miR-9-5p靶向调控ZAK对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:阐明miR-9-5p通过靶向调控ZAK表达从而影响结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的分子机制。方法:通过qPCR、Western blot检测结直肠癌细胞系(HCT116、SW260、HT29及LoVo)及结直肠癌患者组织样本中miR-9-5p表达水平及ZAK的mRNA和蛋白表达水平。生物信息学方法分析miR-9-5p与ZAK结合的靶向序列。双荧光素酶基因报告实验检测miR-9-5p对ZAK的靶向调控关系。脂质体法将miR-9-5p mimic或/和ZAK质粒共转染结直肠癌细胞系HCT116及SW620,通过CCK-8及克隆形成实验观察miR-9-5p/ZAK信号轴对细胞增殖的影响,通过Transwell观察对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:与人正常上皮细胞系相比,在结直肠癌细胞系中ZAK的mRNA及蛋白水平显著上调(P<0.05);在结直肠癌临床组织样本中,ZAK蛋白水平亦显著上调(P<0.05);miR-9-5p的表达水平在癌细胞系及组织样本中下调(P<0.05)。双荧光素酶报道基因实验显示miR-9-5p能显著影响ZAK 3’UTR野生型表达载体的荧光素酶...     

藻蓝色素蛋白通过调控miR-642a-5p抑制LTEP-a2细胞的增殖和迁移

研究藻蓝色素蛋白抑制非小细胞肺癌LTEP-a2体外增殖迁移的机制.以LTEP-a2细胞为模型,采用高通量miRNA转录组学对藻蓝蛋白处理后细胞中差异表达的miRNA进行了筛选;对筛选出的差异miRNA,利用体外转染mimics的方法对细胞的增殖、迁移能力进行验证.研究结果显示,藻蓝蛋白处理LTEP-a2细胞后能够显著增加细胞内miR-642a-5p的表达水平;过表达miR-642a-5p能够显著抑制细胞的体外增殖、迁移能力;此外,藻蓝蛋白可以通过上调miR-642a-5p表达抑制核受体NF-κB信号通路,降低蛋白磷酸化水平,进而抑制LTEP-a2细胞的增殖迁移能力.研究能够为藻蓝色素蛋白的应用以及非小细胞肺癌的治疗提供一定的理论基础.      

miR-20a-5p表达对胃粘膜相关组织淋巴瘤增殖的影响及其机制研究

目的 探讨miR-20a-5p的表达对胃粘膜相关组织(MALT)淋巴瘤的增殖影响及其相关分子机制.方法 收集18例人胃MALT淋巴瘤组织及邻近正常胃粘膜组织.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织中miR-20a-5p的相对表达;应用miR-20a-5p mimic和miR-20a-5p inhibit...     

miR-429对甲状腺癌细胞增殖迁移侵袭能力的影响

目的 探讨miR-429对甲状腺癌细胞增殖迁移能力的影响及其作用机制.方法 将甲状腺癌细胞分为观察组(anti-miR-429质粒转染)、阴性对照组(miR-429空载体质粒转染)、空白对照组(不进行转染),分别进行CCK-8细胞增殖实验、Transwell细胞迁移和侵袭实验.RT-PCR法检测miR-429表达水平,...     

miR-194-5p通过Wnt5a抑制肝星状细胞活化

为研究miR-194-5p对肝星状细胞(HSCs)活化的影响及作用机制,采用CCK-8、β-半乳糖苷酶染色、Transwell、划痕、集落形成实验和RT-qPCR、Western blot分别检测miR-194-5p对LX-2细胞生物学特性、细胞活化标志物和靶基因表达的影响,并用生物信息学和双荧光素酶报告实验确定miR-194-5p靶基因.结果显示：miR-194-5p抑制LX-2细胞增殖、细胞集落形成、迁移能力以及LX-2细胞中活化标志物的表达,促进LX-2细胞衰老;Wnt5a为miR-194-5p的直接靶基因.研究表明miR-194-5p通过靶定Wnt5a抑制LX-2细胞活化,miR-194-5p和Wnt5a可能是治疗肝纤维化新的靶点.     

干扰FOS表达对KSHV感染的神经元细胞增殖的影响

目的探讨在卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma associated herpesvirus,KSHV)感染的神经元细胞中干扰FOS基因表达,对细胞增殖和KSHV病毒的影响。方法采用强力霉素和丁酸钠诱导islk.219细胞的病毒r KSHV.219进入裂解态并提取病毒,采用病毒提取液感染SH-SY5Y细胞,采用荧光显微镜观察GFP确定感染成功,采用real time-PCR检测KSHV感染与未感染SH-SY5Y细胞FOS基因的表达;构建FOS基因的干扰质粒;并与KSHV感染的SH-SY5Y细胞中干扰FOS的表达,采用real time-PCR和Western blot确定干扰效率,采用real time-PCR检测干扰与未干扰细胞中KSHV病毒因子LANA、RTA以及K8. 1的mRNA表达情况,采用MTT法检测细胞增殖能力,PI染色结合流式细胞技术检测细胞周期;结果重组病毒r KSHV. 219能够成功感染SH-SY5Y细胞,FOS基因在KSHV感染的SH-SY5Y细胞中表达上调(P0.05);干扰FOS基因后,FOS基因的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05); KSHV病毒因子LANA、RTA以及K8. 1的mRNA表达水平均有降低(P0.05); MTT结果提示,干扰FOS表达抑制了KSHV感染的SH-SY5Y细胞增殖(P0.05);干扰48 h后感染细胞周期被阻滞在G0/G1期(P0.05)。结论 KSHV能够感染神经元细胞SH-SY5Y,干扰FOS表达能抑制感染细胞的增殖,阻滞细胞周期G0/G1期的进程,靶向干扰FOS在KSHV感染引起的神经系统疾病的治疗中具有一定的价值。     

积雪草苷调控miR-342-5p/AQP3轴保护IL-1β诱导的软骨细胞损伤

目的 探讨积雪草昔(Ass)对白细胞介素1B(IL-1B)诱导的软骨细胞损伤的影响及作用机制。方法 不同 浓度的Ass作用IL-1B诱导软骨细胞24 h,流式细胞仪检测细胞凋亡,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中白细 胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-342-5p和水通道蛋白3 (AQP3)mRNA表达水平,Western Blot法检测B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)和AQP3蛋 白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-342-5p与AQP3靶向关系。转染miR-342-5p抑制剂或AQP3过表达载体至软骨细胞,上述相同方法检测抑制miR-342-5p表达或AQP3过表达对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及IL- 6和TNF-α表达的影响。结果 Ass可抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡率、Bax蛋白、IL-6和TNF-α表达及miR- 342-5p表达(P <0. 05),促进Bcl-2蛋白、AQP3 mRNA和蛋白表达(P <0.05)。miR-342-5p在软骨细胞中负调控 AQP3表达。抑制miR-342-5p或AQP3过表达后,IL-1&诱导的软骨细胞凋亡率、Bax蛋白、IL-6和TNF-α表达降低 (P <0. 05) ,Bcl-2蛋白表达升高(P <0.05)。抑制AQP3表达逆转了抑制miR-342-5p对IL-1β诱导的软骨细胞凋 亡、Bax和Bcl-2蛋白及IL-6和TNF-α表达的影响。结论 Ass可抑制IL-1β诱导软骨细胞凋亡和炎症反应,其可 能通过调控miR-342-5p/AQP3保护软骨细胞损伤。     

miR-17-92和p21对E2F-Rb网络动力学的影响

转录因子E2F对于细胞周期进程具有重要的作用,它调控着细胞的增殖和凋亡。而p21和miR-17-92都是细胞周期进程的有效抑制剂。为了进一步探究p21和miR-17-92对于E2F的调控机制,提出了E2F/Myc/miR-17-92/p21网络模型。通过数值模拟发现miR-17-92、p21可调控E2F的开关转换值和跳跃的幅度,还可以引导细胞进出癌区且miR-17-92和p21的共同调控比起各自调控更有效。这很可能为癌症的治疗提供新思路。     

miR-96对牦牛颗粒细胞凋亡和增殖的影响

为研究牦牛卵巢组织内miR-96对颗粒细胞凋亡、增殖及激素分泌的影响,本试验通过采集成年牦牛卵巢内颗粒细胞,分离培养后将其分为4个处理组,分别转染miR-96模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor)及两者的阴性对照(NC)后培养并检测颗粒细胞受到的影响。使用流式细胞术和CCK-8法对细胞凋亡和增殖情况进行检测,采用qPCR和Western Blot检测凋亡相关基因表达情况,ELISA检测转染后类固醇激素分泌情况。结果表明：miR-96-mimics使颗粒细胞凋亡发生抑制促进细胞增殖,并促使凋亡相关基因Bcl-2表达极显著升高,Bax表达极显著降低;ELISA检测类固醇激素水平变化显示,与mimics NC组相比miR-96-mimics组细胞培养液中孕酮(P4)分泌水平极显著降低,雌二醇(E₂)分泌水平极显著升高;与inhibitor NC组相比miR-96-inhibitor组孕酮(P4)分泌水平极显著升高,雌二醇(E₂)分泌水平显著降低。miR-96可促进颗粒细胞增殖并抑制凋亡,同时会对生殖激素分泌产生影响,从而参与调控牦牛卵...     

CKLF1过表达对肾癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及机制研究

肾癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤.趋化素样因子1(chemokine-like factor 1, CKLF1)在多种恶性肿瘤中呈高表达,本研究旨在探讨CKLF1在肾癌细胞ACHN中过表达后,肾癌细胞ACHN增殖、迁移和侵袭能力的变化及其发生机制.利用4D核转染技术将实验组和对照组质粒分别转染肾癌ACHN细胞,实现该因子在肾癌细胞中的过表达.显微镜下,通过观察绿色荧光蛋白在视野细胞中的表达比例判定转染效率.利用Incu Cyte S3活细胞动态成像与分析系统评估细胞的增殖情况.划痕和transwell实验被用于评估CKLF1过表达后,肾癌细胞迁移和侵袭能力的变化情况.Western blot法检测CKLF1过表达后,蛋白CyclinD1、MMP2表达情况.动态细胞监测系统检测结果显示,与对照组相比较,实验组细胞的增殖活性明显高于对照组.CKLF1过表达后,实验组肾癌细胞的迁移和侵袭能力均明显升高,并且CyclinD1和MMP2蛋白表达水平明显高于对照组.CKLF1可能通过促进CyclinD1的表达增强细胞的增殖活性,通过促进MMP2蛋白的表达,增强ACHN细胞的迁移和侵袭能力.在肾癌的发生...     

SLC44A5对肺腺癌细胞迁移影响

肺癌是发病率和死亡率最高的恶性肿瘤.SLC44A5是一种胆碱转运蛋白,其与肿瘤关系的相关报道较少.有报道显示其与肝癌的发生发展有关,然而其在肺癌中的作用尚未有相关报道.为探讨SLC44A5的影响,使用人肺腺癌细胞系H1299和H1792构建SLC44A5低表达细胞系,利用MTT法证明敲低SLC44A5会抑制细胞增殖.使用细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验证明敲低SLC44A5抑制细胞迁移.结果表明SLC44A5可能参与了肺癌的转移,具有成为肿瘤治疗分子靶点的潜力.     

Ezrin蛋白对施旺细胞增殖和迁移的影响

施旺细胞参与髓鞘的形成与神经损伤后再生,涉及细胞的增殖和迁移能力。Ezrin蛋白对施旺细胞增殖和迁移的调控机制尚不明确。本文在RSC96细胞中对Ezrin基因干扰和过表达,结合qRT-PCR技术、MMT法、western印迹法和细胞划痕实验,检测Ezrin表达量的变化对RSC96细胞增殖和迁移能力的影响。结果显示Ezrin表达下调能够显著抑制RSC96细胞的增殖和迁移能力,过表达Ezrin则不影响RSC96细胞增殖能力但明显提高其迁移能力。此外,利用Y27632抑制剂降低Ezrin的Thr567磷酸化水平,同样不影响RSC96细胞增殖,但显著抑制其迁移能力。另外,Ezrin表达下调或降低Ezrin的Thr567磷酸化,能抑制PI3K、Akt及ERK的活性。以上结果提示,Ezrin活化激活PI3K/Akt与MAPK/ERK信号通路,对施旺细胞增殖和迁移能力具有促进作用。     

Hela细胞中突变PSF蛋白对细胞增殖迁移及可变剪接的影响

PSF作为真核细胞中的抑癌蛋白,在Hela细胞发生基因突变导致其蛋白功能改变.为了阐明突变体PSF蛋白在肿瘤细胞的作用,本文分别采用siRNA干扰、细胞生长曲线、细胞划痕等实验检测muPSF对Hela细胞增殖及迁移的影响,半定量PCR实验分析PSF调控的下游靶基因的可变剪切情况.研究结果显示,当通过siRNA干扰muPSF的表达后Hela细胞的增殖迁移能力下降,高表达突变体PSF可增强Hela细胞的增殖与迁移,半定量PCR实验分析PSF下游调控基因显示muPSF可以改变增殖和迁移相关基因的可变剪接形式.因此,我们的实验证明,Hela细胞中muPSF通过调控下游靶基因的可变剪切影响Hela细胞的增殖和迁移能力.     

Napabucasin对结直肠癌细胞增殖及迁移的影响

为了探究新型小分子抑制剂Napabucasin对结直肠癌细胞增殖以及迁移的影响. 首先通过分子模拟对接分析了Napabucasin与STAT3蛋白的互作机制. 然后利用克隆形成实验、细胞划痕实验等方法在多种结直肠癌细胞系中证明了Napabucasin能够显著抑制结直肠癌细胞的集落形成能力以及迁移能力. 进而使用Napabucasin与Wnt信号通路激活剂Wnt agonist 1共处理结直肠癌细胞HCT116,结合蛋白质印迹实验发现,Wnt信号通路介导了Napabucasin对结直肠癌细胞的迁移以及增殖的抑制过程. 研究结果显示,Napabucasin能够在体外抑制结直肠癌细胞的增殖能力以及迁移能力,并且Wnt信号通路参与介导了这一抑制过程.     

c-Myc蛋白对三阴性乳腺癌增殖迁移的影响

目的:研究c-Myc蛋白对三阴性乳腺癌增殖迁移的影响.方法:应用shRNA进行慢病毒包装,构建低表达稳转株,再用westernblot验证敲低效果.利用MTT验证c-Myc蛋白对三阴性乳腺癌增殖的作用;应用划痕实验、Transwell Assay证明c-Myc蛋白在肿瘤转移中的影响.结果:在myc基因敲低后,c-Myc蛋白表达量明显降低,增殖能力明显下降,迁移能力变弱.结论:c-Myc蛋白作为原癌基因的翻译产物对三阴性乳腺癌的增殖、迁移具有促进作用.     

重组人三叶因子3对细胞的增殖及迁移的影响

将重组人三叶因子3(Trefoil factor 3, TFF3)作用于人结肠肿瘤细胞,研究重组蛋白对细胞增殖的影响,结果发现该蛋白在较低的浓度(10～50 mg/L)下对细胞的增殖基本没有影响,在100～200 mg/L浓度下该蛋白对细胞仅有微弱的刺激作用,提高浓度对细胞增殖作用没有改变。同时研究了TFF3对损伤的单层结肠肿瘤细胞迁移的影响,发现TFF3对细胞有明显的促进迁移作用。     

miR-30a-3p对食管鳞癌ECA-109细胞侵袭和增殖能力的影响及生物信息学分析

为探讨miR-30a-3p对食管鳞癌细胞生物学行为的影响及机制,miR-30a-3p转染ECA-109细胞后,实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-30a-3p表达水平,Transwell小室检测细胞侵袭能力,CCK-8检测细胞增殖能力,通过生物信息学预测miR-30a-3p的靶基因,分析靶基因集合的基因功能及通路富集。结果显示,miR-30a-3p抑制ECA-109细胞侵袭能力(P0.05),但对增殖能力的影响无统计学意义(P0.05)。利用系统的生物信息学预测得到与ESCC相关的靶基因77个,其中在食管癌中上调的差异基因42个,下调的差异基因35个。miR-30a-3p的靶基因多集中于迁移、黏附连接、外泌体及蛋白代谢等过程;靶基因显著富集于Ras信号通路。由此可知:miR-30a-3p可抑制ESCC细胞的侵袭能力,分析得出的参与侵袭迁移及其他功能的靶基因为进一步研究提供了方向。     

Linifanib和Tivozanib对肺癌细胞增殖的影响

为探讨小分子化合物Linifanib和Tivozanib对肺癌细胞A549和H358增殖的影响,以不同浓度Linifanib和Tivozanib预处理细胞48 h,用MTT法检测了细胞存活率,并通过流式细胞仪检测了细胞周期和凋亡情况,用RT-PCR检测了肿瘤抑制因子P21的mRNA表达量.结果表明:Linfanib和Tivozanib能抑制肺癌细胞的增殖,呈现剂量依赖性.Linifanib能诱导细胞凋亡,同时引起细胞周期在G2/M期阻滞.Tivozanib主要引起细胞周期在G2/M期阻滞.Linifanib和Tivozanib均能引起A549和H358细胞中P21的mRNA表达量显著升高,说明Linifanib和Tivozanib能抑制肺癌细胞A549和H358的增殖.