荧光法检测辐射所致肿瘤细胞DNA链断裂与3-氨基苯甲酰胺对重接修复的抑制

采用简化的DNA解旋荧光法(FADU),检测HeLa S3细胞在受到γ射线照射后的DNA链断裂,在10 Gy以内,剂量效应曲线呈线性。ADP-核糖基转移酶特异性抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3AB),在无毒浓度下可以抑制HeLa S 3细胞DNA链断裂重接,并可降低H3La S3细胞照后活存率。3AB单独与HeLa S 3细胞保温,不造成DNA链断裂,同时未见对细胞有毒性反应。3AB可以作为有希望的放疗增敏剂深入研究。     

哺乳动物细胞DNA辐射损伤与修复的研究Ⅱ 羟磷灰石离心-荧光法检测γ-线所致鼠血淋巴细胞DNA链断裂与重接

我们改进了能用于检测不分裂细胞DNA链断裂与重接的羟磷灰石离心—荧光法。证明了鼠血淋巴细胞能将γ—线引起的DNA断链重接。但受30Gy损伤的细胞修复不完全,继续保温至8小时又发生断裂,同时细胞活力下降,再次肯定我们以前提出的观点:即重接DNA分子的再断裂是一种不可逆的生化变化,它可能是细胞死亡的预兆。     

过热对细胞DNA辐射损伤与修复的影响Ⅰ 滤膜—荧光法及其在DNA结构检测中的应用

本文报道了用输液夹代替蠕动泵调控洗脱速度,改进和建立了能用于分裂和不分裂细胞DNA单链断裂检测的微孔滤膜硷洗脱—荧光法。对其中一些影响因素作了较详细的探讨。结果表明:改进后的方法灵敏、简便、重复性较好,可进行批量样品分析。并用此法研究了小鼠淋巴细胞型白血病L_(7712)细胞DNA辐射损伤与修复的规律。     

彗星分析法检测γ射线诱导的人肝癌细胞DNA链断裂

以人肝癌SMMC-7721细胞为材料,用慧星分析法研究了γ射线诱导的DNA链断裂,结果表明,随着剂量的增加,慧星逐渐变长,慧尾的细胞数也越来越多;慧尾与慧头的长度比和面积比与剂量成线性正相关,尤以长度比随剂量的增加变化为明显,可反映γ射线诱导的DNA链断裂程度。     

斜纹夜蛾核型多角体病毒DNA链断裂的辐射剂量响应

用琼脂糖凝胶电泳法测定了斜纹夜蛾核型多角体病毒（ＳＩＮＰＶ）经＾６０Ｃｏγ射线辐照产生的ＤＮＡ单链和双链断裂频数，得到在１－１００ｋＧｙ剂量范围内，ＤＮＡ单、双链断裂频数与吸收剂量的关系。实验结果表明，ＳＩＮＰＶ－ＤＮＡ对γ辐射的链断裂响应可以用单靶一次击中和二次击中复合模型描述，单链断裂是一次缶中效应，而病毒ＤＮＡ的双链断裂是一次击中和二次击中事件的共同效应，其中以二次击中事件效应为主。     

抗辐射菌LexA蛋白对γ射线所致DNA链断裂的影响

观察不同剂量γ射线、不同细胞数量和不同浓度的LexA蛋白对DNA链断裂与修复的影响。结果表明,在2—10Gy范围内,照射剂量与DNA断裂程度之间存在良好的线性关系,r=0.881,当细胞浓度为(OD600=0.4—0.6,相当于2×108细胞/mL),细胞液体积为0.1—0.5mL时,细胞DNA含量与相对荧光强度成正相关,结论抗辐射菌LexA蛋白对γ射线所致细胞DNA链断裂无明显的保护作用。     

单细胞凝胶电泳对辐射所致肿瘤细胞DNA损伤的研究

为探测肿瘤细胞的辐射敏感性,应用单细胞凝胶电泳技术和^3H-TdR掺入方法,对γ射线照射的K562、SMMC－772和HOS8603细胞株单细胞DNA链断裂的辐射效应进行了研究,实验表明上述3种肿瘤细胞在受到1－20Gy^60Coγ射线照射后细胞迁移率增高,迁移距离延长,并且DNA合成受到抑制,^3H-TdR掺入下降。     

过热对细胞DNA辐射损伤与修复的影响Ⅱ 过热对受照L_(7712)细胞DNA链断裂与重接的影响

本文应用我们改进后的滤膜—荧光法研究了过热温度对L_(7712)细胞DNA结构的影响及其对DNA辐射损伤与修复的影响。发现照前达到某一临界加热温度会增加对DNA链断裂的损伤作用.而照后加热则抑制DNA链断裂的重接修复。提示临床加热治疗肿瘤以加热→照射→再加热的处理次序可能会提高疗效。     

光敏剂(PSD-007)—γ射线辐射对小鼠白血病细胞DNA的影响

小鼠白血病L7712细胞经与不同浓度PSD—007保温后,该药能抑制细胞DNA的合成,在10μg/ml以下,随药物浓度增加抑制成比例增强,再增加药量,则抑制程度增加缓慢。可能与该药被细胞吸收结合部位渐趋饱和有关。经用PSD-007处理过的细胞在避光条件下,用γ射线照射10GY与未处理受10GY照射细胞的DNA链断裂程度无差别,表明PSD-007不能增加电离辐射对DNA的损伤效应;但是处理过的细胞在不避光条件下照射10GY,则DNA链断裂明显增加,与相应避光下照射细胞DNA损伤有显著差别;但经药物处理细胞只曝露在高压汞灯光照下却未检测出DNA的损伤,结果表明PSD—907只有在不避光下辐照才可增加γ射线对细胞DNA链断裂损伤。这种新现象的发现,提示在某些情况下利用光敏剂进行肿瘤放疗,以及在评价疗效上也许会有所裨益。作者对上述结果及检测中的影响因素进行了讨论。     

辐射致人胚肺细胞转化与DNA单链断裂

以细胞转化为实验模型，应用细胞生物学和分子生物学的实验手段，研究了辐射所致仍胚肺细胞体我转化以及辐射对细胞ＤＮＡ单链断裂损伤效应的规律。接受０．２５－５Ｇｙ＾３０Ｃｏγ射线作用后第２０代，各剂量组的人胚肺细胞半固体２琼脂培养集落均明显增加，说明人胚肺细胞在射线作用下发生了转化。而且细胞形态转化的出现具有时相性及作用剂理依赖性，采用缺口翻译技术检测细胞ＤＮＡ单链断裂损伤的结果表明，经不同剂量作用后，     

辐射诱发细胞内活性氧增高与DNA氧化损伤研究

用60 Coγ射线照射人支气管上皮细胞 (BEP2D)。细胞内过氧化氢 (H2 O2 )和超氧阴离子(O2 · - )分别用分子探针 2’ ,7’ -二氯荧光黄双乙酸盐 (DCFH -DA)和氢化乙锭 (HE)进行标记 ,并通过流式细胞仪测定荧光产物 2’ ,7’ -二氯荧光黄 (DCF)和溴乙锭 (EB)荧光强度进行相对定量分析。DNA氧化损伤产物 8-羟基脱氧鸟嘌呤 (OH8dG)含量用高压液相色谱结合电化学方法 (HPLC-ECD)测定。结果表明 ,60Coγ射线诱发BEP2D细胞内活性氧 (ROS)水平和OH8dG含量均显著增高 ,并有良好的剂量效应关系。进一步分析显示 ,60 Coγ射线照射诱发BEP2D细胞内ROS增高与DNA氧化损伤产物OH8dG含量呈明显正相关 ,提示辐射对细胞的损伤效应可能与其诱发细胞内ROS增高及其对DNA氧化损伤机制有关