抗莱氏支原体单克隆抗体的研制

通过细胞融合技术，筛选出ＭＡＬ－１和ＭＡＬ－２两株抗莱氏支原体单克隆抗体。通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法测得单抗相对应的抗原分子量均为６７．４６ｋｕ。用音接免疫荧光法检测，单抗与细胞培养中另外３种常见污染的支原体和呼吸道肺炎支原体无交叉反应。     

用Ciprofloxacin和BMcyclin清除培养细胞中的支原体污染

目的：防治支原体污染是细胞培养中难以解决的问题．我们用ＣＩＰ和ＢＭｃｙｃｌｉｎ联合治疗清除了杂交瘤细胞ＨＡｂ１８，Ａ１０，骨髓瘤细胞ＳＰ２／０和人白血病细胞Ｋ５６２中的支原体污染．方法：３株小鼠细胞系（ＨＡｂ１８，Ａ１０，ＳＰ２／０）用含有１０μｇ／ｍｌＣＩＰ的培养液治疗１２ｄ后根除了污染的支原体．人细胞株（Ｋ５６２）用ＣＩＰ加ＢＭｃｙｃｌｉｎ联合治疗２６ｄ后清除了支原体的污染．结果：清除支原体后，细胞的增殖率和杂交瘤细胞抗体分泌稳定性增强．未见有任何毒性作用．结论：用ＣＩＰ和ＢＭｃｙｃｌｉｎ清除培养细胞中支原体的污染是一个安全有效的方法．     

应用生物素—亲和素系统检测类风湿因子

目的 研究准确定量检测ＩｇＭ，ＩｇＧ，ＩｇＡ型类风湿因子（ＲＦ）的方法。方法 应用生物素－亲和素结合ＥＬＩＳＡ法（ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ）对５７例类风湿关节炎患者及１００例正常人血清进行检测，并与胶乳凝集试验（ＬＡＴ）及常规ＥＬＩＳＡ法测定的ＲＦ作对比。结果 ５７例病人ＩｇＭＲＦ阳性率在ＡＢＣ，ＥＬＩＳＡ法及ＬＡＴ法分别为８９．５％，８０．７％和６３．２％（Ｐ〈０．０１）。在ＬＡＴ法ＩｇＭＲＦ阴性的１     

肺癌患者肺泡巨噬细胞一氧化氮活性研究

用镀铜镉还原－Ｃｒｉｅｓｓ法检测肺癌患者ＢＡＬＦ及肺泡巨噬细胞（ＡＭ）培养上清液中ＮＯ水平；ＲＴ－ＰＣＲ检测ＡＭ ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ表达。结果显示，肺癌组ＢＡＬＦ及ＡＭ培养上清液中ＮＯ水平均明显低于对照组。两组ＡＭ ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ表达阳性率分别为６９％和９１％（Ｐ〉０．０５），但表达强度肺癌组明显弱于对照组（Ｐ〈０．０１）。经ＧＭ－ＣＳＦ刺激后，ＡＭ ｉＮＯＳ表达强度及培养上清液中ＮＯ水平均显     

肺癌患者肺泡巨噬细胞一氧化氮活性研究

用镀铜镉还原－Ｇｒｉｅｓｓ法检测肺癌患者ＢＡＬＦ及肺泡巨噬细胞（ＡＭ）培养上清液中ＮＯ水平；ＲＴ－ＰＣＲ检测ＡＭｉＮＯＳｍＲＮＡ表达。结果显示，肺癌组ＢＡＬＦ及ＡＭ培养上清液中ＮＯ水平均明显低于对照组。两组ＡＭｉＮＯＳｍＲＮＡ表达阳性率分别为６９％和９１％（Ｐ＞０．０５），但表达强度肺癌组明显弱于对照组（Ｐ＜０．０１）。经ＧＭ－ＣＳＦ刺激后，ＡＭｉＮＯＳ表达强度及培养上清液中ＮＯ水平均显著提高。提示肺癌局部ＡＭ抗肿瘤功能可能存在某些缺陷；ＧＭ－ＣＳＦ可刺激ＡＭ使其功能增强     

心肌顿抑组织一氧化氮含量的变化

目的 探讨心肌顿抑（ＭＳ）时局部组织一氧化氮（ＮＯ）含量的变化。方法 开胸阻断犬左前降体（ＬＡＤ）１５ｍｉｎ,实验组分别再灌注ＮＯ合成前体Ｌ－精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）、供体Ｓｉｎ－１、一氧化氮合酶（ＮＯＳ）抑制剂Ｌ－ＮＡＭＥ,通过将ＮＯ检测电极与左室前壁ＭＳ组织流出血液密切接触的直接测定法及用Ｇｒｅｉｓｓ法检测冠状窦血样的间接测定法,观察ＭＳ组织ＮＯ含量的变化。结果 ＭＳ组织ＮＯ含量降低,再灌注Ｌ－Ａ     

急性淋巴细胞白血病细胞分化与花生凝集素受体表达

用系列单抗与标记的花生凝集素（ＰＮＡ）对３８例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）细胞行免疫分型与确定分化阶段，检测ＡＬＬ细胞ＰＮＡ受体表达情况，与正常成熟淋巴细胞（ＮＭＬ）对照。发现Ｔ－ＡＬＬ，Ｎｏｎ－Ｔ－ＡＬＬ细胞大多表达ＰＮＡ受体，而ＮＭＬ细胞极少表达ＰＮＡ受体，两者有显著差异（Ｐ〈０．０１）。经神经氨酸酶（ＮＡ）预处理后，Ｎｏｎ－Ｔ－ＡＬＬ与ＮＭＬ细胞ＰＮＡ受体表达明显增加（Ｐ〈０．０５），以ＮＭ     

慢性粒细胞白血病反义核酸基因治疗的实验研究

目的单独应用ｂｃｒ－ａｂｌ反义硫代磷酸寡聚脱氧核糖核酸（ＡＳＰＯ）或ｃ－ｍｙｂＡＳＰＯ作用于慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）细胞的研究已有报道，但抑制的不彻底性是个主要问题。由于ＣＭＬ的发生是多癌基因协同作用及相互影响的结果，为进一步提高ＡＳ－ＰＯ对ＣＭＬ细胞的作用效果，用互补于两种类型（ｂ２ａ２及ｂ３ａ２）的ｂｃｒ－ａｂｌ基因融合位点两侧各１３个核苷酸的ＡＳＰＯ（ｂ２ＡＳＰＯ和ｂ３ＡＳＰＯ）及ｃ－ｍｙｂ基因起始密码子２－７互补的ＡＳＰＯ（ｍＡＳＰＯ）联合作用于Ｋ５６２细胞株和原代ＣＭＬ细胞。方法硫代磷酸寡核基酸（ＰＳ－ＯＤＮ）的合成由３９２－０５型ＤＮＡ－ＲＮＡ合成仪自动合成，经ＯＰＣ柱纯化；细胞与ＰＳ－ＯＤＮ共培养后２４，４８，９６，１２０ｈ倒置显微镜下活体观察，０．４％台盼蓝拒染法进行死活细胞计数；ＣＦＵ－Ｋ５６２、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ采用０．８％甲基纤维素半固体培养法；采用两对引物ＲＴ－ＰＣＲ半定量法检测细胞ｂｃｒ－ａｂｌｍＲＮＡ表达；通过流式细胞仪检测及电镜观察细胞凋亡情况。结果（１）ＡＳＰＯ能够特异性抑制ｂｃｒ－ａｂｌ基因表达；经ＲＴ－ＰＣＲ的检测发现１０μｍｏｌＡＳＰＯ作用４８ｈ，两种反义     

用Ciprofloxacin和BMcyclin清除培养细胞的支原体污染

防治支原体污染是细胞培养中难以解决的问题，我们用ＣＩＰ和ＢＭｃｙｃｌｉｎ联合治疗清除了杂交瘤细胞ＨＡｂ１８，Ａ１０，骨髓细胞ＳＰ２／０和人白血病细胞Ｋ５６２中的支原体污染。方法：３株小鼠细胞系（ＨＡｂ１８，Ａ１０，ＳＰ２／０）用含有１０μｇ／ｍｌＣＩＰ培养液治疗１２ｄ后根除了污染的支原体。人细胞株（Ｋ５６２）用ＣＩＰ加ＢＭｃｙｃｌｉｎ联合治疗２６ｄ后清除了支原体的污染。结果：清除支原体后，细胞的增     

L－赖氨酸高产菌株筛选

本实验以Ｌ－赖氨酸产生菌钝齿棒杆菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｃｒｅｎａｔｕｍ）ＯＭ－４（ＨＳ＋，ＡＥＳｒ，Ｍｅｔｒ）为出发菌株，经硫酸二乙酯和氯化锂复合诱变处理，用ＡＥＣ（Ｓ－［２－氨乙基）－Ｌ－半胱氨酸）和苏氨酸定向筛选获得了高抗ＡＥＣ的突变株ＡＴ－５（ＨＳ＋，ＡＥＣｒ，Ｍｅｔｒ）菌株，再以ＡＴ－５为出发菌株经亚硝基胍诱变处理，获得一株产Ｌ－赖氨酸的ＴＡ（２－噻唑－ＤＬ－丙氨酸）抗性突变株（ＡＴＴ一６８号），菌株产酸量由原来ＯＭ一４菌株的４６．３ｍｇ／ｍＬ提高到７４．８ｍｇ／ｍＬ提高１６１．５％，在筛选结构类似物抗性突变株时采用小钢杯法，可大大节省结构类似物药品．     

心肌M2胆碱受体抗体对大鼠心房及心室肌cAMP含量的影响

目的 :了解心肌M2 胆碱受体抗体 (M2 Ab)对大鼠心房和心室肌cAMP含量的影响 ,并与M2 胆碱受体激动剂卡巴可 (Carb)的作用进行了对比观察。方法 :采用离体生化放射免疫分析法测定M2 Ab及M2 胆碱受体激动剂Carb对心肌cAMP含量的影响。结果 :①M2 Ab及Carb两者均可剂量依赖性抑制异丙肾上腺素 (Isoproterenol,Iso)所刺激的大鼠心房及心室肌cAMP的增加。卡巴可浓度为 2 μmol/L ,10 μmol/L ,5 0 μmol/L时可分别抑制Iso所刺激的cAMP含量 (8.5± 1.2 ) % ,(16 .2± 1.4) % ,(2 9.5± 2 .1) % ,而M2 Ab浓度为 5 0nmol/L ,10 0nmol/L ,40 0nmol/L时 ,可分别抑制 (6 .1± 0 .6 ) % ,(17.3± 1.8) % ,(31.7± 3.1) % (P <0 .0 1)。②Carb(10 μmol/L)及M2 Ab(10 0nmol/L)两者可分别抑制基础cAMP(49.2± 4.3) %和 (6 4.3± 5 .1) %。③M受体阻断剂阿托品 (Atr) (1.5 μmol/L)不但可阻断Carb对Iso的抑制反应 ,亦能阻断M2 Ab的这种反应。而相应的抗原性肽段也能阻断M2 Ab的这种反应。结论 :M2 Ab抑制Iso引起的心室肌细胞cAMP生成量的增加反应 ,类似于M受体激动剂Carb ,两者效应均通过作用于M2 受体途径实现。     

用125I-M胆碱受体亚型特异抗体测定大鼠脏器M受体亚型的分布

目的人类多种疾病在Ｍ胆碱受体（Ｍ－ＡｃｈＲ）亚型的分布上有差别。本研究旨在根据Ｍ受体的氨基酸序列,合成人工多肽抗原,研究大鼠主要脏器Ｍ受体亚型的分布。方法制备特异性Ｍ１和Ｍ２受体抗体,用１２５标记两种抗体,注射到大鼠体内。结果研究显示Ｍ１和Ｍ２受体在大鼠心脏、肝脏、气管平滑肌、肾脏及肺组织中分布不同。结论人工抗体抗原诱发的Ｍ受体亚型抗体特异性好,为进行Ｍ受体亚型检测提供比较简便、可靠的方法。     

Stimulatory activity of anti-peptide antibodies against the second extracellular loop of human M2 muscarinic receptors

Objective To study the activity of anti-peptide antibodies against the second extracellular loop of human M(2) muscarinic receptors on cAMP production and inward calcium currents (I(Ca)) in guinea pig ventricular myocytes.A comparison was also made with those of a muscarinic receptor agonist.Methods cAMP content was determined by radioimmunoassay and the I(Ca) in guinea pig single ventricular cells were recorded by the whole-cell patch clamp technique.Results Both the muscarinic receptor agonist, carbachol (Carb 10 μmol/L), and anti-peptide antibodies (Abs 100 nmol/L) could decrease basal cAMP levels (by 46.9%±4.2% and 60.2%±4.6%, respectively) and basal I(Ca).Both Carb (10 μmol/L) and Abs (100 nmol/L) could also inhibit the isoprenaline-induced (Iso 0.8 μmol/L) increases in cAMP production (from 108.2±7.0 to 88.4±7.2 pmol/mg·protein/min for Carb and 88.6±5.1 pmol/mg·protein/min for Abs, respectively) and the increases in I(Ca).The muscarinic receptor antagonist atropine (Atr) was able to prevent these effects of Carb and Abs.Conclusions Anti-peptide antibodies against an epitope located in the second extracellular loop of human M(2) muscarinic receptors, similar to muscarinic receptor agonist, could decrease the basal I(Ca) and β-receptor agonist stimulated increase of I(Ca) by decreasing the basal and β-receptor agonist stimulated increase of cAMP production, and therefore could have an effect on their target receptor.These results further suggest that autoimmunity may participate in the pathogenesis of human cardiomyopathy and the second extracellular loop of human M(2)muscarinic receptor could be the main immunodominant region.     

Protective immunity in mice elicited by living infective third-stage hookworm larvae (Shanghai strain of Ancylostoma caninum).

OBJECTIVE: To elucidate the mechanisms of protective immunity in mice elicited by living hookworm (Ancylostoma caninum third-stage infective larvae (L3). METHODS: The number of migrating infective larvae recovered from the lungs was used as an endpoint for vaccine immunity. The timing of maximal L3 lung entry was determined by counting the number of lung larvae at several time points after infection with 500 or 1000 L3. Mice were immunized either orally or subcutaneously with 500 L3, followed by two boosts of L3 once every two weeks. The immunized mice were challenged orally with 500 L3 one week after the final boost. To evaluate the protective immunity, the number of L3 recovered from the lungs of the immunized mice during the time of maximal larval entry was compared with that of controls. Host immunity was also evaluated by comparing circulating anti-L3 antibodies between immunized and controlled mice, using both enzyme immunoassays and immunoblotting techniques, and by lung histopathology. RESULTS: The peak time of larval entry into the lungs occurred 48 hours after infection. Mice immunized either orally or subcutaneously with L3 exhibited a marked reduction (90.2% and 86.2% respectively) in the number of recovered lung larvae in comparison to controls (P < 0.01). The protection might be associated with circulating anti-L3 antibodies, including antibodies directed against 132-200 kDa L3 antigens, as well as three major antigens ranging from 28 to 51 kDa. Larvae migrating through the lungs of vaccinated mice showed cuticular damages accompanied with host-inflammatory cell invasion. CONCLUSIONS: Immunization with living L3 protects mice against lung invasion after challenged with hookworm infection. Vaccine immunity is associated with circulating antibodies against L3 antigens and lung inflammatory responses. The mouse model is potentially useful for developing a hookworm vaccine.     

中线T细胞淋巴瘤的临床病理、免疫组织化学与形态定量分析

应用系列抗体对１２２例中线恶网作免疫组化染色，证实１１２例为Ｔ细胞源性，４例Ｂ细胞性，余６例尚不能分类，支持本病大多数是Ｔ细胞淋巴瘤的观点。本病可分为肉瘤样型和肉芽肿样型两种组织学类型，经形态定量发现前者光镜下可再分为大、中、小细胞亚型。对随访病例作临床病理分析表明，不同组织类型者其临床表现有所不同并与其预后密切相关。     

SP-A1在甲醇酵母中的分泌表达及产物的鉴定

目的：研究人肺表面活性物质相关蛋白A1(SP-A1)在甲醇酵母Pichia pastoris(P．pastoris)中的分泌表达、产物的分离纯化及免疫活性测定。方法：将人SP-A1基因克隆至P.pastoris的分泌表达质粒pPIC9K上，获得重组表达质粒pPIC9K／SP-A，转化P.pastoris GS115、KM71。通过G418筛选获得高拷贝转化子(HIS4Mut^ )，在摇瓶中培养、甲醇诱导表达SP-A1，纯化目的蛋白，并免疫小鼠，ELISA法和western blotting分析SP-A1的免疫活性。结果：SDS-PAGE结果显示，在P.pastoris中经甲醇诱导，SP-A1获得表达，其表达量在上清中为200mg／L。经过纯化可获得纯度达95％以上的蛋白质。ELISA法和western blotting结果表明，目的蛋白可被多克隆抗体识别。可刺激小鼠产生抗体。结论：人组织特异性蛋白SP-A1可在P.pastoris中表达，表达产物具有免疫原性。     

Mapping epitopes of human papillomavirus type 16 L1 protein with a phage display epitope library

Ｍａｐｐｉｎｇｅｐｉｔｏｐｅｓｏｆｈｕｍａｎｐａｐｉｌｏｍａｖｉｒｕｓｔｙｐｅ１６Ｌ１ｐｒｏｔｅｉｎｗｉｔｈａｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙｅｐｉｔｏｐｅｌｉｂｒａｒｙＬｉｕＴｉａｎｊｕ刘天菊，ＳｉＬüｓｈｅｎｇ司履生，ＷａｎｇＹｉｌｉ王一理，ＳｕｎＸｉａ...     

4-苯基咪唑+氢氧化铝复合佐剂对甲型肝炎减毒活疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响

目的 研究4-苯基咪唑(4-PI)+氢氧化铝[Al(OH)3]复合佐剂对甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-l)诱导的小鼠体液免疫应答的影响.方法 实验设置7个分组,分别是:阴性对照组(1 × PBS),铝佐剂组[HepA-l+Al(OH)3],疫苗组(HepA-l),M1[HepA-l+Al(OH)3+4-PI500 μg]组,M2[HepA-l+Al(OH)3+4-PI 1 rmg]组,M3[HepA-l+Al(OH)3+4-PI 1.5 mg]组和M4(HepA-l+4-PI 1 mg)组,200 μL HepA-l,24 μLAl(OH)3,随机分配小鼠,7只/组,分别皮下注射300 μL,接种一次.用间接酶联免疫吸附法测试抗-甲型肝炎病毒(HAV) IgG抗体滴度,检测时间为免疫后4周、8周、12周、16周.实验过程中,观察和记录小鼠的健康情况.结果 除阴性对照组,其余各组4个时间点均检测到抗-HAVIgG抗体,12周达到峰值.M2组在整个检测阶段抗体水平最高,显著高于疫苗组(t=4.449、3.633、2.565、6.809,P＜0.05)和M4组(t=6.256、4.796、4.153、4.113,P＜0.05),且第4周高于铝佐组(t=2.877,P＜0.05);M4组在4个时间点检测到的抗体水平与疫苗组相当.4-PI最佳剂量组是1mg/只.实验全程观察到小鼠每项生理指标均正常.结论 4-PI+氢氧化铝复合佐剂能增强HepA-1诱导的小鼠体液免疫应答,有望开发成HepA-1新型复合佐剂.     

SARS相关冠状病毒M基因片段的克隆及其DNA疫苗诱导的体液免疫

目的：构建含有SARS相关冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus，SARS—CoV)M基因片段的核酸疫苗，观察其免疫小鼠后病毒特异性抗体产生情况。方法：将合成的M基因片段克隆到核酸疫苗真核表达载体pVAX1中，免疫小鼠后，用SARS—CoV抗体ELISA检测试剂盒定期检测免疫小鼠血清中抗SARS—CoV的病毒特异性抗体水平。结果：构建了重组核酸疫苗质粒pVCo—M，免疫小鼠后可诱导产生出病毒特异性抗体。结论：以M为抗原基因的DNA疫苗能诱导SARS病毒特异性抗体，为进一步改进或探索同类DNA疫苗提供有益启示。     

环孢霉素A合成抗原的单抗制备技术探讨

目的：研究利用自制的合成抗原制备环孢霉素A单克隆抗体的方法。方法：利用光化学反应将环孢霉素A与聚-L-赖氨酸偶联为合成抗原,免疫BALB／e小鼠,将免疫后小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0进行细胞融合,经反复筛选亚克隆获得抗CsA抗体的杂交瘤细胞株,以间接ELISA法进行抗体鉴定。结果：获得4株分泌抗CsA抗体的杂交瘤细胞株,其中2株分泌的抗体效价高,有一定特异性。结论：该抗原合成和免疫的方法切实可行,但单克隆抗体制备及保存方法有待进一步改进。