分化抗原gp42在人免疫细胞的表达

目的　明确gp4 2蛋白为分化抗原 ,检测它在人免疫细胞的表达。方法　用gp4 2蛋白免疫小鼠 ,制备抗gp4 2蛋白的单抗。用反义技术制备gp4 2蛋白表达抑制的 3D5细胞。用免疫荧光染色和Western印迹确定gp4 2单抗的特异性。用胞膜蛋白免疫沉淀和流式细胞术确定gp4 2蛋白为分化抗原。用双色免疫荧光染色流式细胞术检测gp4 2分化抗原在多种人免疫细胞的表达。结果　制备了抗gp4 2蛋白的特异性单抗。用gp4 2单抗作探针 ,从 3D5细胞膜免疫沉淀到相对分子质量 (Mr)为4 2 0 0 0的一条蛋白带 ,并在活 3D5细胞见阳性免疫荧光染色。gp4 2分化抗原在人外周围血CD19+ 、CD14 + 、CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率分别为 5 9.71%± 11.36 %、89.0 8%± 4 .87%、2 6 .0 3%±9.75 %、2 4 .2 4 %± 15 .2 9%和 2 4 .2 0 %± 15 .72 % ,在人免疫细胞株的表达率分别为 5 8.0 % (Nalm6 )、72 .7% (3D5 )、5 3.6 % (BJAB)、6 1.0 % (Daudi)、6 .9% (SKW6 )、6 .3% (Jurkat)、5 .8% (Peer)、2 1.3% (K5 6 2 )和 39.1% (U937)。结论　gp4 2蛋白为一个分化抗原 ,在人外周围血CD14 + 细胞的表达率最高 ,其次为CD19+ 细胞 ,CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率较低。     

分化抗原gp42表达对B细胞株增殖和血清撤除致死的影响

目的　研究分化抗原gp4 2表达对 3D5B细胞株功能的影响。方法　以生长曲线检测细胞的增殖 ,碘化丙啶 (PI)染色 ,DNA流式细胞仪分析细胞周期 ,Annexin Ⅴ PI染色检测细胞死亡 ,间接免疫荧光染色流式细胞仪分析CD分子的表达 ,用Fluo 3AM作探针激光共聚焦显微镜观察胞内Ca2 + 浓度的变化。结果　分化抗原gp4 2表达抑制的 3D5细胞生长明显加速 (P <0 .0 0 1) ,从S期进入G2 M期的比率明显增加。对血清撤除所致的死亡发生抵抗。分化抗原gp4 2表达抑制的 3D5细胞间的粘附消失 ,CD11c的表达明显减弱。在McAb 5D4的刺激下 ,3D5细胞胞内的Ca2 + 浓度随时间逐步增高。结论　分化抗原gp4 2表达抑制致使 3D5细胞生长加速 ,细胞间粘附消失。分化抗原gp4 2是一个信号传导分子。     

一个新的人B细胞活化抗原—5C5

用活化人B细胞株3D5细胞免疫小鼠和作为筛选的靶细胞,我们建立了产生单克隆抗体5C5的杂交瘤细胞株。此单抗识别的抗原5C5在25μg/ml anti-μ刺激的B细胞,于第10小时开始表达,亦即于G_1期开始表达。5C5细胞百分率随培养时间而增多。在PWM诱导下.外周血单一核细胞中5C5~ 细胞随培养时间而增加,至第3～4天达最高峰,然后减少,至第7天降至本底水平。5C5~ 细胞在不能为BCDF诱导分化至免疫球蛋白分泌细胞(ISC)的B细胞株3D5,Raji和Daudi阳性,但在能为BCDF诱导分化至ISC的CESS和SKW6细胞却不表达。这均表明5C5抗原表达于B细胞活化的早期和中期,但在B细胞终末分化阶段消失。在休止期B细胞、休止期T细胞、PHA激活的T细胞、单核细胞和中性粒细胞,以及在所检测的T细胞株和髓细胞株,5C5抗原均为阴性。~(125)I标记后用单抗5C5免疫沉淀提取的抗原,在还原与非还原条件下电泳,均只有分子量为52000的一条带,表明5C5是一个单链细胞表面蛋白。鉴于5C5抗原的分子量与文献中已报道的B细胞活化抗原分子量不同,以及5C5在细胞株表达的特点,它可能是一个新的人B细胞活化抗原。     

激发型CD28单抗直接激发的T细胞及其表型

1.用羊抗鼠IgG(20μg/ml)包被96孔细胞培养板,再加入游离的激发型CD28单抗(终浓度为5 μg/ml);2.用激发型CD28单抗(10 μg/ml)直接包被96孔细胞培养板,然后分别加入10~5个/孔经E-花结实验获取的人外周血T细胞(PBTC),其中CD3+T>95％。逐日观察细胞的生长状态并绘制生长曲线,用3H-TdR掺入法分析PBTC的增殖效应,用FITC标记的单抗经流式细胞仪(FCM)分析细胞CD3、CD4、CD8、CTLA-4、4-1BB及OX40的表达。逐日细胞计数的结果表明,经羊抗鼠IgG包被后加入游离激发型CD28单抗或直接用激发型CD28单抗包被,均能引发PBTC的活化与增殖效应,激发3 d时的刺激指数(SI)大于9,细胞CD3、CD4、CD8、CTLA-4、4-1BB及OX40的阳性表达率(x±s,％)分别为98.6±0.2、74.4±3.1、22.5±2.0、2.1±0.4、18.4±2.2、35.2±3.5。与XGB7(作为APC)刺激的T细胞相比,经CD28单抗直接激发的T细胞,CD4+/CD8+T细胞的比值及OX40+T细胞的百分率升高(P<0.01),但不表达负性调节分子CTLA-4。     

人B7-2(CD86) IgV+C段高效原核表达及活性测定

目的克隆、表达B7-2(IgV+C)并进行体外功能测定.方法用聚合酶链反应(PCR)技术从B7-2 cDNA中克隆B7-2(IgV+C),在此基础上构建表达B7-2(IgV+C)的原核表达载体pGEX-4T-3/hB7-2(IgV+C);SDS-PAGE检测蛋白表达,蛋白经变性、复性后在体外协同抗CD3单抗刺激人T细胞,3H-TdR掺入法检测T细胞的活化程度.结果在原核表达载体中成功地克隆了B7-2(IgV+C),SDS-PAGE表明在相对分子质量(Mr)55×103处有hB7-2(IgV+C)/GST融合蛋白的高效表达,其表达量占菌体总蛋白的33%.体外实验证明,此融合蛋白可协同抗CD3单抗刺激人T细胞活化.结论重组蛋白B7-2(IgV+C)在第一信号存在下可活化T细胞,即具有共刺激活性.     

骨关节炎与免疫关联性初探

为了探讨免疫因素是否介导骨关节炎的发病 ,应用直接免疫荧光法检测了 6例晚期骨关节炎患者滑膜液中浸润淋巴细胞分化抗原的表达 ,同时用微量酶联免疫技术测定了这些患者滑膜液中IL 10、IL 12和sFasL的含量。结果显示关节滑膜液中的淋巴细胞以CD8+ 细胞为主 (6 7 0 %± 14 6 %) ,远远高于CD4+ 细胞 (15 0 %± 12 8%) ,两者相差显著 (P <0 0 1)。CD4+ /CD8+ 比值 <1。进一步分析表明其T细胞受体主要为αβ型TCR (6 4 0 %± 12 6 %)。滑膜液中IL 12含量 (2 0 3 84±49 2 )pg/ml高于IL 10 (37 8± 14 5 )pg/ml,有明显统计学差异 (P <0 0 1)。外周血中IL 10和IL 12的含量分别为 (4 3 37±14 2 )pg/ml和 (4 5 5 8± 10 6 )pg/ml。血清中sFasL含量较高 (15 3 90± 5 6 )pg/ml,而滑膜液中则很低 (<5pg/ml,P <0 0 1)。提示在骨关节炎的晚期CD8+ 淋巴细胞和IL 12增高可能参与了关节的免疫损伤。     

年龄对人细胞毒性T淋巴细胞和自然杀伤细胞中穿孔素表达的影响

目的　通过研究健康儿童、成人和老年人外周血淋巴细胞 (PBL)中细胞毒效应分子穿孔素 (PFP)的表达水平的变化 ,了解细胞毒性T细胞 (CTL )的杀伤活性随年龄增长而下降的分子机制。方法　利用抗人PFP、抗人CD3和抗人CD5 6单克隆抗体 (mAb) ,采用单标记免疫组化染色法 ,检测外周血单个核细胞 (PBMC)中PFP的表达。采用双标记免疫组化染色法 ,检测上述细胞表面标志CD3或CD5 6的表达和细胞内PFP的表达。结果　儿童组、成人组及老年组PBL中表达PFP阳性细胞的百分率 (% ) ,分别为 (2 6 .4± 2 .7) % ,(2 1.6± 3.2 ) %和 (13.4± 2 .0 ) % ,老年组明显下降 ,与其他两组相比较P <0 .0 0 1。 3个年龄组CD3+ T细胞表达PFP的阳性率 (% ) ,分别为 (30 .1± 4 .8) %、(2 1.4± 7.3) %和 (18.8± 4 .2 ) % ,随年龄的增长而显著下降。3个年龄组CD5 6 +NK细胞PFP的表达差别不显著。结论　健康人PBL中PFP的表达随年龄增长而递减 ,CD3+ T细胞亚群PFP表达水平的下降尤其显著。这可能是老年人CTL杀伤活性下降的重要原因之一     

T淋巴细胞清除促进脐血造血细胞的体外扩增

采用抗CD3或抗CD8单克隆抗体的补体细胞毒方法清除脐血单个核细胞 (MNC )中T淋巴细胞 ,CD34免疫亲和柱纯化MNC中CD34 +细胞 ,流式细胞技术 (FACS )分析细胞表面标志。将CD34 +细胞中加入含多种造血生长因子的培养基进行体外液态扩增 ,并观察粒 巨噬集落 (CFU GM )和多向祖细胞集落 (CFU GEMM )形成能力。结果CD3+或CD8+细胞清除组和MNC经CD34免疫亲和柱纯化后 ,CD34 +细胞分别为 5 9 5 2 %、 5 6 70 %和 5 0 72 % ,比未纯化组 (1 0 7% )纯度大幅度提高。抗CD3单抗清除 +CD34纯化组和单纯CD34纯化组经造血生长因子刺激培养第 14天 ,细胞总数分别扩增 110 40倍和 87 0 0倍。抗CD3单抗清除 +CD34纯化组、抗CD8单抗清除 +CD34纯化组和单纯CD34纯化组的CFU GM产率分别为 2 86 5 0± 12 0 2、2 88 5 0± 17 68和 2 19 5 0± 5 3 0 3,前者虽高于后者 ,但差异无显著性。CFU GEMM产率分别为 376 67± 43 2 4、 438 33± 36 73和 311 0 0± 40 11,抗CD3单抗清除 +CD34纯化组无显著差异 ,抗CD8单抗清除 +CD34纯化组显示出显著性作用 (P <0 0 5 )。     

传染病医院不同年龄职工细胞免疫状态的分析

目的 分析传染病医院健康职工不同年龄段T、B细胞亚群表达的差异,探讨其与年龄及工作环境的关系.方法 采用多色免疫荧光标记和流式细胞术对不同年龄体检职工(分为A、B、C、D四组)外周血T、B细胞水平进行检测,比较各组差异.结果 A、B、C、D各组CD3+T细胞占淋巴细胞的百分比分别为(65.48±5.22)％、(66.24±6.03)％、(66.15±7.11)％及(65.29±5.43)％,各组之间表达水平相近,无统计学差异;CD3+ CD4+T细胞占T淋巴细胞的百分比分别为(33±1.84)％、(31.57±2.11)％、(34.63±2.56)％及(41.53±3.41)％,A、B、C各组两两比较无统计学差异,但D组与其它三组比较均有统计学差异(P＜0.05);各组CD3+ CD28-T细胞占T细胞的百分比分别为(17.84±1.21)％、(21.81±1.43)％、(22.37±1.56)％及(14.22±1.36)％,D组分别与B、C两组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);B细胞的百分比分别为(12.8±2.21)％、(11.79±1.79)％、(11.33±1.86)％及(8.17±2.36)％,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 不同年龄层次的职工机体的免疫功能存在差异.     

C5aR在慢性移植物抗宿主病中的表达及其作用机制

目的:探讨补体5a(C5a)及其受体(C5aR)在慢性移植物抗宿主病(cGVHD)中的表达及其作用机制。方法:用流式细胞术检测20例cGVHD患者及9例健康供者外周血淋巴细胞中C5aR的表达及CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Tregs)在CD4~+T细胞中的比例,并分析两者的相关性;将体外分离培养小鼠脾细胞分为对照组及重组小鼠C5a蛋白(rmC 5a)刺激组,用流式细胞术检测2组Tregs在CD4~+T细胞中的表达比例;另外,提取患者外周血单个核细胞进行体外培养,分为空白对照组及C5aR拮抗剂(C5aRA)组,用流式细胞术检测2组Tregs在CD4~+T细胞中的表达比例。结果:cGVHD患者外周血淋巴细胞表面C5aR的表达明显增多,而Tregs在CD4~+T细胞中的比例明显减少,两者呈显著负性相关(P0.05);体外培养小鼠脾细胞结果显示C5a下调Tregs在CD4~+T细胞中的比例;而体外培养患者外周血单个核细胞显示阻断C5aR可上调Tregs在CD4~+T细胞中的比例。结论:C5a/C5aR可能通过抑制Tregs的分化来介导cGVHD的发生发展。     

用单抗5C5和5C5—G1筛选的613bp cDNA的核苷酸序列分析

用识别人活化Ｂ细胞分化抗原５Ｃ５的单克隆抗体５Ｃ５和５Ｃ５－Ｇ１的混合物从人扁桃体细胞λｇｔ１１ ｃＤＮＡ文库筛选到３个阳性克隆。其ｃＤＮＡ插入到质粒ｐＵＣ１８，经双链双脱氧测序法作核苷酸序列分析，知其中一个ｃＤＮＡ长６１３ｂｐ，另二个长４６７ｂｐ，后者与前者的前４６７ｂｐ完全重叠。６１３ｂｐ ｃＤＮＡ中有一个开放阅读框架，从１０３ｂｐ到４２９ｂｐ，共３２７ｂｐ。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析显示，此６     

新的识别人活化B细胞分化抗原5C5单克隆抗体（5C5－G＿1）的制备和鉴定

新制备的抗人活化Ｂ细胞分化抗原５Ｃ５单克隆抗体５Ｃ５－Ｇ＿１经Ｗｅｓｔｅｒ印迹分析表明，该分化抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（还原条件下）显示五条带，分子量分别为９２ｋＤ、５２ｋＤ±（两条）、４０ｋＤ和２０ｋＤ。用单抗５Ｃ５和单抗５Ｃ５－Ｇ＿１的混合物，从３Ｄ５细胞的λｇｔｌｌｃＤＮＡ文库中筛选到７个阳性ｃＤＮＡ克隆。     

Partial trisomy 5q and partial monosomy 5q within the same family

The observation of partial trisomy for 5q31-5qter and partial monosomy for the same segment in two offspring within the same family is presented. Their normal mother was a balanced carrier of a reciprocal translocation 46,XX,t(5;10) (q31.3;q26). The trisomic female had craniofacial dysplasia, a short neck, clinodactyly of the 5th fingers, a small umbilical hernia, arhinencephalia, cerebellar hypoplasia, atrial septal defect, an accessory spleen, bifid uterus and vagina, hypoplastic ovaries. Potter syndrome with cystic dysplasia of the left kidney and agenesis of the right, urethral atresia, uterus unicornus with utero-urethral fistula, true hermaphroditism with two ovaries and one testicle were found in her stillborn sister. Analysis of the manifestations of monosomy 5q and trisomy 5q in the same family supports a well known fact that the effects of deletions are more pronounced than those of duplications for the same segments.     

5-Hydroxytryptamine (5-HT)-dependent myoclonus in guinea pigs is induced through brainstem 5-HT-1 receptors

The brainstems of 3 cats were transected at the ponto-medullary junction and the cats maintained in stable condition for periods of from 16 to 31 days. After transection, all of these cats had periods in which forebrain sensorimotor cortex, olfactory bulb, hippocampus, eye movement and lateral geniculate recordings exhibited the pattern of activity seen only in REM sleep in the intact cat. We conclude that medullary regions are not required to generate these signs of REM sleep. The pons is necessary for REM sleep and is sufficient to produce REM sleep signs in rostral as well as caudal brain regions. However, the medulla may contribute to regulation of the duration and periodicity of REM sleep.     

Ring chromosome 5

A case of an infant with ring chromosome 5 is presented. The phenotype of this patient and other reported cases is analyzed with respect to the deletion of the long arm of chromosome 5.     

人分化抗原5C5在原核细胞的表达

为了确证5C5cDNA是全长cDNA并制备抗5C5分化抗原不同表位的功能性单抗,进而研究5C5分化抗原的结构与功能,用Northern-blot检测5C5mRNA在人各种组织的表达,并构建了重组表达质粒pGEX-5X-3-5C5全长和pGEX-5X-3-5C5 N端与pGEX-5X-3-5C5 C端。结果表明：所有检测的组织中均只有一个5C5 mRNA转录本,其大小与5C5 cDNA长度一致,表明所分离到的908bp 5C5cDNA是个全长cDNA。重组表达质粒pGEX-5X-3-5C5 N端与pGEX-5X-3-5C5 C端在大肠杆菌DH5α表达出了可溶性融合蛋白GST-5C5 N端与GST-5C5 C端,分子量各为36kD和35kD。     

5-Hydroxytryptophan (5-HTP)-immunoreactive neurons in the rat brain tissue

We demonstrated the presence of 5-hydroxytryptophan (5-HTP), the immediate precursor of serotonin (5-HT), in the rat brain tissue using a glutaraldehyde-coupled immunohistochemical technique. The immunoreactivity of 5-HTP was intensified in the colchicine-pretreated rat. The distribution of labelled cells was the same as for 5-HT-immunoreactive cells, but they were fewer in number.