陈皮总黄酮干预血管平滑肌细胞糖胺聚糖代谢的机制研究

目的研究陈皮总黄酮(CPTF)干预血管平滑肌细胞(VSMC)糖胺聚糖(GAGs)代谢的作用机制。方法MOVAS细胞分为正常组、模型组、CPTF组(100μg·mL-1);采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导建立VSMC增殖模型。采用硫酸咔唑法测定GAGs总量;以HPLC法检测半乳糖胺含量;以流式细胞仪检测成纤维细胞生长因子-硫酸乙酰肝素-成纤维细胞生长因子受体1c(bFGF-HS-FGFR1c)三元复合物的荧光信号;高通量测序检测GAGs转录组基因表达。结果与正常组比较,模型组的GAGs、硫酸软骨素(CS)含量增多(P 0.05),HS含量降低(P 0.05),Cspg5(调节CS合成)、Hs3st3b1(调节HS、肝素合成)基因表达明显上调,B3gnt3(调节鞘糖脂生物合成-乳酸和新乳酸系列)、Has3(调节透明质酸合成)、Fut1(调节鞘糖脂生物合成-globo系列)基因表达下调。与模型组比较,CPTF组的GAGs、CS含量降低(P 0.01),HS含量增多(P 0.01),B3gnt3、Has3、Fut1、Hs3st3b1基因表达上调,Cspg5基因表达明显下调。结论 CPTF可能通过调节Cspg5基因的表达及HS的合成来干预VSMC的GAGs代谢,从而发挥一定的抗动脉粥样硬化的作用。     

丹蒌片抗动脉粥样硬化模型小鼠主动脉平滑肌细胞增殖的机制研究

目的研究丹蒌片对动脉粥样硬化(AS)模型ApoE~(-/-)小鼠血清抵抗素水平、血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,并探讨其可能机制。方法 32只ApoE~(-/-)小鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、他汀组及丹蒌组,每组8只。正常组ApoE~(-/-)小鼠喂饲基础饲料12周,余各组均采用高糖高脂饲料连续喂饲12周制备AS模型。正常组不予灌胃干预,模型组、他汀组及丹蒌组于第5周时分别给予生理盐水、阿托伐他汀片混悬液(1.5 mg/mL)、丹蒌片混悬液(0.34 g/mL)连续灌胃干预8周。干预结束后,ELISA检测血清抵抗素水平,免疫组化染色观察主动脉细胞增殖核抗原(PCNA)阳性表达,透射电镜观察VSMC表型改变,Real-time PCR、Western Blot检测ApoE~(-/-)小鼠主动脉ERK1、ERK2 mRNA和ERK1/2、pERK1/2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组血清抵抗素水平升高(P0.05),PCNA阳性表达增加(P0.01),血管内ERK1、ERK2 mRNA和ERK1/2、pERK1/2蛋白表达上升(P0.01,P0.05),透射电镜下可见主动脉VSMC胞浆内肌丝减少,粗面内质网、线粒体等细胞器增多,有较多的吞噬大量脂质形成的空泡,呈典型合成型改变。与模型组比较,他汀组与丹蒌组血清抵抗素水平降低(P0.05),PCNA阳性表达减少(P0.01),血管内ERK1、ERK2 mRNA和ERK1/2、pERK1/2蛋白表达下降(P0.05,P0.01),透射电镜下主动脉合成型VSMC明显减少。结论丹蒌片可明显抑制VSMC异常增殖,其作用机制可能是通过降低血清抵抗素水平,抑制抵抗素对ERK信号通路的激活,减缓VSMC的增殖效应,从而达到抗VSMC增殖作用。     

参附注射液对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用

目的观察参附注射液对脓毒症大鼠肺保护作用并探讨其可能的作用机制。方法30只健康无特定病原体(SPF)级SD大鼠随机分成空白对照组、模型组和参附组3组,每组10只。空白对照组尾静脉注射0.9%氯化钠注射液10 m L/kg加0.9%氯化钠注射液10 mL/kg;模型组尾静脉注射0.1%脂多糖(LPS)溶液10 mL/kg加0.9%氯化钠注射液10 m L/kg;参附组尾静脉注射0.1%LPS溶液10 m L/kg加参附注射液10 m L/kg。6 h后检测血气分析,记录肺湿/干重比(W/D),观察肺组织病理检测并记录肺组织损伤评分,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、Syndecan-1、硫酸乙酰肝素(HS)、硫酸软骨素(CS)水平。结果与空白对照组相比,模型组与参附组血pH低、乳酸(Lac)高、氧分压(PaO;)低、肺W/D比高,肺组织出现水肿伴炎细胞浸润、肺组织损伤评分升高,血清TNF-α、MMP-1、Syndecan-1、HS、CS水平高(P<0.05);与模型组相比,参附组血pH升高、Lac降低、PaO;明显改善、肺W/D比明显降低、镜下观察发现肺组织水肿及炎细胞浸润改善、肺组织损伤评分下降,血清TNF-α、MMP-1、Syndecan-1、HS、CS水平显著下降(P<0.05)。结论参附注射液具有一定的改善脓毒症肺损伤的作用。其机制可能是通过降低炎症水平,抑制MMP-1的过量表达,减少内皮多糖包被的降解,从而降低肺毛细血管的通透性、改善氧合,保护肺组织并减轻肺部及全身的炎症反应。     

康复新液对噁唑酮诱导溃疡性结肠炎大鼠治疗作用及机制初探

目的:研究康复新液对噁唑酮(oxazolone,OXZ)诱导溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠的治疗效果,并初步探讨其机制。方法:将SD大鼠分为正常组、模型组、美沙拉嗪组和康复新低、中、高剂量组,后5组以OXZ溶液灌肠诱导UC模型。造模后第1天开始各组灌肠给药,每天1次,连续给药7 d。每天进行疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分,造模后第8天处死大鼠,进行结肠黏膜损伤指数(colonmucosa damage index,CMDI)评分和病理组织学评分(histopathological score,HS);采用酶联免疫吸附测定方法检测血清中白细胞介素-4(IL-4)含量和结肠黏膜中IL-13含量。结果:模型组大鼠的DAI评分,结肠指数,CMDI评分,HS和结肠黏膜中IL-13含量均显著高于正常组(P0.05,P0.01),而模型组大鼠血清中IL-4含量显著低于正常组(P0.01)。与模型组比较,康复新高剂量能显著降低大鼠DAI评分,CMDI评分,HS和结肠黏膜中IL-13含量(P0.05,P0.01),而血清中IL-4含量显著升高(P0.01)。结论:康复新液能够有效地缓解噁唑酮诱导的溃疡性结肠炎。     

淫羊藿苷对血管平滑肌细胞增殖活性及总蛋白含量的影响

目的:研究淫羊藿苷( icariin,ICA)对氧化低密度脂蛋白(oxidized,ox - LDL)诱导增殖血管平滑肌细胞(vascular smoooth muscle cell,VSMC)的促凋亡作用.方法:建立ox- LDL诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的淫羊藿苷共同培养,用MTT法检测细胞增殖活性;考马斯亮蓝法测定细胞总蛋白量.结果:与空白组相比较,模型组OD值显著升高(P＜0.01),证明LDL可促进VSMC增殖;与模型组相比,高、中、低浓度的ICA均可抑制LDL所诱导的VSMC增殖(P＜0.01);经ICA处理24h、48h、72 h后,VSMC总蛋白含量均低于LDL组,提示ICA对VSMC增殖均有抑制作用.结论:淫羊藿苷拮抗ox-LDL诱导的兔VSMC增殖,促进其凋亡.     

扶芳藤益心方对缺血再灌注损伤后心内膜微血管内皮细胞的保护机制

目的 :研究扶芳藤益心方对人心内膜微血管内皮细胞(HUMCE)缺血再灌注损伤(IR)后的保护机制。方法 :体外培养HUMCE至第3代,将HUMCE分为造模组:扶芳藤益心方组(FY)、益心方组(Y)、卡托普利高(CAP1)、中(CAP2)、低(CAP3)浓度组、模型对照组和非造模组(N)。造模组进行缺氧/复氧(H/R)处理,非造模组不做缺氧/复氧处理,两组均添加相应的含药血清干预培养24 h后,采用硝酸还原酶法测定NO、NOS的含量,蛋白印迹法测定内皮素(ET-1)、内皮素转化酶(ECE)蛋白表达率,荧光定量测定ET-m RNA、i NOS-m RNA基因表达水平。结果:与非造模组对照,造模对照组细胞NO、NOS含量及i NOS-m RNA基因表达降低,ET-1、ECE蛋白表达及ET-m RNA基因表达明显增加(P0.05)。与模型对照组比较:扶芳藤益心方组、益心方组NO、NOS含量和i NOS-m RNA基因表达升高,ET-1、ECE蛋白表达及ET-m RNA基因表达明显降低(P0.05)。与扶芳藤益心方组比较:益心方组NO、NOS含量及i NOS-m RNA基因表达均明显降低(P0.05),ET-1、ECE蛋白表达及ET-m RNA基因表达均明显增加(P0.05);CAP1组NO、NOS含量及i NOS-m RNA基因表达均升高(P0.05),ET-1、ECE蛋白表达及ET-m RNA基因表达均降低(P0.05);CAP2组、CAP3组的NO含量及i NOS-m RNA基因表达均降低(P0.05),ET-1、ECE蛋白表达及ET-m RNA基因表达均升高(P0.05)。与益心方组比较:CAP1组、CAP2组、CAP3组的NO、NOS含量均升高(P0.05),ET-1、ECE蛋白表达及ET-m RNA基因表达均降低(P0.05),CAP3组的i NOS-m RNA基因表达降低(P0.05);CAP1组、CAP2组的i NOS-m RNA基因表达均升高(P0.05)。结论 :扶芳藤益心方通过下调人心内膜微血管内皮细胞缺血再灌注后的ET-1、ECE蛋白表达及ET-m RNA基因表达,导致内皮细胞缺血再灌注后ET-1分泌降低,上调i NOS-m RNA基因表达,提高内皮细胞NO、NOS的分泌,从而维持ET/NO平衡关系防止内皮细胞在缺血再灌注后的损伤。     

五味子乙素对NAFLD细胞模型肝脂质堆积、内质网应激信号通路蛋白及脂肪酸合成相关基因表达的影响

目的观察五味子乙素(Sch B)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)肝脂质堆积、内质网应激信号通路蛋白及脂肪酸合成相关基因表达的影响,探讨其降脂作用机制。方法培养正常人L02细胞株,加入游离脂肪酸的混合物(油酸∶软脂酸=2∶1),培养24 h诱导肝脂肪变性,建立NAFLD细胞模型。给予不同浓度SchB干预细胞模型,流式细胞术检测脂肪堆积,检测三酰甘油(TG)含量,Western blot检测内质网应激信号通路相关蛋白Bip、PERK、p-PERK、p-eIF2α、SREBP-1的表达,RT-PCR检测脂肪酸合成相关基因硬脂酰CoA去饱和酶(SCD)、甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAT)、乙酰CoA羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)的表达。结果体外实验成功建立L02细胞脂肪堆积模型。与模型组比较,SchB组脂质堆积显著降低(P0.05),且SchB可剂量依赖性降低TG水平,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);模型组较对照组Bip、SREBP-1、p-PERK、p-eIF2α蛋白和ACC、FAS、GPAT基因表达均上调,SCD基因表达下调;与模型组比较,SchB各浓度组内质网应激信号通路蛋白和ACC、FAS、GPAT基因表达均明显下调,SCD基因表达明显上调,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 SchB可能通过抑制内质网应激信号通路蛋白的表达,进而影响脂肪合成相关基因表达,从而降低肝脏TG的堆积。     

祛湿化瘀方对脂肪肝大鼠肝脏基因表达谱的调节作用

目的观察祛湿化瘀方对高脂饮食诱导脂肪肝大鼠肝脏基因表达谱的干预作用及其作用机制。方法20只SD雄性大鼠采用单纯高脂饮食(88%普通饲料+2%胆固醇+10%猪油)制备脂肪肝大鼠模型。造模4周后按随机数字表法分为祛湿化瘀方组(10只)和模型组(10只),继续造模同时分别给予祛湿化瘀方汤剂(0.93 g生药/100 g体重)和蒸馏水灌胃,每日1次。同时设10只SD雄性大鼠为正常组,给予等量蒸馏水灌胃,各组均于8周末取材。采用生化法检测肝组织甘油三酯(triglyceride,TG)、游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量及血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活性;采用HE及油红染色观察肝脏组织的病理变化;采用Affymetrix基因芯片检测肝组织基因表达,比较祛湿化瘀方组与模型组差异表达基因、分析差异基因的功能以及涉及的信号通路;并选取祛湿化瘀方组与模型组间10个差异倍数大于2的涉及糖脂代谢的差异基因进行RT-PCR验证。结果(1)与正常组比较,模型组大鼠肝组织TG、FFA含量和血清ALT、AST活性均明显升高(P0.01);与模型组比较,祛湿化瘀方组大鼠TG、FFA含量和ALT、AST活性均明显降低(P0.05,P0.01)。祛湿化瘀方能降低高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝模型的肝细胞脂肪变性程度,减少炎症,改善肝组织病理。(2)祛湿化瘀方组与模型组比较,P0.05且差异倍数大于2的功能明确、有指定基因名称的差异基因共80个,其中上调基因44个,下调基因36个。80个差异基因涉及27条差异有统计学意义的信号通路(包括甘油酯类代谢、通路脂肪细胞信号通路、胰岛素信号通路及药物代谢信号通路等,P0.05)。(3)对甘油激酶(Gk)、硬脂酰CoA去饱和酶-1(Scd1)、甘油-3-磷酸转移酶(Gpat2)、葡萄糖-6-磷酸酶(G6pc)、Irs1等10个调节糖脂代谢基因的RT-PCR验证实验结果显示:所有基因RT-PCR与基因芯片结果上调或下调趋势完全一致,80%基因差异倍数非常接近。结论祛湿化瘀方可调节高脂饮食诱导的脂肪肝大鼠脂肪代谢、糖类代谢、抗脂质过氧化及药物代谢等相关基因表达,表现出中药复方的综合药理作用。     

黄芪甲苷对博来霉素肺纤维化模型小鼠miR-29b及其相关因子表达的影响

目的 基于微小核糖核酸29b(MicroRNA-29b,miR-29b)探讨黄芪甲苷对博来霉素肺纤维化模型小鼠的干预作用。方法 将40只小鼠随机分为空白组、模型组、miR-29b组、miR-29b阴性对照药组(简称NC组)和黄芪甲苷组,每组8只。博来霉素气道滴入建立肺纤维化模型。干预用药28天后取血清及肺组织,用HE和Masson染色法观察肺组织病理变化;碱水法检测肺组织羟脯氨酸含量; Elisa检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平; PCR检测转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、smad3蛋白(mothers against decapentaplegic homolog 3,smad3)、miR-29b基因表达;Western-blot检测TGF-β1、smad3蛋白、磷酸化smad3蛋白(phosphorylated mothers against decapentaplegic homolog 3,P-smad3)表达。结果 病理显示模型组出现肺纤维化改变,miR-29b组和黄芪甲苷组肺纤维化程度较轻。与空白组相比,模型组和NC组的羟脯氨酸升高、SOD含量减少,MDA和ROS含量增加,TGF-β1、P-smad3基因表达量明显升高,miR-29b基因表达量减少,TGF-β1、P-smad3蛋白含量升高(P 0. 05)。与模型组相比,黄芪甲苷组羟脯氨酸含量较低,SOD含量增加,MDA含量减少,miR-29b基因表达量增加,Smad3基因表达量减少,TGF-β1、P-smad3蛋白含量减少(P 0.05)。结论 黄芪甲苷可以减少肺组织羟脯氨酸含量,减轻胶原纤维沉积,具有抗纤维化作用,其作用机制可能与升高miR-29b水平,调节氧化应激反应和TGF-β1/Smad3信号通路有关。     

葛根调节脂肪细胞糖脂代谢改善胰岛素抵抗的研究

该实验通过检测葛根对胰岛素抵抗(IR)3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗,甘油三脂(TG)含量及PPARγ,ADPN,GLUT4,LPL,FABP4,FASn表达量的影响来探讨葛根调节糖脂代谢改善脂肪IR的作用机制。先采用3T3-L1前脂细胞诱导分化的成熟脂肪细胞,地塞米松诱导建立IR模型,将脂肪细胞分为正常组,IR模型组,罗格列酮阳性组,低、中、高剂量葛根含药血清组,以葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(glucose oxidase-peroxidase,GOD-POD)法检测细胞培养液葡萄糖含量和甘油磷酸氧化酶(glycerol phosphate oxidase,GPO-POD)法测定胞内TG含量,荧光定量q PCR检测PPARγ,ADPN,GLUT4,LPL,FABP4(a P2),FASn基因mRNA水平。结果显示1μmol·L~(-1)地塞米松作用3T3-L1脂肪细胞96 h,与正常组比较,模型组葡萄糖消耗量降低(P0.01),胞内TG含量增加(P0.01),由此确认建立IR模型;与IR组比较,葛根含药血清干预IR细胞24 h葡萄糖消耗量上升(P0.01),胞内TG含量降低(P0.01),中、高剂量葛根含药血清组升高PPARγ,ADPN和GLUT4表达(P0.01),PPARγ与后两者基因表达呈现一致性。脂代谢相关基因检测结果显示仅高剂量葛根含药血清显著升高LPL表达(P0.05);各剂量葛根含药血清下调FABP4表达(P0.01);中、高剂量的葛根含药血清上调FASn基因表达(P0.01)。该实验表明葛根提高IR-3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的摄取能力,降低细胞内TG积聚,干预多个重要糖脂代谢基因,推测以PPARγ为中心多靶点调节糖脂代谢改善脂肪IR。     

西洋参不同组织部位中皂苷生物合成相关基因的表达研究

通过皂苷含量与基因表达量之间相关性分析,获得西洋参中不同组织部位皂苷含量与人参皂苷生物合成相关基因表达之间联系。以四年生红果期西洋参的14个组织部位为材料,利用高效液相法和香草醛-硫酸比色法测定西洋参样本中6种单体皂苷（人参皂苷Rg1,Re,Rb1,Rc,Rb2,Rd）,分组皂苷和总皂苷含量;同时,利用实时荧光定量PCR法检测西洋参不同组织部位中7种（SQS,OSC,DS,β-AS,SQE,P450,FPS）人参皂苷生物合成相关基因的表达量。在西洋参中7种人参皂苷生物合成相关酶基因虽然参与人参皂苷合成,但是β-AS和P450基因的表达对单体皂苷,分组皂苷及总皂苷含量影响不显著;FPS,SQS,OSC,DS和SQE这5种基因表达对单体皂苷Re,Rg1,Rb1,Rd,分组皂苷PPD和PPT,单体总皂苷TMS和总皂苷TS含量影响显著或者极显著（P〈0.05或P〈0.01）。西洋参中部分单体皂苷,分组皂苷以及总皂苷的生物合成受着皂苷合成途径多种酶基因相互作用影响,生物合成途径中关键酶基因表达差异决定了西洋参中不同组织部位皂苷含量。因此,该研究通过相关性分析进一步明确了FPS,SQS,OSC,DS和SQE这5种酶基因是控制西洋参中皂苷合成的关键酶,它们通过集群协同表达互作的方式调控西洋参中人参皂苷的生物合成。     

黄芪-当归配伍对家兔血管内膜增生、平滑肌细胞表型转化和增殖的影响

目的探讨黄芪-当归配伍对家兔血管内膜增生、平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)表型转化和增殖的影响及作用机制。方法新西兰兔随机分为对照组、模型组、黄芪(1 g/kg)组、当归(1 g/kg)组、黄芪-当归(1∶1)组、黄芪-当归(1∶5)组、黄芪-当归(5∶1)组和阿托伐他汀(5 mg/kg)组。除对照组外,其余各组按颈总动脉套管法改良制备颈总动脉血管内膜增生模型,自术后第1天起给予2%高胆固醇饲料。各给药组于术后第1天起ig相应药物,1次/d,连续28 d。采用ELISA法检测各组家兔血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;采用Masson染色法观察各组家兔颈动脉病理变化及血管内膜增生程度;采用免疫组化法检测各组家兔颈动脉α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达情况;采用Western blotting法检测各组家兔颈动脉磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(proteinkinaseB,Akt)通路相关蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组家兔血清中TC、TG、LDL-C水平显著升高(P0.01),HDL-C水平显著降低(P0.01);颈动脉内膜增生明显,血管内膜面积(intimalarea,IA)、内膜厚度(intimal thickness,IT)、内膜面积增生率(hyperplasia ratio of intimal area,HRIA)和内膜厚度增生率(hyperplasia ratio ofintimalthickness,HRIT)均显著增加(P0.01);颈动脉VSMC收缩表型α-SMA表达显著降低(P0.05),合成表型OPN和细胞增殖标志物PCNA表达增加(P0.01);颈总动脉p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,黄芪-当归(1∶1、5∶1)组家兔血清中TC、TG和LDL-C水平显著降低(P0.05、0.01),HDL-C水平显著升高(P0.01);当归组血清中TG和LDL-C水平显著降低(P0.05、0.01);黄芪-当归(1∶1、5∶1)组家兔颈动脉IA、IT、HRIA、HRIT均显著降低(P0.01),颈总动脉α-SMA表达显著升高(P0.05、0.01),OPN和PCNA表达显著降低(P0.01);黄芪-当归(1∶5)组颈总动脉PCNA表达显著降低(P0.01);黄芪-当归(1∶1、1∶5、5∶1)组颈总动脉p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01)。结论黄芪-当归(1∶1、5∶1)能够有效改善家兔血管内膜增生、调节血脂、调控VSMC表型转化和增殖,其作用机制与抑制PI3K/Akt信号通路有关。     

淫羊藿苷对HCY诱导增殖血管平滑肌细胞GRP78表达的影响

目的:研究淫羊藿苷(ICA)对同型半胱氨酸(HCY)诱导的增殖血管平滑肌细胞(VSMC)葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因表达的影响,探讨ICA抗动脉粥样硬化的机制.方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48 h后,用流式细胞仪Annexin/PI双染法检测凋亡率;RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达;目的基因克隆、鉴定并测序.结果:0.2,0.4 mg·L~(-1)的IcA可显著促进兔VSMC凋亡,且存在剂量依赖性,与半胱氨酸组相比,差异显著(P＜0.01);RT-PCR结果显示:0.2,0.4 mg·L~(-1)的淫羊藿苷作用于VSMC 48 h后,GRP78 mRNA表达水平显著升高,与半胱氨酸组相比差异显著(P＜0.05);测序结果表明,来源于VSMC的全长648 bp的基因片断与兔葡萄糖调节蛋白78基因高度同源.结论:ICA促进GRP78 mRNA表达,诱导兔VSMC凋亡,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一.     

益气活血化瘀方药对血管胶原转换及相关基因表达的影响

目的：观察益气活血化瘀中药对大鼠血管细胞外基质(ECM)重塑的影响并探讨其分子机制。方法：采用^3H—TdR和^^3H—Pro掺入实验和血管壁羟脯氨酸含量测定检查血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活性及胶原合成与降解程度;应用Northern印迹和Ⅳ型胶原酶(MMP-2)酶图分析检测MMP-2和骨桥蛋白表达的变化。结果：益气活血化瘀中药可显著抑制bFGF对VSMC的促胶原合成作用,降低血管内皮剥脱大鼠血管壁胶原转换速率,下调MMP-2和骨桥蛋白在体外培养的VSMC及血管壁中的表达水平,抑制VSMC增殖。中药血清去蛋白后对VSMC的影响不发生明显变化。结论：益气活血化瘀中药通过调节MMP-2和骨桥蛋白基因表达及降低胶原转换速率可抑制和(或)减缓ECM重塑。     

参麦对“失血加内毒素”大鼠肝脏IKB和TIMP 1 mRNA的影响

目的观察参麦的抗休克效果,探讨其作用机制.方法大鼠随机分为实验对照组(control),双击组(HS+LPS),参麦注射液组(HS+LPS+SM).测定血清中NO含量,NOS活性以及肝脏IκB及TIMP 1 mRNA的表达.结果HS+LPS+SM组NOS活性,NO2/NO3含量显著低于LPS组(P＜0.05),HS+LPS+SM组IκB及TIMP1 mRNA表达明显增加.结论参麦可能是通过影响NOS活性降低NO的含量,并上调肝脏组织中IκB和TIMP 1 mRNA的表达,减轻内毒素引起的机体损伤.     

红芪多糖对非酒精性脂肪肝大鼠脂代谢及硬脂酰辅酶A去饱和酶1基因表达的影响

目的观察红芪多糖对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠脂代谢及调控基因硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD-1)表达的影响,探讨其对NAFLD的干预效应。方法受试动物按随机数字表法分为空白组和实验组,实验组采用高脂饲料喂养8周造模,随机分为模型组、阳性对照组、红芪多糖组,药物干预8周后分别检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平及三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)含量,采用半定量PCR检测肝脏SCD-1基因表达。结果与空白组比较,模型组大鼠血清ALT、AST和LDL-c、TC、TG升高(P0.05,P0.01),HDL-c降低(P0.01);SCD-1基因表达降低(P0.01);与模型组比较,红芪多糖组血清ALT、AST降低(P0.01),LDL-c、TC、TG降低(P0.05,P0.01),HDL-c升高(P0.01);肝组织SCD-1基因表达升高(P0.01)。结论红芪多糖具有调节NAFLD大鼠脂代谢紊乱和促进调控基因SCD-1表达的作用。     

益气活血中药对大鼠退变腰椎间盘中TGF-β_1、MMP-3的影响

目的探讨益气活血中药对大鼠退变腰椎间盘中TGF-β1、MMP-3的影响。方法将60只大鼠随机分为对照组(A组)、实验组(B组)、假手术组(C组),每组20只;从腹后外路腰椎间盘纤维环穿刺建立腰椎间盘退变模型,术后第1 d,实验组开始给予益气活血中药浓缩液灌胃,术后第4 w,8 w,每组取5只观察各组椎间盘组织形态学改变,其余5只取标本检测各组退变椎间盘中TGF-β1、MMP-3含量。结果与A组比较,B组大鼠腰椎间盘退行性改变较轻,大鼠腰椎间盘中TGF-β1含量减多(P0.05)、MMP-3含量减少(P0.05)。结论益气活血中药可能通过调节TGF-β1、MMP-3的含量,而影响椎间盘细胞外基质合成和降解,来延缓椎间盘退变。     

基于神经兴奋-抑制因子(Glu-GABA)受体含量及表达观察电针对于脑卒中痉挛状态大鼠黑质纹状体的影响实验研究

目的通过动物实验分析电针治疗对脑卒中痉挛状态下SD大鼠大脑神经兴奋因子谷氨酸与神经抑制因子γ-氨基丁酸含量及其相关活性基因表达的影响,来探讨电针缓解SCA(脑卒中痉挛状态)的疗效及其作用机制。方法每组8只,将32只SD大鼠随机分为电针组(模型+电针阳陵泉、曲池)、假手术组、模型组、空白组。运用在大脑中动脉线栓法制作SCA模型,行为学评分确认模型成功后开始与电针治疗,连续3天。酶联免疫吸附实验法(ELISA)检测黑质中谷氨酸Glu、γ-氨基丁酸GABA及其相关受体(GluR、GABAR)的含量,并通过RT-PCR检测黑质中谷氨酸基因mGluR1amRNA与γ-氨基丁酸基因GABABR1mRNA的相应表达。结果 (1)电针治疗前,模型组、电针组同空白组、假手术组进行比较显示,肌张力评分明显升高,统计学意义显著(P0.01);之后在电针治疗与电针治疗前肌张力评分差异明显,统计学有意义(P0.01)。(2)电针组同模型组比较谷氨酸及其受体含量明显降低(P0.01);而模型组与空白组、假手术组比较谷氨酸及其受体的含量均明显升高(P0.01)。(3)电针组同模型组比较γ-氨基丁酸及其受体含量均升高(P0.05);而模型组与空白组、假手术组比较γ-氨基丁酸及其受体含量均降低(P0.05)。(4)观察谷氨酸mGluR1amRNA表达的变化电针组与模型组比较相关基因表达明显减少(P0.01);模型组与空白组、假手术组比较表达明显增高(P0.01);而观察γ-氨基丁酸GABABR1mRNA表达的变化,电针组与模型组比较相关基因表达明显增加(P0.01);模型组与空白组、假手术组比较表达明显降低(P0.01)。结论通过电针治疗可以从谷氨酸和γ-氨基丁酸的基因、受体及其活性因子全面的调节,使大脑黑质内的Glu低表达和GABA的高表达,从而使病态的中枢神经系统的功能趋于恢复正常,证明了电针对脑卒中痉挛状态具有良好的治疗效果。     

参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎模型大鼠血清IL-1β、Il-4及Caspase-8基因蛋白表达的影响

目的研究参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠血清IL-1β、IL-4含量及结肠组织内Caspases-8基因及蛋白表达水平的影响。方法 60只SPF级Wistar大鼠按随机数字表法分为空白组与造模组,造模组采用复合因素法建立脾虚湿困型UC大鼠模型(造模时间3周),造模成功后将造模大鼠按随机数字表法分为模型组、参苓白术散高、中、低剂量组和阳性对照组。各组均按设定实验方法给药,连续3周;用ELISA法检测其血清内IL-1β、IL-4的表达;q PCR法检测结肠组织Caspase-8 mRNA表达变化,WB法检测Caspase-8蛋白表达变化。结果与正常组比较,模型组大鼠的一般生存状况较差,血清IL-1β含量明显升高(P0.05)、IL-4的含量明显降低(P0.05),组间差异有统计学意义,模型组大鼠Caspase-8基因表达及蛋白含量明显高于空白组(P0.01),组间差异有统计学意义;与模型组比较,参苓白术散治疗组IL-1β含量明显下降、IL-4含量明显上升,Caspase-8蛋白含量和基因表达水平明显降低,组间差异有统计学意义(P0.01)。结论参苓白术散具有改善脾虚湿困型UC大鼠一般生存状况,调节UC大鼠血清IL-1β、IL-4含量及下调Caspase-8基因和蛋白表达的作用。     

淫羊藿苷对HCY诱导增殖血管平滑肌细胞的促凋亡作用

目的:研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对同型半胱氨酸(homocysteinemia,HCY)诱导增殖血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的促凋亡作用。方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的淫羊藿苷共同培养48h后,用MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞仪Annexin/PI双染法检测凋亡率;比色法测半胱天冬蛋白酶3(Caspas-3)活性。结果:与空白组相比较,模型组OD值显著升高(P0.01),证明HCY可促进VSMC增殖;与模型组相比,高、中、低浓度的ICA都可抑制HCY所诱导的VSMC增殖(P0.05),抑制作用与ICA浓度呈正相关;淫羊藿苷各组凋亡细胞数明显增多,与HCY组相比差异显著(P0.01);与空白组相比较,模型组A405nm显著降低(P0.01),表明HCY可通过抑制Caspas-3酶的活性而抑制VSMC凋亡;与模型组相比,高、中、低浓度ICA组Caspas-3酶活性显著升高(P0.01)。结论:淫羊藿苷拮抗HCY诱导的兔VSMC增殖,促进其凋亡,激活caspase-3这一凋亡效应酶可能是其机制之一。