龙葵碱调控还原型谷胱甘肽和活性氧氧化还原体系损伤线粒体

目的 探讨龙葵碱诱导 HepG2 细胞凋亡与线粒体损伤的关系。 方法 倒置显微镜观察细胞形态,Annexin V/PI 双染激光共聚焦扫描显微术检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率。透射电镜观察细胞线粒体超微结构,CDFH-DA 染色激光共聚焦扫描显微术检测活性氧 (ROS) 相对量,比色法检测还原型谷胱甘肽 (GSH) 量。 结果 龙葵碱组 HepG2 细胞贴壁细胞数量减少,部分出现死亡。Annexin V/PI 双染激光共聚焦扫描显微镜下观察发现龙葵碱组细胞 Annexin V-FITC 高染,细胞膜呈绿色荧光;PI 低染,细胞核呈红色荧光,呈现明显的早期凋亡特征。流式细胞术分析 0.4、2、10 μmol/L 龙葵碱作用 HepG2 细胞 24 h 后,早期凋亡率分别为 4.0%、8.5%、20.1%。透射电镜观察发现龙葵碱作用 HepG2 细胞 24 h,细胞线粒体超微结构出现肿胀,嵴排列紊乱、嵴消失,重度空泡样变性等变化;细胞内 ROS 水平升高,GSH 的水平降低。 结论 龙葵碱通过降低 HepG2 细胞内 GSH 量,使 ROS 不能被及时清除而损伤线粒体结构,导致 HepG2 细胞凋亡。     

色霉素A2 诱导人肝癌HepG2 细胞凋亡

目的研究色霉素A2对人肝癌细胞HepG2 的凋亡诱导作用,以期为肝癌的治疗提供新的治疗药物。方法MTT法检测
色霉素A2作用HepG2、MCF-7、A549、7901 细胞后对细胞增殖的影响;激光共聚焦显微镜观察HepG2 细胞在色霉素A2（0、
60 nmol/L）的作用下,细胞染色质的变化;色霉素A（2 0、20、40、60 nmol/L）作用HepG2细胞24 h,显微镜观察细胞形态变化,采用
流式细胞术检测细胞凋亡率,活性氧水平及膜电位水平的变化。结果色霉素A2对人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制效果,且
呈时间,剂量依赖关系;药物作用细胞后,细胞染色质凝聚,染色加深;细胞形态方面发生细胞皱缩,并且细胞数目变少;流式细
胞仪测定结果显示,细胞凋亡率随药物浓度升高而增大,并且细胞内活性氧水平上升,线粒体膜电位水平降低。结论色霉素A2
诱导人肝癌HepG2细胞产生凋亡,其诱导HepG2细胞凋亡的机制可能与活性氧的升高及线粒体膜损伤有关。
     

野西瓜总生物碱诱导 HepG2 细胞凋亡与［Ca2+］i 变化的相关性

目的 探讨野西瓜总生物碱 (Capparis spinosa alkaloid, CSA) 对人肝癌 HepG2 细胞的杀伤和诱导凋亡的作用机制。方法 MTT 法研究 CSA 对人肝癌 HepG2 的杀伤作用;荧光显微镜观察 HepG2 细胞形态;流式细胞仪研究 CSA 对 HepG2 细胞的凋亡诱导作用;激光共聚焦显微镜检测 CSA 对 HepG2 细胞内［Ca²⁺］_i 的影响。结果 CSA 对人肝癌 HepG2 有明显细胞毒性作用,并且有剂量依赖性,IC₅₀ 为 142.82 μg/mL;HepG2 细胞在 CSA 作用后出现特征性凋亡形态特征,凋亡细胞比率明显高于自然凋亡率;且阻断细胞由S期向 G₂ 期的移行,CSA 明显升高 HepG2 细胞［Ca²⁺］_i,并与药物质量浓度呈量效正相关。结论 CSA 对人肝癌 HepG2 有明显的杀伤和促凋亡作用,其机制可能与 CSA 造成肿瘤细胞内钙离子超载有关。     

龙葵碱调控 Bcl-2 与 Bax 蛋白表达及 caspase-3 活性诱导HepG2 细胞凋亡的研究

目的 探讨龙葵碱诱导 HepG2 细胞凋亡的作用机制。方法 透射电镜观察凋亡细胞形态变化,原位缺口末端检测法 (TUNEL 法) 检测 DNA 断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,间接免疫荧光法激光共聚焦扫描显微术检测 Bcl-2 与 Bax 蛋白表达,比色法检测 caspase-3 活性的变化。结果 在透射电镜下观察,龙葵碱组细胞出现细胞固缩,染色质致密,核凝聚固缩,染色体断裂形成核碎块,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态。TUNEL 法发现龙葵碱高、中、低剂量组 HepG2 细胞均有绿色荧光,阴性对照组无荧光。流式细胞术分析表明 0.4、2、10 μmol/L 龙葵碱作用 HepG2 细胞 24 h 凋亡率分别为 4.0%、8.5%、20.1%。同时,龙葵碱升高 caspase-3 活性,下调 Bcl-2 蛋白表达,上调 Bax 蛋白表达。结论 龙葵碱通过降低 Bcl-2/Bax 的值,激活 caspase-3 酶活性诱导 HepG2 细胞凋亡。     

三氧化二砷对黑色素瘤B-16细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对体外培养黑色素瘤B-16细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用MTT比色法检测细胞增殖活力;采用流式细胞术测定细胞周期及凋亡率;倒置显微镜、激光共聚焦显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态学变化和凋亡特征。结果:6.25~100μmol/L As2O3作用细胞24、48小时后,细胞增殖活力明显下降,且具有时-效和量-效依赖关系;50μmol/L As2O3作用细胞12小时后,细胞凋亡率增加,S期细胞百分率下降;倒置显微镜下可见细胞生长密度减小、形态变圆、体积缩小;hoechst33258核染色可见核染色质边集、浓集;电子显微镜下可见到典型的凋亡细胞。结论:三氧化二砷能抑制黑色素瘤B16细胞的增殖并可诱导其发生凋亡。     

T-2毒素对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用

目的：探讨T-2毒素对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用和促凋亡作用。方法：选取对数生长期的人肝癌HepG2细胞,分为对照组（未给予T-2毒素）和实验组（给予0.25、2.50、25.00、250.00和2 500.00 μg·L^-1T-2毒素）。24 h后倒置显微镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Hoechest 33258染色法观察HepG2细胞凋亡形态表现,检测各组HepG2细胞中caspase-3的活性。结果：T-2毒素作用HepG2细胞24 h后,倒置显微镜下观察,与对照组比较,实验组细胞数量明显减少,细胞皱缩变形。MTT法检测,与对照组比较,实验组细胞增殖抑制率升高（P<0.01）。流式细胞术检测,与对照组比较,实验组SubG₁期细胞比例明显升高,细胞凋亡率明显升高。Hoechest 33258染色法检测,实验组细胞出现染色质固缩,细胞核呈致密浓染色的凋亡形态。实验组细胞中caspase-3活性明显高于对照组（P<0.01）。结论：T-2毒素对人肝癌HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用,并能促进细胞凋亡。     

石见穿多糖诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨石见穿多糖诱导人肝癌HepG2细胞凋亡作用。方法荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学改变;利用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测经不同浓度石见穿多糖作用的肝癌HepG2细胞的凋亡率。结果荧光显微镜观察可见HepG细胞不同时期凋亡形态学改变;石见穿多糖各浓度组平均细胞凋亡率分别为25mg/L组(8.27±1.84)%、50mg/L组(13.53±2.67)%、100 mg/L组(22.03±2.48)%,显著高于对照组(0.57±0.23)%(P0.01)。结论石见穿多糖能够诱导肝癌细胞HepG2凋亡,且凋亡率随着石见穿多糖浓度的增加而增高。     

乙型肝炎病毒197L变异核壳蛋白对诱导HepG2细胞凋亡的影响

目的研究197L变异核壳蛋白对诱导HepG2细胞凋亡的影响。方法构建EGFP-野毒株核壳蛋白、197L变异核壳蛋白融合表达载体（pEGFP—WT和pEGFP—L97）,酶切和测序鉴定;将pEGFP—WT、pEGFP—L97和对照质粒分别转染HepG2细胞．筛选阳性细胞株;荧光显微镜观察阳性克隆细胞荧光蛋白表达,Western—blot检测核壳蛋白表达：以TNF-α、Act-D诱导HepG2细胞株凋亡,0、16、32和48h采用流式细胞术检测细胞凋亡,32h时采用共聚焦检测细胞凋亡比例。结果成功建立了融合表达蛋白表达载体;荧光显微镜显示各细胞克隆有较好的荧光蛋白表达,Western-blot检测各细胞系核壳蛋白表达没有差异;16、32、48h时,pEGFP-WT、pEGFP-L97表达细胞株凋亡率均明显低于pEGFP-C1细胞株（P〈0．05）;32h和48h时,pEGFP-L97细胞株凋亡率明显高于pEGFP-WT细胞株（P〈0．05）;32h时激光共聚焦检测结果与流式细胞术检测结果一致。结论乙型肝炎病毒197L变异核壳蛋白对诱导HepG2细胞凋亡的影响与野毒株核壳蛋白不同,与野毒株核壳蛋白相比,197L变异核壳蛋白对凋亡因素可能更敏感。     

乙型肝炎病毒I97L变异核壳蛋白对诱导HepG2细胞凋亡的影响

目的研究I97L变异核壳蛋白对诱导HepG2细胞凋亡的影响。方法构建EGFP-野毒株核壳蛋白、I97L变异核壳蛋白融合表达载体(pEGFP-WT和pEGFP-L97),酶切和测序鉴定;将pEGFP-WT、pEGFP-L97和对照质粒分别转染HepG2细胞,筛选阳性细胞株;荧光显微镜观察阳性克隆细胞荧光蛋白表达,Western-blot检测核壳蛋白表达;以TNF-α、Act-D诱导HepG2细胞株凋亡,0、16、32和48h采用流式细胞术检测细胞凋亡,32h时采用共聚焦检测细胞凋亡比例。结果成功建立了融合表达蛋白表达载体;荧光显微镜显示各细胞克隆有较好的荧光蛋白表达,Western-blot检测各细胞系核壳蛋白表达没有差异;16、32、48h时,pEGFP-WT、pEGFP-L97表达细胞株凋亡率均明显低于pEGFP-C1细胞株(P<0.05);32h和48h时,pEGFP-L97细胞株凋亡率明显高于pEGFP-WT细胞株(P<0.05);32h时激光共聚焦检测结果与流式细胞术检测结果一致。结论乙型肝炎病毒I97L变异核壳蛋白对诱导HepG2细胞凋亡的影响与野毒株核壳蛋白不同,与野毒株核壳蛋白相比,I97L变异核壳蛋白对凋亡因素可能更敏感。     

野西瓜正丁醇萃取物对HepG2细胞线粒体膜电位和［Ca2+］i的影响

目的 研究野西瓜正丁醇萃取物诱导人肝癌细胞 HepG2 细胞凋亡的机制,观察其对 HepG2 线粒体膜电位和细胞内 Ca²⁺ 浓度［Ca²⁺］_i 的影响。方法 经流式细胞仪观察野西瓜正丁醇萃取物对线粒体膜电位的影响;激光共聚焦显微镜检测野西瓜正丁醇萃取物作用前后,HepG2 细胞［Ca²⁺］_i 的变化。结果 野西瓜正丁醇萃取物可不同程度降低 HepG2 细胞线粒体跨膜电位,此外,中、高剂量的野西瓜正丁醇萃取物还可以显著升高［Ca²⁺］_i,造成钙稳态平衡。结论 野西瓜正丁醇萃取物降低线粒体膜电位,开放 MPTP 孔道,造成细胞内 Ca²⁺ 超载,诱导 HepG2 细胞凋亡。     

白藜芦醇抑制HepG2细胞生长和对细胞间隙连接通讯的影响

目的研究白藜芦醇对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用以及对细胞间隙连接通讯（GJIC）的影响。方法利用MTT法观察白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用。流式细胞仪检测细胞周期的时相分布，使用荧光探针5＇-CFDA／AM标记细胞．采用荧光漂白后重恢复技术（FRAP）和共聚焦显微镜技术观察白藜芦醇对HepG2细胞间隙连接通讯的影响。结果不同浓度的白藜芦醇处理细胞不同时间后，HepG2细胞的生长增殖明显受到抑制，抑制率最高达92．1％，各处理组间比较均有显著性差异（F=18．532，P〈0．05）；细胞周期分析显示，白藜芦醇能诱导HepG2细胞在S期停滞．抑制细胞DNA的合成并可诱导细胞凋亡：另外，白藜芦醇有恢复HepG2细胞间隙连接通讯的功能，且随浓度增加而增加。结论白藜芦醇可抑制HepG2细胞增殖，使细胞停滞于S期，并能诱导细胞凋亡；白藜芦醇还有恢复HepG2细胞间隙连接通讯功能的作用，提示此作用可能是白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖和抗肿瘤作用的机制之一。     

白藜芦醇通过影响线粒体膜电位诱导HepG2细胞凋亡

目的 研究白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡的机制,探讨白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化。方法采用MTT法测定白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,通过荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡,电子显微镜观察细胞超微结构的变化,用Rhodaminel23和TMRE标记细胞线粒体膜电位（△ψ）,并分别通过流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜检测。结果低浓度白藜芦醇（≤25μmoFL）对HepG2细胞的生长抑制作用不显著,而高浓度白藜芦醇（〉25μmol／L）显著地抑制HepG2细胞的生长,且呈时间和浓度的依赖性（F=18．532,P〈0．05）;流式细胞术分析显示,白藜芦醇能显著诱导HepG2细胞凋亡,且呈浓度依赖性（P〈0．05）;白藜芦醇能降低HepG2细胞线粒体膜电位。结论白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡,白藜芦醇使HepG2细胞线粒体膜电位去极化,提示线粒体膜电位去极化在白藜芦醇诱导细胞凋亡的过程中起作用。     

姜黄素对人卵巢癌细胞株skov3生长的影响

目的 探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株skov3体外生长的的影响.方法 采用MTT法测定姜黄素不同浓度及不同时间对人卵巢癌细胞株skov3生长的抑制作用,计算细胞生长抑制率;光镜和电镜下观测细胞形态学及超微结构的改变;流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果 姜黄素具有诱导人卵巢癌细胞株skov3细胞凋亡的作用,呈剂量和时间依赖性....     

白藜芦醇诱导肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用及机制

目的:探讨白藜芦醇(RES)诱导人肝癌HepG2、人慢粒K562肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用及机制. 方法: 应用形态学方法,Annexin V荧光染色检测HepG2,K562细胞凋亡的发生,应用流式细胞术(FCM)检测细胞周期,应用四唑蓝比色法(MTT)检测HepG2,K562肿瘤细胞对,RES的药物敏感性. 结果: RES对人肝癌HepG2细胞的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡. 凋亡细胞表现为细胞固缩, 核染色质碎裂. Annexin V荧光染色检测HepG2细胞凋亡率为33.7%,用FCM检测细胞周期明显阻止于G1期,而K562细胞凋亡率为9.97%. MTT检测表明RES对人肝癌HepG2细胞有剂量-效应关系. 但RES对人K562细胞的生长无明显的抑制作用. 结论:RES通过诱导HepG2细胞凋亡抑制肿瘤的生长,并有剂量-效应关系. 同时RES对肿瘤细胞的抑制及诱导凋亡的作用有细胞选择性.     

苦参素诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡及其机制的研究

目的：观察苦参素对结肠癌LoVo细胞体外生长的影响。方法：用苦参素处理结肠癌Lovo细胞，采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用，倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果：在苦参素作用下，结肠癌LoVo细胞呈凋亡改变。细胞凋亡的同时，细胞周期发生特定的改变。结论：苦参素能抑制结肠癌细胞增殖，能诱导结肠癌细胞凋亡。     

苦参素诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡及细胞周期的影响

目的：探讨苦参素对卵巢癌细胞株H08910的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法：用苦参素处理H08910细胞，采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用，倒置显微镜观察细胞形态学改变；琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解，以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果：在苦参素作用下，H08910细胞呈凋亡改变，DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。细胞凋亡的同时，细胞周期发生特定的改变。结论：苦参素能抑制卵巢癌细胞增殖，能诱导卵巢癌细胞凋亡。     

桂枝茯苓丸诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡的研究

目的：探讨桂枝茯苓丸对卵巢癌细胞株HO8910的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法：用桂枝茯苓丸处理HO8910细胞，采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用，倒置显微镜观察细胞形态学改变，以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果：在桂枝茯苓丸作用下，HO8910细胞呈凋亡改变，DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。细胞凋亡的同时，细胞周期发生特定的改变。结论：桂枝茯苓丸能抑制卵巢癌细胞增殖，能诱导卵巢癌细胞凋亡。     

FHIT基因转染对肝癌细胞系HepG2的作用

目的:探讨外源性FHIT基因的表达对肝癌细胞株HepG2的影响. 方法:用脂质体介导法将pcDNA3.1-FHIT及空载体pcDNA3.1( )导入肝癌细胞系HepG2中,G418选择培养,经免疫组化和Western blotting鉴定其过表达. 用流式细胞仪、普通光镜、透射电镜观察FHIT基因的表达对HepG2细胞凋亡和增殖的影响. 结果:获得FHIT基因稳定表达的肝癌细胞株HepG2-FHIT. 转染FHIT基因的HepG2细胞的生长速率明显下降,电镜下超微结构发生了凋亡早期改变,流式分析细胞的生长周期可见S/G2期阻滞. 结论:外源性FHIT基因在体外通过诱导其凋亡及细胞周期俘获作用可有效抑制HepG2生长增殖.     

奥沙利铂诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡及其机制探讨

目的 :研究奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2生长抑制及诱导凋亡的作用并探讨其诱导凋亡的作用机制。方法 :应用MTT法检测奥沙利铂对HepG2细胞生长的抑制作用 ;电镜观察细胞的形态改变 ;流式细胞仪分析细胞周期的分布和凋亡的情况 ;免疫组织化学法检测突变型p5 3,Bcl- 2 ,Bax ,Fas等凋亡相关基因蛋白的表达。结果 :奥沙利铂对HepG2有明显的抑制作用 ,细胞阻滞于S期和G2 /M期 ,G0 /G1期细胞减少 ,作用 72h出现凋亡峰 ,电镜可以找到凋亡小体 ,免疫组织化学表明Bax表达增强 ,突变型 p5 3、Bcl- 2表达减弱 ,Fas表达无差异。 结论 :奥沙利铂具有抑制肝癌细胞株HepG2增殖及诱导凋亡作用 ,其机制与促凋亡相关基因表达增强和抗凋亡相关基因表达减弱有关。     

多孔聚醚砜平板膜培养肝细胞的初步研究

目的初步观察一种多孔聚醚砜平板膜上支持人肝细胞系L02细胞生长能力,探讨聚醚砜膜材料用于生物人工肝的可行性。方法将正常人肝细胞系L02细胞接种在多孔聚醚砜平板膜片上,用倒置相差显微镜、激光共聚焦显微镜以及扫描电镜观察L02细胞在此种平板膜上的贴壁和生长情况。结果倒置相差显微镜下可以观察到L02细胞能够在多孔聚醚砜平板膜较好生长,细胞培养到7 d时,细胞仍然保持良好生长增殖状态。激光共聚焦显微镜证实了该结果,且随着培养时间延长,细胞可呈多细胞聚集状态生长,保持活性。扫描电镜下膜表面微孔和微小孔结构得以观察,并能观察到部分细胞可以向微孔中延伸密集生长。结论多孔聚醚砜平板膜能够有效的支持L02细胞在其表面生长,有望成为生物人工肝支持系统理想的生物支架材料。