神经节苷脂对体外培养的嗜铬细胞的影响

将新生ＳＤ大鼠肾上腺髓质中的嗜铬细胞在含有神经节苷脂的培养液中培养，应用相差显微镜、荧光组织化学及免疫细胞化学染色等方法，观察嗜铬细胞的成活及突起生长情况。实验结果表明，神经节苷脂可明显提高嗜铬细胞的成活率。     

牛眼前房小梁细胞体外培养的建立

牛眼前房小梁细胞体外培养的建立杨新光，李美玉，张东杲（唐都医院眼科西安７１００３８北京医科大学北大医院眼科）关键词细胞培养；小梁网；牛眼中图号Ｒ７７５．２前房角小梁网是房水排出的主要途径，也是目前认为原发性开角型青光眼的主要病变所在．房水流出通道的大...     

牛眼小梁细胞体外培养技术的改进

目的 改进体外培养牛眼小梁细胞的方法。方法 分别采用常规和改进的方法对牛眼小梁细胞行体外原代及传代培养,比较两者在组织成活率、细胞贴壁率、生长曲线上的差异,并做组织学特异染色鉴定,应用光学显微镜、电子透射显微镜对原代及传代培养的细胞进行形态学及生长特性的观察。结果 牛眼小梁细胞培养成功,两种方法对培养无明显影响。结论 应用加有小牛血清的培养液可在不影响培养效果前提下明显降低实验成本,而且选择性的收集小梁组织块是培养成功及保证成活率的有效手段。     

体外培养成人及成年大鼠肾上腺嗜铬细胞

成人及成年大鼠肾上腺髓质组织比较致密,消化困难,应选用消化能力较强的胶原酶。在体外培养条件下,嗜铬细胞较其它类型细胞贴壁能力差,以多聚赖氨酸或鼠尾胶原包被底壁有利于细胞贴壁生长。神经生长因子(NGF)可促进嗜铬细胞贴壁,存活和生长出神经轴突样突起,但是成人及成年大鼠肾上腺嗜铬细胞对于NGF的依赖程度存在种属差异。在合NGF的培养基中大鼠嗜铬细胞存活数量增加,存活时间延长,并有较多细胞发育出神经轴突样突起。成人嗜铬细胞对NGF也产生一定反应,但其依赖程度不如鼠嗜铬细胞明显。     

胎牛主动脉内皮细胞的培养

目的 建立动脉内皮细胞（ＥＣｓ）的体外研究模型。方法 用消化法结合机械法的方法分离胎牛主动脉ＥＣｓ,在ｐＨ７．０的Ｍ１９９培养液中培养。结果 用Ⅷ因子相关抗原免疫荧光法以及倒置显微镜下细胞融合后呈单层生长、鹅卵石状排列,证实所培养的细胞为ＥＣｓ,在无内皮细胞生长因子的条件下体外连续培养的细胞达１８代。结论 在人动脉取材极为不易的情况下,胎牛主动脉ＥＣｓ的培养是很好的补充。     

刺激-分泌偶联离体嗜铬细胞模型的研究

目的　用离体蟾蜍肾上腺髓质嗜铬细胞建立刺激 分泌偶联的模型。方法　用胶原酶 (0 5mg ml)消化蟾蜍肾上腺 ,再用牛血清白蛋白 (5mg ml)终止消化 ,获得离体的蟾蜍肾上腺髓质嗜铬细胞。用乙酰胆碱 (2 0 0μmol L)或高K (6 5mmol L)刺激离体嗜铬细胞分泌儿茶酚胺。结果　消化培养后获得了离体的蟾蜍肾上腺髓质嗜铬细胞。ACh(2 0 0 μmol L)能刺激离体细胞分泌CA ,回归方程为Y =- 16 12 16 94X ,r=0 995 1>α0 0 1 =0 95 87;K (6 5mmol L)也能刺激离体细胞分泌CA ,回归方程为Y =12 5 3 7 933X ,r =0 994 2 >α0 0 1 =0 95 87。结论　离体的蟾蜍肾上腺髓质嗜铬细胞是理想的刺激 分泌偶联模型。由ACh和高K 促进的嗜铬细胞CA分泌具Ca2 浓度的依赖性。     

转化生长因子β1对体外培养的牛眼小梁细胞肌动蛋白影响的研究

目的：了解转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对培养的牛眼小梁细胞微丝肌动蛋白的影响，探讨房水引流阻力在原发性开角型青光眼（primary open angle glaucoma,POAG)的病因和发病机制中的作用。方法：进行牛眼小梁细胞体外培养。以含不同浓度TGF－β1（终浓度为0，0．5，1，5ng.ml^-1）的培养液孵育传三代的小梁细胞24小时，SABC法对细胞进行actin染色，结果以计算机图像分析系统分析并进行统计学检验。结果：各浓度组与对照组相比，TGF－β1可增加小梁细胞actin的表达。结论：TGF－β1在一定范围内增加体外培养的牛眼小梁细胞actin表达，加强小梁细胞收缩能力，有利于降低小梁网房水引流阻力。     

牛嗜铬细胞植入大鼠蛛网膜下腔的镇痛作用

目的 :观察牛嗜铬细胞 (BCC)植入大鼠脊髓蛛网膜下腔后的镇痛效应。方法 :5 0只成年Sprague Dawley大鼠 ,随机分为A、B、C、D和E组 ,每组 10只。A、B、C和D组大鼠蛛网膜下腔植入 2 0 μlBCC悬液 ;E组大鼠植入等量的DMEM液。D组和E组于移植手术后 ,每周进行急性热刺激实验 ,持续 8周 ;A、B和C组于移植手术后 3周分别进行纳洛酮、酚妥拉明和生理盐水阻断的福尔马林实验 ,D组和E组进行福尔马林实验。结果 :急性热刺激实验中D组抗热伤害效应明显高于E组 (P <0 .0 5 ) ,并持续 8周 ;福尔马林实验中D组急性期反应评分和慢性期反应评分均低于E组 (P <0 .0 1)。阻断剂实验中 ,急性期疼痛评分A组、B组均高于C组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,但慢性期2组间差异无统计学意义 (P均 >0 .0 5 )。结论 :BCC移植对大鼠急慢性痛均有明显镇痛作用 ,植入的BCC分泌的脑啡肽类和儿茶酚胺类活性成分参与镇痛过程的调节 ,但 2种物质的作用机制不同。     

微囊化牛嗜铬细胞移植对致痛大鼠行为学及脊髓C-fos表达的影响

目的:探讨微囊化牛嗜铬细胞(BCC)蛛网膜下腔移植对疼痛大鼠脊髓后角神经元活动的影响。方法:SD大鼠24只,随机分为空囊组、微囊化BCC组和BCC组,每组8只。分别在3组大鼠的脊髓蛛网膜下腔植入含空囊的DMEM、微囊化BCC和单纯BCC。移植8周后,对3组大鼠行福尔马林疼痛实验;福尔马林处理后2h,免疫组织化学法检测大鼠脊髓后角Cfos蛋白的表达。结果:空囊组、BCC组和微囊化BCC组大鼠痛觉行为反应和脊髓后角Cfos阳性神经元数目均依次减少(P均<0.05)。结论:BCC移植对福尔马林致痛大鼠有镇痛作用,可以抑制福尔马林致痛大鼠脊髓后角Cfos的表达,微囊化BCC效果优于BCC。     

大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞钙通道亚型研究

目的　研究大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞钙离子通道的亚型。方法　利用全细胞膜片钳技术 ,在维持电压 - 70m V的条件下 ,给予细胞 4 0 ms,从 - 6 0 m V到 +6 0 m V的序列除级方波 ,阶跃 10 m V,引导出钙通道电流 (ICa) ,观察不同类型钙通道阻滞剂对 ICa的影响。结果　用 10 μmol/ L 硝苯地平 (NIF)、 1μm ol/ Lω- conotoxin GVIA和 10 0 nmol/Lω- agatoxin IVA灌洗细胞 10 m in,对 ICa有明显的抑制作用 ,抑制率分别为 (44 .6± 2 .0 ) %、 (31.3± 2 .0 ) %和 (2 0 .6± 2 .0 ) %。结论　在大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞中 ,L 型钙通道是主要的 ,同时也存在 N型和 P/ Q型钙通道     

大鼠血管平滑肌细胞的培养与鉴定

目的:改进大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的培养方法。方法:采用机械刮除、差异贴壁等手段进行组织贴块法原代培养,胰蛋白酶消化传代,并应用相差显微镜和即用型SABC免疫组化染色试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果:镜下培养细胞呈典型的"谷-峰状"生长,免疫组化染色显示胞浆内-αactin阳性表达,锥虫蓝染色检测细胞传代成活率95%。结论:本法可获纯度高、结构和功能良好的VSMCs。     

鸡胚细胞的培养

研究了鸡胚细胞的生长规律，葡萄糖的利用和乳酸、氨等代谢产物的积累规律，比较了培养基对细胞生长的促进作用，筛选了合适的微载体，初步探讨了用微载体培养鸡胚细胞的方法。实验结果表明，鸡胚细胞在DMEM培养基中生长良好，最适合的微载体为胶原型微载体，如GT-2，Gytodex-3。     

人甲状腺乳头状癌细胞对牛-TSH和去甲肾上腺素反应性的实验研究

目的　通过体外实验研究人体甲状腺乳头状癌细胞对牛 -促甲状腺激素 (TSH)、去甲肾上腺素的反应性 ,阐述它们之间的关系 ,观察甲状腺癌细胞生长的影响因素 ,探讨其内分泌治疗的机理。方法　实验标本来自手术病例 ,病理类型为乳头状癌。修理组织、漂洗、剪碎 ,胰酶和胶原酶 型双酶消化 ,96孔板置于 37℃、5 % CO2 、95 %湿度孵箱中培养。用不同浓度的 b TSH和去甲肾上腺素分别刺激 72 h;非放射细胞增殖法测定细胞生长。结果　显示肿瘤细胞对 b TSH无反应 ;而去甲肾上腺素促进癌细胞生长。结论　 b TSH不能促进甲状腺乳头状癌细胞生长 ,提示临床上甲状腺癌的 TSH抑制治疗机理有待进一步探讨 ;另外提示甲状腺癌也受到肾上腺素神经内肽的调节。     

胶质瘤干细胞的培养和分化研究

目的探讨人类胶质瘤干细胞的体外培养、传代和分化。方法采用机械方法从胶质瘤组织中分离细胞,应用N2培养基进行培养,碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子刺激细胞扩增;应用免疫组织化学染色对培养的细胞及其分化的细胞进行鉴定。结果从胶质瘤组织当中成功培养出人类的胶质瘤干细胞,培养条件下呈悬浮状态生长,形成神经球,绝大多数的细胞表达波形蛋白和巢蛋白两种神经干细胞的标志物;这种细胞可分化为神经元和星型胶质细胞。结论体外的培养条件下,可从胶质瘤组织中培养出干细胞,能够分化为神经元和星型胶质细胞,为胶质瘤的深入研究莫定基础。     

Culture and Identification of Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells

Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells （hAMSCs）. Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase digestion, and cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medinm/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Phenotypic characteristics of these cells were analyzed by means of immunocytochemistry and flow cytometry. Results The cells successfully isolated from human amniotic membrane expressed representative mesenchymal cell surface markers CD44, CD90, and vimentin, but not CD45. Conclusions This study establishes a potential method for isolation of hAMSCs from human amnion, in vitro culture, and identification. The isolated cells show phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells.     

输卵管上皮细胞的培养及生物学特性

目的建立输卵管上皮细胞的培养方法，进行形态学观察，鉴定及冻存，方法取雌性日本大白兔的输卵管上皮细胞进行原代及传代培养，用光镜，电镜及单克隆角蛋白抗体进行ＳＰ染色，结果输卵管上皮细胞呈多角形组成簇生长。电镜下可见表面有微绒毛，细胞之间有紧密连接等上皮细胞的特征，免疫组化染色上皮细胞角蛋白染色阳性，原代培养细胞７天长成单层，传代细胞４天长成单层，结论建立稳定的输卵管上皮细胞的培养方法，为进一步研究输卵     

人类神经干细胞的长期培养和传代

【目的】探讨人类神经干细胞的体外培养条件及其传代的方法。【方法】采用机械方法从胎脑中分离神经细胞 ,应用N2培养基进行培养 ,碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和表皮生长因子 (EGF)刺激细胞扩增 ;传统方法和对神经球切割的方法进行传代培养 ;应用免疫组织化学染色对培养的细胞及其分化的细胞进行鉴定。【结果】从流产胎脑当中成功培养出人类的神经干细胞 ,培养条件下呈悬浮状态生长 ,形成神经球 ,绝大多数的细胞表达波形蛋白和Musashi1两种神经干细胞的标志物 ;这种细胞可分化为神经元和星型胶质细胞 ,早期的培养有少量的少突胶质细胞 ;在这种培养条件下 ,神经干细胞生长速度较慢 ,而采用切割神经球的方法保持了细胞间的联系 ,神经干细胞可获得较大的扩增速度。【结论】体外的培养条件下 ,可从胎脑组织中培养出神经干细胞 ,它可做为中枢神经系统疾病移植治疗的潜在细胞来源。