银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝组织GRP78及CHOP表达的影响

目的：观察银杏叶提取物（GbE）对肝纤维大鼠内质网应激通路相关分子GRP78、CHOP表达的影响,探讨GbE抗肝纤维的作用机制。方法：采用40％的CCl4皮下注射（3mL.Kg-1.d-1,2次/周,首剂加倍） 6周诱导大鼠肝纤维化模型,同时分别以200、100、50mg.Kg-1.d-1的GbE灌胃干预6周,空腹取肝组织,RealTime-PCR及免疫组化法分别检测肝组织GRP78及CHOP基因的mRNA及蛋白表达。结果：肝组织GRP78和CHOP的mRNA及蛋白的表达较正常组明显增加（P〈0.05 P〈0.01）;应用高、中、低剂量GbE干预后,大鼠肝组织GRP78和CHOP基因的mRNA及蛋白表达显著下降（P〈0.05 P〈0.01）。结论：肝纤维化大鼠肝脏发生了ERS反应,GbE下调肝纤维化大鼠肝组织内质网应激通路相关分子GRP78和CHOP的mRNA及蛋白的表达可能是其抗肝纤维化作用的机制之一。     

GRP78、GRP94在乳腺癌中的表达及其意义

目的:在对乳腺癌的临床研究中,探讨GRP78和GRP94表达水平所提示的临床意义.方法:将符合临床研究标准的患者的病理样本统一采用免疫组化法检测其GRP78、GRP94的表达,将检测结果数值用SPASS统计软件中卡方、spearman法和方差分析进行统计分析.结果:①乳腺癌组织中GRP78阳性表达高于癌旁组织,具有统计学意义(P＜0.01);GRP94表达也具有统计学意义.②在乳腺癌癌组织中,肿瘤大小≤2cm组与＞2cm组GRP78表达无统计学意义(P＞0.05);GRP94同样.③在肿瘤的高、中、低分化组比较GRP78表达具有统计学意义(P＜0.05);GRP94同样.④在淋巴结转移的分析中,有淋巴结转移组较无淋巴结转移组GRP78的阳性表达明显增高,且具有统计学意义(P＜0.01); GRP94表达同样.⑤在临床分期的比较中,临床分期越靠后GRP78的含量越高,具有统计学差异性(P＜0.01);GRP94表达也同样⑥GRP78、GRP94在乳腺癌肿的表达存在正相关.结论:①GRP78、GRP94在乳腺癌组织中呈高表达.②.GRP78、GRP94可能与乳腺癌的发生、发展及预后有关.     

姜黄素对大鼠肠缺血再灌注后肠黏膜细胞凋亡及GRP78表达的影响

目的 观察姜黄素对大鼠肠缺血再灌注后肠黏膜细胞凋亡及GRP78表达的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、姜黄素组。采用无创性动脉夹夹闭肠系膜上动脉1 h后实施再灌注来建立肠缺血再灌注模型,姜黄素组在手术前5 d开始每天按200 mg/kg ig给药1次,假手术组仅分离肠系膜上动脉,不夹闭。采用HE染色观察肠黏膜损伤情况并进行病理评分;TUNEl法观察肠黏膜细胞凋亡情况并计算凋亡指数;Western blotting检测再灌注损伤3 h时肠黏膜GRP78及Caspase-12蛋白表达。结果 模型组肠黏膜损伤严重,绒毛上皮成块脱落,固有层破坏、溃疡,腺体破坏严重;姜黄素组肠黏膜绒毛上皮仅部分脱落,腺体排列紊乱,与模型组比较,病理评分显著降低（P<0.05）;模型组肠黏膜隐窝可见大量凋亡阳性细胞;与模型组比较,姜黄素组肠黏膜隐窝上皮细胞凋亡情况明显减轻,凋亡指数显著下降（P<0.05）;与模型组比较,姜黄素组GRP78蛋白表达量显著增加（P<0.05）,Caspase-12蛋白表达量显著下降（P<0.05）。结论 姜黄素有可能通过上调GRP78表达,减少内质网应激所致肠黏膜细胞凋亡,来减轻肠黏膜的再灌注损伤,达到保护肠黏膜作用。     

壬基酚暴露致小鼠睾丸GRP78和CHOP表达改变

目的 观察壬基酚暴露下小鼠睾丸中内质网应激相关分子表达改变,初步探索壬基酚对雄性生殖功能影响的机制.方法 将32只SPF级雄性昆明小鼠随机分为对照组(等体积注射玉米油)、壬基酚(50 mg/kg·bw)组、壬基酚(50 mg/kg·bw) +4-PBA(100 mg/kg·bw)组和4-PBA(100 mg/kg·bw...     

GRP78——一个新的肿瘤靶向治疗靶点

葡萄糖调节蛋白78（Glucose-regulated protein 78，GRP78）作为内质网中具有代表性的蛋白，能够促进细胞蛋白质成熟，是维系细胞机能和生命的关键性调节物质。GRP78作为分子伴侣的生物学功能已为人们所熟知。近年来，研究人员发现GRP78与肿瘤的增值，迁移以及抗药性的产生有着密切的关系，因此人们对这种葡萄糖调节蛋白的功能有了新的认识。     

原花青素对脑缺血再灌注后大鼠海马内质网应激相关分子GRP78和CHOP表达的影响

目的:探讨原花青素(procyanidin,PC)对脑缺血再灌注后大鼠海马内质网应激(endoplasmic re-ticulum stress,ERS)相关分子表达的影响。方法:将180只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和PC组,每组60只。PC组于术前1周灌胃给予PC(100 mg.kg-1)然后建立脑缺血再灌注模型,分别在脑缺血再灌注后3,6,12,24和48 h处死大鼠。观察不同时间点大鼠的神经行为表现;焦油紫染色处理大鼠海马组织切片,光镜观察病理学改变;末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;采用免疫组化及RT-PCR方法检测脑缺血再灌注后不同时间点大鼠海马GRP78和CHOP的表达。结果:PC组大鼠脑缺血再灌注后的神经功能缺损明显改善,与模型组相比具有统计学差异(P<0.01),其细胞凋亡数亦明显少于模型组(P<0.05);模型组与假手术组相比,GRP78与CHOP明显升高(P<0.01),PC组GRP78表达高于模型组(P<0.05),而PC组CHOP表达低于模型组(P<0.05)。结论:PC对脑缺血再灌注损伤大鼠具有保护作用,其机制可能与其增加GRP78表达、拮抗CHOP表达、阻断内质网应激(E...     

三七总皂苷抑制毒胡萝卜素诱导Bip/GRP78和caspase-12的表达

目的探索三七总皂苷在内质网(ER)应激条件下的细胞保护作用,分析三七总皂苷的抗肝细胞凋亡作用的机制。方法毒胡萝卜素(TG)诱导人类肝脏来源的细胞株Huh7细胞形成内质网应激介导的细胞凋亡。设置空白对照,三七总皂苷,毒胡萝卜素,及三七总皂苷加毒胡萝卜素不同处理细胞,加入细胞培养TG浓度5μmol/L,三七总皂苷浓度150μmol/L,培养24 h。荧光显微镜观察细胞形态学形态学,流式细胞仪测定细胞凋亡,免疫印记法检测Bip/GRP78和pro caspase-12,细胞caspase-3/7活性分析。结果毒胡萝卜素处理细胞染色质固缩,向外周聚集,周边化。形成很多颗粒物质。大量细胞核破裂形成碎片,核解体。三七总皂苷共同处理的细胞改善了细胞器的完整性,减少形态学改变,DAPI染色颗粒物质减少了45%。流式细胞仪测定显示三七总皂苷处理减少了2.5倍毒胡萝卜素引起的细胞凋亡。三七总皂苷减少TG诱导内质网应激标志物Bip/GRP78产生,降低pro caspase-12向caspase-12转化。减少caspase-3/7活性50%。结论三七总皂苷具有细胞保护作用,对抗内质网应激介导的细胞凋亡。三七总皂苷的抗凋亡作用的机制与稳定内质网内环境,抵消TG-诱导的内质网应激Bip/GRP78产生,降低pro caspase-12向caspase-12转化有关。这些研究结果有助于我们了解三七总皂苷对内质网应激相关的肝脏疾病的治疗作用机制。     

辣椒素通过调节GRP78触发内质网应激对人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的影响

目的 探讨辣椒素通过调节GRP78触发内质网应激对人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的影响及机制.方法 CCK-8筛选辣椒素的最佳作用浓度;Wright-Giemsa染色观察HL-60细胞的形态;Western blot检测GRP78蛋白的表达量;Annexin V-FITC/PI双染法检测HL-60细胞的凋亡率.结果...     

GRP78在二型糖尿病(T2DM)及其并发症中表达研究进展

糖尿病是一种常见的慢性疾病,有许多并发症,涉及多个器官和组织。葡萄糖调节蛋白78(GRP78)是内质网应激最敏感的伴侣蛋白。糖尿病及其并发症与内质网应激有着密切联系。研究GRP78表达特征及机制,对糖尿病及其并发症的发病机制及治疗有重要意义。文章就GRP78在二型糖尿病(T2DM)及其并发症中的表达和作用进行了综述。     

镧对大鼠星形胶质细胞GRP78、IRE1、JNK、Caspase-3和cPARP表达的影响北大核心CSCD

目的探讨镧(lanthanum,La)对大鼠大脑皮质星形胶质细胞(astrocyte,AS)的损害效应及对GRP-78、IRE1、JNK、Caspase-3和c PARP表达的影响。方法 0、0.25、0.5和1.0 mmol/L La Cl3处理大鼠大脑皮质AS细胞24 h,然后用乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)检测试剂盒测AS细胞LDH释放量,流式细胞仪测AS细胞凋亡情况,Western blot法测AS细胞GRP-78、IRE1、磷酸化的IRE1(phosphorylated IRE1,p IRE1)、JNK、磷酸化的JNK(phosphorylated JNK,p JNK)、Caspase-3和c PARP表达。结果 0.25、0.5和1.0 mmol/L La Cl3处理的大鼠AS细胞LDH释放量和细胞凋亡率显著高于对照AS细胞,且有剂量-反应关系。0.25、0.5和1.0 mmol/L La Cl3处理的大鼠AS细胞GRP-78、p IRE1、p JNK、Caspase-3和c PARP表达显著高于对照AS细胞,且随La Cl3处理AS细胞的剂量增加而升高,其中1.0 mmol/L La Cl3处理的大鼠AS细胞GRP-78、p IRE1、p JNK、Caspase-3和c PARP表达分别为对照AS细胞的2.60倍、2.96倍、3.93倍、3.38倍和2.93倍。结论 La对大鼠大脑皮质AS细胞的损害效应可能和GRP-78水平升高、IRE1和JNK磷酸化增加及Caspase-3、c PARP表达增强而致凋亡增加有关。     

硫化氢抑制葡萄糖调节蛋白78减轻6-OHDA诱导的PC12细胞损伤

目的：探讨硫化氢（H2S）是否通过改变葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的表达参与其对抗6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法应用具有神经毒性的6-OHDA损伤PC12细胞为帕金森病细胞模型,以硫氢化钠（NaHS）作为H2S的供体;应用CCK-8比色法检测细胞存活率;DFCH-DA染色检测细胞内活性氧（ROS）的水平;Rh123染色检测细胞线粒体膜电位（MMP）;Western blot检测GRP78的表达。结果200μmol/L的6-OHDA引起PC12细胞的存活率显著降低,ROS生成增加及MMP降低,且诱导了GRP78的高表达。应用25~400μmol/L的NaHS预处理30 min,呈浓度依赖性抑制6-OHDA引起的细胞存活率降低,其中400μmol/L的NaHS作用最明显,此浓度也可以显著减少6-OHDA引起的ROS增多,提高MMP,同时明显抑制6-OHDA诱导的GRP78高表达。结论 H2S具有抗6-OHDA氧化应激损伤的PC12细胞保护作用,抑制内质网应激分子GRP78的表达可能是其机制之一。     

高果糖饮食对大鼠胰岛功能和胰岛葡萄糖调节蛋白78的影响

目的：高果糖饮食所致的胰岛素抵抗大鼠早期胰岛功能和胰岛葡萄糖调节蛋白78( glucose related pro-tein78,GRP78)的变化。方法雄性Wistar大鼠36只随机分为对照组和高果糖组,每组18只,分别给予正常饲料和高果糖饲料喂养8周,测定相关指标,并应用口服葡萄糖耐量试验( OGTT)测定血糖和血胰岛素计算稳态模型胰岛素抵抗指数( HOMA-IR)、稳态模型胰岛素分泌指数( HOMA-β)和口服葡萄糖后30 min胰岛素增量和血糖增量比值(△I30/△G30)评价胰岛功能。分离和纯化大鼠胰岛测定GRP78蛋白水平。结果与对照组相比,高果糖组空腹胰岛素、胰岛素原、血甘油三酯以及HOMA-IR均明显升高(P均<0.01),反映早时相胰岛素分泌功能的△I30/△G30明显降低(P<0．01),但反映基础胰岛素分泌功能的HOMA-β无明显差异(P>0．01)。与对照组相比,高果糖组胰岛GRP78蛋白表达明显增加( P<0．01)。结论高果糖喂养8周导致 Wistar大鼠出现早期胰岛功能的下降和胰岛GRP78蛋白表达增加。其胰岛功能下降可能和内质网应激有关。     

低水平铅暴露对仔鼠白细胞78kd糖调蛋白表达的影响

目的 通过建立低水平铅暴露模型,研究宫内和哺乳期低水平铅暴露对仔鼠白细胞葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)蛋白表达量的影响,从内质网应激的角度探讨铅的发育免疫毒性.方法 将母鼠孕0天至仔鼠出生21天分成不同时期对仔鼠进行低水平铅暴露,用原子吸收分光光度法测定血铅含量,用Western印迹法检测白细胞内质网GRP78蛋白表达量.结果 3个染铅组血铅含量均明显高于对照组,哺乳组的白细胞中GRP78蛋白表达量明显高于对照组,有显著性差异.结论 哺乳期低水平铅暴露可使仔鼠白细胞内质网上的GRP78蛋白应激性表达增加而表现出发育免疫毒性,内质网上的GRP78是铅的重要蓄积库.     

Glucose-deprived HT-29 human colon carcinoma cells are sensitive to verrucosidin as a GRP78 down-regulator

Glucose deprivation, a feature of poorly vascularized solid tumors, activates the unfolded protein response (UPR) which is a stress-signaling pathway in tumor cells that is associated with the molecular chaperone GRP78 and induction of GRP78 has been shown to protect them against programmed cell death. Thus, targeting glucose-deprived conditions may be a novel strategy in anticancer drug development. Based on that, we established a novel screening program for chaperone modulators that preferentially cytotoxic activity in cancer cells under glucose-deprived conditions. During the course of our screening system, we recently isolated an active compound, 326-2, from Penicillium verrucosum var. cyclopium and identified it as a down-regulator of the grp78 gene. As expected, 326-2 inhibited the expression of the GRP78 promoter under glucose-deprived conditions in a dose-dependent manner with an IC(50) value of 50nM. Furthermore, 326-2 was identified as verrucosidin, a pyrone-type polyketide, by ESI-MS analyses and various NMR spectroscopic methods. We found that verrucosidin prevents UPR-induced expression of protein, such as GRP78, whose expression is induced by glucose-deprived or by 2-deoxyglucose; this effect is not seen under normal growth conditions. The GRP78-inhibitory action of verrucosidin was dependent on strict hypoglycemic conditions and resulted in selective cell death of glucose-deprived HT-29 human colon cancer cells.     

砷及MPST过表达对SH-SY5Y细胞GRP78/CHOP通路的影响

目的探讨内质网应激是否参与亚砷酸钠(NaAsO2)神经毒性损伤,明确3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,MPST)过表达是否调节砷诱导的内质网应激。方法通过构建MPST基因慢病毒表达载体来获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株作为SH-MPST过表达组,另设空载体转染细胞为SH-PEB组,染砷组(NaAsO2组),内质网应激阻断剂TUDCA组,TUDCA预处理染砷组。Western blot法分别检测过表达MPST、染砷及TUDCA预处理后细胞内GRP78和CHOP蛋白表达的变化。结果单纯MPST过表达不影响SH-SY5Y细胞内GRP78、CHOP蛋白的表达水平;经NaAsO2处理后,SH-PEB细胞内GRP78、CHOP蛋白明显上调(P<0.01),而被内质网应激阻断剂TUDCA所拮抗;MPST过表达则抑制砷对GRP78、CHOP蛋白的上调(P<0.01);然而,TUDCA预处理则明显逆转MPST过表达对GRP78、CHOP蛋白的影响(P<0.01)。结论GRP78/CHOP内质网应激通路参与了砷诱导的神经毒性损伤;MPST过表达可降低砷诱导的内质网应激水平。     

The effect of lead exposure on expression of SIRT1 in the rat hippocampus

Based on how the silent information regulator 2 homolog 1 (SIRT1) regulates the cyclic AMP response element binding protein (CREB), which is the molecular switch of long-term memory that maintains cognitive function, it is postulated that the impact of lead (Pb) on SIRT1 is one of the mechanisms leading to Pb-induced cognitive and learning deficits. Hence, the purpose of this study was to investigate the effect of Pb exposure on the expression of SIRT1, and the reversion effect of resveratrol, which is an activator of SIRT1. We examined the effects of maternal rat ingestion of Pb in drinking water during gestation and lactation on the expression of SIRT1 and CREB in the hippocampus of their offspring at postnatal week 3 (PNW3) and 52 (PNW52), and then reexamined these effects in offspring after intragastric administration of resveratrol for 4 weeks. Pb exposure decreased SIRT1 and CREB phosphorylation in a dose-dependent manner in the rat hippocampus at both PNW3 and 52, and resveratrol reversed those losses. These results indicated that SIRT1 might be a novel target to prevent Pb neurotoxicity.