细菌16SrDNA基因PCR检测在败血症诊断的临床研究

目的建立细菌16SrDNA基因半巢式PCR检测方法,并与血培养方法比较,评估其在临床败血症的诊断价值。方法针对16SrDNA高度保守区设计半巢式PCR引物,并对92例临床疑为败血症的患者血标本同时进行血培养和16SrDNA基因检测。结果 92例疑为败血症患者16SrDNA基因检测阳性45例,阳性率为48.9%;血培养检测阳性标本24例,阳性率为26.1%。经χ2检验,PCR检测的灵敏性明显高于血培养（P〈0.05）。结论半巢式PCR方法检测细菌16SrDNA基因具有高敏感、高特异及快速的优点,是一种易于推广的早期败血病诊断方法。     

判别函数在法医学溺死诊断中的应用

目的探讨判别函数在法医学溺死诊断中的价值。方法运用环境扫描电镜、能谱分析仪及图像分析软件观测生前入水溺死、死后抛尸入水尸体,根据异物颗粒面积、最大直径、整体密度等参数建立与溺死、死后入水判别函数。结果异物颗粒的最大直径和整体密度有助于判别函数鉴别溺水及死后抛尸入水,交叉验证判别函数符合率为89.0%,与传统方法相比,该法在保证实验结果可靠性的同时具有简便、快捷、客观等优势。结论判别方程对法医学实践鉴别溺水、死后入水具有积极的提示及勘验指导价值。     

16SrDNA序列测定在细菌鉴定中的应用

目前临床微生物鉴定主要依靠表型方法,但遇到革兰染色差、生化反应不活跃、代谢反应和生长模式较为独特的菌株,则鉴定变得十分困难.随着核酸技术发展,16SrDNA序列测定被用于细菌分型鉴定,还可用于发现和描述新的细菌种类,尤其是表型鉴定难于确定的细菌.     

肿瘤特异性生长因子检测在原发性肝癌诊断中的应用

现已公认 ,早发现、早诊断、早治疗是治疗恶性肿瘤最重要、最有效的措施 ,这是国内外肿瘤界共同关注的课题和追寻的目标。肿瘤特异性生长因子 (Tumorsuppliedgroupoffac tors,TSGF)是近年发现的一种新型肿瘤标志物 ,对恶性肿瘤的检测具有早期性和广谱性 ,甲胎蛋白 (AFP)检测对原发性肝癌诊断有特异性。为探讨TSGF对原发性肝癌诊断的价值 ,我们进行了研究 ,现将我们的结果报告如下。1　临床资料1 1　检测对象　病历选自我院 2 0 0 2年 1 1月至 2 0 0 3年 7月间住院患者 1 0 9例 ,其中原发性肝癌患者 38例 ,男 2 2例 ,女1 6例 ,中位年龄…     

藻类在溺死动物体内分布的示踪研究

采用核素示踪技术检测了溺死动物对~(32)P标记藻类的吸收分布情况,结果显示:溺死组内脏的~(32)P活性明显增高,组织接触法自显影可见银粒聚集;对照组内脏的~(32)P活性接近本底,自显影呈阴性反应。证明两者对藻类的吸收有显著性差异(P<0.05),认为藻类检验对鉴别溺死与抛尸入水有重要参考价值,溺死组内脏的~32P活性高低反映出藻量的多少,依次为肾>肝>脾>肌>脑,有助于准确取材提高检出率。     

16SrDNA测序在细菌性重症肺炎痰液致病菌分析中的应用

目的 采用16S rDNA测序,分析重症肺炎痰液中致病菌构成,探索病原学诊断的新方法.方法 收集细菌性重症肺炎患者的痰液标本,运用聚合酶链反应（PCR）扩增及高通量测序技术,对标本中病原菌16SrDNA V3～V5区进行多样性分析.结果 测序显示痰液样本含有的物种种类相对较多,还存在较多未被测序检测到的物种,优势菌属主要为链球菌属、变性菌属、不动杆菌属、鞘氨醇单胞菌属、普氏菌属、克雷伯菌属、假单胞菌属、水杆菌属、棒状杆菌属等.结论 细菌性重症肺炎痰液致病菌种复杂多样,物种丰富,16S-rDNA测序是临床实践中一种新的尝试.     

16SrDNA测序在儿童血流感染细菌性病原菌分布中的应用

目的：探讨PCR方法在分析血流感染病原菌分布中的作用,为儿童细菌性血流感染的流行病学调查提供新的思路。方法从儿科重症监护病房（PICU）收集100份疑似血流感染患儿的外周静脉血进行血培养,同时扩增并测序细菌16S rDNA,比较培养结果与PCR结果。结果100份血液标本中11份细菌培养阳性,阳性率为11%;PCR法23份阳性,阳性率为23%,二者比较差异具有统计学意义（χ2=10.08,P〈0.05）;在23例PCR阳性标本中,革兰氏阳性球菌占65.2%,其中表皮葡萄球菌最多（6例,26.1%）,革兰氏阴性菌占34.8%,以大肠埃希菌为主（4例,17.4%）。结论16S rDNA-PCR结合测序的方法可以很好地鉴定血流感染病原菌,与血培养相比能更客观地反映病原菌分布,可作为一种新的流行病学方法在临床应用;儿科重症监护病房血流感染病原菌以革兰氏阳性球     

血清特异性IgE检测在变应性鼻炎病因诊断中的应用

目的:探讨引起本地区变应性鼻炎(AR)的主要吸入性变应原,为AR的防治提供客观依据.方法:以艾蒿花粉、禾本科花粉、屋尘螨、黑麦花粉、车前草花粉、交链孢霉、猫上皮、白桦花粉、狗上皮作为变应原,将样本中87例4～18岁患者设为儿童组,174例19岁以上患者设为成人组.采用阿罗格AD体外诊断盒检测261例AR患者血清中变应原特异性IgE抗体,并对结果进行相应性分析.结果:261例AR患者中,艾蒿花粉检测阳性率位于首位(占37.55%),其次为禾本科花粉(占36.02%),屋尘螨(占34.48%),黑麦花粉(占24.52%),车前草花粉(占16.48%),交链孢霉(占8.05%),猫上皮(占8.05%),白桦花粉(占6.51%),狗上皮(占3.45%).儿童组中对艾蒿花粉的敏感性明显高于成人组(P＜0.05).结论:艾蒿、禾本科、黑麦花粉和屋尘螨是乌鲁木齐市主要的吸入性变应原.     

基于16S rDNA测序分析功能性便秘婴幼儿的肠道菌群组成

目的：探讨16S rDNA测序分析功能性便秘婴幼儿肠道菌群的结构与组成,为临床治疗提供依据。方法：选取2020 年1月至12 月湖州市妇幼保健院门诊就诊的功能性便秘婴幼儿17 例作为便秘组,正常婴幼儿15例作为对照组,收集粪便,采用16S rDNA扩增子测序的方法检测2组婴幼儿肠道菌群的组成并分析其结果。结果：2组肠道菌群Alpha多样性差异无统计学意义（P ＞0.05）,但Beta多样性差异有统计学意义（P ＜0.01）。在门水平中放线菌门、厚壁菌门、变形菌门是2组儿童肠道微生物群落中最丰富的菌群,其中疣微菌门在便秘组中丰度高于对照组（P ＜0.05）。在属水平中,双歧杆菌为2组优势菌种,乳酸菌属与阿克曼菌属在便秘儿童肠道中的丰度高于对照组（P ＜0.05）。便秘组中双歧杆菌种、疣微菌门、阿克曼菌属、副干酪乳杆菌的丰度差异有统计学意义,而对照组齿双歧杆菌、放线菌目、放线菌科、放线菌属、鼠李糖乳杆菌的丰度差异有统计学意义（均P ＜0.05）。结论：功能性便秘婴幼儿存在肠道菌群结构和多样性的改变,便秘与肠道菌群之间可能存在相关性。     

细菌16S rDNA基因T碱基特异的PCR产物片段化

目的探讨细菌16S rDNA检测芯片杂交前的样本处理优化方法。方法设计针对细菌16S rDNA基因全长的通用引物,通过PCR时掺入一定比例的dUTP替代dTFP,扩增长度为1：5kb的片段,用尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)消化处理掺入到双链上的dUTP后,再经浓氨水特异性断开DNA双链上原dUTP处的磷酸二酯键,然后用聚丙烯酰胺凝受胶电泳(PAGE)和琼脂糖电泳确认片段化的效果。结果本实验选用的基因当dUTP与dTFP的比例在3：7～1：1时,都能够获得比较理想的片段化结果。结论通过控制一定的dUTP掺入比例再经UDG及氨水处理能够得到稳定的片段化结果。     

16S rDNA序列分析在临床不常见细菌鉴定中的初步应用

目的建立细菌16S rDNA序列分析技术并探讨其在临床不常见细菌鉴定中的应用价值。方法收集经全自动微生物分析系统鉴定其可靠率在99%及以上的常见细菌10株和常规方法难以鉴定或少见菌17株,通过PCR扩增16S rDNA v3-v4区基因片段并进行序列测定,序列与16SpathDB 2.0数据库上已知细菌的16S rDNA序列进行比对分析确定细菌种属。当v3-v4序列片段不能明确鉴定细菌时,结合16S rDNA长片段测序及管家基因dnaJ和rpoB的序列做进一步分析。结果经16S rDNA v3-v4区序列分析,10株(100%)临床常见菌都能鉴定到种水平,其可靠性大于98.0%。17株不常见菌株中,10株(58.8%)细菌只与1种菌相似性大于98.0%,成功鉴定到单个种水平;6株(35.3%)细菌与不止1种菌的相似比大于98.0%;1株菌与已知菌相似性在96.0%~98.0%之间只能鉴定到属(棒状杆菌)。进一步结合16S rDNA长片段及管家基因dnaJ和rpoB的序列分析,所有菌株均可鉴定到单个种水平。结论结合16S rDNA和管家基因序列分析,可用于临床常见及不常见细菌的分子鉴定。     

卡立泊来德复合心脏停跳液对兔未成熟心肌的保护作用

目的 比较选择性钠氢离子交换阻断剂卡立泊来德（Cariporide）联合不同心脏停跳液（St．Thomas液与HTK液）对未成熟心肌缺血／再灌注损伤的保护作用。方法32只新西兰幼兔（2-3周龄）,建立Langendorff离体心脏灌注模型后,随机分为4组,每组8只：对照组（st组,St．Thomas液）、HTK组（HTK液）、St＋C组（St．Thomas液中添加Cariporide）和HTK＋C组（HTK液中添加Cariporide）。所有心脏均30℃全心缺血120min,37℃KH液再灌注60min。记录心功能参数：左室发展压（LVDP）、左室最大收缩变化率（＋dp／dtmax）、左室最大舒张变化率（-dp／dtmax,）及冠脉流量（CF）;测定冠脉流出液中磷酸肌酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌三磷酸腺苷（ATP）、丙二醛（MDA）、心肌细胞内钙（iCa）及心肌含水量（WC）。结果 HTK组LVDP、＋dp／dtmax、-dp／dtmax,、CF恢复率及ATP含量均明显高于St组（P〈0．05）,CK-MB、MDA、WC和iCa明显低于St组（P〈0．05）;St＋C组、HTK＋C组各指标分别优于st组、HTK组,且HTK＋C组各指标则优于st＋C组;而st＋C组与HTK组比较显示,St＋C组-dp／dt-、CF恢复率和ATP高于HTK组（P〈0．05）,而MDA高于HTK组（P〈0．05）,其余指标两组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Cariporide能提高St．Thomas液及HTK液对未成熟心肌缺血再灌注损伤的保护作用。     

界膜组织细菌16S rRNA和23S rRNA对假体周围感染的诊意义

目的 对界膜组织中细菌16S rRNA、23S rRNA进行PCR检测,分析比较两者单独以为及联合应用于假体周围感染诊断的效率.方法 应用诊断标准对本机构67例髋关节翻修患者是否患有假体周围感染(PJI)作出诊断;用PCR技术检测各界膜组织中细菌16S rRNA和23S rRNA基因片段的表达,同样对PJI作出诊断.分别将16S rRNA、23S rRNA、16S rRNA/23S rRNA(即16S rRNA或23S rRNA检测一项为阳性结果即可)以及16S rRNA+23S rRNA 4种策略的诊断结果与诊断标准的结果比较,分析4种策略的敏感性、特异性、阳性及阴性预测值、准确性的差异.结果 应用16S rRNA/23S rRNA诊断的敏感性和阴性预测值均高于16S rRNA+23S rRNA(95.7％vs52.2％,P＜0.01;97.6％vs79.6％,P=0.01).4种诊断策略的特异性、阳性预测值以及准确性无显著性差异,单独应用16S rRNA或23S rRNA的诊断效率相当.结论 单独应用16S rRNA或23S rRNA进行诊断的效率明显差异,16S rRNA/23S rRNA较16S rRNA+23S rRNA更为敏感,且阴性结果可信度更高.     

阿司匹林抗动脉粥样硬化作用的机制探讨

目的 观察阿司匹林对动脉粥样硬化(AS)家兔血管壁核因子-κB(NF-κB)-DNA结合活性、环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达、AS斑块面积和血管内膜厚度的影响,探讨阿司匹林的抗AS作用机制.方法 36只雄性新西兰大耳白兔被随机分为正常对照组(NC)、高脂对照组(HC)和阿司匹林组(HC+A).实验结束时,分别用酶法、固相酶联免疫吸附实验、电泳移动迁移技术、免疫组化技术、形态学方法检测3组兔的血脂、高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平、主动脉组织中NF-κB-DNA结合活性、COX-2蛋白表达及各组主动脉新生内膜厚度和AS斑块面积.结果 HC与HC+A组的血脂和hs-CRP水平、NF-κB-DNA结合活性、COX-2蛋白表达、动脉新生内膜厚度和粥样斑块面积均明显大于NC组(P＜0.05～0.01);HC+A组的血脂水平与HC组相比差异无统计学意义(P＞0.05),但HC+A与HC组的hs-CRP水平[(5.14±0.32)μg/ml vs(9.39±0.79)μg/ml,P＜0.05]、NF-κB-DNA结合活性[(14.6±2.7)μg/ml vs(32.4±4.7)μg/ml,P＜0.05]、COX-2蛋白表达[(0.342±0.02 vs 0.572±0.061,P＜0.05)]、血管新生内膜厚度[(165±24)μm vs(337±64)μm(P＜0.05)]和AS斑块面积[(24.3±7.6)% vs(49.5±21.3)%,(P＜0.05)]相比差异有统计学意义.结论 阿司匹林可通过抑制NF-κB-DNA结合活性、降低hs-CRP水平、减弱COX-2蛋白表达而发挥抗AS作用.     

基于16S rDNA测序的帕金森病患者肠道菌群初步分析

目的对帕金森病患者的肠道菌群进行初步分析。方法收集2018年10月～2019年4月某三甲医院收治的7例帕金森病患者及7例健康对照者的粪便样本,提取菌群DNA,选取细菌16S r DNA的V3～V4区序列进行基因扩增及Illumina测序,生物信息学分析肠道菌群测序数据。结果 Alpha多样性分析中,Chao指数、Ace指数、Shannon指数、Simpson指数在两组样本间无显著统计学差异(P0.05)。在界、门分类水平上PD组及健康对照组物种数目相等,在纲、目、科、属、种、OTU分类水平上PD组所包含的物种数目依次高于健康对照组。受试样本中肠道菌群结构由4个主要的菌门组成,分别为厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门和放线菌门。在PD组中,检测到了12种显著升高的肠道菌群组分(P0.05)。结论帕金森病患者与健康对照者的肠道菌群结构在大体上是相似的,有部分菌群在两组间存在着差异,深入分析肠道菌群变化有望为研究帕金森病的发病机制、疾病预防及治疗提供新思路。     

基于16S r DNA测序检测原发性胆汁性胆管炎患者肠道菌群的变化

目的 研究原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者的肠道菌群丰度和多样性。方法 收集2018年1月至2019年1月期间浙江大学医学院附属第一医院收治的9例原发性胆汁性胆管炎患者(另有8名健康者作为健康对照),分别提取肠道菌群DNA,采用16S rDNA高通量测序方法扩增V3～V4区序列相应基因片段,建库测序及生物信息学分析。结果 Alpha多样性分析中,两组间Ace指数、Chao指数、Simpson指数、Shannon指数比较,差异无统计学意义(P0.05)。通过OTU聚类和物种注释,发现两组间部分菌群的丰度比较,差异有统计学意义(P0.05)。与健康对照组(NC)相比,原发性胆汁性胆管炎组(PBC)解纤维素根瘤菌(Cellulosilyticum)、霍尔德曼氏菌(Holdemanella)、毛螺菌(Lachnospiraceae)、乳酸乳球菌(Lactococcus)和摩根菌(Morganella)降低,亨盖特拉菌(Hungatella)显著升高。此外,采用实时定量PCR技术检测PBC组和NC组肠道中大肠杆菌的含量,发现PBC组中的含量显著高于NC组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 与健康对照组(NC)相比,原发性胆汁性胆管炎组(PBC)在一定水平上肠道菌群发生了改变。进一步分析肠道菌群的变化,有望为研究原发性胆汁性胆管炎的发生发展和寻找新的敏感微生物标志物提供新的思路。     

Using 16S rDNA Sequencing Technology to Preliminarily Analyze Intestinal Flora in Children with Mycoplasma pneumoniae Pneumonia

ObjectiveWe investigated changes in the intestinal flora of children with Mycoplasma pneumoniae pneumonia (MPP).MethodsBetween September 2019 and November 2019, stool samples from 14 children with MPP from The Fourth Hospital of Baotou city, Inner Mongolia Autonomous Region, were collected and divided into general treatment (AF) and probiotic (AFY) groups, according to the treatment of “combined Bifidobacterium, Lactobacillus, Enterococcus, and Bacillus cereus tablets live”. High-throughput 16S rDNA sequencing was used to identify intestinal flora.ResultsIntestinal flora abundance and diversity in children with MPP were decreased. Both Shannon and Simpson indices were lower in the AF group when compared with healthy controls (P < 0.05). When compared with healthy controls, the proportion of Enterorhabdus was lower in the AF group, while the proportion of Lachnoclostridium was higher (P < 0.05). The proportion of Bifidobacteria and Akkermansia was lower in the AFY group but Enterococcus, Lachnoclostridium, Roseburia, and Erysipelatoclostridium proportions were higher. The proportion of Escherichia coli–Shigella in the AFY group after treatment was decreased (P < 0.05).ConclusionsThe intestinal flora of children with MPP is disturbed, manifested as decreased abundance and diversity, and decreased Bifidobacteria. Our probiotic mixture partly improved intestinal flora disorders.