门诊患者尿液分离大肠埃希菌喹诺酮类耐药机制研究

目的回顾性分析社区尿液分离大肠埃希菌喹诺酮类抗菌药物耐药机制,为临床抗感染治疗提供参考。方法收集2013年6月-2015年6月门诊就诊患者尿液标本中分离的环丙沙星耐药大肠埃希菌,经VITEK 2全自动鉴定药敏仪进行鉴定和药敏分析,PCR检测质粒介导喹诺酮耐药基因qnr A、qnr B、qnr C、qnr D、qnr S、aac(6')-Ib-cr、qep A、oqx A、oqx B,同时测序分析喹诺酮耐药决定区gyrA、gyrB、parC、parE突变情况。结果共分离到大肠埃希菌131株,其中环丙沙星耐药56株,耐药率为42.7%,qnr S检出1株(1.7%)、oqx A及oqx B阳性各4株(7.1%)、aac(6')-Ib-cr阳性26株(46.4%)、qnr A阳性10株(17.9%)、qnr B阳性3株(5.4%),未检出qnr C、qnr D、qep A。此外,gyrA基因发生Ser83→Leu突变3株(5.4%)、gyrB发生基因Asp87→Leu突变3株(5.4%);parC基因发生Ser80→Ile突变2株(3.6%)。结论门诊患者尿液分离大肠埃希菌喹诺酮类耐药机制以质粒介导为主,尤其是aac(6')-Ib-cr耐药基因。由于质粒介导喹诺酮耐药基因易在不同菌株中播散,应加强监测。     

耐喹诺酮类大肠埃希菌耐药机制的研究

目的探讨耐喹诺酮类大肠埃希菌的耐药机制。方法收集天津市第一中心医院2004年3月-2005年10月临床分离的大肠埃希菌,并随机选取40株作为研究对象,通过K-B药片试纸法和微量稀释法测40株目的菌株的耐药性;PCR扩增耐药株的gyrA QRDR区和parC基因,进行PCR-SSCP分析;同时,PCR扩增marOR基因,在耐药株中随机选取进行测序,检测marOR基因突变情况。结果37株对耐喹诺酮类菌株均出现了gyrA基因突变,除常见氨基酸改变外,还发现Asp87→Asn、Ala84→Pro;36株耐喹诺酮菌株发生了parC基因突变,只对萘啶酸耐药,对环丙沙星中介、氧氟沙星、加替沙星敏感的ECO24未出现parC基因突变;只对氟喹诺酮类耐药的ECO11未出现marOR区突变;存在多重耐药的ECO5 marOR区发现6处突变,且1 879 bp处的突变改变了marOR的终止密码子。结论gyrA和parC基因突变引起大肠埃希菌产生耐药,gyrA基因突变是产生对氟喹诺酮类耐药的主要原因,parC基因突变可引起菌株对氟喹诺酮类药物的高水平耐药,marOR的多位点突变在多重耐药机制中有一定的作用。     

大肠埃希菌对喹诺酮类药物的耐药机制分析

目的分析大肠埃希菌对喹诺酮类药物的耐药机制。方法菌株来源于2013年1月-2016年12月医院患者分离的大肠埃希菌348株,排除同一患者同一部位分离出的重复病原菌,采用琼脂稀释法,按照《美国临床实验室标准协会》(CLSI)2007年标准计算分离菌株的最低抑菌浓度值(MIC)。筛选出耐药菌株,加入7种常用抗菌药物,测定其他抗菌药物对喹诺酮类耐药菌株的药敏情况。提取耐药大肠埃希菌株的DNA,加入适宜引物,进行扩增,并进行比对分析。结果在分离的大肠埃希菌中为喹诺酮类非敏感菌株87株占25.00%,87株喹诺酮类非敏感菌株对庆大霉素、阿米卡星、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢曲松、头孢他啶6种抗菌药物的耐药率均超过50.00%。大肠埃希菌中gryA耐药基因的突变主要发生于低水平的MIC耐药菌株,而parC和PMQR的耐药基因均主要发生在MIC值在4~8μg/ml、16~64μg/ml两个浓度区间的耐药菌株。gryA基因S83L、D87N两个位点,及gryC基因的S80I、A108V两个位点的突变情况在MIC值各个范围内突变发生情况无显著性差异。结论喹诺酮类抗菌药物非敏感的大肠埃希菌对很多其他的抗菌药物也具有耐药性,大肠埃希菌中的耐药基因同喹诺酮类抗菌药物的MIC值分布上具有一定的相关性。     

大肠埃希菌耐药特征及质粒介导喹诺酮耐药基因分布

目的调查临床分离大肠埃希菌的耐药特征及质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因流行状况。方法收集本院住院患者分离的大肠埃希菌191株,经VITEK 2全自动鉴定药敏仪进行鉴定和药敏分析,PCR检测PMQR基因qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、aac(6′)-Ib-cr、oqxA、oqxB、qepA。接合试验分析PMQR基因的转移性。结果 191株菌株对美洛培南和亚胺培南均敏感。对阿米卡星、奈替米星、阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦和头孢西丁耐药率均低于30%。环丙沙星耐药率为64.4%,PMQR基因检出率为37.7%,123株环丙沙星耐药株中qnrA阳性26.0%、qnrB阳性4.9%、qnrS阳性1.6%、aac(6′)-Ib-cr阳性43.1%、oqxA阳性8.9%、qepA阳性4.9%,未检出到qnrC、qnrD和oqxB。其中40株(32.5%)只检测到单一基因,其余32株(26.0%)检测到2种或2种以上PMQR基因。接合试验证明43株细菌携带的PMQR基因可转移。结论本院分离大肠埃希菌耐药较严重且呈多药耐药,对环丙沙星耐药较高,PMQR基因以qnr和aac(6′)-Ib-cr为主。     

大肠埃希菌对氟喹诺酮类的耐药性及其机制研究

目的 探讨大肠埃希菌(ECO)对氟喹诺酮类药物的耐药率及耐药机制.方法 K-B法测定100株ECO对5种氟喹诺酮抗菌药物的耐药性,试管稀释法测定耐环丙沙星和左氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC);错配PCR技术检测耐环丙沙星ECO gyrA基因和parC基因的突变.结果 100株ECO中耐环丙沙星有65株;环丙沙星MIC50、MIC90分别是32、128 μg/ml,左氧氟沙星MIC50、MIC90是16、64 μg/ml;基因位点结果显示,耐环丙沙星的65株中,有60株发生gyrA、parC一个或多个基因位点的突变,有5株未发生突变.结论 gyrA、parC基因突变是该地区ECO,对氟喹诺酮类药物耐药的重要机制,且基因突变位点越多其耐药程度越高.     

老年脑卒中患者分离的大肠埃希菌耐药特点及机制研究

目的 了解老年脑卒中住院患者分离的大肠埃希菌耐药特点、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检出率、ESBLs基因型及携带模式。方法 回顾分析本院老年脑卒中住院患者分离的206株大肠埃希菌对16种抗生素耐药性,双纸片协同试验检测大肠埃希菌产ESBLs率,PCR及产物测序确定菌株ESBLs基因型及携带模式。结果 未见亚胺培南和美罗培南耐药株,49. 5%的菌株产ESBLs,产ESBLs菌对大部分抗菌药物的耐药率明显高于非产ESBLs株,TEM和CTXM基因型是ESBLs优势编码基因,TEM+CTX-M携带模式最常见。结论 本地区大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素敏感,产ESBLs菌株耐药率远较不产ESBLs菌株高,应加强对大肠埃希菌ESBLs监测,有效控制产ESBLs大肠埃希菌的散播以及耐药基因的传播。     

健康人群肠道大肠埃希菌对氟喹诺酮药物的耐药性及耐药机制研究

目的研究健康人群(2周内未使用过抗菌药物)肠道分离的110株大肠埃希菌对4种氟喹诺酮类抗菌药物的耐药性及耐药机制。方法用琼脂稀释法测定4种氟喹诺酮类抗菌药物对110株大肠埃希菌的最低抑菌浓度(MIC)。用聚合酶链反应扩增gyrA、parc基因,序列分析明确其突变情况,并与28株2周内使用过抗菌药物病人肠道分离的菌株进行比较。结果大肠埃希菌对4种氟喹诺酮类抗菌药物的耐药率未用药组为12.7%~15.5%,用药组为20.8%~25.0%。测序发现60号敏感菌株没有任何氨基酸突变。11株耐药菌中,gyrA基因编码的氨基酸均存在83位突变,即Ser83→Leu;其中8株存在双突变,即同时Asp87→Asn;6株存在3个突变,还包括Clu214→Gly。parC基因编码的氨基酸中,有8株存在Ser80→Ile突变,另有2株存在Glu84→Gly突变。结论健康人群肠道大肠埃希菌对4种氟喹诺酮类抗菌药物的耐药率为12.7%~15.5%,主要由gyrA基因和parC基因位点突变造成,以gyrA基因为主。     

大肠埃希菌染色体、质粒介导的喹诺酮类药物耐药机制研究

目的 探讨医院ICU临床分离大肠埃希菌(ECO)的耐喹诺酮类抗菌药物耐药机制.方法 收集2007年12月-2008年6月20株分离自ICU患者临床标本的ECO,采用纸片扩散法测定30种抗菌药物的敏感性、微量琼脂希释法测定环丙沙星、左氧氟沙星的MIC值;采用PCR法联合检测细菌染色体介导DNA解旋酶gyrA和质粒介导的qnrA、qnrB、qnrS以及aac(6')-Ⅰ b-Cr变异体和与喹诺酮类外排有关的qepA等6种基因.结果 20株ECO gyrA基因均存在突变,其中13,15号株gyrA基因经比对与美国NCBI中已登录的gyrA基因序列均不相同,为新亚型;检出aac(6')-Ⅰ b检出3株,经比对分别为aac(6')-Ⅰ b(2株)和aac(6')-Ⅰ b-Cr(1株);qnrA基因检出1株,经比对为qnrAl.结论 ECO对环丙沙星等喹诺酮类耐药主要为gyrA基因突变所致,但也有aac(6')-Ⅰ b-Cr、qnrAl的因素,值得进行大规模流行病学研究.     

大肠埃希菌体外对氟喹诺酮类药物交叉耐药的研究

目的探讨大肠埃希菌在体外对氟喹诺酮类药物的交叉耐药性。方法采用多步诱导法,对32株临床分离的氟喹诺酮类敏感大肠埃希菌分别进行环丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星的诱导性耐药试验;用琼脂稀释法测定药物敏感性。结果22株大肠埃希菌诱导出稳定的高耐氟喹诺酮菌株;与原株比较,耐药株的MIC分别增加了32-3 000倍,三种氟喹诺酮药物诱导的耐药株对三种药物存在交叉耐药性;进行测序的1株诱导高度耐药菌株的gyrA发生Ser83→Leu、Asp87→Asn,parC发生ser80→Ile的氨基酸替换,而测序的一株敏感菌株未发现氨基酸改变。结论在低浓度抗菌药物的长期压力下,可诱导大肠埃希菌产生对氟喹诺酮类药物的获得性耐药,氟喹诺酮药物之间存在交叉耐药性。     

氟喹诺酮类药物对大肠埃希氏菌杀菌作用量效关系的研究

目的研究环丙沙星、氧氟沙星和诺氟沙星３种氟喹诺酮类药物对大肠埃希氏菌４４１０２的抗菌效能和杀菌机理,并且观察了细菌在各种药物浓度下的形态变化。方法采用液体稀释法测定了３种药物在各种不同浓度下的杀菌活性及时间—杀菌曲线。结果３种药物对大肠埃希氏菌４４１０２的杀菌作用随药物剂量的增加而呈双相变化,环丙沙星、氧氟沙星和诺氟沙星的最强杀菌浓度分别为０．２ｍｇ／Ｌ、１．０ｍｇ／Ｌ和１．５ｍｇ／Ｌ,利福平（１５０ｍｇ／Ｌ）和氯霉素（２０ｍｇ／Ｌ）对３种药物有着不同程度的拮抗作用。１／２ＭＩＣ时细菌菌体明显变长,而高浓度时（１０００ｍｇ／Ｌ）菌体变化不大。结论氟喹诺酮类药物主要通过抑制细菌ＤＮＡ合成而发挥抗菌作用,在较高浓度时杀菌作用减弱,与其抑制ＲＮＡ和蛋白质合成有关     

不同疾病住院患者大肠埃希菌耐药性研究

目的 了解不同疾病患者大肠埃希菌流行病学分布及耐药性.方法 查阅2009年12月-2011年2月细菌培养为大肠埃希菌的住院患者253例,8种疾病各收集40例次,统计不同疾病患者大肠埃希菌的耐药率.结果 不同疾病患者分离的大肠埃希菌对喹诺酮类药物耐药率不尽相同,其中恶性肿瘤患者耐药率最高达70.0％,其次为长期口服糖皮质激素和慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者,为65.0％,器官移植患者耐药率也偏高,为62.5％；8种疾病中器官移植的ESBLs检出率最高达80.0％,其次COPD患者为52.5％,外伤患者检出率最低是25.0％；同一例患者基础疾病种类越多,耐药性也越严重.结论 大肠埃希菌的耐药性比较严峻,所以应加强细菌耐药监测,了解耐药变迁,为临床合理用药提供依据,防止耐药菌株的传播.     

临床分离大肠埃希菌整合子介导的耐药机制分析

目的了解临床分离大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药特征及整合子在大肠埃希菌中的分布情况,探讨其与大肠埃希菌耐药性之间的相关性。方法收集温州地区2002年-2010年分离的大肠埃希菌,采用纸片扩散法进行药敏试验;PCR扩增3类整合子整合酶基因和整合子可变区,并测序分析整合子携带的耐药基因盒类型及att C位点。结果共收集524株大肠埃希菌,均为耐药菌,对3类或3类以上抗菌药物不敏感的多重耐药菌(MDR)占60.8%;Ⅰ类整合子的检出率为53.8%(28/524),所检出的整合子可变区分为6种类型,att C位点有16种类型,dfr A17-aad A5基因盒检出率最高(70.2%);Ⅱ类整合子阳性仅有3株;Ⅲ类整合子未检测到。结论大肠埃希菌整体耐药情况严重;Ⅰ类整合子在临床分离大肠埃希菌中分布广泛,并与大肠埃希菌的耐药性关系密切,主要介导对氨基糖苷类、磺胺类等多种抗菌药物的耐药性。     

大肠埃希菌耐药情况分析

了解大肠埃希菌(包括产超广谱β-内酰胺酶ESBLs和非产超广谱β-内酰胺酶ESBLs)的临床耐药情况与医院感染的特征,以指导临床合理使用抗生素。     

质粒介导的大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物耐药机制的研究

目的分析广州地区大肠埃希菌对喹诺酮类等12种抗菌药物耐药性,探讨qnr、qepA、aac-(6′)-Ib-cr质粒基因流行状况以及与耐药的关系。方法收集广州市两所三甲医院临床分离大肠埃希菌103株,采用纸片扩散法进行药敏试验,采用PCR技术检测大肠埃希菌中qnr(qnrA、qnrB、qnrS)、aac-(6′)-Ib-cr和qepA质粒基因,并对PCR产物进行DNA测序分析。结果 103株大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药率均>50.0%,20株菌检出阳性基因qnrB、qnrS、aac(6′)-Ib-cr的阳性率分别为9.7%、7.8%、10.7%,有8株菌同时携带≥2种质粒基因,这8株菌对喹诺酮类药物全部耐药,同时合并其他类抗菌药物耐药,其中52号菌同时携带3种基因[qnrB、qnrS、aac-(6′)-Ⅰb-cr],对6类抗菌药物全部耐药,12株菌检出单个质粒基因,其中4株对喹诺酮类敏感。结论广州市大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物耐药率居高不下;药敏谱呈多样化,多药耐药株比例高;菌株中存在qnrB、qnrS、aac-(6′)-Ⅰb-cr的流行,并呈现出两种或多种耐药基因共存于同一株细菌的特征;质粒介导的喹诺酮耐药基因数量与耐药种类数量呈正相关。     

耐药大肠埃希菌湖北监利分离株常见耐药基因研究

目的调查一组耐药大肠埃希菌分离株中β-内酰胺类、氨基糖苷类耐药基因与可移动遗传元件遗传标记的携带状况及菌株间的亲缘关系。方法收集2016年1-6月医院住院患者痰液标本中分离的耐药大肠埃希菌20株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析15种β-内酰胺酶基因、7种氨基糖苷类修饰酶基因、1种16SrRNA甲基化酶基因、4种可移动遗传元件遗传标记;阳性耐药基因测序后直接作BLAST比对,耐药基因检测结果作样本聚类分析(UPGMA法)。结果 20株耐药大肠埃希菌对头孢类、β-内酰胺类复合制剂、喹诺酮类均耐药,对碳青霉烯类均敏感;20株菌共检出4种β-内酰胺酶基因,4种氨基糖苷类修饰酶基因,4种可移动遗传元件遗传标记,且阳性率较高;样本聚类分析显示20株菌中的18株出现了明显的聚集性,出现4个克隆。结论 20株耐药大肠埃希菌携带的β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因和可移动遗传元件遗传标记是对β-内酰胺类和氨基糖苷类产生耐药的重要原因;本组菌检出的四个克隆高度疑似医院感染,同一克隆菌株携带相同基因。     

大肠埃希菌败血症临床分布及耐药分析

目的了解大肠埃希菌败血症临床分布及耐药情况。方法患者血培养标本经安图BC-120全自动血培养仪培养,用VITEK 2-Compact全自动微生物鉴定分析仪鉴定分离所得菌,并采用K-B法进行药敏试验。结果 67株大肠埃希菌中,超广谱β-内酰胺酶(ESBL)为31株,占有比例为46.3%,大肠埃希菌ESBL阳性菌株组和阴性菌株组对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林、氨曲南、头孢克肟、环丙沙星、头孢曲松、头孢唑啉、头孢吡肟和头孢他啶的耐药率差异有统计学意义(P0.01),而庆大霉素、复方新诺明和妥布霉素的耐药性差异无统计学意义(P0.05)。结论大肠埃希菌ESBL阴性菌株对抗菌药物的耐药率明显低于ESBL阳性菌,阿米卡星、头孢替坦、哌拉西林/他唑巴坦及碳青霉烯类抗生素厄他培南和亚胺培南敏感率为100.0%,可作为大肠埃希菌感染败血症的首选抗菌药物,但对其他类抗生素耐药性相差较大,所以临床应加强检测,合理使用抗生素,减缓耐药菌株的出现和提高临床的疗效。     

80株大肠埃希菌靶位基因突变对喹诺酮耐药影响

目的　探讨大肠埃希菌靶位基因突变对喹诺酮类药物耐药的影响。方法　本研究分别用琼脂稀释法和K -B纸片扩散法药敏试验检测了 80株致泌尿系感染的大肠埃希菌环丙沙星MIC的分布和对四种喹诺酮类药物的敏感性 ;PCR扩增大肠埃希菌的gyrA和 parC基因的QRDR区 ,分别对其进行限制性内切酶酶切分析和SSCP分析 ,以检测药物靶位基因可能存在的突变。结果　 80株致泌尿系感染的大肠埃希菌中有 4 7株对环丙沙星耐药 ,耐药率达 5 8.75 % ,2 0株对环丙沙星敏感的菌株 gyrA基因QRDR区未发生改变 ,而 13株敏感株和 4 7株耐药株gyrA 2 4 7bp位点处均存在突变 ,且这 13株对环丙沙星敏感的菌株均对萘啶酸耐药。 33株对环丙沙星敏感的菌株parCSSCP分析 ,均未存在突变。 结论　① 80株致泌尿系感染的大肠埃希菌对环丙沙星的敏感性和对萘啶酸的敏感性存在明显差异 ;②gyrA基因是大肠埃希菌喹诺酮类药物的主要作用靶位。在某些菌株中 ,其 2 4 7位核苷酸位点的改变仅使细菌对环丙沙星的敏感性下降 ,parCQRDR区的突变使细菌的耐药程度增加。     

大肠埃希菌碳青霉烯异质性耐药机制初步研究

目的分析大肠埃希菌碳青霉烯异质性耐药的可能机制,为医院感染预防控制工作提供基础数据。方法收集深圳市第三人民医院、深圳市龙岗区人民医院、深圳市人民医院和中国科学院血液病医院2015年7月-2017年6月临床标本中筛选出的60株碳青霉烯异质性耐药大肠埃希菌(CHEC),采用改良Hodge实验检测菌株是否产碳青霉烯酶,PCR法检测菌株耐药基因,脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测基因的同源性,并将菌株分型,同时通过菌落谱型分析实验(PAP)和亚群传代实验证实异质性耐药进化为完全耐药的过程。结果改良Hodge试验结果,60株CHEC中,20株产碳青霉烯酶,阳性率为33.33%,均携带耐药基因,17株为KPC型,3株为IMP型;随机选取17株CHEC进行PFGE分型,结果显示电泳图谱差异性较大;PAP结果显示,CHEC亚群经抗菌药物选择传代后,PAP曲线向右移动。结论医院筛选出的CHEC菌株无同源性,碳青霉烯异质性耐药的发生可能与CHEC菌株携带KPC、IMP等耐药基因有关,并且异质性耐药是完全耐药进化的中间阶段。     

大肠埃希菌血流分离株的耐药特点分析

目的 对大肠埃希菌血流分离株的耐药特点进行分析.方法 收集南昌大学第二附属医院2005年1月-2011年12月从血液分离的大肠埃希菌,使用全自动微生物分析仪对大肠埃希菌进行菌种鉴定和药敏试验,超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测采用双纸片扩散法;头孢哌酮/舒巴坦和美罗培南的药敏试验采用K-B法.结果 112株血液分离的大肠埃希菌主要来自肝胆疾病的患者,占22.3％,其次为泌尿系统疾病,占13.4％,血液系统疾病占9.8％;检出55株产ESBls菌株,检出率为48.2％;产ESBLs大肠埃希菌对抗菌药物的耐药率较高,对5种药物的耐药率＞50.0％,但也有5种被测抗菌药物的耐药率＜20.0％,所有被测菌株对亚胺培南和美罗培南全部敏感,对阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率分别为7.3％、10.9％、10.9％,非产ESBLs株对8种被测抗菌药物的耐药率＜10.0％.结论 血液分离的大肠埃希菌主要来自患有肝胆疾病的患者,产ESBLs菌株检出率较高.