槲皮素对小鼠T细胞体外活化的抑制作用

目的:通过分析槲皮素对淋巴细胞早期活化标记物CD69表达的影响,探讨其对T淋巴细胞体外活化抑制作用的机制。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂及槲皮素共同培养,分别于2、6、24h收获细胞,进行双色免疫荧光标记,以流式细胞仪对T细胞的CD69分子表达情况进行分析并计算抑制率。结果:槲皮素(终浓度10μmol/L)对未受刺激的T细胞CD69表达百分率无明显影响,而经佛波醇酯(PDB)及刀豆蛋白A(ConA)活化同时加入槲皮素的T细胞CD69表达百分率在2h、6h及24h均显著下降(P＜0.01)。槲皮素对PDB的抑制率随作用时间延长而明显下降,对ConA的抑制率平缓而持久。结论:槲皮素对PDB、ConA活化的T淋巴细胞均显示明显的抑制效应,表明该药可能作用于T细胞活化信号传递通路蛋白激酶Cθ或其下游部位,并且,这种抑制效应表现出一定的可逆性。     

TMB-8对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的: 研究胞内钙离子释放阻断剂8- (N,N-二乙胺) 辛基-3,4,5-三甲氧基苯甲酸酯（TMB-8）对刀豆蛋白A（Con A）介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响。方法: 以Con A作为T细胞活化、增殖的刺激剂，以不同浓度的TMB-8及与环孢菌素A（CsA）联合作用于该系统，用流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子的表达；以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）染色流式细胞术，分析TMB-8在Con A刺激下小鼠淋巴细胞的增殖相关指数（PI）；以碘化丙啶染色分析细胞周期的分布情况。结果: Con A作用6 h后，CD69+ T细胞的比率为（74.88±1.88）%，TMB-8在终浓度10、20、40 μmol/L下均抑制Con A介导的T细胞CD69表达（P<0.01），其中，40 μmol/L的TMB-8为（52.55±1.54）%, 达到最高抑制率。培养48 h和72 h，Con A刺激下的PI值分别为1.24±0.01和2.05±0.07，TMB-8从5 μmol/L起均抑制Con A介导的淋巴细胞增殖（P<0.01），以40 μmol/L的效果最为显著，PI值分别为1.01±0.01和1.10±0.01；10 μmol/L的TMB-8与25 μg/L的环孢菌素A（CsA）具有明显的协同抑制作用（P<0.01）。细胞周期分析显示，培养48 h的TMB-8从10 μmol/L起即显著抑制S期（P<0.01）。结论: TMB-8可明显抑制Con A介导下的T细胞早期活化及增殖，并具T细胞周期的S期阻滞作用。     

米诺环素对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

研究米诺环素(MNC)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。以ConA刺激小鼠淋巴结来源的淋巴细胞,以不同终浓度的MNC与T细胞共培养,荧光抗体染色结合流式细胞术,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,并用ModFit软件分析T细胞增殖相关指数。结果:终浓度为10、25和50μmol/L的MNC显著抑制ConA诱导的T细胞CD69的表达,由ConA组的71.20%±1.08%,分别降低为64.43%±1.39%、53.34%±1.26%和33.65%±1.91%;CFDA-SE染色结果显示,培养48 h和72 h的ConA组T细胞的增殖指数(PI)分别为1.57±0.03和2.06±0.02,各浓度的MNC对ConA刺激的T细胞增殖具有明显的抑制作用,以50μmol/L的MNC抑制作用最明显,48 h和72 h的PI分别为1.01±0.02和1.03±0.01,与相应时间的对照组比较,均有统计学意义(P<0.01)。MNC能有效地抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖。具有独立于其抗菌活性的抗炎作用。     

环孢菌素A对小鼠T细胞活化影响的血清免疫药理学评价

目的　应用血清免疫药理学技术 ,探讨环孢菌素A(CsA)对T细胞体外活化的影响 ,以进一步揭示CsA免疫调节的分子机制 ,为临床用药提供理论依据。方法　分离小鼠淋巴结细胞 ,分别与CsA、5 %CsA血清预孵后 ,加入多克隆刺激剂继续培养共 2 4h。收获细胞 ,进行双色免疫荧光标记 ,以流式细胞术分析T细胞上CD6 9分子的表达情况。结果　在CsA和 5 %CsA血清作用下 ,ConA活化的T细胞CD6 9表达的百分率分别为 (2 4 15± 3 38) %和 (2 3 6 8±6 89) % ,与相应对照组 [分别为 (6 4 6 7± 5 88) %和 (6 4 35± 10 13) % ]相比较均有显著差异 (P <0 0 1) ;在CsA和5 %CsA血清作用下 ,PDB活化的T细胞CD6 9表达的百分率分别为 (78 86± 7 70 ) %和 (80 0 5± 9 91) % ,与相应对照组 [分别为 (84 79± 6 87) %和 (79 6 8± 4 17) % ]相比较均无显著差异 (P >0 0 5 )。结论　CsA(410nmol/L)和含CsA血清均可强烈抑制ConA刺激的T细胞活化 ,而对PDB刺激的T细胞活化无抑制效应。 5 %CsA血清与CsA单纯药物体外实验的结果相一致 ,在一定程度上反映了临床等效剂量下血清免疫药理技术的有效性与可行性     

流式细胞术检测调节性T细胞方法的建立

目的建立流式细胞术（FCM）检测外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Tregs）的方法，并观察紫杉醇联合卡铂治疗对晚期肺癌和乳腺癌患者外周血CD4＋CD25＋Tregs数量的影响。 方法19例晚期肺癌和10例乳腺癌患者均给予紫杉醇联合卡铂方案化疗，于化疗前1d和化疗后第7天采集患者外周血，分别加入鼠抗人CD4-FITC（异硫氰酸荧光素）/CD8-PE（藻红蛋白）/CD3-PerCP（多甲藻叶绿素蛋白）、CD25-FITC/CD127-PE/CD4-PerCP、CD3-FITC/CD（16＋56）-PE/CD45-PerCP单抗，并以分别加入同型鼠抗人IgG1-FITC、IgG1-PE、IgG1-PerCP抗体作为阴性对照。采用流式细胞术（FCM）检测化疗前后外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T细胞和CD4＋CD25＋Tregs、NK细胞所占比例并进行数据分析。实验重复3次。 结果与化疗前比较，晚期肺癌和乳腺癌患者化疗后外周血CD4＋CD25＋Tregs的比例均明显降低（6.82%±3.11%vs.5.48%±2.13%，P=0.045；6.38%±1.84%vs.3.88%±1.69%，P=0.007）；晚期肺癌患者化疗后外周血CD4＋T细胞的比例升高（48.84%±16.44%vs.56.35%±14.50%，P=0.006），CD8＋T细胞的比例降低（51.18%±16.44%vs.43.65%±14.50%，P=0.006），CD4＋/CD8＋T细胞比值升高（1.12±0.60vs.1.57±0.88，P=0.008），而CD3＋T细胞和NK细胞的比例均无明显变化；乳腺癌患者化疗后外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T细胞、NK细胞的比例和CD4＋/CD8＋T细胞比值均无明显变化。 结论成功建立了FCM检测CD4＋CD25＋Tregs的方法，联合应用CD4、CD25、CD127检测CD4＋CD25＋Tregs简便可行、重复性好，检测结果可靠、准确，比较适用于临床检验。紫杉醇联合卡铂能够降低晚期肺癌和乳腺癌患者外周血CD4＋CD25＋Tregs的数量。     

红车轴草提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化的抑制作用

探讨红车轴草提取物(Trifolium pratense Leguminosae extract,TLE)对小鼠T淋巴细胞的体外活化的影响。无菌条件下制备小鼠淋巴细胞悬液;双色荧光抗体染色结合流式细胞术分别分析TLE对小鼠T淋巴细胞在刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PDB)刺激下的体外分化抗原CD69、CD25、CD71表达的影响。终质量浓度为20、30、40 mg/L的TLE对小鼠T淋巴细胞在ConA或PDB刺激下的体外分化抗原CD69、CD25、CD71表达具有明显的抑制作用(P<0.01)。TLE对ConA或PDB刺激的不同时期的小鼠T淋巴细胞的体外活化具有明显的抑制作用。     

山奈酚对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的:研究山奈酚(KA)对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,以不同终浓度的KA与T细胞共培养.流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;MTT法检测KA对T细胞增殖的影响;用碘化丙锭(PI)染色分析T细胞的细胞周期.结果:终浓度为10、20和40 μmol/L的KA可以显著抑制ConA刺激的T细胞CD69的表达,由ConA组的(39.11±1.17)%,分别降低为(30.64±0.23)%、(27.95±0.04)%和(5.63±0.37)%(P<0.05);MTT法结果显示,KA对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性;PI染色结果显示,随着KA浓度的增加,均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2/M期.结论:KA可显著抑制ConA刺激下的小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖;它能抑制T淋巴细胞进入细胞分裂期.     

通痹灵总碱对活化的小鼠T淋巴细胞CD69表达的影响

目的：研究通痹灵（TBL）总碱对活化的小鼠T淋巴细胞表达CD69的影响及其可能的免疫调控机制。方法：培养小鼠淋巴细胞，加入不同浓度的TBL总碱预孵1h后，再加佛波醇酯（PDB）或刀豆蛋白（ConA).24h后，用流式细胞术检测T淋巴细胞CD69的表达率。结果；不同质量浓度的TBL总碱对PDB或ConA激活的T淋巴细胞表达CD69，均有明显的下调作用（对ConA激活的T淋巴细胞表达CD69。均有明显的下调作用（对ConA激活的T淋巴细胞的作用要强于PDB激活的T淋巴细胞）。呈明显的量效关系。结论：TBL总碱可明显抑制活化的小鼠T淋巴细胞CD69的表达，为其用于类风湿性关节炎的治疗提供了实验依据。     

心理应激对正常人外周血T淋巴细胞体外活化表面分子表达的作用

目的:探讨心理应激增加对感染的易感性的细胞和分子免疫学机理。方法:采用双荧光染色流式细胞分析法对20名健康大学生志愿者(男女各半)在应激前后进行外周血淋巴细胞免疫表型及T细胞体外丝裂原刺激早期活化抗原表达分析。连续一周期末考试被设定为心理应激。结果:免疫表型分析显示,应激前后CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD16、CD56等淋巴细胞的表面分子阳性的细胞的百分比的差异无统计学显著性;与应激前的结果相比,应激后的T细胞在体外培养条件下多克隆刺激剂活化后CD69的表达明显降低,植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)组CD69⁺CD3⁺/CD3⁺的百分率由应激前的28.1±4.1降低到应激后的17.6±3.8,佛波醇酯(phorbol 12,13-dibutyrate,PDB)组CD69⁺CD3+/CD3⁺的百分率由应激前的80.7±6.8降至应激后的65.8±7.9,而在没有刺激剂作用的条件下,T细胞CD69表达率应激前后的差别无显著。结论:应激对免疫系统的影响并不在于改变外周血淋巴细胞各亚群的比例的层面上;心理应激能降低健康人T细胞体外活化的反应性,这可能与心理应激个体对感染的易感性增加有关。     

慢性乙肝患者外周血T细胞早期活化的研究

已有证据表明乙肝病毒携带者体内存在免疫紊乱，但对于这些个体中T淋巴细胞早期激活标志CD69的研究在国内外尚未见报道。CD69是T淋巴细胞激活后最早表达的表面抗原，当其表达后，可作为共刺激信号促进T细胞进一步活化和增殖。我们研究乙肝病毒携带者外周血CD4^ CD8^ T淋巴细胞CD69的表达，现报告如下。     

喜树碱对小鼠T淋巴细胞活化、增殖以及细胞周期的影响

目的： 研究喜树碱（CPT）对刀豆蛋白A(ConA)介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞周期的影响。方法：以ConA刺激小鼠T淋巴细胞，建立小鼠T淋巴细胞活化、增殖的模型，以不同浓度的CPT作用于该模型，流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子的表达；以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）染色流式细胞术分析CPT 在Con A刺激下小鼠淋巴细胞的增殖相关指数（PI）；以碘化丙啶染色流式细胞术分析细胞周期的分布情况。 结果： ConA作用6 h后流式细胞术分析显示CD69的表达率为（58.88±0.55）%，不同浓度的CPT组（10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L）CD69的表达率分别为（55.48±0.98）%、（54.67±1.05）%、（50.40±0.82）%、（42.47±1.32）%，均可明显抑制CD69的表达(P<0.01)；ConA刺激48 h后流式细胞术分析显示，不同浓度的 CPT 组（10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L）的增殖指数（PI）明显低于对照组(P<0.05)；细胞周期分析显示刺激48 h后不同浓度的CPT组（10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L）均出现明显的凋亡峰（apoptosis peak，AP），sub-G1期、G₀/G₁期细胞的比率明显高于ConA刺激组(P<0.01)。结论：CPT可明显抑制ConA刺激的T淋巴细胞的活化、增殖，同时使淋巴细胞阻滞于G₀/G₁期。     

异体角膜刺激引起的人外周血T细胞及其亚群CD25分子表达

目的：观察异体角膜体外对人外周血T细胞及其亚群CD25分子表达的影响。方法： 异体角膜与外周血淋巴细胞体外共同培养后，进行单克隆抗体标记和流式细胞分析。结果： 对照组T细胞CD25表达为25.2％；受角膜或沸波醇酯（PDB）激活后T细胞CD25表达分别为56.8％和80.9％；受角膜和沸波醇酯共同激活后T细胞CD25表达为70.2％；受异体角膜激活后，CD4和CD8 T淋巴细胞CD25表达分别为67.3％和52.3％。结论： 异体角膜组织体外能够刺激人外周T细胞CD25表达和T细胞活化，CD4 T细胞比CD8 T细胞活化更明显。     

异黄酮Genistein对T细胞体外活化CD69表达的影响

目的 :研究异黄酮Genistein对T淋巴细胞活化的影响 ,探讨将其发展为免疫干预药物的可能性。方法 :应用荧光标记的单克隆抗体和流式细胞技术 ,在全血培养体系中于 2h和 6h时间点检测分别经 10 ,5 0或 10 0 μmol L浓度Genistein预培养的 ,PHA或PDB诱导活化的T细胞的CD6 9表达百分率。结果 :培养 2h后 ,Genistein对PHA活化组的抑制作用要强于PDB活化组 ,P <0 0 5 ;培养 6h后 ,Genistein对PHA活化组的抑制作用同样强于PDB活化组 ,P <0 0 5 ,但较之 2h时间点均有所降低 ;无论PHA活化组或PDB活化组 ,Genistein对T细胞CD6 9表达率的抑制效应均随作用浓度的升高而增强。结论 :Genistein对PHA和PDB诱导活化的T细胞的CD6 9表达率均有明显的抑制作用 ,这种抑制作用存在浓度依赖关系。Genistein有潜力发展成一种免疫干预药物。     

异种角膜基质异位移植对大鼠外周血T细胞亚群的影响

目的: 比较3种异种角膜基质的免疫原性。方法: 将SD大鼠36只随机分为4组,每组9只。1组为对照组,2-4组为实验组。分别获取新鲜猪、兔、鸡角膜基质,等量湿重25 mg异位植入大鼠背部皮下,术后观察伤口愈合情况,并于术后7 d、14 d、28 d获取大鼠外周血,免疫荧光标记及流式细胞仪分析比较3种异种角膜基质对大鼠CD4⁺、CD8⁺、CD25⁺、CD71⁺表型的动态影响。结果: 各组植入处皮肤无红肿、无渗出及其它改变,伤口愈合良好;各组与对照组比较:猪角膜基质组各时相表达的CD4⁺、CD8⁺、CD25⁺、CD71⁺T细胞比例无显著差异(P＞0.05);兔角膜基质组术后7 d,CD4⁺T细胞升高(P＜0.05),鸡角膜基质组术后7 d,CD4⁺、CD4⁺CD71⁺升高(P＜0.01)。结论: 3种异种角膜基质对大鼠细胞免疫原性比较:鸡>兔>猪,猪角膜基质的免疫原性最低。     

放线菌酮对小鼠T细胞活化影响的血清免疫药理评价

目的:利用淋巴细胞的早期活化标记物CD69的表达,探讨CHX对T淋巴细胞体外活化的影响。方法:分离小鼠淋巴结细胞,分别与放线菌酮(CHX)、CHX血清预孵1h,加入多克隆刺激剂继续培养,总计培养24h后收获细胞,进行双色免疫荧光标记,以流式细胞术对T细胞的CD69分子表达情况进行分析。结果:在CHX(终浓度10μmol/L)、CHX血清作用下,ConA活化的T细胞CD69表达百分率依次为(12.33±4.75)%、(20.39±6.32)%,与相应对照[分别为(64.67±3.00)%、(64.35±10.13)%]比较均有显著差异(P＜0.01);相应的,药物作用下PDB活化的T细胞CD69表达的百分率依次为(13.07±11.05)%、(6.10±4.91)%,与相应对照[分别为(84.79±6.87)%、(79.68±4.17)%]比较均有显著差异(P＜0.01)。结论:CHX(10μmol/L)、5%的CHX血清对ConA、PDB活化的T淋巴细胞均显示了强烈的抑制效应,证明T细胞活化过程中CD69的表达存在蛋白质的从头合成,对"CD69表达中CD69分子可能储存于细胞浆及其表达的发生并不需要蛋白质的从头合成"这一观点提出质疑。     

乙型肝炎病毒感染者外周血CD4＋T细胞CD25-CD127-表达的检测及临床意义

目的 检测乙型肝炎病毒（ HBV）感染者外周血CD4＋T细胞表面CD25 - CD127 -的表达情况及临床意义.方法 用流式细胞术比较分析53例慢性乙肝患者、53例HBV携带者和26例正常对照人群CD4＋T细胞表面CD25 - CD127 -的表达情况,并对20例用干扰素治疗的HBV-DNA阳性慢性乙肝患者随访.结果 ①与正常对照组比较,慢性乙肝患者、HBV携带者CD4＋ CD25 -CD127 -T细胞均显著升高,两者比较有统计学差异（Q =4.559,P＜0.05;Q=6.230,P＜0.05）;②HBV- DNA阳性患者（n=77） CD4＋ CD25 - CD127 -T细胞显著低于HBV- DNA阴性患者（n=29）,两者比较有统计学意义（t =2.290,P=0.024）;③与治疗前比,慢性乙肝患者干扰素治疗12周后CD4＋CD25- CD127 -T细胞显著降低,两者比较差异有统计学意义（t =2.469,P=0.024）.结论 乙型肝炎病毒感染者外周血CD4＋ CD25 - CD127 -T细胞与病毒的感染和清除相关,外源性干扰素可降低CD4＋ CD25 - CD127 -T细胞.