风湿宁胶囊含药血清对JAK2/STAT3信号通路及相关细胞因子的影响

目的:探讨风湿宁(FSN)胶囊含药血清对JAK2/STAT3信号通路及相关细胞因子的影响。方法:采用Real-time PCR和Western blot技术分别从基因和蛋白的角度来观察各组CIA-FLS细胞中P-JAK2、PSTAT3及其负反馈调节因子SOCS1和SOCS3的含量;采用Real-time PCR技术分别对各组CIA-FLS细胞中VEGF和RANKL的表达情况进行检测。结果:Tofacitinib含药血清+IL-6组、FSN含药血清+IL-6组CIAFLS细胞JAK2、STAT3的mRNA含量和蛋白表达都明显下降(P<0.05),该通路相关细胞因子VEGF和RANKLmRNA的含量也明显减少(P<0.05)。20%FSN含药血清+IL-6组CIA-FLS细胞SOCS3mRNA含量和蛋白表达上升(P<0.05),10%FSN含药血清+IL-6组中VEGF和RANKLmRNA的含量不同程度的减少(P<0.05)。结论:风湿宁胶囊含药血清可能通过对CIA-FLS细胞JAK2/STAT3信号通路的抑制作用进而影响了相关细胞因子VEGF和RANKL的表达,这也可能是风湿宁胶囊能够改善类风湿关节炎血管翳形成和骨破坏的机制之一。     

黄瓜香含药血清对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察黄瓜香含药血清在体外对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用血清药理学方法制备黄瓜香含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用MTT比色法观察黄瓜香含药血清对K562细胞增殖的影响,采用wright-Giemsa染色观察肿瘤细胞形态学变化.采用caspase-3活性检测试剂盒检测K562细胞内caspase-3的酶活力水平.结果:不同浓度黄瓜香含药血清对K562细胞增殖具有抑制作用,并呈剂童依赖关系.高剂量黄瓜香含药血清对K562细胞形态学有明显的影响.在黄瓜香含药血清处理K562细胞24 h后,caspase-3活性均显著增加,随黄瓜香含药血清浓度的升高呈现较好的剂量依赖性.结论:黄瓜香含药血清具有抑制K562白血病细胞增殖及诱导凋亡的作用,其作用强度与时间一浓度呈正相关.其作用机理可能与其直接细胞毒作用及提高caspage-3酶的活性有关.     

抗骨增生胶囊含药血清对大鼠软骨细胞增殖凋亡及基质金属蛋白酶分泌的影响

目的:考察抗骨增生胶囊含药血清对大鼠软骨细胞增殖凋亡和基质金属蛋白酶分泌的影响。方法:大鼠灌胃制备抗骨增生胶囊含药血清,骨性关节炎软骨原代细胞培养,采用CCK-8法测定抗骨增生胶囊含药血清对骨性关节炎软骨细胞增殖的影响,采用Annexin V法测定抗骨增生胶囊含药血清对骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响,采用ELISA法检测MMP-1、MMP-3和MMP-13。结果:培养24、36和48 h后,抗骨增生胶囊含药血清低、中、高组和硫酸氨基葡萄糖组OD值均显著高于对照组(P0.05);抗骨增生胶囊含药血清低、中、高组和硫酸氨基葡萄糖组早期凋亡率和总凋亡率均显著低于对照组(P0.05);各组MMP-3无统计学差异(P0.05);抗骨增生胶囊含药血清低、中、高组和硫酸氨基葡萄糖组MMP-1和MMP-13均显著低于对照组(P0.05);结论:抗骨增生胶囊含药血清可通过降低软骨细胞凋亡率增加细胞的增殖率,抑制MMP-1和MMP-13分泌从而保护软骨组织。     

益肺饮含药血清对肺癌A549细胞增殖凋亡的影响

目的:研究中药复方益肺饮不同浓度含药血清对肺癌A549细胞增殖凋亡的影响。方法:将SD小鼠分为2组,分别灌胃益肺饮和0. 9%氯化钠注射液,获得5%、10%、15%、20%的益肺饮含药血清和10%无药血清。A549细胞进行培养后分为实验组、对照组和空白对照组,实验组加入不同浓度的含药血清,对照组加入10%无药血清,空白对照组加入10%胎牛血清。采用CCK-8法观察各组血清对A549细胞的增殖影响;采用流式细胞仪检测不同浓度含药血清对A549细胞凋亡的影响。结果:与空白对照组相比,各浓度益肺饮含药血清对A549细胞均有明显的增殖抑制作用(P 0. 05),其抑制率随药物浓度递增而增强,5%含药血清组与20%含药血清组相比,差异有统计学意义(P 0. 05)。流式细胞术检测结果表明,不同浓度下含药血清组凋亡率明显优于对照组及空白对照组(P 0. 05);不同浓度含药血清组组内比较,5%、10%、15%各浓度之间两两比较差异有统计学意义(P 0. 05),但15%与20%浓度组比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论:益肺饮含药血清对肺癌A549细胞具有明显的增殖抑制、诱导凋亡的作用,并具有一定的浓度依赖性。     

荔枝核含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨荔枝核含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用血清药理学方法制备荔枝核、环磷酰胺含药血清以及对照血清,作用于HepG2细胞,MTT法检测各种血清对HepG2细胞增殖的影响,Hochest33258荧光染色观察细胞凋亡,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率。结果:荔枝核含药血清处理HepG2细胞后,呈剂量依赖性抑制肿瘤细胞增殖活性;并出现细胞核浓染与核碎裂;流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率明显高于对照组。结论:荔枝核含药血清能抑制人肝癌HepG2细胞增殖,其机制可能与诱导HepG2细胞凋亡有关。     

加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞-T6 (HSC-T6)增殖与凋亡的影响.方法 以不同浓度的加味四逆散含药血清[(加味四逆散低浓度组(含生药量0.78 g/ml)、加味四逆散中浓度组(含生药量1.56 g/ml)、加味四逆散高浓度组(含生药量3.12 g/ml)]作用于体外培养的HSC-T6细胞,作用时间分别为12、24、48 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组HSC-T6.采用流式细胞仪和TUNEL法检测对HSC-T6凋亡的影响.结果 ①加味四逆散含药血清作用于大鼠HSC-T6后,细胞增殖受到抑制,呈时间和浓度依赖性,加味四逆散各浓度组与空白对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01);加味四逆散高浓度组[48 h:(0.399±0.041)％]与鳖甲软肝片组[48 h:(0.429±0.037)％]比较差异有统计学意义(P＜0.05).②流式细胞仪分析结果:与空白对照组比较,加味四逆散各浓度组、复方鳖甲软肝片组与HSC作用12、24、48 h后,细胞凋亡增加.与鳖甲软肝片组[12 h:(8.31±0.30)％,24 h:(16.25±0.25)％,48 h:(27.12±0.39)％]比较,加味四逆散中浓度组[12h: (17.83±0.25)％,24 h:(26.06±0.26)％,48h:(39.30±2.25)％]、加味四逆散高浓度组[12h:(27.15±0.29)％,24h:(38.96±0.51)％,48h:(49.34±0.77) ％]细胞凋亡均增加(P＜0.05).③TUNEL检测,与鳖甲软肝片组[(30.0±3.92) ％]比较,加味四逆散各浓度[低浓度组(25.1±1.48)％、中浓度组(39.30±2.25)％、高浓度组(39.30±2.25)％]药物血清作用48 h后,细胞凋亡率均增加(P＜0.01).结论 加味四逆散含药血清可抑制体外HSC-T6的增殖、促讲其凋亡,以高剂量作用48 h最明显.     

芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的 研究芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖作用。方法 采用血清药理学和体外培养HUVEC的方法,通过倒置显微镜观察、MTT法和流式细胞术（FCM）检测芎芍胶囊高、中、低3个浓度含药血清对HUVEC增殖的影响。结果 MTT法检测结果显示高、中、低剂量的芎芍胶囊含药血清均有促进HUVEC增殖的作用,增殖率分别为54．14％、54．98％、33．77％;FCM法检测发现高、中、低剂量芎芍胶囊含药血清均可增加S期细胞比例,分别为52．14％、42．65％、37．08％;显微镜观察结果也显示各含药血清具有促进HUVEC增殖的作用。结论 芎芍胶囊能促进HUVEC的增殖,其促进细胞增殖的作用与浓度有一定的关系;提示芎芍胶囊的促血管新生作用可能是通过促进血管内皮细胞的增殖。     

不同浓度石斛合剂含药血清对β-Tc-6细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨不同浓度石斛合剂Ⅰ方和Ⅱ方含药血清对小鼠胰岛素瘤细胞株β-Tc-6增殖及凋亡的影响。方法将长满80%培养瓶的β-Tc-6消化后,接种于96孔板,1×104个细胞/孔,采用MTT法测吸光值A490,连续10d,绘制生长曲线;分别用20%、10%和5%的石斛合剂Ⅰ方或Ⅱ方含药血清作用于对数生长期细胞,48h后采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果β-Tc-6在第5前缓慢增殖,到第6天进入对数生长期,第9天后进入平台期。与对照组相比,10%石斛合剂Ⅰ方组可显著促进细胞增殖(P0.05);与对照组相比,三种不同浓度的石斛合剂Ⅰ方组及10%Ⅱ方组显著抑制细胞凋亡(P0.05,P0.01),与10%Ⅰ方组相比,20%Ⅰ方组和5%Ⅰ方组抑制凋亡更为显著,差异有统计学意义(P0.01,P0.05)。与对照组相比,20%Ⅱ方组显著促进细胞凋亡(P0.05)。结论石斛合剂Ⅰ方具有促进增殖及抑制凋亡的作用,其最佳作用浓度为10%;石斛合剂Ⅱ方对细胞增殖无显著性促进作用,但对细胞凋亡则依据不同浓度有显著性促进或抑制作用。     

甲亢宁胶囊含药血清对M22刺激FRTL-5细胞增殖的影响及自噬在其中的作用

目的探讨甲亢宁胶囊含药血清对甲状腺刺激性抗体(TSAb)单克隆抗体M22刺激Fisher大鼠甲状腺细胞系(FRTL-5)增殖作用和自噬的影响。方法体外培养FRTL-5细胞,采用不同浓度及时间观察M22刺激细胞增殖的量效关系,并确定作用最佳浓度及时间并制备甲亢宁胶囊含药血清。将FRTL-5细胞分为模型组(M22刺激24 h+15%空白大鼠血清),中药低、中、高剂量组(M22刺激24 h后5%、10%、15%甲亢宁胶囊含药血清干预24 h),正常组(15%空白大鼠血清)。采用CCK8法、酶联免疫竞争法检测各组细胞增殖情况及上清液中c AMP水平。确定高剂量(15%)甲亢宁胶囊含药血清抑制细胞增殖作用最强后再将FRTL-5细胞分为正常组(15%空白大鼠血清)、模型组(M22刺激24 h+15%空白大鼠血清)和中药组(M22刺激24 h后15%甲亢宁胶囊含药血清干预24 h),透射电镜下观察各组细胞内自噬体的变化,Western blot检测各组细胞自噬相关LC3及Beclin1蛋白水平。结果 M22对FRTL-5细胞的增殖影响呈现明显量效关系,确定1μg/m L M22于24 h增殖作用最佳。与正常组比较,模型组FRTL-5细胞增殖活性明显增强(P 0. 01),细胞上清液中c AMP释放量增加(P 0. 01),自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin1表达减少(P0. 01);与模型组比较,中药中剂量组和高剂量组FRTL-5细胞增殖被抑制(P 0. 01),上清液中c AMP释放量减少(P 0. 05,P 0. 01),中药低剂量组作用差异无统计学意义(P0. 05),中药组自噬关键蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达均增高(P 0. 01)。透射电镜提示,模型组较正常组自噬小体的数量减少,而中药组较模型组增多。结论 M22可促进FRTL-5细胞增殖且导致细胞自噬异常,而中药甲亢宁胶囊可通过改善其自噬异常,进而发挥抑制FRTL-5细胞增殖的作用。     

透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨透骨消痛胶囊含药血清影响软骨细胞线粒体凋亡通路的作用机制。方法:SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,Ⅱ型胶原原位杂交鉴定。第3代软骨细胞培养72h,SNP诱导软骨细胞凋亡,采用含药血清干预凋亡软骨细胞,Hocehst 33342染色检测软骨细胞的凋亡率,Real time RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达。结果:干预24h,软骨细胞的OD值,对照组、实验2组、实验3组明显高于空白组(P<0.05);软骨细胞Bcl-2mRNA表达,对照组、实验2组、实验3组明显高于空白组(P<0.05);软骨细胞Bax、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达,对照组、实验2组、实验3组明显低于空白组(P<0.05)。结论:透骨消痛胶囊含药血清能下调软骨细胞促凋亡基因Bax、Caspase-9、Caspase-3表达,上调抗凋亡基因Bcl-2表达,抑制软骨细胞线粒体凋亡通路的信号转导。     

六味地黄丸含药血清对骨髓细胞增殖的影响

目的观察六味地黄丸含药血清对正常大鼠骨髓细胞体外增殖的影响。方法体外培养大鼠股骨骨髓细胞,加入不同浓度的六味地黄丸含药血清,采用MTT比色法检测对骨髓细胞增殖的影响,采用流式细胞仪PI单标法检测对骨髓细胞周期的影响。结果与正常对照组比较,六味地黄丸含药血清能显著促进骨髓细胞增殖,促使细胞由G0/G1期进入S期以及由S期进入G2/M期,从而有利于骨髓细胞的增殖。结论六味地黄丸含药血清对大鼠骨髓细胞有很好的促增殖作用。     

六味地黄丸含药血清对树突状细胞增殖的影响

目的：研究六味地黄丸含药血清对SD大鼠骨髓源性树突状细胞（bone marrow-derived dendritic cells,BMDC）增殖的影响。方法：制备六味地黄丸含药血清,观察含药血清作用下的细胞生长情况,进行细胞计数及细胞活力测定;用四甲基偶氮唑盐（MTT）法,检测不同浓度、不同时间六味地黄丸含药血清作用下的细胞增殖变化,寻找最佳六味地黄丸浓度和作用时间;ELISA法检测细胞上清中树突状细胞分泌细胞因子IL-12的浓度;混合淋巴细胞反应（MLR）检测其刺激T淋巴细胞活化和增殖能力。结果：与空白对照组比较,成熟型DC含药血清组显著促进DC细胞增殖,且这种增殖在含药浓度15%,作用时间48 h时最为显著。其IL-12分泌量显著提高（P<0.05）。六味地黄丸含药血清培养的成熟型DC对异基因T淋巴细胞具有增殖刺激作用,且随着细胞数量的增加作用增强（P<0.05）,呈量效关系。结论：六味地黄丸含药血清具有诱导大鼠骨髓源性树突状细胞增殖的作用。     

瓜蒌含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响

目的研究瓜蒌水煎剂含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用,探讨其抗癌作用机制。方法采用血清药理学方法制备瓜蒌含药血清,MTT法检测含药血清对HeLa细胞生长的抑制作用,Wright’s-Giemsa染色和吖啶橙-EB染色在倒置显微镜和荧光显微镜下观察细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA Ladder。结果 HeLa细胞经不同剂量的瓜蒌含药血清作用24,48 h后,细胞体外抑制作用明显,呈量效、时效关系;倒置显微镜观察可见HeLa细胞膜皱缩,细胞核固缩,核染色质边缘化,并出现凋亡小体;荧光显微镜下可见晚期的凋亡细胞被染成红色,细胞固缩成球状;琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞发生了DNA断裂,呈梯状条带。结论瓜蒌含药血清对HeLa细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用机制与诱导细胞凋亡相关。     

加味四君子汤含药血清对B16恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究加味四君子汤含药血清对B16恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法:应用血清药理学方法给药,37℃5％ CO2的恒温培养箱中培养B16恶性黑色素瘤细胞,收集对数期细胞,终浓度10％的小鼠含药血清,分别作用12,24,48 h.实验分为空白对照组、血清对照组、加味四君子汤含药血清组(高、中、低3个剂量组)、顺铂组,每组含5个样本数.分别应用MTT法、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测加味四君子汤含药血清对B16恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响.结果:加味四君子汤含药血清作用12,24,48 h,与同时间段空白对照组和血清对照组相比,以剂量依赖方式抑制Bt6恶性黑色素细胞增殖,中剂量加味四君子汤含药血清组24,48 h抑制率为50.22％,53.81％,且48 h与24 h相比没有显著性变化;与空白对照组和血清对照组相比,中、高剂量加味四君子汤含药血清组、顺铂组的凋亡率分别为(19.70±0.98)％,(25.21±1.03)％,(21.31±1.00)％,显著促进B16恶性黑色素瘤细胞的凋亡(P＜0.05),但顺铂组凋亡率高于中剂量中药组,低于高剂量中药组.结论:加味四君子汤含药血清抑制B16恶性黑色素瘤细胞增殖;促进B16恶性黑色素瘤细胞的凋亡,这可能是加味四君子汤抗恶性黑色素瘤的机制之一.     

灵芪胶囊含药血清对人红白血病K562细胞增殖抑制作用的影响

目的：观察灵芪胶囊（LQC）含药血清在体外对K562白血病细胞增殖抑制作用的影响。方法：采用血清药理学方法制备灵芪胶囊含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,并测定抑制率、分裂指数以及克隆形成能力,观察灵芪胶囊含药血清对肿瘤细胞的抑制作用;用W right-G iemsa染色方法观察肿瘤细胞形态的变化。结果：不同浓度灵芪胶囊含药血清对K562细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系;灵芪胶囊含药血清对肿瘤细胞的分裂指数和克隆形成能力均具有显著的降低作用,在一定的时间内与剂量呈正相关,同时亦使肿瘤细胞的形态结构发生改变。结论：灵芪胶囊含药血清对K562白血病细胞具有细胞毒作用,其直接杀伤和破坏肿瘤细胞的作用是灵芪胶囊抗肿瘤的主要机理之一。     

仙茅、淫羊藿含药血清对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨仙茅、淫羊藿含药血清单用或与三苯氧胺(TAM)合用是否有促人乳腺癌MCF-7细胞增殖/凋亡的作用.方法 设立空白、E<,2>及TAM对照组,观察仙茅、淫羊藿含药血清单用及联合TAM在不同剂量和作用时间下时MCF-7细胞生长的影响.应用MTT法观察细胞增殖情况,应用Annex-V+PI双染法及流式细胞仪观察细胞凋亡情况.结果 仙茅、淫羊藿对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响因浓度的不同而不同:不同浓度的仙茅含药血清对乳腺癌细胞MCF-7的促增殖作用均不明显(P>0.05).仙茅、淫羊藿与TAM联合作用于MCF-7细胞,无明显促细胞增殖的作用(P>0.05),高剂量的淫羊藿甚至有诱导细胞凋亡的可能(P<0.05).结论 仙茅、淫羊藿临床上使用基本是安全的,尤其对ER(+)乳腺癌患者合并TAM治疗的情况下.研究结果为临床应用补肾中药治疗乳腺癌提供了实验依据.     

冠心舒通胶囊含药血清对AGEs诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨冠心舒通胶囊含药血清对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其可能机制。方法:分别以0.5g/kg、1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊内容物对大鼠灌胃给药28d制备冠心舒通胶囊含药血清;以各剂量含药血清单独或联合体外制备的AGE-牛血清白蛋白(AGE-BSA)处理原代培养大鼠VSMCs,MTT法检测各处理组细胞增殖水平、RT-PCR检测细胞血小板源性生长因子-B(PDGF-B)mRNA表达水平、酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清PDGF-B浓度。结果:40mg/L终浓度AGE-BSA显著增强VSMCs增殖水平(P<0.05),0.5g/kg、1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊含药血清对正常VSMCs生长未见显著影响(P>0.05),但显著抑制AGE-BSA诱导的VSMCs增殖(P<0.05),作用具有明显的剂量依赖性。AGE-BSA诱导VSMCs PDGF-B表达与分泌显著增强(P<0.05),1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊含药血清可有效抑制AGE-BSA这一作用(P<0.05),0.5g/kg剂量血清对AGE-BSA这一作用则未见明显影响(P>0.05)。结论:冠心舒通胶囊可剂量依赖性抑制AGEs诱导的VSMCs增殖,作用机制与抑制AGE诱导的PDGF-B表达与分泌有关。     

姜黄素体内外给药及含药血清对小鼠淋巴细胞增殖的影响

目的 探讨姜黄素3种不同给药途径对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.方法通过噻唑蓝(MTT)比色法比较姜黄素3种给药途径对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.结果姜黄素体内给药和含药血清能够促进小鼠脾淋巴细胞的增殖,体外实验证实姜黄素能够抑制小鼠脾淋巴细胞的增殖,并呈量效关系.结论姜黄素与其代谢产物对淋巴细胞增殖作用的影响是相反的.     

肝喜合剂含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究肝喜合剂对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用不同浓度肝喜合剂含药血清(10%、15%、20%)处理HepG2细胞,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况,RT-qPCR和Western blot法检测细胞凋亡相关因子Bax、Puma、caspase-9 mRNA和蛋白表达。结果 肝喜合剂含药血清可抑制HepG2细胞生长(P<0.05,P<0.01),促进HepG2细胞凋亡(P<0.05,P<0.01),升高Bax、Puma、active caspase-9蛋白表达及Bax、Puma mRNA表达(P<0.05,P<0.01),并呈剂量依赖性。结论 肝喜合剂可有效抑制HepG2细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与促进凋亡相关因子Bax、Puma、caspase-9表达有关。