人B7-1转基因肝癌瘤苗的制备

目的:制备人B7-1(hB7-1)转基因肝癌瘤苗.方法:用逆转录病毒转移系统将hB7-1基因导入人肝癌细胞株HepG2,并用RT-PCR、PCR-Southern杂交法检测转染空载体 pLXSN的HepG2/neo细胞和转染重组质粒pLXSN/hB7-1的HepG2/hB7-l细胞中hB7-1 mRNA表达;间接免疫荧光法检测HepG2细胞、HepG2/neo细胞、HepG2/hB7-1细胞形态,计算当日细胞绝对数,绘制生长曲线.结果:所建立的肝癌瘤苗(HepG2/hB7-1)细胞可高效表达hB7-1分子.基因转染对HepG2细胞的生长形态及生长曲线无明显影响.结论:逆转录病毒基因转移系统是使肝癌细胞高效表达hB7-1分子的有效途径.     

B7-1基因转染小鼠EL-4淋巴瘤细胞体外诱导免疫小鼠脾细胞产生的白细胞介素-2

目的　研究B7 1基因转染小鼠EL 4淋巴瘤体外诱导免疫小鼠脾细胞产生的白细胞介素 2。方法　以CTLL 2细胞检测EL 4B7 1 免疫小鼠的脾细胞与瘤细胞共育的MLTC培养上清中的IL 2活性。结果　EL 4B7 1 免疫小鼠的SPL经瘤细胞在体外刺激可诱生出明显的IL 2活性 ,而EL 4免疫小鼠的SPL则无此作用 ,两者具有较明显的差异 (P <0 0 1)。结论　B7 1基因转染小鼠EL 4淋巴瘤可在体外诱导免疫小鼠脾细胞产生较高水平的白细胞介素 2。     

急性白血病细胞B7-1及MHC分子的表达

目的：探讨共刺激分子B7-1(CD80)及MHC分子在急性白血病(acute leukemia，AL)中的表达，方法：应用一组mAb，采用免疫荧光法对AL52例瘤细胞及34例正常人骨髓单个核细胞（BMMC)表面B7-1及主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)分子的表达进行了检测．结果：所有患瘤细胞及正常人BMMC上MHCI类分子表达强阳性，MHCⅡ类分子表达920k，阳性，而B7-1表达差异较大，急性单核细胞白血病(M5)表达阳性率最高(8／11)，而急性粒细胞白血病(M1，M2，M3)均无表达．结论：B7-1缺陷是白血病细胞逃避宿主免疫监视的重要原因，转染B7-1基因的瘤苗可能是免疫基因治疗的有效途径。     

过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞共刺激分子B7-1、B7-2与CD28的表达及意义

目的 探讨免疫共刺激分子B7-1、B7-2和CD28在过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞（PBMc）中的表达及其意义。方法 应用流式细胞仪（FCM）从蛋白质水平检测了38例过敏性紫癜（HSP）患儿（其中11例诊断为紫癜性肾炎）和20例正常儿童PBMC中B7-1、B7-2和CD28的表达，并分析其与24h尿微量白蛋白的关系。结果 过敏性紫癜患儿B7-2蛋白和CD28蛋白的表达水平（相对平均荧光强度，RMFI）均高于正常对照组（P〈0．05），各组间B7-1蛋白表达水平的差别无显著性意义（P〉O．05）。18例24h尿微量白蛋白（24hUMA）增高的HSP患儿共刺激分子B7-2、CD28蛋白的表达与24hUMA呈等级正相关。结论 过敏性紫癜患儿PBMC共刺激分子B7-2、CD28表达异常增加，可能参与HSP的起病，而且B7～2、CD28蛋白的表达与24h尿微量白蛋白呈等级正相关，提示可以作为监测HSP患儿病情以及检测早期肾脏损害的免疫学指标。     

共刺激分子B7-1与汉坦病毒核蛋白基因共表达载体的构建及免疫调节作用

目的:探讨共刺激分子B7-1(CD80)对汉坦病毒核蛋白基因疫苗的免疫调节作用.方法:构建双启动子共表达B7-1基因和汉坦病毒核蛋白基因的真核表达载体pcDNA 3.1-B7-S,酶切鉴定后直接肌注免疫BALB/c小鼠,同时设对照组pcDNA 3.1 空质粒接种组、pcDNA 3.1-S接种组.ELISA法检测血清特异性抗体,MTT法检测T细胞增殖反应.结果:pcDNA 3.1-B7-S接种组鼠在抗体的产生水平及淋巴细胞增殖指数上均较pcDNA 3.1-S接种组明显增高.结论:接种B7-1基因和汉坦病毒核蛋白基因的共表达质粒优于注射单目的抗原基因表达质粒,为探索增强基因疫苗的免疫作用提供了新的途径.     

CIK细胞与树突状细胞共培养后抗肿瘤效应的研究

目的观察CIK细胞与抗原刺激的树突状细胞共培养后的增殖情况、免疫表型、分泌的细胞因子水平及抗肿瘤效应的变化。方法无菌采集新鲜脐血,加入细胞因子分别定向诱导培养成DC、CIK细胞,然后将两种细胞混合,分为CIK-A-DC组（试验组）、DC-CIK组和单纯CIK组（对照组）,观察细胞的形态和增殖状况,ELISA法测定细胞因子分泌水平的差异,并测定其对肿瘤细胞的凋亡及杀伤情况。结果共培养后CIK细胞的增殖倍率增高,分泌细胞因子的水平也明显升高。流式检测显示共培养后的CIK细胞对肿瘤凋亡率高,MTT法显示共培养后的CIK细胞杀伤肿瘤的活性增强,且具有抗原特异性。结论树突状细胞可明显增强其相同来源的CIK细胞的抗肿瘤效应,为肿瘤细胞的过继性免疫治疗提供了一个新的方向。     

不明原因习惯性流产患者体内B7-1及B7-2绒毛共刺激分子表达的研究

目的探讨B7-1、B7-2在不明原因习惯性流产（UHA）中的表达，并总结B7-1、B7-2在预防不明原因习惯性流产中的价值。方法选择35倒不明原因习惯性流产患者为观察组，并分别选择50例正常孕妇和50例正常女性为对照组和正常组。使用贝克曼库尔特Epics-XLⅡ型流式细胞仪测定B7-1、B7-2的表达。结果观察组B7-1和B7-2表达分剐为11.56±1.23和25.83±1.24。观察组B7-1和B7-2与对照组和正常组相比，差异有统计学意义（P〈0.05）。经Spearman秩相关分析，发现B7-1与不明原因习惯性流产呈正相关的关系（r=0.832，t=5.632，P=0.012），B7-2与不明原因习惯性流产呈负相关关系（r=-0.745，t=6.032，P=0.009）。B7-1和B7-2均是不明原因习惯性流产的独立危险因素。结论在不明原因习惯性流产患者中，B7-1表达要高于正常孕妇和正常女性，B7-2的表达则要低于正常孕妇和正常女性。在临床检测中，要注意B7-1、B7-2的表达，并可以通过减弱B7-1表达、增强B7-2表达，以降低不明原因习惯性流产发生风险。     

人B7-2基因修饰的食管癌细胞瘤苗抗肿瘤的免疫效应

目的:研究人B7-2基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:将真核荧光表达载体pEGFP-C3-B7-2,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706。外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染pEGFP-C3-B7-2的人食管癌细胞EC9706的杀伤活性。结果:CTL对转染pEGFP-C3-B7-2的肿瘤细胞的杀伤活性大于转染pEGFP-C3和未转染细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:人B7-2基因修饰的EC9706肿瘤细胞瘤苗,可诱导出明显的抗EC9706细胞的免疫效应。     

γ射线诱导人肝癌细胞表达B7—1共刺激分子的研究

目的 研究电离辐射与肿瘤细胞Ｂ７－１分子表达之间的关系，探讨肿瘤细胞辐粕免疫原性增强的机制。方法 采用间接免疫荧光－流式细胞仪分析技术，研究在用不同剂量γ射线照射ＳＳＭ－７７２肝癌细胞后，培养不同时间内ＳＭＭＣ－７７２细胞Ｂ７－共刺激分子的表达水平。并用＾３Ｈ－ＴｄＲ释放法测定照向射肿瘤细胞与人反应后的细胞知性。结果 未燠才经１０、２０、３０Ｇｙ照射的人肝癌细胞不表达Ｂ７－１分子经４０、５０、６０     

B7—1基因转当小鼠EL—4淋巴瘤细胞体外诱导免疫小鼠脾细胞产生的白细胞介素

目的 研究Ｂ７－１基因转染小鼠ＥＬ－４淋巴瘤体外诱导免疫小鼠脾细胞产生的白细胞介素－２。方法 以ＣＴＩＬ－２细胞检测ＥＬ－４Ｂ７－１＾＋免疫小鼠的脾细胞与癌细胞共育的ＭＬＴＣ培养上清中的ＩＬ－２活性。结果 ＥＬ－４Ｂ７－１＾＋免疫小鼠的ＳＰＬ经瘤细胞在体外刺激可诱生出明显的ＩＬ－２活性,而ＥＬ－４免疫小鼠的ＳＰＬ则无此作用,两者具有较明显的差异（Ｐ〈０．０１）。结论 Ｂ７－１基因转染小鼠ＥＬ－４淋巴瘤可在体外诱导免疫小鼠脾细胞产生较高水平的白细胞介素－２。     

B7—1阳性细胞的选择与鉴定

目的选择和鉴定共刺激分子Ｂ７—１阳性的细胞。方法应用Ｇ４１８进行选择培养，然后用荧光激活的流式细胞计数仪（ＦＡＣＳ）进行鉴定，结果Ｇ４１８选择前，阳性细胞率为３７．２５％，应用２００μｇ／ｍｌ４００μｇ／ｍｌ的Ｇ４１８选择后，阳性细胞率分别为５２％和８８．８８％。结论Ｇ４１８浓度高时，选择效果较好；ＦＡＣＳ是一种快速而且敏感的鉴定方法。     

B7-H1对同种异体小鼠角膜移植免疫反应的影响

目的探讨B7-H1在同种异体小鼠角膜移植术后眼球组织表达情况,及其对角膜免疫赦免的影响。方法建立同种异体小鼠角膜移植实验模型。按Sonoda方法对角膜混浊及新生血管指数进行评分,8周后将实验小鼠分为存活组和排斥组,并取8只正常小鼠为对照组。取3组小鼠眼球组织行免疫组化检测B7-H1表达情况。结果正常小鼠角膜及虹膜睫状体表达B7-H1,移植术后存活小鼠角膜及虹膜睫状体高度表达B7-H1,而移植术后排斥的小鼠角膜及虹膜睫状体未见明显表达B7-H1。结论B7-H1可能参与了同种异体小鼠角膜移植术后的免疫反应,可能在免疫赦免现象中发挥重要作用。     

腺病毒携带p53、GM-CSF、B7-1基因转染乳腺癌细胞诱导抗肿瘤免疫的研究

近年来肿瘤的基因免疫治疗研究已成为广大学者关注热点。其目的是通过对肿瘤细胞的基因修饰，提高其免疫原性、打破免疫逃避和免疫耐受，诱导免疫系统对肿瘤细胞的杀伤。本研究对腺病毒转染的p53、GM-CSF、B7-1三种外源基因是否可以提高乳腺癌细胞的免疫原性，以及乳腺癌基因免疫治疗的可行性，进行了并以肺腺癌细胞进行对比研究。     

转B7-1基因的人多发性骨髓瘤细胞XG-7在激发杀肿瘤细胞CTL中的作用

为调查B7－1分子在人多发性骨髓瘤细胞的表达是否可诱导出具有抗肿瘤作用的CD8 的CTL，我们用含B7－1基因逆转录病毒载体PTG5192的包装细胞293E的培养上清，感染人多发性骨髓瘤细胞系XG－7（不表达B7－1分子），用新霉素G418选择并经流式细胞仪筛选，获得了稳定高表达B7－1分子的XG－7细胞（命名为XG－7－B7细胞）。在体外增殖实验中，XG－7－B7细胞显示出比母系细胞XG-7对外周血淋巴细胞（PBL）具有更大的刺激活性。表型分析证实XG-7-B7细胞所刺激的PBL是一群T细胞，其表型特征为CD3，CD8阳性，CD25、CD28也高表达，而CD4和CD16几乎不表达。这群细胞可在体外长期培养扩增，并可用作效应细胞。细胞毒实验结果表明：CD8 T细胞可杀死XG－7－B7细胞、母系细胞XG－7和其它肿瘤细胞如K562与Daudi细胞。结果提示，这群肿瘤持异的CD8 CTL细胞对肿瘤的过继免疫治疗具有潜在的应用价值。     

重组腺病毒介导的人野生型p53,GM-CSF和B7-1基因在胰腺癌细胞中的表达

目的: 以复制缺陷型重组腺病毒为载体,使用人野生型p53基因、人GM-CSF基因和B7-1基因为目的基因,探讨三基因在胰腺癌细胞BxPC-3中的表达.方法: 免疫组织化学方法检测外源性p53蛋白在BxPC-3细胞中表达.ELISA方法测定GM-CSF表达量;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测BxPC-3细胞转染B7-1的表达效果.结果: 重组腺病毒介导的p53基因、GM-CSF基因、B7-1基因在BxPC-3细胞中得到高效表达.结论: 重组腺病毒介导的外源基因在BxPC-3细胞中得到高效的表达,为进一步探讨其体内外治疗胰腺癌的实验研究提供了理论基础.     

B7-H1分子在肿瘤微环境中的特异表达及对调节性T细胞的诱导促进作用

目的通过分析人结直肠癌细胞表达B7-H1分子与肿瘤微环境中浸润的调节性T细胞的关系,探讨肿瘤性B7-H1信号参与肿瘤免疫逃逸的机制。方法采用免疫组化分析肠癌组织中B7-H1分子的表达及调节性T细胞的浸润情况,采用细胞培养和流式细胞术分析肿瘤性B7-H1信号对调节性T细胞分化的作用。结果 B7-H1异常高表达在肠癌组织中,正常组织不表达;肿瘤组织中B7-H1表达水平与调节性T细胞浸润数量成正相关（P〈0.01）,在TGFβ-的共同作用下,M435-B7-H1细胞可以显著促进Tregs的诱导。结论 B7-H1在肿瘤组织异常表达可通过诱导肿瘤微环境中调节性T细胞的分化参与肿瘤免疫逃逸。     

B7-1基因修饰的肿瘤细胞瘤苗抗小鼠胃癌效应的实验研究

探讨Ｂ７－１基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗对小鼠胃癌的治疗效果。方法：在已建立高表达Ｂ７－１分子的小鼠前胃癌细胞系ＭＦＣ－Ｂ７的基础上,观察ＭＦＣ－Ｂ７细胞体外激活脾淋巴细胞的能力,体内成瘤性变化及作为瘤苗对荷瘤鼠胃癌的治疗效果。结论：Ｂ７－１基因修饰的肿瘤细胞免疫原性明显增强,有希望作为瘤苗用于此类肿瘤的治疗。     

大鼠共刺激分子B7 cDNA的克隆和骨肉瘤细胞转染

目的：为了研究共测激分子B7增强针对大鼠骨肉瘤的特异性细胞免疫反应，首先需获得大鼠B7分子的cDNA克隆，方法：应用反转录PCR的方法，从大鼠脾细胞mRNA中扩增特异性片段，结果：经测序表明，所获得的cDNA克隆与已经发表的B7－1和B7－2的c-DNA序列完全一致，并将其表达载体转染UMR－106细胞系，结论：成功获得大鼠B7共刺激分子的cDNA克隆，其转染的UMR－106大鼠骨肉瘤细胞可用于免疫诱导研究。     

抗B7-1功能性单克隆抗体对B淋巴瘤细胞生长的抑制作用

目的　分析抗B7- 1功能性单克隆抗体对表达B7分子的人恶性淋巴瘤细胞株Raji和Daudi细胞体外生长的抑制作用及其可能机制。方法　采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析肿瘤细胞的B7- 1分子表达 ;以不同浓度抗B7- 1功能性单克隆抗体 ,加入体外培养细胞中 ,经细胞计数和MTT法 ,观察单克隆抗体对肿瘤细胞体外生长的作用。结果　Raji和Daudi细胞均表达B7- 1分子 ,表达阳性百分率分别为 92 .7%和 89.2 % ;抗B7- 1单克隆抗体浓度在 5 μg/ml时就对这两种细胞株有显著的抑制作用 ,并随浓度增高而增强。 结论　抗B7- 1单克隆抗体对高表达B7- 1分子的人恶性淋巴瘤细胞体外生长有明显的抑制作用 ,这种抑制作用是通过诱导肿瘤细胞的凋亡所致     

转B7—1基因的人多发性骨髓细胞XG—7在激发杀肿瘤细胞CTL？…

为调查Ｂ７－１分子在人多发性骨髓瘤细胞的表达是否可诱导出具有抗肿瘤作用的ＣＤ＾＋８的ＣＴＬ，我们用含Ｂ７－１基因逆转录病毒载体ＰＴＧ５１９２的包装细胞２９３Ｅ培养上清，感染人多发性骨髓瘤细胞系ＸＧ－７（不表达Ｂ７－１分子）用新霉素Ｇ４１８选择并经流式细胞仪筛选，获得了稳定高表达式Ｂ７－１分子的ＸＧ－７细胞（命名为ＸＧ－７－Ｂ７细胞）在体外增殖实验中，ＸＧ－７－Ｂ７细胞显示出比母系细胞ＸＧ－７对外周