L-天冬酰胺酶的研究进展

L-天冬酰胺酶具有显著的抗肿瘤作用,尤其是广泛应用于儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的治疗。作者对L-天冬酰胺 酶的分离纯化工艺、与ALL的治疗、酶的修饰等进行了综述。     

L-天冬酰胺酶的研究进展

L-天冬酰胺酶具有显著的抗肿瘤作用,尤其是广泛应用于儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的治疗.作者对L-天冬酰胺酶的分离纯化工艺、与ALL的治疗、酶的修饰等进行了综述.     

重组L-天冬酰胺酶的鉴定

目的 :对重组L 天冬酰胺酶进行鉴定。方法 :用基因测序、氨基酸组成分析、N 末端氨基酸测序、胰肽图谱、IEF、分子量、紫外扫描等各种实验手段对重组L 天冬酰胺酶及其天然品进行了全面比较。结果 :重组产品与天然品具有同质性。结论 :重组L 天冬酰胺酶具有较好的应用前景。     

E.coli L-天冬酰胺酶结构与功能及其纯化工艺

综述近年来有关大肠杆菌来源的L-天冬酰胺酶的结构与功能、纯化工艺以及酶的修饰的研究进展。L-天冬酰胺酶具有抗肿瘤活性,目前临床上已将其用于儿童急性淋巴细胞白血病的治疗,是治疗此类白血病的重要药物。     

石刁柏细胞的L-天冬酰胺酶发酵条件的研究

优化了石刁柏细胞L-天冬酰胺酶发酵条件并对其粗提进行了探索。其最佳产酶条件为:最适培养基为MS 蔗糖(35 g/L) 6-(苄胺基)嘌呤(0.01 mg/L) α-奈乙酸(3 mg/L)最适pH值为6.4、最适温度为27℃、最适转速为110 r/min、接种量为5.0×104个/ml。在此发酵条件下,L-天冬酰胺酶发酵液酶活力的峰值可达到22.37 U/ml、产酶稳定期持续7~8 d,利用吴氏提取工艺可以得到回收率为30.8%,纯化倍数为9.85,比活力为0.55 U/mg的L-天冬酰胺酶。     

几种因素在L-天冬酰胺酶化学修饰中对酶活力及抗原性的影响

为了寻求在较好地保持酶活力的同时解除L-天冬酰胺酶抗原性的方法,采用不同分子量的乙酸酐、右旋糖酐和单甲氧基聚乙二醇,作为修饰剂和不同的修饰方法对该酶进行了化学修饰。结果表明在保持酶活性和降低抗原性方面,大分子修饰剂右旋糖酐、单甲氧基聚乙二醇优于小分子乙酸酐,底物保护修饰优于直接修饰;活化PEG,优于活化PEG₁。在底物保护下的PEG,修饰酶其抗原性完全解除的同时,酶活力保持在30%以上。     

L-天冬酰胺酶Ⅱ基因工程菌的培养

为提高Ｌ－天冬酰胺酶Ⅱ基因工程菌Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｐＫＡ／ＣＰＵ２１０００９的产酶量,采用正交试验法确定了较佳培养条件,并优化了发酵工艺。工程菌摇产酶稳定在１９８Ｕ／ｍｌ。２５Ｌ发酵罐产酶亦高达１８０Ｕ／ｍｌ,发酵周期大大缩短,仅９～１０小时。产酶量比原部以上,具有较好的工业生产前景。     

L-天冬酰胺酶B细胞表位研究

采用ELISA竞争抑制法和光学干涉生物传感器试验对预测的7个段肽进行抗原性鉴定。结果表明7段合成肽中,f(^192TPARKHTS^199)和g(^280AKNGTA^286)肽段抗原性较强。研究探索了光学干涉生物传感器在B细胞表位研究中的应用,为进一步抗原位点精细定位打下良好的实验基础。     

重组大肠杆菌L-天冬酰胺酶Ⅱ中残余DNA的检测

用地高辛标记工程菌ＤＡＮ片段作探讨,针通过分子杂交和免疫显色检测重组天冬酰胺酰半成品中的残余ＤＮＡ。该法对半成品用氯仿抽提,消除了蛋白质对ＤＮＡ测定的干扰。３批重组门冬酰胺酶半成品的测定结果表明,其残余ＤＮＡ均小于１００ｐｇ／剂量。     

抗体夹心酶联免疫吸附法测定重组E.coli L-天冬酰胺酶及药代动力学研究

目的建立大鼠血浆中重组E.coli L-天冬酰胺酶的抗体夹心酶联免疫吸附测定法,并进行药代动力学研究.方法应用重组E.coli L-天冬酰胺酶免疫家兔,分离IgG,用DEAE-纤维素柱色谱纯化,辣根过氧化物酶标记抗体,建立抗体夹心酶联免疫吸附法,测定大鼠血浆中重组E.coli L-天冬酰胺酶浓度.结果方法的线性范围为1～64 U*L-1,血药浓度与时间的关系符合二房室模型,初期和末端的T1/2分别为0.50～0.57 h和2.45～3.02 h,AUC与剂量成正比.结论建立的抗体夹心酶联免疫吸附法在灵敏度、特异性、线性范围、精密度和回收率等方面,满足药代动力学研究要求.实验方法和重组E.coli L-天冬酰胺酶在大鼠中的药代动力学参数为临床研究提供了手段和依据.     

PEG-L-天冬酰胺酶的临床研究近况

综述近年来对抗肿瘤药物PEG-L-天冬酰胺酶的临床研究进展,讨论其在急性淋巴细胞白血病治疗中的用药方案和疗效,抗药性以及安全性。PEG-L-天冬酰胺酶由E.coliL-天冬酰胺酶经聚乙二醇共价修饰而得,其免疫原性降低,且药物半衰期延长。     

单甲氧基聚乙二醇修饰L-门冬酰胺酶的研究

用一种单甲氧基聚乙二醇修饰剂修饰L-门冬酰胺酶，初步确定了最佳修饰条件，应用阴离子交换色谱和分子筛色谱分离纯化得到单修饰产物，酶活性回收率在40％以上，修饰产物的稳定性提高，免疫原性显著下降。     

重组E.coli L-天冬酰胺酶在大鼠中的药物代谢动力学

应用放射性核素示踪技术研究^125I重组E.coliL－天冬酰胺酶在大鼠体内的药物代谢动力学。^125I重组L－天冬氨酶静脉注射后24h内，在尿、粪、胆汁中的排泄量分别占注射剂量的68．95％，4．44％和5．36％。测定血浆中^125I重组E.coliL－天冬酰胺酶浓度，应用聚丙烯酰胺凝胶电泳和生物成像分析系统结合方法评价原药水平，由房室模型评价药物动力学参数，静注后，浓度时间曲线符合二房室模型，初期和末端的t1/2分别为0．52－0．63h和2．39－2．76h，AUFC与剂量成正比。重组E.coliL－天冬酰胺酶的分解代谢产物主要随尿液排泄，重组E.coliL－天冬酰胺酶在大鼠中的药物热力学参数为临床试验提供了有用依据。     

PEG2修饰^125I—L—天冬酰胺酶在小鼠体内的分布与代谢

本文对ＰＧＦ２修饰＾１２５Ｉ－Ｌ天冬酰胺酶在小鼠体内的分布与代谢进行了研究，结果表明：ＰＥＧ２修饰Ｌ－天冬酰胺酶在小鼠体内半衰期与天然酶相比明显延长，修饰酶是５４ｈ，天然酶是４ｈ，前者是后者的１３．５部，修饰酶与天然酶在体内分布与代谢也明显不同，修饰酶主要分布在肝脏，并在肝脏代谢，而天然酶主要分布在肾脏，并通过肾脏代谢，修饰酶没有体内积留现象，这些结果暗示，在治疗白血病上修饰酶较天然酶更有效。     

L-天门冬酰胺酶II的表达与纯化

依据发表的大肠杆菌天门冬酰胺酶II基因序列,合成引物,利用PCR技术获得天门冬酰胺酶II的结构基因,插入高效表达载体pBV220,并转化大肠杆菌菌株DH5α,获得高效表达天门冬酰胺酶II的基因工程菌株。通过对包涵体的提取与纯化,结合离子交换层析获得天门冬酰胺酶II的蛋白质纯品。检测结果表明得到的天门冬酰胺酶II具有较高的比活性,与商品化的同类产品比活相近。     

天冬酰胺特异性酶培戈卡门冬酶的药理作用与临床评价

培戈卡门冬酶(长效聚乙二醇化天冬酰胺酶,calaspargase pegol-mknl,EZN-2285,SC-PEG)是一种天冬酰胺特异性酶,为急性淋巴细胞白血病(ALL)特异性化疗组合疗法组成之一,适用于年龄为1个月～21岁的急性淋巴细胞白血病患者。2018年12月,FDA批准培戈卡门冬酶上市,商品名为Asparlas。本文对其作用机制、药效学、药动学、临床评价等进行综述。     

L-天门冬酰胺酶的提取和纯化工艺改进

目的　改进L 天门冬酰胺酶的提纯工艺 ,使成品达到中国药典标准。方法　在工艺流程中改溶菌酶破壁、蔗糖提取为丙酮破壁、稀盐提取 ,并增加了亲和层析的工序。结果　提取的L 天门冬酰胺酶比活力提高到 2 5 0IU/mg ,纯度达到 98%以上 ,产率达到 40 %。结论　本工艺优于吴氏工艺 ,成品达到中国药典标准     

L-天门冬酰胺酶的提取和纯化工艺改进

目的改进L-天门冬酰胺酶的提纯工艺,使成品达到中国药典标准.方法在工艺流程中改溶菌酶破壁、蔗糖提取为丙酮破壁、稀盐提取,并增加了亲和层析的工序.结果提取的L-天门冬酰胺酶比活力提高到250IU/mg,纯度达到98%以上,产率达到40%.结论本工艺优于吴氏工艺,成品达到中国药典标准.     

豆豉纤溶酶的研究进展

豆豉纤溶酶是从我国豆豉中分离得到的一种蛋白酶,具有良好的溶解血栓作用。文章综述了豆豉纤溶酶产生菌的菌种特性,酶的理化性质、发酵工艺、分离纯化、酶活测定、分子生物学及溶栓实验方面的研究现状,并对其应用和发展前景做了展望。