苦荞麦黄酮对人食管癌细胞EC9706增殖的影响

目的研究苦荞麦黄酮在体外对EC9706细胞增殖的影响。方法 MTT法观察苦荞麦黄酮对EC9706细胞的毒性,荧光染色法观察细胞核的改变,流式细胞术观察细胞周期和细胞内活性氧水平,Western blotting分析凋亡蛋白表达。结果苦荞麦黄酮明显抑制EC9706细胞的增殖,其抑制率与药物浓度和作用时间呈正相关。经DAPI染色,电镜观察细胞核,可见多个凋亡小体的形成。流式细胞仪检测发现,苦荞麦黄酮使细胞发生G2/M期周期停滞,细胞内活性氧水平明显增加,且呈浓度依赖效应。Western blotting分析表明,苦荞麦黄酮能上调细胞内的促凋亡蛋白Bax,并下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量。结论苦荞麦黄酮对人食管癌细胞株EC9706增殖具有明显的抑制作用,使细胞发生周期阻滞,并能通过调节活性氧水平及改变凋亡蛋白的表达量诱导其发生凋亡。     

基于活性氧机制的叶黄素诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的探讨叶黄素对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制效应及其凋亡机制。方法通过SRB法、Hoechst33342/PI荧光染色法观察叶黄素对胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用及诱导凋亡机制,并采用荧光分析法检测叶黄素作用SGC-7901细胞后细胞内ROS的变化。结果 40mg/L的叶黄素作用SGC-7901细胞24,48,72 h的抑制率分别是(8.57±2.43)%、(25.07±2.90)%和(32.33±1.81)%;160mg/L的叶黄素作用SGC-7901细胞的抑制率上升为(34.72±4.06)%、(64.55±2.48)%和(83.29±0.10)%。Hoechst33342/PI荧光染色法检测细胞的凋亡情况,对照组显示低蓝光低红光,40mg/L部分显示高蓝光低红光,80 mg/L大部分显示高蓝光低红光,160 mg/L的大部分显示低蓝光高红光;荧光分光光度计检测叶黄素作用胃癌SGC-7901细胞后细胞内ROS的活性变化,结果显示随着叶黄素浓度的升高,细胞内ROS的活性降低(P<0.01)。结论叶黄素对胃癌SGC-7901细胞的生长抑制以及诱导其凋亡的分子机制,可能是通过降低细胞内ROS的活性所介导的。     

管通方醇提物对人食管癌EC9706细胞抑制作用的研究

目的:通过观察管通方醇提物对食管癌EC9706细胞增殖、细胞周期的影响,揭示该方抑制食管癌EC9706生长的作用机制。方法:体外培养食管癌EC9706细胞,用管通方醇提物处理细胞,MTT法检测管通方醇提物对食管癌EC9706细胞增殖影响的量效关系;倒置显微镜下观察食管癌EC9706细胞形态学变化;PI单染标记流式细胞术检测醇提物对食管癌EC9706细胞周期的影响。结果:管通方醇提物均可不同程度地抑制食管癌EC9706细胞的增殖,其抑制率呈剂量依赖关系;管通方醇提物影响了细胞形态结构。管通方醇提物对EC9706细胞周期各时相均有影响。与对照组比较,管通方组G0/G1期细胞比率升高(P0.05)。结论:管通方醇提物将食管癌EC9706细胞阻滞于G0/G1,阻滞细胞周期的进程,该方对食管癌EC9706细胞的增殖具有抑制作用。     

启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对人食管癌EC9706细胞Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导的影响

目的:研究启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对人食管癌EC9706细胞增殖影响,并从Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导通路探讨三方作用机制。方法:体外培养食管鳞癌细胞株EC9706细胞,分别加入启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤提取液培养处理细胞,通过MTT染色观察细胞增殖变化,通过Western blot法检测Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导通路蛋白表达。结果:启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤的IC50值分别是1462、1232、2875μg/m L,均可促进Caspase-3蛋白表达而诱导细胞凋亡,而Cyt.C蛋白表达较弱;启膈散和沙参麦冬汤对FADD、Fas、TNFR1和DR5蛋白表达有不同程度地影响。结论:三方可通过激活Caspase-3诱导细胞凋亡,其中启膈散主要通过非依赖FADD死亡受体途径,沙参麦冬汤主要通过依赖FADD死亡受体途径,通幽汤可能通过其他凋亡蛋白参与的上游信号途径而激活Caspase-3致细胞凋亡。     

甘草次酸对人食管癌Eca9706细胞生长的抑制作用及机制

目的:研究甘草次酸对人食管癌细胞生长的抑制作用及对细胞凋亡的影响。方法:Eca9706细胞接种于96孔板,每孔104个细胞/100μL,培养24 h贴壁,分别加入含不同浓度甘草次酸的培养液100μL,质量浓度分别为95,114,138,166,200 mg·L-1,另设对照孔(加培养液100μL和与溶解药物等量的DMSO),每组设8个复孔。细胞培养48 h,MTT法检测甘草次酸对人食管癌细胞Eca9706增殖的抑制,用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡情况。结果:在95~200 mg·L-1质量浓度甘草次酸能有效抑制Eca9706细胞增殖,且呈剂量依赖性,(P<0.05)。83,108,133 mg·L-1的甘草次酸作用Eca9706细胞48 h,细胞凋亡率明显增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。激光共聚焦显微镜下对照组细胞膜绿色荧光,以早期凋亡为主,甘草次酸高、低剂量组细胞膜绿色荧光、核红色荧光较多,既有早期凋亡,又有晚期凋亡。结论:甘草次酸可能通过诱导细胞凋亡对食管癌Eca9706细胞增殖起抑制作用。     

去甲斑蝥素诱导食管癌细胞凋亡作用研究

目的：探讨去甲斑蝥素诱导食管癌细胞凋亡的作用及机制。方法：对去甲斑蝥素作用后细胞凋亡及增殖的变化进行流式细胞术分析,通过免疫细胞化学技术对用药前后凋亡相关基因（Fas、bcl-2、caspase8）的表达情况进行检测。结果：去甲斑蝥素对人食管癌细胞凋亡具有诱导作用,能够诱导Eca-109细胞发生形态改变。从流式细胞仪分析的结果中可知,在DNA组方图上,食管癌Eca-109细胞出现了典型的亚二倍体峰即凋亡峰,同时细胞周期中的分布也出现了明显的变化。根据显示的免疫细胞化学结果,食管癌Eca-109细胞在经过去甲斑蝥素作用后,Fas、caspase8蛋白表达出现明显升高（P〈0.05）,而bcl-2蛋白表达则出现显著降低（P〈0.05）。结论：去甲斑螫素对食管癌Eca-109细胞增殖具有抑制作用并且能够诱导其凋亡,该作用的实现可能与下调bcl-2蛋白表达和上调Fas、caspase8蛋白表达有关。     

肉桂醛诱导食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞凋亡作用及机制研究

目的探究肉桂醛对食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞增殖活性及凋亡的作用,并探讨其机制。方法 MTS实验检测不同质量浓度(1.88、3.75、7.50、15.00、30.00μg/m L)肉桂醛对Eca109细胞增殖活性的影响;倒置相差显微镜观察Eca109细胞形态学变化;流式细胞术检测不同质量浓度肉桂醛对Eca109细胞周期分布和凋亡的影响;Westernblotting检测不同质量浓度肉桂醛作用24h对Eca109细胞凋亡相关蛋白Caspase-3/Caspase-9、促凋亡蛋白Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达水平的影响。结果质量浓度为15.00、30.00μg/m L的肉桂醛作用Eca109细胞24 h后,与对照组相比,肉桂醛组细胞增殖活性显著降低(P0.05);经肉桂醛作用后,Eca109细胞呈现明显的凋亡形态学变化;经不同质量浓度肉桂醛处理Eca109细胞24 h后,G0/G1期细胞比例明显下降(P0.05),而G2/M期细胞比例明显增加(P0.05);肉桂醛处理Eca109细胞24h后,细胞凋亡率明显上升(P0.05);与对照组相比,经不同质量浓度肉桂醛处理24 h后,Eca109细胞中凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9出现明显的裂解片段(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达水平显著降低(P0.05),而促凋亡蛋白Bax表达明显上调(P0.05)。结论肉桂醛可抑制食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与上调凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9、促凋亡蛋白Bax表达,以及下调抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1表达有关。     

淫羊藿苷对食管癌细胞EC9706增殖与凋亡的影响

目的:探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对食管癌细胞EC9706增殖的影响,明确其作用机制。方法:ICA(40,160,640 nmol·L^-1)作用EC9706细胞48 h后,应用CCK8法检测EC9706细胞增殖;应用Hoechest33342染色和荧光显微镜检测细胞凋亡;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA表达;应用免疫印迹法检测Bax,Bcl-2的蛋白表达。结果:ICA能显著抑制EC9706细胞增殖;ICA作用EC9706细胞出现细胞凋亡形态学改变;免疫印迹结果显示Bax蛋白表达减少,而Bcl-2蛋白表达增多。结论:ICA能显著抑制人食管癌EC9706细胞增殖,其凋亡作用机制可能与上调Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白的表达相关。     

熊果酸诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡的作用及机制

目的研究熊果酸(Ursolicacid,UA)抑制人食管癌Eca-109细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用及机制。方法MTT比色法检测熊果酸对Eca-109细胞的增殖抑制作用;透射电镜观察经熊果酸处理后Eca-109细胞超微结构的改变;流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡率;Westernblot法检测P27kip1蛋白、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果20～50μmol/L熊果酸对Eca-109细胞具有显著的抑制作用(P<0.01);电镜下,18.32～36.65μmol/L熊果酸处理过的Eca-109细胞可见典型的凋亡形态及坏死形态;流式细胞检测显示细胞凋亡率及G0/G1期细胞随着熊果酸浓度的增加而增多,S期细胞逐渐减少;Westernblot检测结果提示熊果酸能使Bcl-2表达下降而Bax、P27kip1增加。结论熊果酸对人食管癌细胞系Eca-109具有显著的增殖抑制、诱导细胞凋亡作用。其作用与提高P27kip1蛋白的表达,将细胞阻滞在G0/G1期,下调Bcl-2的表达和增加Bax的表达有关。     

涤痰化瘀汤诱导人食管癌Eca—109细胞凋亡的作用的研究

目的：研究涤痰化瘀汤药物血清诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡作用。方法：采用MTT法测定细胞生长抑制率，通过流式细胞仪（AnnexinV检测），电镜观察凋亡细胞。结果：涤痰化瘀汤药物血清能明显抑制人食道癌Eca-109细胞生长，AnnexinV检测及电镜观察结果均表明药物血清能诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡，结论：涤痰化瘀汤能诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡。有望用于临床治疗食管癌。     

基于AMPK/mTOR信号通路研究异常山碱对EC9706细胞能量代谢的调控机制

目的通过观察异常山碱对食管癌EC9706细胞的增殖、凋亡、周期、能量代谢及能量代谢通路相关蛋白表达的影响,探讨其治疗食管癌的分子机制。方法常规培养ECC9706细胞,用MTT法检测细胞活性,筛选药物浓度,选择1、2μg/mL 2个质量浓度;流式细胞术检测异常山碱对EC9706细胞凋亡、周期的影响,能量代谢检测系统检测异常山碱对EC9706细胞能量代谢的影响,Westernblotting检测细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(p-ACC)、腺苷磷酸激活蛋白激酶(AMPK)蛋白表达。结果不同质量浓度异常山碱作用48h后能有效抑制EC9706细胞增殖,呈剂量依赖性(P0.01),可以将EC9706细胞阻滞于S期和G_2/M期(P0.05),有效促进细胞凋亡(P0.05),且明显抑制细胞糖酵解及线粒体代谢能力(P0.01),与对照组比较,异常山碱组细胞AMPK蛋白表达水平上升,mTOR、p-mTOR、p-ACC蛋白表达水平降低(P0.05)。结论异常山碱可能通过能量代谢调节EC9706细胞周期、凋亡,抑制EC9706细胞增殖。     

常山水提醇沉物对EC9706细胞周期、凋亡、能量代谢的影响

目的从细胞增殖、凋亡、细胞周期、能量代谢角度,研究常山水提醇沉物抗食管癌细胞EC9706的作用及机制。方法用MTT法检测EC9706细胞活性,流式细胞术检测药物对食管癌EC9706细胞凋亡、周期的影响,能量代谢检测系统检测药物对EC9706细胞能量代谢的影响。结果不同浓度常山水提醇沉物作用48 h后能有效抑制EC9706细胞增殖,呈剂量依赖性(P<0.01),可以有效促进细胞凋亡(P<0.05),将EC9706细胞阻滞于S期和G2/M期(P<0.05),并且明显抑制细胞糖酵解及线粒体代谢能力(P<0.01)。结论以上结果表明,常山水提醇沉物可能通过干预细胞周期、凋亡及能量代谢抑制食管癌EC9706细胞增殖。     

启膈散、沙参麦冬汤、通幽汤和补气运脾汤对人食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响

目的观察启膈散、沙参麦冬汤、通幽汤、补气运脾汤各证方对人食管癌细胞株EC9706细胞增殖和凋亡的影响作用。方法体外培养人食管癌细胞株EC9706细胞,分别用启膈散、沙参麦冬汤、通幽汤和补气运脾汤处理细胞,倒置显微镜下观察EC9706细胞增殖和形态变化;MTT法检测各证方对EC9706细胞增殖影响的量效关系;TUENL法和荧光显微镜观察各证方诱导EC9706细胞凋亡的作用;Annexin V FITC/PI双标记流式细胞术检测各证方诱导EC9706细胞凋亡率：结果启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对EC9706细胞增殖的抑制率随药物浓度增加而上升,呈现剂量-效果依赖性关系,在药物浓度为6400μg/ml时,三组抑制率分别为78%、63%、78%。启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤不同程度地诱导细胞发生凋亡,各组诱导细胞的凋亡率依次为：沙参麦冬汤组〉启膈散组〉通幽汤组。结论启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤可不同程度地明显抑制人食管癌细胞株EC9706细胞增殖,补气运脾汤对体外培养细胞增殖的直接抑制作用很弱。启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤均可不同程度诱导人食管癌EC9706细胞凋亡。     

姜黄素诱导结肠癌LoVo细胞凋亡的作用及机制研究

目的: 探讨姜黄素促人结肠癌LoVo细胞凋亡的生物学作用及其调控机制。 方法: 体外培养人结肠癌LoVo细胞,0~20 mg·L^-1不同浓度姜黄素处理后,采用MTT 比色法测定姜黄素对细胞的增殖抑制作用,利用透射电镜观察细胞的超微结构,采用PI单标流式细胞仪测定细胞周期分布,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率; 采用 RT-PCR检测Bax,Bcl-2,Caspase-3,Bcl-xL mRNA表达水平。 结果: MTT检测显示姜黄素能显著抑制人结肠癌LoVo细胞的生长、増殖,呈现浓度和时间效应关系;透射电镜结果显示姜黄素能使LoVo细胞发生形态学改变,呈现典型凋亡细胞特征;流式细胞仪分析显示姜黄素能阻滞细胞周期于S期,诱导细胞发生凋亡。RT-PCR检测显示姜黄素可促进细胞中Bax,Caspase-3 mRNA 表达,抑制Bcl-2,Bcl-xL mRNA 表达。 结论: 姜黄素能显著抑制人结肠癌LoVo细胞的增殖并促进其凋亡,这种生物学效应可能与激活Bax表达、抑制Bcl-2和Bcl-xL表达而活化Caspase-3的信号通路有关。     

壁虎醇提物对人食管鳞癌细胞EC9706的作用和体内抗肿瘤活性

目的:观察壁虎醇提物体内外抗肿瘤作用。方法:体外实验采用四噻唑蓝法(MTT)检测壁虎醇提物对人食管鳞癌细胞EC9706的增殖抑制作用;采用Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡的形态改变;采用TUNEL法检测细胞凋亡率;采用SP免疫组化法检测细胞内凋亡蛋白Bax和Bc l-2的表达。体内实验以小鼠S180肉瘤为模型,观察壁虎醇提物对肿瘤生长的抑制作用。结果:6~8 g.L-1壁虎醇提物作用于细胞24,48,72 h后能够明显抑制EC9706食管鳞癌细胞株的生长(P(0.01),抑制作用呈剂量和时间依赖性;Hoechst33258荧光染色可见凋亡细胞;6,7 g.L-1壁虎醇提物处理组细胞凋亡率高于阴性对照组(P0.05,P0.01),凋亡率分别为(12.73±3.84)%,(19.80±2.32)%;免疫组化结果显示细胞内Bc l-2蛋白无明显变化,而Bax蛋白表达升高(P(0.01),Bax/Bc l-2升高。不同剂量的壁虎醇提物(0.6,1.2,2.4 g.kg-1)均可抑制S180肉瘤在昆明小鼠体内生长,抑瘤率分别为44.88%,63.94%,69.53%。结论:壁虎醇提物体内体外具有抗肿瘤作用,体外诱导EC9706细胞凋亡的作用机制可能与凋亡相关蛋白Bax/Bc l-2升高有关。     

通幽汤及拆方对食管癌EC9706细胞PI3K/AKT信号通路影响的研究

目的:揭示通幽汤对食管癌抑制作用的细胞内分子机制,确定从功效分类的有效药物及瘀血内结证的分子本质。方法:体外培养食管鳞癌EC9706细胞,通幽汤及活血行气、滋阴养血拆方分别作用于细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化;以MTT法检测细胞抑制率,确定最佳药物浓度和作用时间;western blot法观察PI3K/AKT信号通路各蛋白表达变化情况。结果:通幽汤及活血行气拆方可显著抑制EC9706细胞增殖,48h作用最强,通幽汤全方IC50=1523μg.mL-1,活血行气拆方IC50=1001μg.mL-1;可抑制PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达,作用强弱依次为:活血行气拆方>通幽汤全方>滋阴养血拆方。结论:通幽汤抑制食管癌细胞增殖主要为活血行气类药物,根据"以方测证"理论,瘀血内结证与PI3K/AKT信号通路表达增强有关。