人类口腔白斑-严重联合免疫缺陷小鼠原位移植模型的建立

目的:建立口腔白斑(OLK)原位移植组织动物模型.方法:将148只严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠随机分为A、B两组,A组为舌腹原位移植组,B组为背部异位移植组.将人非白色念珠茵感染的不同阶段的OLK病损组织(单纯上皮增生、上皮轻度异常增生、上皮中度异常增生、上皮重度异常增生)以及人正常口腔黏膜分别移植到A、B组SCID小鼠的舌腹和背部,观察小鼠的全身情况及移植物的生长情况,并分别于2、4、6、8周取出移植物行病理检查.结果:SCID小鼠舌腹和背部的OLK移植物生长良好.移植物组织病理学证实,不同的病损移植物保持了原OLK的生物学特征.结论:不同阶段的OLK病损组织移植物的上皮组织生长良好,均保持了人口腔白斑的生物学特征,为人口腔白斑的研究提供了较为理想的动物模型.     

人-NOD/SCID小鼠异种急性移植物抗宿主病模型的建立

目的 建立一种人-NOD/SCID小鼠嵌合的异种急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型.方法 NOD/SCID小鼠给予亚致死剂量的60Coγ射线全身照射后经尾静脉输注动员后人外周血单个核细胞(PBMNC),移植后每周检测血常规,采用流式细胞术检测人CD45+细胞的比例,分析人淋巴细胞亚群,取各脏器组织检测人、鼠保守基因序列片段,并进行免疫病理分析.结果 移植后1周起NOD/SCID小鼠的血细胞中有明确的人CD45抗原表达,随人CD45+细胞比例增高逐渐出现以体重减轻和血细胞减少为主要表现的异种急性移植物抗宿主病(X-GVHD),人-NOD/SCID嵌合体的基因组DNA中可扩增出入β-globin及小鼠保守基因HYPSIN序列片段,移植后6周生存率约为14%;人-NOD/SCID嵌合体中以人T淋巴细胞的植人为主,CD4+/CD8+细胞比例倒置;X-GVHD以人的淋巴细胞浸润为主,肝脏与肺脏是主要靶器官.结论 NOD/SCID小鼠预先给予亚致死剂量照射,再经尾静脉输注入PBMNC,能够建立X-GVHD模型.临床表现主要为植入率相关的体重减轻和血细胞减少,病理表现靶器官主要为肝脏和肺脏.该模型建立方法简便,X-GVHD发生时间(2～3周)较早,发生率(94%)高,便于在此基础上进行aGVHD防治的动物实验研究.     

人免疫重建荷子宫内膜癌SCID小鼠动物模型的建立

目的构建人免疫重建皮下荷人子宫内膜癌移植瘤SCID小鼠模型。方法将SCID小鼠随机分成空白对照组、单纯免疫重建组、荷瘤组及模型组,分别经腹腔注射人淋巴细胞和(或)皮下接种HEC-1B细胞建立相应模型。观察荷瘤鼠成瘤、移植瘤生长及组织学特征;ELISA法检测小鼠血清中人IgG含量,流式细胞术、免疫组化法检测小鼠外周血及脾脏T细胞表型。结果小鼠成瘤率均为100%,但模型组小鼠成瘤潜伏期延长、移植瘤生长受限。单纯免疫重建组及模型组小鼠外周血、脾脏分别可检出人IgG及人T淋巴细胞表型。未发现移植物抗宿主情况,空白对照组、单纯免疫重建组、模型组小鼠体质量无显著差异。结论初步建立了人免疫重建荷人子宫内膜癌SCID小鼠复合模型。     

SCID鼠人源化及视网膜母细胞瘤模型的建立

目的进行SCID鼠的人源化并建立人化SCID鼠视网膜母细胞瘤模型。方法SCID鼠腹腔注射人脐带血单个核细胞(CBMNC)生理盐水悬液。两周后割尾采血,检测其IgG水平。将10只人化的SCID鼠混分为两组,分别于腹股沟皮下注入视网膜母细胞瘤细胞株(SoRb-70),浓度分别为2×106,2×107,然后对肿瘤的发生率及瘤体大小连续观察,并作统计学分析,最后做病理解剖及组织切片观察。结果该实验经腹腔注射移植入SCID小鼠体内的CBMNC可在小鼠体内存活并大量增殖。移植后2～4周,SCID小鼠血清中即可检测到人免疫球蛋白。视网膜母细胞瘤细胞以两个梯度接种人化SCID鼠10只,观察8周,10只SCID小鼠7只致瘤。结论该模型的建立方法科学合理,在一定程度上可模拟人眼视网膜母细胞瘤的生物学行为,为进一步研究其发生发展机制及免疫治疗提供了一种模型。     

人卵巢癌重症联合免疫缺陷小鼠腹腔移植瘤模型的建立及其生物学研究

目的建立人卵巢癌重症联合免疫缺陷小鼠(SCID鼠)移植瘤模型,为研究人腹水型卵巢癌的实验研究提供合适的动物模型。方法将2例卵巢癌患者手术切除标本移植于SCID鼠腹腔,原代移植瘤形成后进行鼠间传代,观察移植瘤的生长、转移及腹水形成情况,做腹水细胞学计数、涂片,检测荷瘤鼠血中肿瘤标记物CA125的浓度,肿瘤作病理学检查。结果成功建立3只原代人卵巢癌SCID鼠移植瘤模型,原代移植成功率为37.5%,自第四代后,移植瘤的传代成功率为100%,随着传代次数的增加,移植瘤的成瘤潜伏期及荷瘤鼠的生存期逐渐缩短,荷瘤鼠血中肿瘤标记物的浓度升高,病理组织学证实:移植瘤保持了原卵巢癌生物学特征。结论成功建立了人卵巢癌SCID鼠移植瘤模型,移植瘤保持了原卵巢癌生物学特征,是研究人卵巢癌较理想的动物模型。     

SCID小鼠子宫内膜异位症模型的鉴定

目的建立人子宫内膜异位症的移植模型，观察其生物学特性。方法将子宫内膜异位症患者的在位内膜种植于SCID小鼠腹部皮下，建立人子宫内膜异位症模型，用组织病理学检查、血清学指标的检测和免疫组织化学染色鉴定模型。结果从SCID小鼠腹部皮下取出的成活的内膜组织，在形态和结构上与原来的内膜组织一致。结论SCID小鼠腹部皮下移植内异症患者的在位内膜，保留了子宫内膜原有的生物学特性，为研究子宫内膜异位症的发病机理和药物治疗提供了较客观的依据及动物实验模型。     

SCID小鼠模型在造血干细胞移植中的应用及研究进展

重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠的发现为人造血干细胞体内分析的研究提供了一个有效的小动物模型。在经放射线照射的SCID小鼠静脉内注入人骨髓、脐血或动员的外周血单个核细胞(PBMC)后,均能使小鼠受体内产生人造血干细胞的移植物。本文主要介绍了C.B17-SCID小鼠、hu-SCID小鼠及NOD-SCID小鼠模型体系。观察人造血干细胞植入SCID小鼠后,在体内的增殖、分化情况,同时探讨了该模型体系在基因治疗体内分析中的作用。     

人子宫肌瘤SCID鼠皮下移植瘤的建立及其生物学研究

目的建立人子宫肌瘤SC ID鼠皮下移植瘤模型,为研究人子宫肌瘤的实验研究提供合适的动物模型。方法将2例子宫肌瘤患者手术切除标本移植于SC ID鼠皮下,观察移植瘤的及SC ID鼠生长情况。待移植瘤存活后作病理学及雌激素受体、孕激素受体(ER,PR)检查。结果成功建立6只人子宫肌瘤SC ID鼠皮下移植瘤模型,移植成功率为100%,荷瘤鼠的生存期未见缩短,状态良好。病理组织学证实:移植物保持了原子宫肌瘤生物学特征,ER、PR均有不同程度的表达。结论成功建立了人子宫肌瘤SC ID鼠皮下移植瘤模型,移植瘤保持了原子宫肌瘤生物学特征,是研究人子宫肌瘤较理想的动物模型。     

PCR检测上呼吸道肿瘤病毒

电镜、免疫组化、Southern杂交和DNA原位杂交技术研究发现咽喉部良性和恶性鳞状上皮肿瘤以及鼻移行上皮乳头状瘤与HPV 感染有关。本文用聚合酶链反应(PCR)对这些肿瘤和组织学正常的鼻咽粘膜中的HPV 进行了对比检测,包括13例鼻移行上皮乳头状瘤、6例喉鳞状上皮乳头瘤、5例疣状癌,8例侵润性鳞癌;14例组织学正常的鼻咽粘膜组织标本。PCR 检测HPV 序列采用与HPV6型和11型的E6区序列互补的寡核苷酸引物。每例取5张10μm厚的切片,提取核酸进行扩增。再行电泳、印迹及     

缺氧诱导因子-1α单克隆抗体治疗SCID小鼠子宫内膜异位病灶的实验研究

[目的]探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)单克隆抗体对子宫内膜异位症(EMS)模型的严重联合免疫缺陷病(SCID)小鼠病灶体积及组织微血管密度(MVD)影响.[方法]将子宫内膜组织接种于SCID小鼠腹部皮下,建立EMS SCID小鼠模型,随机分三组:对照组10例、生理盐水组10例和治疗组10例.对照组常规饲养,生理...     

Detection of human papillomavirus DNA in normal epithelium and in squamous metaplasia of the uterine cervix by the polymerase chain reaction.

The presence of human papillomavirus (HPV) 16 was studied by using the polymerase chain reaction (PCR) directly on sections histologically defined as normal squamous epithelium and metaplastic squamous tissue of the uterine cervix. Ten specimens of normal epithelium were obtained at hysterectomy from women with uterine leiomyoma. Six specimens of squamous metaplasia were adjacent to the areas of dysplastic epithelium in which HPV 16 DNA had been detected previously by PCR. HPV 16 DNA was amplified specifically and detected in two of 10 normal cervical epithelium specimens and in all of 6 squamous metaplasia specimens adjacent to dysplastic lesions. However, HPV DNA could not be detected in the metaplasia by in situ hybridization. These results suggest that metaplastic squamous tissue adjacent to dysplastic lesions harbors fewer copies of HPV DNA than the dysplastic area and the carcinoma and that the HPV copy number per cell may be relevant to the pathogenesis of cervical carcinoma.     

高危型人乳头状病毒和IL-17在宫颈病变患者宫颈脱落细胞中表达的相关性和临床意义

目的 探讨高危人乳头状病毒和白细胞介素17(interleukin,IL-17)在宫颈病变中的表达及临床意义.方法 应用多重PCR技术和流式细胞技术对来我院就诊的66例妇女宫颈病变患者进行HPV-DNA、IL-17含量检测.结果 HPV阴性患者29例、HPV阳性患者20例、宫颈癌患者17例.三组所表达的IL-17的含量分别为(2.37±2.03)%、(27.99±11.28)%、(35.4±11.59)%.HPV阳性患者、宫颈癌患者的IL-17的含量比HPV阴性患者显著增高(P＜0.01),HPV阳性患者与宫颈癌患者之间无明显差别(P＞0.05).结论 IL-17与宫颈癌的发生发展相关,检测IL-17含量对宫颈癌诊断和病情变化有重要意义.     

绵阳地区食管鳞癌患者人乳头瘤病毒感染及基因型别分析

目的：了解绵阳地区食管鳞癌感染与人乳头瘤病毒（HPV）的关系,探讨HPV在食管癌病因学中的作用。方法收集食管组织标本166例（试验组为食管癌患者活检标本114例,对照组为食管良性疾病活检标本52例）,提取组织标本DNA,采用表面等离子谐振法,检测组织标本HPV感染情况及感染HPV基因型别。结果114例食管癌组HPV检出率为40．4％,对照组HPV检出率为5．8％,HPV感染基因型从高到底依次为16、18、58、6、31、33、35、51、11型,食管鳞癌感染HPV主要的基因型为16（23／114）、18（10／114）型,在食管鳞癌HPV阳性病例中混合感染10例占21．7％,16型混合感染7例占15．2％（7／46）,18型混合感染3例占6．52％。结论绵阳地区食管癌活检组织中有HPV存在,HPV感染可能和绵阳地区食管癌的发生存在相关,可能是本地区食管鳞癌发病的危险因素之一。     

血红蛋白和宫颈黏液对人乳头状瘤病毒分型的影响

目的探讨血红蛋白和宫颈黏液对导流杂交基因芯片（HybriMax）技术检测人乳头状瘤病毒（HPV）分型结果的影响。方法应用碱裂解法分别提取不同类型的宫颈脱落细胞样本的HPvDNA,经扩增后采用HYbriMax技术对HPVDNA进行分型检测。结果（1）非溶血样本经不同浓度（0．75～24．0g／L）血红蛋白处理后,HPV分型结果不受影响,符合率为100％。（2）无宫颈黏液标本和宫颈黏液标本HPVDNA的阳性率分别为25．11％和20．92％,差异有统计学意义（χ2=5．364,P〈0．05）。（3）宫颈黏液标本和无宫颈黏液标本的复查率分别为6．91％和2．49％,差异有统计学意义（χ2=24．049,P〈0．01）。结论溶血的宫颈脱落细胞标本,可采用碱裂解法提取HPVDNA进行HybriMax技术分型检测。标本中的宫颈黏液可影响本法对HPVDNA分型的检测。     

HPV16／18及NDRG1在宫颈癌组织中的表达与相关性研究

目的探讨HPV16／18、NDRG1在宫颈癌组织中的表达情况及其临床意义。方法对宫颈癌组织块60例,正常宫颈组织30例。采用免疫组化法（S-P法）测定NDRG1蛋白以及应用原位杂交法检测HPv16／18N表达情况。结果HPV16／18NINDRG1在宫颈癌中阳性表达率为70％和53．33％,正常宫颈组织的6．67％和96．67％（P〈0．01）;NDRG1淋巴结转移者阳性表达率明显低于无转移者（P〈0．01）;HPV16／18和NDRG1在宫颈癌中的表达呈负相关（r=-0．476,-P〈0．01）。结论HPV16／18和NDRG1表达与宫颈病变良恶性有关;NDRG1可能为一个潜在的抑癌基因,HPV16／18N能通过抑制NDRG1的表达,通过促进肿瘤浸润、转移,从而促使宫颈细胞的恶性转化。     

Characterization of in vivo expression of the human papillomavirus type 16 E4 protein in cervical biopsy tissues.

The role of human papillomavirus (HPV) proteins in the pathogenesis of cervical intra-epithelial neoplasia (CIN) and invasive cervical cancer is poorly understood. To characterize E4 protein expression in 49 paraffin-embedded cervical biopsies representing different histopathologic grades of disease, antibodies were elicited to a synthetic peptide corresponding to amino acids 20-34 of a protein predicted to be encoded by the HPV 16 E4 open reading frame. The E4 protein was detected throughout the spectrum of CIN, from CIN1 to CIN3. Expression was localized to the cell nucleus, primarily in the superficial layers of the squamous cervical epithelium. Ultrastructural studies showed that the E4 protein was organized into compact, intranuclear arrays 25-35 nm in diameter. E4 protein expression was also demonstrated in some histologically normal tissues containing HPV 16 DNA, but not in any of five cervical cancers containing HPV 16 DNA. These results suggest that E4 protein expression may precede development of light microscopic tissue abnormalities, that it may continue through the spectrum of CIN, and that expression of this protein may be reduced or terminated in invasive cancer. The function of this protein remains unknown, but its nuclear localization may be consistent with a role in viral maturation.     

第二代杂交捕获法检测宫颈人乳头瘤病毒感染的初步研究

目的:探讨人乳头瘤病毒与宫颈癌及癌前期病变的相关性.方法:选取2004年12月～2005年7月我院妇科宫颈病门诊妇女1689例,取宫颈刷出物同时作宫颈薄层液基细胞学涂片与HPV-DNA检测,HPV-DNA检测方法是第二代杂交捕获法,可一次检测13种高危型HPV病毒,分析HPV感染与宫颈癌及癌前期病变的关系.结果:HPV-DNA检出率随宫颈癌变程度加重呈趋势性升高,1689例病人中高危型HPV检出率为25.16%(425/1689),宫颈癌及癌前期病变中为90.35%(234/259).结论:高危型HPV是诱发宫颈癌及癌前期病变的重要病因学因素.第二代杂交捕获法可作为宫颈癌的一种筛查方法.     

Molecular evaluation of the prevalence of oncogenic human papillomavirus genotypes in cervical acetowhite lesions

The actual prevalence of cancer-related human papillomavirus (HPV) genotypes in cervical acetowhite lesions has not been established. In this work, the presence of oncogenic types of HPV in cervical acetowhite tissue was evaluated by molecular means. The presence of HPV DNA was determined in a group of women with and without cervical acetowhite lesions by a polymerase chain reaction (PCR) using the MY09/MY11 primers. The presence of 13 oncogenic HPV types was evaluated using the Hybrid Capture II test, and the prevalence of HPV type 16 (HPV16) was studied using an HPV16-specific PCR. HPV DNA was detected in 85.9% patients with acetowhite lesions; oncogenic HPV types were found in 83.7% of them; HPV16 was identified in 51.1% of the cases. HPV DNA was detected in 87.3% of the patients without acetowhite changes. Interestingly only 16.8% were infected by oncogenic genotypes and 2.5% were positive for the presence of HPV16. In conclusion, subclinical infection by oncogenic HPV genotypes is associated with the presence of acetowhite cervical tissue (p < 0.0005). Therefore, women showing acetowhite lesions might be at risk of developing cervical cancer.     

691例女性外阴尖锐湿疣组织HPV感染基因分型的研究

目的探讨691例江苏省南京市及镇江市女性外阴尖锐湿疣(CA)组织中人乳头瘤病毒(HPV)感染基因型分布状态和分型的临床意义。方法采用基因扩增结合基因芯片技术对江苏省南京市665例及镇江市26例女性外阴尖锐湿疣组织标本进行23种HPV分型检测,并对患者的相关资料进行分析。结果 691例女性外阴尖锐湿疣患者检出HPV感染者597例,总HPV感染率为86.40%(597/691),其中一型感染率为51.38%(355/691),以11、6和16型最为常见,分别占一型感染51.55%(183/355)、41.97%(149/355)和3.38%(12/355)。多型感染率为35.02%(242/691),以6+11型、11+18型、6+16型和11+16型为主,其分别占多型感染9.92%(24/242)、9.09%(22/242)、4.96%(12/242)和4.13%(10/242)。结论南京市及镇江市女性外阴CA组织中HPV感染,以低危型感染为主,高危型感染为辅,行外阴CAHPV分型检测,对我国女性外阴CA和宫颈病变的防治具有十分重要的意义。