mRNA水平,酶活性,酶含量等方面干扰效果的鉴定,获得b5R缺陷的细胞克隆;噻唑蓝法测定b5R缺陷细胞的生长曲线.结果 获得两个靶向b5R基因的siRNA重组表达载体pSib5R-1和pSib5R-2,其中pSib5R-2瞬时转染对BEL-7402细胞b5R mRNA的抑制率达68.3%.获得18个稳定转染的细胞克隆,pSib5R-2转染的克隆中有两个克隆MR mRNA抑制率达48.2%和56.2%,酶活性抑制率为54.6%和63.5%,酶含量也有明显降低.b5R酶缺陷没有改变细胞的生长速度.结论 b5R基因的表达可被载体介导的RNA干扰有效抑制,成功建立了b5R缺陷的细胞表型,为进一步研究b5R基因的功能以及探讨Ⅱ型隐性先天性高缺血红蛋白症的发生机制提供了实验依据和材料.     

siRNA表达载体介导靶向NADH-细胞色素b5还原酶基因的RNA干扰实验研究

目的探索经载体介导的RNA干扰抑制人NADH-细胞色素b5还原酶（bSR）基因表达的可行性。方法应用网络在线软件设计并合成两条针对b5R mRNA的RNA干扰的DNA模板片段，分别将其克隆至经过改建、带有neo基因的pSilencer1．0-U6载体上，构建成siRNA真核表达载体；脂质体转染法将上述重组质粒转入人肺成纤维细胞和BEL-7402肝癌细胞株。通过半定量RT-PCR和荧光定量RT—PCR分析，检测所构建的重组siRNA真核表达载体对b5R基因表达的干扰效应。结果获得两个能在细胞内生成靶向b5R基因siRNA的重组载体pSib5R-1和pSib5R-2；其中pSib5R-2对成纤维细胞b5R mRNA的抑制率达81.7％，对BEL-7402细胞b5R mRNA的抑制率达60％。结论两种细胞b5R基因的表达均可被载体介导的RNA干扰有效抑制；成功构建了针对b5R基因的siRNA表达载体，为建立稳定表达siRNA的、b5R酶缺陷的细胞模型提供了实验基础。     

间接免疫荧光法检测人红细胞NADH-细胞色素b5还原酶

ＮＡＤＨ 细胞色素ｂ５还原酶（ｂ５Ｒ）缺陷可导致遗传性高铁血红蛋白血症（ＨＭ）。研究表明 ,ｂ５Ｒ基因多种突变类型（包括点突变、碱基缺失、无义突变和ＲＮＡ剪接突变等）均可导致该基因编码有缺陷的酶蛋白（即催化活性和稳定性）下降。检测ｂ５Ｒ活性最理想的方法是用细胞色素ｂ５作为底物进行测定 ,但目前尚无商品化的细胞色素ｂ５产品。从动物肝脏组织自行提取、纯化十分困难 ,且难于标准化 ,故目前主要采用分光光度法测定ｂ５Ｒ的活性 ,而该法又有操作繁琐 ,反应条件要求高等不足。我们以往研究表明 ,ＨＭ患者体内ｂ５Ｒ活性的降…     

抗人红细胞NADH－细胞色素b5还原酶单克隆抗体的建立

以重组人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠；通过常规方法将小鼠脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选及有限稀释法克隆化，选出６株阳性克隆。其中两株分泌ＩｇＧ，其余均分泌ＩｇＭ。免疫印迹分析表明，两株ＩｇＧ单克隆抗体对人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶有较高的特异性和亲和力。这一研究为开展对人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶的研究和遗传性高铁血红蛋白血症的免疫诊断奠定了基础。     

NADH─细胞色素b_5还原酶在甲状腺过氧化氢生物合成中的作用

应用高香草酸荧光分析技术及NADH─高铁氰化钾还原酶法对正常和Graves病甲状腺过氧化氢(H2O2)和NADH─细胞色素b5还原酶(b5R)进行测定, 发现Graves病甲状腺b5R活性和H2O2水平均明显高于正常, 而H2O2酶活性在Graves病和正常甲状腺间无显著差异。加b5R 抑制剂对氯汞苯甲酸后,Graves病和正常甲状腺b5R活性降低近85%,同时H2O2降低50％。b5R活性和H2O2水平两者呈显著正相关关系。以上结果表明b5R参与甲状腺内H2O2的生物合成,是甲状腺内H2O2生成的重要酶系。     

免疫斑点法检测NADH—细胞色素b5还原酶活性

在硝酸纤维素膜上点有抗细胞色素ｂ５还原酶（ｂ５Ｒ）单克隆抗体，以捕捉红细胞裂解液中的ｂ５还原酶，然后用还原型辅酶Ⅰ－二氯酚靛酚－噻唑蓝底物缓冲液进行活性染色。遗传性高铁血红蛋白血症５个不同家系患者（５例）ｂ５还原酶活性检测结果均为阴性，正常对照为强阳性。本法是一种简便、直观地检测遗传性疾病高铁血红蛋白血症ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶活性的定性或半定量方法     

NADH—细胞色素b5还原酶在甲状腺过氧化氢生物合成中的作用

应用高香草酸荧光分析技术及NADH-高铁氰化钾还原酶法对正常和Graves病甲状腺过氧化氢（H2O2）和NADH--细胞色素b5还原酶（b5R)进行测定，发现Graves病甲状腺b5R活性H2O2水平均明显高于正常，而H2O2酶活性在Graves病和正常甲状腺间无显著差异。加b5R抑制剂对氯汞苯甲酸后，Graves病和正常甲状腺b5R活性降低近85%，同时H2O2降低50%。b5R活性和H2O2水平两者呈显著正相关关系。以上结果表明b5R参与甲状腺内H2O2的生物合成，是甲状腺内H2O2生成的重要酶系。     

老年肿瘤患者手术前后血小板膜糖蛋白的流式细胞检测

应用流式细胞学技术对９８例老年恶性肿瘤患者手术前后外周血血小板Ｐ－选择素（ＣＤ６２ｐ），凝血酶敏感蛋白（Ｔｓ）及血小板整合素αⅡｂ链（ＧＰⅡｂ或ＣＤ４１）的变化进行了对比研究。结果显示：术后外周血ＣＤ６２ｐ、ＣＤ４１及Ｔｓ较术前明显增高，有统计学意义，其中ＣＤ６２ｐ、ＣＤ４１增加更为明显（Ｐ＜０．０１）。男性患者术后血小板活化较女性患者更为显著。实验表明：手术对老年恶性肿瘤患者血小板有明显的活化作用，以老年男性尤为显著。应重视手术后的防凝措施，以防血栓病的发生     

SM6的多态性及其在成人多囊肾病基因诊断中的初步应用

为了评估与成人多囊肾病ＰＫＤ１基因肾密连锁的微卫星ＤＮＡＳＭ６在基因诊断中的有效性，采用ＰＣＲ，聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法分析了９５名无血缘关系的中国汉族人，结果表明：在汉族人群中ＳＭ６具有２４种等位片段，其杂合度为０．６６３，多态信息量为０．８０．人群与文献报道的白种人群相比，ＳＭ６在种类和分布上均有差异。     

IgH AND TcR-γ GENE REARRANGEMENTS IDENTIFIED IN HODGKIN'S DISEASE BY PCR DEMONSTRATE LACK OF CORRELATION BETWEEN GENOTYPE,PHENOTYPE, AND EPSTEIN–BARR VIRUS STATUS

Analysis of IgH and TcR-γ genes using consensus primers identifying junctional regions of rearranged genes by polymerase chain reaction (PCR) was performed on tissues involved by Hodgkin's disease (HD) in 90 cases and was correlated with the immunophenotype of Hodgkin and Reed–Sternberg (HRS) cells and the presence of Epstein–Barr virus (EBV) within these cells. Clonal IgH gene rearrangements were found in 1/5 cases of lymphocyte predominance (LP) subtype and none was positive for EBV. In 85 cases of classic HD, no IgH or TcR-γ gene rearrangements were found in 51 (60 per cent) cases. A similar percentage, but not the same cases, were of null (non-B, non-T) phenotype. Of 30 cases where a B phenotype was assigned to HRS cells, nine had IgH gene rearrangements, three had TcR-γ gene rearrangements, and two had both genes rearranged. None of the five cases assigned to T phenotype of HRS cells showed rearrangement of TcR-γ genes, but two cases showed rearranged IgH genes. Among 41 cases of null phenotype, ten had IgH gene rearrangements, five had TcR-γ gene rearrangements, and three cases had both genes rearranged. Whereas EBV was detectable in HRS cells in 17/43 classic HD cases of assigned B phenotype, EBV was also detectable in 2/5 cases of assigned T phenotype and in 21 cases with the null phenotype. Furthermore, there was no correlation of EBV with the presence or lack of IgH or TCR-γ gene rearrangements. Of the remainder, half (30 per cent) expressed antigens associated with lymphocytes without an appropriate genotype. The results confirm lymphocyte-lineage committed cells at the origin of HRS cells in 40 per cent of cases. Any hypothesis of a non-lymphocytic origin of HRS cells will require the inducibility of CD30 on candidate precursors and the methodology for probing genetic events in such cells to be addressed. © 1997 by John Wiley & Sons, Ltd.