rhBMP2对牙髓成纤维细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

目的了解重组人骨形成蛋白(rhBMP2)对牙髓成纤维细胞增殖活性及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法用MMT比色法检测不同浓度rhBMP2作用下,牙髓成纤维细胞增殖活性的变化;用酶动力学方法检测不同浓度rhBMP2作用下ALP活性的变化。结果低浓度的rhBMP2可提高体外培养人牙髓细胞的增殖活性,浓度为200ng/mL时,增殖活性达到最大值,与对照组间差异有统计学意义(P<0.05)。并可促进人牙髓细胞ALP活性,呈浓度依赖性,与对照组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论rhBMP2能够促进牙髓细胞增殖和ALP活性,是牙髓细胞增殖和分化的重要因子之一。     

rhBMP-2明胶微球的制备及对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性影响

目的: 观察重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)明胶微球(rhBMP-2-GMs)对人牙周膜细胞(PDLCs)增殖和碱性磷酸酶活性的影响. 方法: 体外培养人PDLCs,分别用不同浓度的rhBMP-2和rhBMP-2-GMs作用,用四唑盐比色实验(MTT)和酶动力学方法进行观察. 结果: rhBMP-2和rhBMP-2-GMs均可以明显促进人PDLCs增殖、提高碱性磷酸酶(ALP)活性,并呈剂量依赖性,rhBMP-2-GMs较单独应用rhBMP-2的效应更加显著. 结论: rhBMP-2-GMs利用其对rhBMP-2的缓释作用,对人PDLCs增殖和碱性磷酸酶活性的作用效果优于单独应用rhBMP-2.     

rhBMP-2对成纤维细胞成骨表型的影响

目的：研究rhBMP－2对成纤维细胞成骨表型的影响,探讨成纤维细胞成骨条件,方法：向体外培养的成纤维细胞（NIH3T3细胞）内加入不同浓度的rhBMP-2,在第3日和第6日检测碱性磷酸酶（ALP）活性和骨钙素表达,绘制生长曲线,结果：rhBMP-2可增加成纤维细胞ALP活性,促进骨钙素表达,在rhBMP－2浓度为800ug.mL^-1和1200ug,mL^-1作用最强,rhBMP-2对细胞增殖规律无明显影响,结论：rhBMP－2可促进成纤维细胞成骨表型表达。     

环孢素A联合脂多糖对牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响

 目的 探讨环孢素A(CsA)联合牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对人牙周膜成纤维细胞(PDLFs)生物学活性的影响。方法 将CsA（100 ng/mL）、LPS（100 ng/mL）分别单独及联合作用于人PDLFs,采用考马斯亮蓝染色、ELISA、Von kossa染色等方法检测其对PDLFs总蛋白量、碱性磷酸酶(ALP)、骨形成蛋白2（BMP-2）及矿化结节形成的影响。 结果 CsA单独及与LPS联合应用可促进细胞总蛋白的合成,增加细胞ALP活性及BMP-2的表达,并促进细胞矿化结节的早期形成;LPS单独应用可增加细胞的ALP活性,但对细胞的总蛋白合成、BMP-2的表达及矿化结节的早期形成无明显影响。。结论 一定浓度的CsA促PDLFs合成、分化作用明显,CsA联合LPS在促进细胞分化方面具有一定的协同作用。     

白藜芦醇介导SIRT1干预地塞米松诱导成骨细胞线粒体自噬的研究

目的 研究白藜芦醇（RES）参与糖皮质激素诱导的成骨细胞线粒体自噬的作用机制。方法 体外培养人成骨细胞hFob1.19，地塞米松（DEX）诱导细胞线粒体自噬，使用不同浓度的RES (10-8～10-6 mol/L)处理成骨细胞5～120 min,CCK-8法检测成骨细胞的增殖，透射电镜检测成骨细胞内的自噬小体，酶联免疫吸附实验、实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测成骨细胞内碱性磷酸酶（ALP）、caspase 3、转录沉默信息调节因子1 (SIRT1)、细胞自噬标志蛋白（LC3和Beclin1）和细胞线粒体自噬标志蛋白（TOM20和Hsp60）的活性表达。结果 DEX和RES作用成骨细胞2 h后，RES可明显减弱DEX对细胞增殖的抑制作用（P <0.05）；透射电镜显示，DEX+RES组自噬小体明显少于DEX组（P <0.05）; DEX可明显抑制成骨细胞内ALP活性，而RES明显改善了DEX对ALP蛋白活性的抑制作用（P <0.05）; RES可导致成骨细胞内caspase 3的蛋白活性明显降低（P <0.05）; RES以剂量依赖性和...     

rhIGF-Ⅰ微球对人牙周膜成纤维细胞作用的实验研究

目的:探讨重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ明胶微球(recombinant human insulin-like growth factor-Ⅰ-gelatin mierospheres,rhIGF-Ⅰ-GMs)保存rhIGF-Ⅰ生物活性的情况及其对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts.HPDLFs)生物学活性的影响.方法:改良乳化冷凝聚合法制备rhIGF-Ⅰ-GMs.ELLS法测定其载药特性;体外培养HPDLFs,rhIGF-Ⅰ和rhIGF-Ⅰ-GMs梯度含量分别作用于HPDLFs,酶动力学方法及ELISA法动态观察其碱性磷酸酶(alka-line phosphatase,ALP)活性及对合成纤维结合蛋白(fibronection,Fn)的影响.结果:微球表面光滑圆整,微球载药量和包封率分别为930 ng/g和93.0%;培养1 d后,对照组、rhIGF-Ⅰ组和rhIGF-Ⅰ-GMs组人牙周膜成纤维细胞ALP活性和合成Fn均无显著性差异(P>0.05);3 d后,各组人牙周膜成纤维细胞ALP活性和Fn的合成依次为rhIGF-Ⅰ-GMs组>rhIGF-Ⅰ组>对照组,rhIGF-Ⅰ-GMs组和rhIGF-Ⅰ组比较,有显著性差异(P<0.01).结论:rhIGF-Ⅰ-GMs及其冻干粉剂制备良好;rhIGF-Ⅰ-GMs通过对rhIGF-Ⅰ的缓释作用,可较长时间地增强HPDLFs的ALP活性和促进Fn的合成.     

rhBMP-2诱导的相关信号转导分子在NIH3T3细胞中的表达

目的 :观察NIH3T3细胞中BMP信号转导因子的表达 .方法 :用免疫组化和原位杂交方法检测NIH3T3细胞中BMP ,BMPⅠ ,Ⅱ型受体和Smad1,4 ,5的表达 ,在细胞培养液中加入 5 0 μg·L-1rhBMP 2 ,检测细胞的碱性磷酸酶 (ALP)活性和骨钙素 (OC)含量观察细胞是否有成骨趋向 .结果 :细胞中有BMPⅠ ,Ⅱ型受体和Smad1,4 ,5的表达 ;没有BMP的表达 ;加入 5 0 μg·L-1rhBMP 2后 ,ALP活性和OC含量均增高 .结论 :rhBMP 2作用于NIH3T3细胞后 ,细胞有成骨趋向 .NIH3T3细胞是rhBMP 2的靶细胞 ,细胞中有BMPs信号转导因子的表达     

BMP2在大鼠牙髓损伤修复中的表达及其对牙髓细胞的生物学效应

目的：从体内体外两方面探讨BMP2在牙髓损伤修复，尤其是牙髓细胞分化过程中的作用。方法：建立大鼠牙髓损伤修复模型和体外人牙髓细胞连续培养，采用免疫组织化学、MTT法和酶动力学等方法，检测BMP2在体内牙髓组织损伤修复过程中的表达，并比较不同浓度rhBMP2对体外人牙髓细胞连续培养各阶段细胞增殖活性及ALP活性的影响。结果：体内牙髓组织损伤修复过程中存在BMP2的表达，牙髓组织损伤修复的不同阶段其表达部位和强度发生变化；rhBMP2可提高体外培养人牙髓细胞的增殖活性，与其本身浓度有关，并可促进人虎髓细胞ALP活性，呈浓度依赖性；结论：BMP2是参与牙髓损伤修复，尤其是牙髓细胞的增殖和分化的重要因子之一。     

成骨生长肽对钛表面人牙周膜成纤维细胞增殖分化影响的研究

目的:研究成骨生长肽(Osteogenic growth peptide,OGP)对人牙周膜成纤维细胞(Periodontal ligament cells,PDLCs)在钛金属表面增殖分化的影响.方法:将纯钛试件放在12孔培养板内,取生长良好的第五代人牙周膜成纤维细胞接种在试件表面,加入不同浓度的OGP(10-11～10-7mol/L),分别在接种后1、3、5、7 d应用MTT法检测细胞增殖;接种后3、7、10 d应用酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性的表达.结果:OGP在该浓度范围内时,对钛表面的人牙周膜成纤维细胞的增殖率有明显的促进作用(P＜0.05),并且能促进细胞内ALP表达活性(P＜0.05),最佳作用浓度为10-9mol/L.结论:OGP可促进钛片表面人牙周膜成纤维细胞的增殖活性,同时可以增强细胞碱性磷酸酶表达的活性,提示OGP在口腔种植领域中具有良好的应用前景.     

联合应用釉基质蛋白,骨形成蛋白-2对人牙囊细胞生物学行为的影响

目的观察联合应用釉基质蛋白（EMPs）、骨形成蛋白-2（BMP-2）对人牙囊细胞增殖及分化的影响。方法以不同浓度的EMPs、BMP-2作用于牙囊细胞，通过四唑盐比色法和酶动力学法检测对细胞增殖及ALP活性的变化，再筛选出浓度为100mg／l的EMPs、100μg／L的BMP-2，检测单独或联合运用二者对牙囊细胞生物学特性的影响。结果EMPs、BMP-2均能促进牙囊细胞增殖和ALP的分泌，联合应用与单独应用两种因子相比，对增殖的影响无差异，对ALP的合成促进更显著。结论EMPs、BMP-2联合可影响牙囊细胞的生物学特性。EMPs、BMP-2两种因子可能在牙囊细胞的诱导分化中起重要作用。     

溶胶-凝胶生物活性玻璃对人牙髓细胞作用的研究

目的:研究溶胶-凝胶生物活性玻璃对人牙髓细胞增殖与碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的作用。方法:取人无龋前磨牙或第三磨牙的牙髓进行牙髓细胞原代培养,传至第4代作为实验用细胞。实验用生物活性玻璃包括溶胶-凝胶法制备的58S、纳米58S(Nano-58S)和传统熔融法制备的45S5。用含有1 g/L(mg/mL)的58S、Nano-58S和45S5浸提液的达尔伯克必需基本培养基(Dulbecco’s mimimum essential medium,DMEM)培养人牙髓细胞,对照组为不含生物活性玻璃的DMEM培养组。采用甲基噻唑基四唑溶液[(4,5-dimethylthiazol-2-yl)2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]法于第1、3、5、7天测定细胞增殖,第14天检测细胞的ALP活性。结果:Nano-58S组的细胞增殖显著高于对照组,Nano-58S组和58S组的细胞ALP活性显著高于对照组(P<0.01);45S5组的细胞增殖(P<0.01)和ALP活性(P<0.05)显著低于对照组。结论:Nano-58S和58S溶胶-凝胶生物活性玻璃能够促进人牙髓细胞增殖和ALP活性,对人牙髓细胞具有良好的生物活性作用。     

生物活性玻璃和牙本质浸提蛋白对人牙髓细胞的作用

目的：明确生物活性玻璃（bioactive glass, BG）和牙本质浸提蛋白（extracted dentin proteins, EDP）对人牙髓细胞增殖、成牙本质向分化、矿化的作用。方法： 采用酶消化法培养牙髓细胞,传代至第4代用于实验。分别用含BG-EDP浸提液、BG浸提液、EDP浸提液的达尔伯克必需基本培养基（Dulbecco’s minimum essential medium,DMEM）培养牙髓细胞,对照组为DMEM培养组;通过细胞活性噻唑蓝比色法检测细胞增殖能力,碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性检测及real-time PCR检测细胞成牙本质向分化能力,茜素红钙化结节染色及氯化十六烷基吡啶半定量分析检测细胞矿化能力。结果： BG-EDP组3、7、9 d时（光密度值1.36±0.06、2.52±0.20 、2.72±0.29）能够增强人牙髓细胞增殖活性,同BG组（光密度值1.20±0.26、2.33±0.26、2.50±0.30）、EDP组（光密度值1.13±0.15、2.10±0.13、2.38±0.22）和对照组（光密度值0.84±0.17、1.84±0.18、1.95±0.19）比较差异具有统计学意义（P<0.05）。7 d时,BG-EDP组ALP活性与EDP组、对照组差异无统计学意义,分化相关基因（DSPP、DMP-1）表达无明显升高。14 d时,BG-EDP组ALP活性升高（56.67±1.83）, 显著高于EDP组（41.98±9.71）及对照组（30.82±6.70）,P<0.05,但同BG组（56.29±6.20）相比差异无统计学意义（P>0.05）;BG EDP组DSPP表达量明显升高(5.79±1.94),显著高于BG组(2.62±0.46)、EDP组(2.66±1.06)及对照组(1.84±0.76),P<0.05;BG-EDP组DMP-1表达升高(3.87±1.87),略高于BG组(1.89±0.90)、EDP组(2.38±1.04)和对照组 (2.25±0.93),但差异无统计学意义（P>0.05）。诱导2周后,BG-EDP组形成较多矿化结节,氯化十六烷基吡啶半定量分析显示BG-EDP组钙化量最高（0.27±0.01）。结论： 同单纯的BG及EDP相比,BG-EDP复合后具有更强的促进人牙髓细胞的增殖、成牙本质向分化、矿化作用。     

复合rhBMP2的异种骨的研制及成骨活性

目的：研制新型具有诱导成骨活性的异种骨植骨材料。方法：在重组合异种骨（RBX）基础上,以基因重组人BMP2（rhBMP2）取代从牛皮质骨中提取的牛BMP,与去抗原牛松质骨载体（BCB）复合,制成复合rhBMP2的异种骨（rhBMP2/BCB）,并采用小鼠股部肌袋模型,通过组织学、骨计量学方法检测rhBMP2/BCB的诱导成骨活性。结果：实验组（rhBMP2/BCB组）术后7d在小鼠肌袋可诱导软骨生成,14d形成纺织骨,21d改建成板状骨并形成大量骨髓;对照组（BCB组）于术后各时间点均未见有软骨成骨形成。实验组的碱性磷酸酶活性和钙含量均高于对照组,有非常显性差异（P＜0．01）。结论：rhBMP2/BCB具有较好的骨诱导能力,是一种较理想的植骨材料。     

Synthesis and characterization of UPPE-PLGA-rhBMP2 scaffolds for bone regeneration

A novel unsaturated polyphosphoester(UPPE) was devised in our previous research,which is a kind of promising scaffold for improving bone regeneration.However,the polymerization process of UPPE scaffolds was unfavorable,which may adversely affect the bioactivity of osteoinductive molecules added if necessary,such as recombinant human bone morphogenetic protein-2(rhBMP2).The purpose of this study was to build a kind of optimal scaffold named UPPE-PLGA-rhBMP2(UPB) and to investigate the bioactivity of rhBMP2 in this scaffold.Furthermore,the cytotoxicity and biocompatibility of UPB scaffold was assessed in vitro.A W1/O/W2 method was used to fabricate PLGA-rhBMP2 microspheres,and then the microspheres were added to UPPE for synthesizing UPB scaffold.The morphological characters of PLGA-rhBMP2 microspheres and UPB scaffolds were observed under the scanning electron microscopy and laser scanning confocal microscopy.The cumulative release of UPB scaffolds was detected by using ELISA.The cytotoxicity and biocompatibility of UPB scaffolds were evaluated through examining the adsorption and apoptosis of bone marrow stromal cells(bMSCs) seeded on the surface of UPB scaffolds.The bioactivity of rhBMP2 in UPB scaffolds was assessed through measuring the alkaline phosphates(ALP) activity in bMSCs seeded.The results showed that UPB scaffolds sequentially exhibited burst and sustained release of rhBMP2.The cytotoxicity was greatly reduced when the scaffolds were immersed in buffer solution for 2 h.bMSCs attached and grew on the surface of soaked UPB scaffolds,exerting well biocompatibility.The ALP activity of bMSCs seeded was significantly enhanced,indicating that the bioactivity of rhBMP2 remained and still took effect after the unfavorable polymerization process of scaffolds.It was concluded that UPB scaffolds have low cytotoxicity,good biocompatibility and preserve bioactivity of rhBMP2.UPB scaffolds are promising in improving bone regeneration.     

rhBMP-2在体内诱导成骨中I，II型胶原及碱性磷酸酶的表达

目的：对rhBMP－2在诱导成骨中CollagenI,II及碱性磷酸酶（ALP）的表达进行研究,方法：将含rhBMP-20.5mg的松质骨载体植入55只BALB／c小鼠的右侧股部股袋内,分别术后3－21d共8个时间点取材,采用免疫组织化学方法对新生骨组织中的I,II型胶原进行检测,对ALP活性进行定量分析,观察rhBMP-2在诱导成骨中CollagenI,II及ALP的表达情况,结果：（1）II型胶原的出现是和成软骨,软骨细胞的出现相伴随的,但是,肥大,变性的软骨细胞并不表达II型胶原,（2）作为成骨细胞成熟标志物的I型胶原,ALP在软骨形成期即有表达,但是随着成骨细胞的出现,骨组织的形成I型胶原仍表现为高表达,而ALP的表达则呈下降趋势,结论：在诱导成骨中rhBMP－2促进了CollagenI,IIey ALP的表达。     

地塞米松联合姜黄素对RAW264.7细胞炎症模型的作用

目的 探究地塞米松(DEX)联合姜黄素(CUR)对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症的抗炎作用。方法 应用Griess比色法考察DEX与CUR单用及合用抑制一氧化氮(NO)分泌的作用,应用Chou-Talalay联合指数法判断DEX与CUR之间的相互作用,筛选两药协同抗炎比例,应用罗丹明-123(Rh-123)外排实验明确在协同配伍摩尔比例下CUR对DEX多药耐药(MDR)的逆转作用;应用乳化溶剂挥发法制备DEX、CUR共载纳米粒(DEX/CUR-NPs),将DEX与CUR按照协同配伍比例进行投药,考察其药剂学性质及体外抗炎活性。结果 当DEX与CUR配伍摩尔比例为1∶5时,各剂量下的协同指数(CI)值均＜1,表现为协同抗炎作用,且在该比例下CUR能够逆转DEX的MDR现象;将DEX与CUR按配伍摩尔比例为1∶5进行投药,所得DEX/CUR-NPs的粒径为(145.5±2.1)nm,Zeta电位为(-20.54±0.98)mV,DEX包封率为(78.9±5.6)%,CUR包封率为(96.4±2.4)%,DEX/CUR-NPs具有良好的缓释特性、体外协同抗炎活性及逆转DEX的MDR的作用。结论 DEX与CUR在1∶5配伍摩尔比例下可以发挥良好的协同抗炎作用,是一种有潜力的抗炎候选组合药物。     

地塞米松对兔骨髓间充质干细胞存活增殖成骨的影响

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)的持续生存能力及地塞米松对其存活、增殖、成骨分化能力的影响。方法:提取兔BMSCs,予不同浓度(0、10-9、10-8、10-7、和10-6mol/L)地塞米松,分别于1、3、5、7 d时观察地塞米松对BMSCs增殖的影响,作用1～4周后检测碱性磷酸酶水平;分别饥饿0～7 d,复苏1、3和7 d后,观察BMSCs的持续生存能力。结果:培养1 d地塞米松10-6mol/L组测得的OD值结果最高,而对照组结果最低,培养3、5、7 d时,地塞米松10-9mol/L组测得的OD值最高;同时,在2～4周10-9mol/L组增加碱性磷酸酶活性最明显;复苏1和3 d,对照组与饥饿1～7 d之间差异有统计学意义(均P<0.05),复苏7 d,各组两两之间差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:BMSCs具有较强的持续生存能力,地塞米松对BMSCs有增加存活、促进增殖、成骨分化的作用。