一脆性X综合征家系的基因诊断及其动态突变

本文报告了使用探针ＰＸ６对一脆性Ｘ家系进行了分子杂交分析研究。结果表明：女性携带者的（ＣＧＧ）的较小扩增遗传到子代出现（ＣＧＧ）重复序列大量扩增，伴随ＣｐＧ岛甲基化，从而导致ＦＭＲ－１基因失活。     

外周淋巴细胞FMR—1mRNA的检测

采用逆转录ＰＣＲ技术检测人外周淋巴细胞ＦＭＲ－１ｍＲＮＡ表达。对１０名在临床筛查中被认为可能患有脆性Ｘ综合征的男性学生进行了检测，其中２例可疑男性样品中未检测出ＦＭＲ－１ｍＮＲＡ表达。ＤＮＡ印迹杂交和异常甲基化ＰＣＲ检测证实这２例患者同样有ＦＭＲ－１基因５＇ＣｐＧ岛甲基化和（ＣＧＧ）ｎ扩展。     

外周淋巴细胞FMR－1mRNA的检测

采用逆转录ＰＣＲ技术检测了人外周淋巴细胞ＦＭＲ－１ｍＲＮＡ表达。对１０名在临床筛查中被认为可能患有脆性Ｘ综合征的男性学生进行了检测，其中２例可疑男性样品中未检测出ＦＭＲ－１ｍＲＮＡ表达。ＤＮＡ印迹杂交和异常甲基化ＰＣＲ检测证实这２例患者同时伴有ＦＭＲ－１基因５＇ＣｐＧ岛异常甲基化和（ＣＧＧ）ｎ扩展。上述方法的建立为诊断脆性Ｘ综合征提供了一种新的分子生物学手段，并可用于ＦＭＲ－１基因表达研究。     

脆性X综合征基因的快速直接筛查法

目的建立一种简便易行、可以快速筛查脆性Ｘ综合征突变基因的方法。方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＦＭＲ－１基因中ＣＧＧ三核苷酸重复序列。通过测定样品中ＣＧＧ重复序列的拷贝数判断ＦＭＲ－１基因是否正常、或处于前突变状态（携带者），从而对临床可疑病例进行快速筛查。结果在正常人中可扩出含２０～３０个ＣＧＧ拷贝的片段；携带者可扩出５０～１００个拷贝；患者由于ＣＧＧ拷贝数大于２００而难以扩出。不能扩增的样品经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法检测证实为脆性Ｘ综合征患者。结论这种方法可以快速、简便地从可疑人群中确定正常人与携带者，在脆性Ｘ综合征群体筛查中有实际应用价值。     

脆性X综合征的PCR筛查与诊断

采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术结合变性序列胶银染方法对１６９例智力低下（简称智低）疑诊病例及６个脆性Ｘ综合征家系中３３名成员的ＦＭＲ１基因（ＣＧＧ）ｎ重复序列进行了分析,结果发现：（１）智低疑诊病例中３例男性未检出ＰＣＲ阳性产物;（２）脆性Ｘ综合征家系内,５例男性先证者亦未检出ＰＣＲ扩增带;（３）对上述ＰＣＲ结果为阴性的８例男性智低患者（此８例均经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交证实为全突变患者）,设立ＦＲＡＸＥ位点引物作内对照,结果仅获得ＦＲＡＸＥ位点的正常扩增产物,故而可排除ＦＲＡＸＡ位点ＰＣＲ产物为假阴性的可能。结果表明,ＰＣＲ分析ＦＭＲ１基因（ＣＧＧ）ｎ重复序列可有效检出前突变携带者,若男性智低患者的ＰＣＲ结果为阴性,在设立内对照基本排除假阴性的前提下,对本病也有提示作用。该方法快速、简便、稳定、可靠,适合于脆性Ｘ综合征的大量群体筛查。     

PCR检测脆性X基因FMR－1的CGG三核苷酸重复数变异及其应用价值

ＰＣＲ检测脆性Ｘ基因ＦＭＲ－１的ＣＧＧ三核苷酸重复数变异及其应用价值项坤三，王延庆，沈卫平脆性Ｘ综合征［Ｆｒａ（ｘ）］系由Ｘ染色体ｑ２７．３上的ＦＭＲ－１基因突变所致。绝大多数［Ｆｒａ（ｘ）］患者中，为５’非翻译区的ＣＧＧ三核苷酸重复数突变致其长度显...     

用微卫生DNA多态性进行血友病甲基因诊断的研究

目的：研究ＦⅧ基因１３内含子（ＣＡ）ｎ重复序列（ＣＡ－１３）、２２内含子（ＣＡ）ｎ重复序列（ＣＡ－２２）及基因旁微卫星ＤＮＡＤＸＳ１５位点的多态性在血友病甲基因诊断中的应用价值。方法：用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（测序胶）的方法，检测了三个血友病甲家系共１２名成员Ｘ波色体ＣＡ－１３、ＣＡ－２２、ＤＸＳ１５的长度变化，并进行连锁分析。结果：三个家系均得到诊断，并俭出一名携带者。结论：     

中国人遗传性慢性舞蹈病病因的确定

国外报道的亨廷顿病有１／３的家系可追溯到共同的祖先，而国内报道的亨廷顿病多为散发病例。为了查明国内报道的遗传性慢性舞蹈病与国外报道的亨廷顿病是否属同一种病因。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法分析了中国正常人和遗传性慢性舞蹈病家系成员的ＩＴ１５基因中（ＣＡＧ）ｎ重复序列。结果２５个正常人拷贝数为１６～２６，来自４个家系的７名患者的拷贝数为４４～５３，显著增大。结论从基因水平第１次确定了中国人遗传性慢性舞蹈病与白种人的享廷顿舞蹈病一样，是由ＩＴ１５基因中（ＣＡＧ）ｎ重复序列扩增所致。     

脆性X综合征的基因诊断

脆性Ｘ综合征被认为是导致遗传性智力低下的首位病因，其发病率在男性为１／１２５０，女性为１／２０００。该病临床以不同程度的智力低下为主，遗传方式呈非寻常的Ｘ连锁显性遗传。细胞遗传学方法可检出位于Ｘｑ２７．３的脆性位点。１９９０年克隆出脆性Ｘ智力低下基因ＦＭＲ－１，确定该病分子学突变基因为ＦＭＲ－１基因外显子中一三核苷酸重复序列（ＧＧＧ）ｎ的扩增。在正常人ｎ为５￣５０，携带者ｎ为５０￣２００，患者ｎ大     

前列腺癌细胞雄激素受体基因CAG重复序列改变的初步研究

目的 了解前列腺癌细胞雄激素受体（ＡＲ）基因ＣＡＧ重复序列有否改变。方法 显微镜下分别取１１例前列腺癌标本的肿瘤细胞及非肿瘤细胞，提取ＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增后，用变性胶电泳测得肿瘤细胞和非肿瘤细胞ＤＮＡ含ＡＲ基因ＣＡＧ重复序列片段的相对长度。结果 有３例（２７．３％）前列腺癌细胞ＡＲ基因ＣＡＧ重复序列较非肿瘤细胞短。其余８例前列腺癌细胞ＡＲ基因ＣＡＧ重复序列与非肿瘤细胞相同。结论 一些病例的前列腺癌     

非同位素PCR方法检测脆性X 综合征FMR-1基因CGG重复序列数目

目的 建立一种可靠、简便的非同位素PCR方法检测脆性X综合征的突变基因。方法 采用生物素标记的CGG寡核苷酸探针，检测通过PCR扩增的FMR-1基因中CGG三核苷酸重复序列数目。从而判断所检样品中FMR—1基因是否正常。结果 该法可检测出正常人及携带者的CGG重复拷贝数。结论 该方法可以简便、安全、可靠地检测FMR—1基因中(CGG)n重复拷贝数，从而确定为正常人或携带者，可作为临床上筛查脆性X综合征的首选方法。     

A rapid screening and diagnosis on fragile X syndrome by PCR

ＦｒａｇｉｌｅＸｓｙｎｄｒｏｍｅ［Ｆｒａ（Ｘ）］ｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｃｏｍｍｏｎｃａｕｓｅｓｏｆｉｎｈｅｒｉｔｅｄｍｅｎｔａｌｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ,ｗｉｔｈａｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆａｐｐｒｏｘｉ－ｍａｔｅｌｙ１ｉｎ１２５０ｍａｌｅｓａｎｄ１...     

前列腺癌中EphA1基因表达的初步研究

目的:检测前列腺癌中EphA1基因转录及受体表达水平,探讨其表达异常的机制及其临床意义。方法:利用RT-PCR法检测雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP和雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3中EphA1基因mRNA表达情况,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法进行甲基化状态分析;用免疫组化方法检测19例前列腺癌和22例良性前列腺组织标本中EphA1受体表达情况。结果:LNCaP和PC-3细胞中均未检测到EphA1基因转录;PC-3细胞中EphA1基因启动子区内CpG岛存在高甲基化现象,而LNCaP细胞则不存在;前列腺癌和良性前列腺增生组织中EphA1受体表达率分别为36.8%和45.5%,其差异无统计学意义(P>0.05)。结论:前列腺癌细胞LNCaP和PC-3中无明显EphA1基因表达,甲基化可能是导致该基因下调的机制之一。EphA1基因的甲基化在前列腺癌进展及由雄激素依赖向雄激素非依赖转化过程中可能发挥一定作用。     

SPM阻留DNA片段解链状态的分析

用ＳＰＭ法分离基因ＣｐＧ岛的实验所获大量阻留片段中，含有很多非ＣｐＧ岛的序列，包括Ａｌｕ重复序列，为了进一步改进ＳＰＭ方法，最大限度驱除非ＣｐＧ岛的影响，对所有的ＳＰＭ阻留的ＤＮＡ片段进行热力学及其电泳行为分析，结果显示，所有ＤＮＡ片段均呈现不同形式的部分解链状态，有的ＤＮＡ片段有２个以上的解链区域，根据各解链区域解链温度差异的大小，有的在ＤＮＡ片段的两侧部分解链，的有在片段中央部分解链，有的既有     

HCC患者GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化状态研究

目的 检测人原发性肝癌（HCC）中抑癌基因GSTP1的启动子区CpG岛甲基化的状况，并探讨其在肝癌发生中的作用。方法 以已知的GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化阳性的乳腺癌细胞株MCF-7为阳性对照，以11例正常人外周血单核细胞（PBMC）DNA为阴性对照，用甲基化特异性PCR（MSP）的方法对26例肝细胞癌患者的癌、远癌组织中GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化的状态进行检测。结果 在26例原发性肝癌中GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化在癌组织为88％（23／26），在远癌组织中为69％（18／26）；而在11例正常人外周血单核细胞均为甲基化阴性。结论 抑癌基因GSTP1基因启动子区CpG岛高甲基化可能是肝癌发生早期的分子事件，在人原发性肝癌的发生发展中具有重要的作用。     

DNA damage and repair in lymphoblastoid cell lines from normal donors and fragile X syndrome patients

BACKGROUND: Because lymphocytes from fragile X patients have been reported as hypersensitive to bleomycin-induced chromatid breaks and because the number of trinucleotide repeats in families with fragile X syndrome has a propensity to expand, we have investigated the possibility that fragile X cells may be hypersensitive to DNA damage and have a lower capacity for DNA repair. METHODS: Lymphocytes from normal and fragile X syndrome donors were immortalized by Epstein-Barr virus transformation. Characteristics of fragile X syndrome including the folate-sensitive fragile site on chromosome Xq27.3, length of CGG repeat expansion, and FMRP expression in Epstein-Barr virus-transformed lymphoblastoid cell lines were analyzed by standard cytogenetic methods, Southern blot, and Western blot, respectively. Analysis of DNA damage and repair induced by hydrogen peroxide, bleomycin, ethyl methanesulfonate, 4-nitroquinoline-N-oxide, etoposide, and mitomycin C was carried out by single-cell gel electrophoresis assay (known as comet assay). RESULTS: Lymphoblastoid cell lines from fragile X donors had a folate-sensitive fragile site on chromosome Xq27.3, no or low FMRP expression, and expansion of the CGG repeat. Results of comet assay showed that fragile X cells were not more sensitive to mutagen-induced DNA strand breaks and did not have lower DNA repair capacity in comparison with normal cells. Furthermore, one fragile X cell line showed hyposensitivity to DNA strand breaks induced by hydrogen peroxide, bleomycin, and ethyl methansulfonate. CONCLUSIONS: The results of this study do not support the notion that CGG trinucleotide expansion in fragile X syndrome is caused by permanent deficiency in DNA repair.     

胰腺癌中人RUNT相关转录因子3基因启动子区甲基化及其临床意义

目的检测胰腺癌人RUNT相关转录因子3(RUNX3)基因启动子的甲基化情况并探讨其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)检测56例胰腺癌组织及癌旁组织、14例正常胰腺组织、3株人胰腺癌细胞株(PANC1、CFPAC-1、SW1990)、1株正常肝细胞株(HL-7702)中RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化状态。检测用甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-cdR)处理前后胰腺癌细胞株RUNX3 mRNA的表达。分析RUNX3异常甲基化与胰腺癌临床特征的关系。结果56例胰腺癌组织中,51.79%(29/56)存在RUNX3基因启动子区CpG岛的异常甲基化,癌旁胰腺组织有10.7%(6/56)存在异常甲基化,而正常胰腺组织中未检测到RUNX3基因异常甲基化。RUNX3基因异常甲基化与患者病理分化程度(r=0.314,P=0.018)、淋巴结转移(r=0.370,P=0.005)显著相关。在5-Aza-cdR处理前,胰腺癌细胞株PANC1、CFPAC-1、SW1990的RUNX3 mRNA无表达或低表达,经5-Aza-cdR处理后各胰腺癌细胞株RUNX3 mRNA恢复表达。结论胰腺癌组织及胰腺癌细胞株均存在RUNX3基因CpG岛异常甲基化;RUNX3启动子的高甲基化与其基因表达降低有关,与胰腺癌组织分化程度、淋巴结转移相关。     

γ射线诱发小鼠白血病模型中p16基因的改变

目的：研究γ射线诱发小鼠白血病模型中p16基因的失活机制。方法：应用聚合酶链反应(PcR)扩增39例γ射线诱发的白血病和对照小鼠胸腺组织中p16基因第1、第2外显子，检测等位基因纯合性缺失；用限制性内切酶-PCR法检测p16基因的甲基化发生情况；并应用PCR-单链构象多态性分析银染方法检测p16基因碱基突变的发生。结果：在白血病模型中，外显子2的缺失率为33．3％，甲基化的发生率为23．1％。结论：γ射线诱发的小鼠白血病模型发生、发展过程中伴有p16基因的改变，其失活以纯合性缺失和甲基化为主。