磷脂酶D(PLD)在植物信号转导中的作用

磷脂酶D是植物中一类主要的磷脂水解酶。它的作用不仅在于通过水解细胞膜中的磷脂而影响到膜的结构、功能和稳定性。而且最近几年的研究发现它在细胞的信息传递、激素作用的发挥、膜运输、细胞增殖、细胞骨架组装、细胞的防御反应、分化和生殖等过程中都有重要作用。由于这一发现,使对磷脂酶D(PLD)的研究掀起了一场热潮。本文就PLD基因分离与克隆,PLD的特性和PLD在信号转导中的作用等研究进展情况作一介绍。     

磷脂酶D特性及其在功能性磷脂生产中的应用

磷脂酶D(Phospholipase D,PLD)是催化磷酸二脂键水解和碱基交换反应的一类酶的总称.生产中利用PLD的转酯作用来制备功能性磷脂.本文介绍了磷脂酶的分子结构、催化机理及功能,以及磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇(PI)的生产方法,包括物理萃取法、化学合成法和酶促合...     

香蕉磷脂酶D的纯化与生化特性分析

[目的]分离纯化香蕉磷脂酶D(PLD)并分析其生化特性,为深入研究香蕉PLD打下基础.[方法]采用硫酸铵沉淀结合柱层析法对香蕉PLD粗酶液进行纯化,考察反应体系中香蕉PLD蛋白含量、Ca2浓度、pH和反应时间对PLD活性的影响,明确PLD的生化特性.[结果]80％硫酸铵沉淀结合DEAE-sepharose CL-6B阴...     

磷脂酶D参与的植物信号转导

磷脂酶D（PLD）是植物中一种重要的磷脂水解酶。介绍了PLD的特性及其在植物信号转导中的作用。     

日本结缕草（Zoysia japonica）磷脂酶D基因部分 保守序列的克隆及其对机械损伤的响应

以日本结缕草Zenith为材料,通过同源克隆的方法克隆出其磷脂酶D(PLD)基因部分保守序列,序列长399 bp,并通过实时荧光定量PCR检测PLD基因在机械损伤胁迫下随时间变化的表达模式.结果表明,磷脂酶D在胁迫2h内大量表达,随后逐渐降低,在9h已接近于对照水平,说明PLD基因在损伤初期大量参与了应对机械损伤胁迫的防御与修复过程,在损伤后期其作用减弱或被代替;电导率的测定结果表明,细胞膜结构在胁迫初期遭到极大程度的破坏,胁迫9h后膜损伤程度开始减轻.结合PLD基因和电导率的表达模式,推测PLD基因在6h内会激活一系列感受信号及下游信号分子,9h后其相应防御机制发挥作用来减轻胁迫造成的损害.     

黄瓜磷脂酶D基因片段克隆及其反义表达载体的构建

采用RT-PCR方法,从新泰密刺黄瓜的幼叶中得到长为1018 bp的cDNA片段,编码339个氨基酸,与GenBank中甜瓜磷脂酶D基因相比核苷酸同源性为96%,氨基酸同源性为97%.克隆片段经双酶切消化,反向插入到植物表达载体pBI121的CaMV 35S启动子和NOS终止子之间,构成磷脂酶D基因的反义表达载体.     

检测磷脂酶A2的气相色谱法的建立与应用

磷脂酶A2(Phospholipase A2,PLA2),即磷脂-2-酰基水解酶(EC 3.1.1.4),广泛存在于生物体内,是磷脂分解代谢中起重要作用的酶。它催化甘油磷脂C-2位脂肪酸的水解反应,生成溶血磷脂和脂肪酸。PLA2具有重要的生理意义,在代谢过程中能够消化磷脂分子,而且在激素的信号传递以及发炎过程等方面都起重要作用。PLA2也具有广泛的应用价值,可以用于生物膜构造和机能的研究、溶血磷脂的制造、油脂精炼、疾病治疗、饲料添加剂制造等方面。     

海藻糖的特性及其在植物抗逆中的应用

干旱、盐碱和冻害是限制植物生长发育的主要逆境因子,海藻糖是一种非还原性二糖,在胁迫条件下可有效维持生物膜、细胞内活性物质的稳定性,从而提高植物对干旱等非生物胁迫的耐受能力。结合海藻糖的理化性质,综述了海藻糖在提高植物抗旱、耐盐等抗逆性方面的研究进展。     

拟南芥非特异性磷脂酶C2的磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C活性研究

在拟南芥中有6个非特异性磷脂酶C(NPC1~NPC6)。GUS染色显示NPC2在根中主要是在根尖分生区和伸长区表达,在成熟区主要是在维管组织中表达;在叶中,NPC2主要在发育的叶片中表达,随着叶片成熟进程,NPC2基因的表达量逐渐降低。npc2-1突变体的PC-PLC活性比野生型降低47.7%,互补的植物能不同程度地恢复突变体的PC-PLC酶活性。这说明NPC2具有PC-PLC酶活性。NPC2基因在侧根形成位点的表达虽然与IAA诱导的侧根形成紧密相关,但外源IAA处理野生型和突变体之间的侧根密度、主根长度和侧根总长无明显区别。     

磷脂酶D高效产生菌的筛选及鉴定

采用蛋黄平板法,从河南某香油作坊附近土样中筛选到2株降解磷脂的菌株X2和X10,产物分析和酶活测定表明,X2所产磷脂酶主要为磷脂酶D,酶活3.2 U/mL,X10除产少量磷脂酶D外,可能还产磷脂酶A.根据形态观察、生理生化特征和Biolog自动微生物分析系统的鉴定,初步判定X2为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus),X10为嗜麦芽糖寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia).     

蟠桃磷脂酶D基因RNAi表达载体构建

[目的]构建蟠桃磷脂酶D基因的RNAi表达载体.[方法]以英格尔蟠桃为材料,将CTAB改良法提取的蟠桃总RNA反转录成cDNA作为模板,通过RT - PCR扩增约347 bp的保守片段,将目标片段插入到pSK - int中间表达载体中,获得pSK - PLD - RNAi中间表达载体,然后将其转入植物双元表达载体pCAMBI1301中,构建该基因的shRNAi表达载体pCAMBIA - PLD - RNAi.[结果]经限制性内切酶酶切和测序鉴定证明蟠桃磷脂酶D基因的RNAi表达载体pCAMBIA - PLD - RNAi已构建成功.[结论]蟠桃磷脂酶D基因的RNAi表达载体的构建为进一步通过RNAi技术延长蟠桃果实的贮藏寿命奠定了基础.     

微生物磷脂酶C检测方法的研究进展

介绍了磷脂酶C检测方法的研究进展,并对各检测方法的特点进行了比较。     

植物磷脂酶D的分子生物学研究进展

综述了植物磷脂酶D（PLD）的基因研究进展及PLD的分类、结构和功能。并对PLD的应用前景进行了展望。     

红河干热河谷不同植物光合作用及抗逆生理特性

采用LI-6400XT便携式光合测定仪测定4种植物山黄麻(Trema tomentosa(Roxburgh)H.Hara)、天干果(Buchanania latifolia Roxh.Hort.Beng)、虾子花(Woodfordia fruticosa(L.)Kurz)及车桑子(Dodonaea viscosa(L.)Jacq)光合指标,并采集新鲜叶片,低温保存,带回实验室后测定抗氧化酶活性、超氧阴离子自由基(O-2·)、脯氨酸(Pro)及叶绿素质量分数.结果表明:4种植物的净光合速率(Pn)随着光合有效辐射(PAR)的增强而增加,在达到光饱和点之后没有下降,不同植物的最大净光合速率(Pmax)与表观量子效率由大到小均为山黄麻、虾子花、车桑子、天干果,虾子花的光饱和点(LSP)最高,山黄麻的光补偿点(LCP)最低;4种植物的净光合速率(Pn),蒸腾速率(Tr)及气孔导度(Gs)日变化响应曲线呈现相似性,表现为"双峰"型,胞间CO2摩尔分数(Ci)大体呈现"V"形趋势;山黄麻与车桑子的叶绿素a、类胡萝卜素和总叶绿素质量分数与其他两种植物间呈显著差异(P<0.05),4种植物的叶绿素b之间无显著差异(P>0.05);4种植物的超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶及脯氨酸质量分数间无显著差异(P>0.05),表现出适应干热河谷的特征.     

水稻磷脂酶A活性测定方法的研究

为了优化水稻磷脂酶A活性测定方法,研究了多种因素对水稻磷脂酶A活性的酸碱滴定测定方法的影响.结果表明水稻磷脂酶A活性酸碱滴定法测定的适宜条件为:起始pH8.0,反应温度40℃,20.0 mL底物,4.0mL酶的粗提液,提取缓冲液的体积与叶片样品重量的比值(mL/g)为2.5,反应时间7h.     

尿素与蚯蚓水解液混合物的活性成分及其抗逆促生效果

以尿素为裂解物制备蚯蚓水解液,研究其主要活性成分及其在植物抗逆促生方面的效果.结果表明:蚯蚓与尿素按质量比5∶1混合制备的新鲜蚯蚓水解液在稀释2 000倍后施用,可基本解除对种子萌发的影响,显著提高叶片SPAD值,促进植株根系生长.该水解液能显著抑制常见的植物病原菌;稀释10倍时喷施,对番茄灰霉病的防治效果可达74.8％,且能显著提高植株抗逆相关酶活性,使植株保持更高的抗氧化能力.Label-Free定量蛋白质组学研究表明,蚓激酶、α-淀粉酶、纤维素酶、ATP结合蛋白、铁蛋白和超氧化物歧化酶等是主要的具有分子功能的蛋白质.这些蛋白质在大分子物质代谢、应对和抵抗外界不良刺激以及参与细胞杀伤等过程中发挥着重要作用.     

叶面喷施抗逆制剂对小麦灌浆特性及产量的影响

为探讨春季低温灾害发生后喷施抗逆制剂对小麦产量和生长发育的影响,在大田低温冻害发生后,以5种化学调控剂为材料对济麦22麦田喷施,研究喷施制剂对小麦灌浆特性、光合性能、产量及其构成因素的影响。结果表明,叶面喷施5种抗逆制剂能延长灌浆时间,平均灌浆速率较对照显著提高,以天达2116和kn-8表现较好;光合速率以旱地龙和kn-8表现较好。各处理的穗数均比对照显著提高,以kn-8最高,比对照提高10.28%;穗粒数均高于对照,以kn-8增幅最大,且差异达到显著水平;千粒质量增幅为1.17～2.41 g,以天达2116增加最多,kn-8次之,二者与对照间差异均达显著水平;产量比对照提高0.14%～9.34%。低温灾害后喷施化学调控剂是灾后恢复生长、提高产量的有效补救措施,推荐喷施抗逆制剂旱地龙和kn-8。     

桃果实磷脂酶Dα基因的电子克隆及序列分析

 【目的】克隆桃果实中的磷脂酶Dα基因,并对其进行序列分析和低温表达模式分析。【方法】采用电子克隆与RT-PCR相结合的方法分离桃果实PLDα 基因cDNA全长序列;半定量RT-PCR和Northern杂交检测目的基因在桃果实低温贮藏过程中的表达情况。【结果】成功获得全长为2 859 bp的桃果实PLDα基因序列,该序列具有完整的开放阅读框架（ORF,172～2 604 bp）,编码810个氨基酸。对ORF进行的RT-PCR验证结果与电子克隆序列一致。序列分析显示,桃果实PLDα基因编码的氨基酸序列与草莓、番茄、葡萄等物种的磷脂酶Dα氨基酸序列之间具有高度的保守性,含有N端C2结构域及两个保守的活性中心。半定量RT-PCR和Northern杂交分析显示,桃PLDα基因在低温贮藏过程中被诱导表达。【结论】本研究首次通过电子克隆的方法获得了桃果实PLDα基因的全长序列,揭示了其序列特征,并初步明确了其在桃低温贮藏期间的表达模式。结果证明基于EST数据库的电子克隆已经是获取植物新基因的有效途径,同时为更深入研究桃果实的耐冷性及低温贮藏方法奠定了基础。     

水稻主茎功能叶光合特性的研究

水稻主茎功能叶的净光合速率呈有规律的双峰曲线变化,不同熟期品种第一峰值的出现时期不同但第二峰值均出现在抽穗期,两峰之间的低谷在减数分裂期。不同品种之间净光合速率大小及特性差异显著。叶片的净光合速率与单位面积氮、钾含量呈极显著及显著的正相关。水稻单叶光合量大小是随出叶顺序而递增的,叶面积的大小对光合产物的贡献起主要作用。