应用PCR方法扩增IS6110保守片段快速鉴定结核分支杆菌

目的：了解PCR方法快速鉴定结核分支杆菌的可靠性，探索快速诊断结核病的实验方法。方法：应用PCR方法扩增149株结核分支杆菌临床分离株的IS6110保守片段，并与结核分支杆菌H37Rv标准株进行比较。结果：149株临床分离株中，140株可以扩增出与结核分支杆菌H37Rv标准株相同的123bp DNA片段(敏感性达93．9％)，而阴性对照均不能扩增出该片段。结论：应用PCR方法扩增IS6110保守片段来鉴定结核分支杆菌，结果准确可靠，且具有方便和快速等优点，有较大的临床应用价值。     

利用裂解型分支杆菌噬菌体快速检测结核分支杆菌

目的 探讨裂解型分支杆菌噬菌体检测技术快速检测临床标本中结核分支杆菌的优缺点及临床应用价值.方法 对122例肺结核患者的痰标本和20份非结核性痰标本应用噬菌体裂解法检测,并与涂片镜检法、荧光定量聚合酶链反应(TaqMan-PCR)法相比较.结果 噬菌体裂解法阳性63例,阳性率51.6%;涂片镜检法阳性46例,阳性率37.7%;TaqMan-PCR法阳性69例,阳性率56.6%.噬菌体裂解法与痰涂片镜检法的阳性率差异有统计学意义(χ2=4.79,P<0.05),与TaqMan-PCR法的相近,差异无统计学意义(χ2=0.59,P>0.05).3种方法 检测20份非结核性痰标本均为阴性.结论 噬菌体裂解法检测结核分支杆菌快速、简便、灵敏、特异,同时又不需要特殊的实验设备,适合结核病的快速诊断.     

应用PCR—SSCP检测结核分支杆菌链霉素耐药基因的研究

结核病耐药问题十分严重，传统的药敏实验需1～2月。Sm是一线抗结核药物，结核分支杆菌耐Sm最常见的分子机制是由于核糖体S12蛋白编码基因（rpsL）突变。该文应用PCR－SSCP分析了62个结核分支杆菌临床分离株的rpsL基因，以H37Rv标准菌株为对照，13个药物敏感菌株中12个rpsL基因未见SSCP异常；37个耐Sm株中，31个（83．8％）有rpsL基因泳动异常；12个耐其它抗结核药物林中，仅1个单链DNA泳动异常。因此，PCR－SSCP有希望成为简便、快速地检测结核分支杆菌耐药突变株的方法，弥补常规药敏试验的不足，指导临床治疗。     

应用巢氏PCR—RFLP直接检测结核病临床标本中结核分支杆菌链霉？…

目的：了解结核分支杆菌链霉素耐药基因突变情况,建立快速检测耐药突变株的方法。方法：通过ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和巢氏ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析４０株结核分支杆菌临床分离株和１５例临床标本的ｒｐｓＬ基因突变的部位和性质。结果：１０株药物敏感株的ｒｐｓＬ双链泳动正常、并可被ＭｂｏⅡ消化;３０株耐ＳＭ分离株中,２５株双链泳动异常,２４株不被消失;１５例临床标本中,常规ＰＣＲ扩增７例ｒｐｓＬ阳性,巢氏     

非结核分支杆菌质粒的研究进展

细菌质粒或称质体是存在于细菌染色体外具有自身复制能力的共价闭合环状DNA分子。1979年Crawford等首次从非结核分支杆菌中分离到质粒。近年来,对该菌质粒的结构与功能有了较多的研究,现对非结核分支杆菌质粒的研究概况综述如下。     

结核分支杆菌异烟肼耐药的分子机制及其快速鉴定

目的：探讨快速检测结核分支杆菌异烟肼耐药的分子药敏方法。方法：用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)检测了20株异烟肼(INH)敏感的结核杆菌临床分离株，20株INH耐药株的katG基因，随后用SSCP方法鉴定扩增产物有无突变，以结核分支杆菌H37RV作对照。结果：所有INH敏感株均观察到katG基因扩增产物，20株INH耐药株中19株观察到katG基因扩增产物。以H37RV标准株为对照，20株敏感株SSCP带谱与对照相同；19株INH耐药株中8株与对照相同，11株有不同程度的差异，INH耐药katG基因突变或缺失的阳性率为60％。结论：多数结核分支杆菌耐INH是由于其katG基因突变所致，用PCR-SSCP筛选突变株可达到快速检测结核分支杆菌INH耐药的目的。     

等位基因特异PCR技术检测结核分支杆菌rpoB基因突变研究

目的 建立并评价等位特异多聚酶链反应检测结核分支杆菌耐利福平基因rpoB突变的方法。方法 设计与rpoB基因突变后的碱基配对的引物用于扩增突变基因，建立AS－PCR检测rpoB基因突变的方法，并对58株结核菌进行了检测。结果 AS－PCR检测结核菌耐利福平相关基因rpoB的敏感性为77.3%，特异性达91.7%。AS－PCR检测rpoB基因，有1628A→T、1657C→T，G和1673C→T突变分别占耐利福平结核菌株的18.2%，22.7%和36.4%。检测rpoB突变与MIC测定RFP耐药率和PCR－SSCP检测的总符合率分别为86.2%和74.1%。检测试验可在3－4h内完成。结论 AS－PCR方法是检测结核菌耐利福平基因突变的敏感和快速方法，可在临床实验室使用并为临床医师提供治疗依据。     

利用噬菌体裂解法快速检测结核分支杆菌

目的　研究噬菌体裂解法在结核分支杆菌快速检测及鉴定中的价值。方法　应用噬菌体裂解法和涂片法、L -J培养法检测 2 70份临床确认的肺结核患者的痰标本以及 3株结核分支杆菌标准株、1 4株非结核分支杆菌和 7株非分支杆菌。结果　 3株结核分支杆菌标准株噬菌体裂解试验均为阳性 ,而 1 4株非结核分支杆菌和 7株非分支杆菌均为阴性。 81份L -J培养阳性和 1 89份L -J培养阴性的痰标本中 ,噬菌体裂解试验分别有 77份(95 1 % )、1 7份 (9 0 % )阳性 (P >0 0 5 )。涂片检查阳性仅 70份 (2 5 9% ) ,阴性 2 0 0份 (74 1 % ) ,而应用噬菌体裂解实验可以检测出 94份 (34 8% )阳性 ,其中有 2 5份为涂片阴性的标本 (P <0 0 5 )。结论　噬菌体裂解法可以简便、快速地检测结核分支杆菌 ,全程只需 2d ,并且具有较高的敏感性和特异性     

应用聚合酶链反应-膜芯片技术快速鉴定分支杆菌菌种

目的建立一种简便、快速、灵敏、特异的分支杆菌菌种鉴定方法。方法通过 1 6SrDNA聚合酶链反应 单链构象多态性 (polymerasechainreaction singlestrandedconformationpolymorphism ,PCR SSCP)分析鉴定 1 4 0株分支杆菌临床分离株 ;设计与合成用于鉴定分支杆菌菌种的 1 6SrDNA寡核苷酸探针 ,制作膜芯片 ,与待测菌株生物素标记的 1 6SrDNA基因PCR产物进行反向斑点杂交。结果 1 4 0株分支杆菌临床分离株中 ,经 1 6SrDNAPCR SSCP初步鉴定 ,1 33株为结核分支杆菌复合群 ,7株为非结核分支杆菌。经膜芯片杂交分析 ,1 33株结核分支杆菌分离株鉴定为结核分支杆菌复合群 ;7株非结核分支杆菌中 ,1株鉴定为戈登分支杆菌 ,1株为土分支杆菌 ,1株为偶发分支杆菌 ,1株为胞内分支杆菌 ,另 3株与分析探针杂交阴性。分析 2 8种分支杆菌标准菌株和 9种非分支杆菌菌株 ,结果显示寡核苷酸探针是特异的。结论 1 6SrDNAPCR 膜芯片技术灵敏度高、特异性强、简便、快速 ,可用于鉴定分支杆菌菌种     

结核分支杆菌耐异烟肼分子机制的研究

目的为了解新疆地区结核分支杆菌耐异烟肼（INH）分离株KatG基因突变情况，探讨其在INH耐药性中的可能作用。方法采用PCR和PCR—SSCP方法对60株结核分支杆菌临床分离株KatG基因突变进行检测。结果以结核分支杆菌H37RV为对照，28株药物敏感株的KatG基因PCR扩增产物273bp片段28例SSCP图谱正常。32例耐INH分离株中KatG基因扩增均阳性，其中11株SSCP图谱异常，其敏感性为34．37％。结论新疆地区结核分支杆菌INH耐药株存在KatG基因突变，其突变对INH耐药性的影响有待于进一步研究。     

MPB64抗原检测对非结核分枝杆菌快速鉴别的意义

目的探讨结核分枝杆菌MPB64抗原在快速鉴别非结核分枝杆菌的诊断中的应用价值。方法对89例痰结核分枝杆菌培养阳性标本,进行培养液结核分枝杆菌MPB64抗原免疫胶体金法检测,并对结果进行比较分析。结果25例确诊非结核性标本,抗原检测均阴性;64例确诊结核性标本中,62例抗原检测阳性,阳性率为96.9%。用MPB64抗原胶体金法检测非结核分枝杆菌,敏感性为96.9%,特异性为100%,诊断一致率为97.8%。结论分枝杆菌MPB64抗原胶体金法可快速鉴别结核分枝杆菌及非结核分枝杆菌,具有高度的特异性和敏感性,是早期诊断与鉴别诊断非结核分枝杆菌感染的一种有价值的检测方法。     

非结核分枝杆菌淋巴结炎特征性组织病理学改变的初步研究

目的：探讨非结核分枝杆菌（NTM）性淋巴结炎的特征性组织病理学改变。方法：建立非结核分枝杆菌性淋巴结炎的实验动物模型，光镜下观察组织病理学改变。结果：NTM淋巴结炎的病理学改变与淋巴结结核的病理学改变不完全相同，其特征性病理学改变为：①淋巴结内可见肉芽肿形成，肉芽肿呈结节状，中央为凝固性坏死，非干酪样坏死，坏死区域中可见中性粒细胞，周围可见类上皮细胞、淋巴细胞、单核细胞，外围为纤维组织包裹；肉芽肿外可见朗汉斯巨细胞。②淋巴结内可见长条状匐形坏死，中央为凝固性坏死，并可见坏死组织脱落后遗留的条状空腔，坏死区域中可见中性粒细胞，周围可见类上皮细胞、淋巴细胞、单核细胞，外围可见纤维组织包绕。结论：匐形性坏死是NTM淋巴结炎的特征性组织病理学改变之一。     

牛鼻腔分泌物非结核分支杆菌分离培养结果分析

目的调查非结核分支杆菌在牛中的感染情况。方法对174头牛鼻腔分泌物，按中国防痨协会1995年11月颁布的“结核诊断细菌学检验规程”进行非结核分支杆菌分离培养和鉴定。结果从174份标本中分离出分支杆菌88株，阳性率为50.5％，其中草分支杆菌占22．7％、偶然分支杆占21.5％、戈登分枝杆菌占17．3％、不产色分支杆菌占14．8％、土分支杆菌占10．2％、龟脓肿分支杆菌占9．1％和鸟胸分支杆菌占2.2％。结论非结核分支杆菌在牛中存在的现象应引起重视，其毒力对人类的影响应进一步研究，以便采取有效的措施，保护人群的健康。     

母牛分支杆菌菌苗治疗非典型分支杆菌肺病的临床观察

目的评价母牛分支杆菌(微卡)菌苗对非典型分支杆菌(NTM)肺病的疗效。方法将31例经菌型鉴定为NTM肺病的患者随机分为A组(微卡组)和B组(对照组)，B组采用4~6种敏感药物，A组在B组的基础上加用微卡，观察痰菌转阴及肺部病灶吸收情况。结果A组痰菌转阴率高于B组。肺部病灶吸收有显著性差异。结论微卡能加速痰菌转阴，提高免疫功能，是一种较好的免疫调节剂。     

非结核分枝杆菌临床分离株的流行病学及临床特征分析

目的 分析台州市非结核分枝杆菌临床分离株的流行病学及临床特征,为非结核分枝杆菌病的疫情监测和诊断治疗提供参考依据。方法 回顾统计分析我院于2015 年1 月～2019 年12 月间检到的非结核分枝杆菌的分离率、菌种分布、混合感染情况、性别年龄构成和临床特征等。应用DNA 微阵列芯片法对分枝杆菌进行菌种鉴定。结果 5年间共检到非结核分枝杆菌331 株,分离率为19.0%,且逐年增加。检到的主要为胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌和龟/脓肿分枝杆菌,以胞内分枝杆菌最为常见,占57.7%。男性高于女性,50 岁以上高发。非结核分枝杆菌感染者常合并有肺结核、支气管扩张、肺部感染和慢性阻塞性肺疾病,临床表现多以咳嗽、咳痰首次就诊。结论 台州市非结核分枝杆菌的分离率和患病率逐年增加,以胞内分枝杆菌最为常见,DNA 微阵列芯片法可以用于分枝杆菌的快速鉴定。     

非结核分枝杆菌肺病54例临床特点分析及诊治体会

目的 分析非结核分枝杆菌(NTM)肺病的临床特点,以提高对NTM肺病的诊疗水平.方法 回顾性分析54例NTM肺病患者的临床资料.结果 NTM肺病≥40岁的中老年人多见(87.0％),病程较长,平均8.3年,多发于原有慢性肺部基础疾病或免疫力低下人群;临床症状无特异性,结核菌素试验皮试多为弱阳性(79.6％);胸部CT示病灶多位于双侧肺(81.5％)和全部肺叶(70.4％),薄壁空洞(14/18,77.8％)较厚壁空洞(4/18,22.2％)常见,均靠近胸膜,支气管扩张多位于右中叶或左舌叶(12/17,70.6％),钙化影少见(9.3％);支气管灌洗液NTM培养阳性率高(18/20,90.0％);菌种以鸟-胞内分枝杆菌(64.8％)和龟或脓肿分枝杆菌(25.9％)多见;对一线抗结核药耐药率高,耐药率均超过90％.极易误诊为肺结核(96.3％),治愈率低(34.8％).结论 NTM肺病容易被误诊,治疗难度大,应分析其临床特点和诊疗上的难点,总结出提高NTM肺病诊疗成功率的策略.     

散发性皮肤非结核分枝杆菌感染37例回顾研究

目的：通过分析散发性皮肤非结核分枝杆菌（nontuberculous mycobacteria, NTM）感染的临床及病理特点,探讨皮肤NTM感染诊断方法的准确性及药物治疗原则。方法：回顾分析北京大学人民医院皮肤科门诊自2000年1月至2014年3月诊治的散发性皮肤NTM感染患者,病原学检查方法主要包括细菌培养鉴定及PCR扩增病损组织DNA分枝杆菌hsp65基因并鉴定。结果：共37例患者,30例为海分枝杆菌感染,6例为脓肿分枝杆菌感染,1例为龟分枝杆菌和偶发分枝杆菌感染,PCR法较细菌培养更为敏感;21例有外伤史,21例有养鱼史或海产相关工作史,1例有美容手术史。海分枝杆菌感染皮疹多表现为结节和浸润性斑块,沿淋巴管播散常见,脓肿分枝杆菌感染临床缺乏特异性,组织病理上常表现为感染性肉芽肿。海分枝杆菌感染患者多采用利福平、乙胺丁醇、克拉霉素二联或三联治疗,治愈率90.00%;6例脓肿分枝杆菌感染患者中4例治愈,1例死亡。结论：散发性皮肤NTM感染以海分枝杆菌感染最常见,外伤（包括美容或手术）及鱼类或海产接触为常见诱因;组织病理改变无致病菌特异性,确诊需有病原学诊断依据。海分枝杆菌感染的治疗可选用利福平、乙胺丁醇、克拉霉素中任两种联合治疗,脓肿分枝杆菌感染的治疗应依据药物敏感试验结果制定方案。     

免疫支持对非结核分枝杆菌肺病患者疗效影响

目的 了解非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)肺病患者免疫功能低下发生率,以及免疫支持的应用状况、探讨免疫支持治疗对患者2月末痰菌阴转及病变吸收的影响,为临床实施免疫干预提供参考依据.方法 分析广州市胸科医院2014年1月-2015年12月确诊的资料完整的381例NTM肺病患者免疫功能情况以及免疫支持的应用状况,观察组(加用免疫调节剂母牛分枝杆菌菌苗)228例与同期对照组(未使用免疫调节剂)153例进行2月末痰菌阴转及病变吸收情况比较.结果 381例患者中,免疫功能低下的发生率为45.67% (174/381);免疫支持率为59.84% (228/381).细菌学改变:治疗前所有患者痰抗酸杆菌涂片和培养均为阳性.治疗2个月后两组的阴转率分别为67/228(29.38%)、17/153(11.11%),x2=17.79,P<0.05. 影像学改变:两组的病变吸收有效率分别为62/228(27.19%)、16/153(10.45%),x2=15.75,P<0.05;空洞吸收有效率分别为61/228(26.75%)、15/153(9.80%),x2 =20.42,P<0.05.结论 非结核分枝杆菌肺病患者存在较高比例的免疫功能低下风险,观察组的痰茵阴转、病灶吸收和空洞闭合的疗效高于对照组.     

循证护理在45例结核性胸膜炎的应用

目的:探讨循证护理在结核性胸膜炎患者中的应用。方法:选择45例结核性胸膜炎患者进行循证护理。结果:45例患者43例康复出院,2例基本康复,留院观察,总有效率达100%。循证护理提高了患者的舒适度,获得了患者和家属的满意。结论:应用循证护理的方法,能较好地提高结核性胸膜炎患者的整体护理质量。     

中枢神经系统不典型的结核感染与视神经脊髓炎13例临床分析

目的 研究视神经脊髓炎(NMO)的发病是否与结核感染密切相关,抗结核治疗是否能够达到治疗该病的目的.方法 对激素冲击治疗无效的13例NMO患者进行前瞻性研究,应用EDSS对患者的伤残程度进行评分,巢式PCR扩增脑脊液中结核杆菌特异性的MPB-64靶基因.进行抗结核诊断性治疗,并进行长期随访和观察.结果 治疗前EDSS评分在4.5～9,10例患者脑脊液常规检查有异常,巢式PCR有3个患者有阳性结果.治疗后13例患者EDSS评分逐步下降,视力改善,脊髓内的异常信号在治疗后逐渐消退,患者对抗结核治疗反应良好.结论 结核感染可能是视神经脊髓炎的主要病因,神经系统不典型的结核感染可能是该病造成脊髓和视神经损害的重要途径.鉴于该病预后差,以及抗结核治疗在本研究中的效果,作者认为在原因不明时,应为患者及早进行诊断性抗结核治疗.