丹参酮对人肺癌细胞株的增殖抑制作用及其分子机理

目的：观察丹参酮ⅡA对人肺腺癌细胞（SPC－A－1）的增殖抑 制作用及其分子机理。方法：体外培养的SPC－A－1细胞经无毒剂量（0．5μg/ml）的丹参酮ⅡA处理5天后，观察细胞形态学、增殖动力学、细胞周期分布及肿瘤相关基因表达改变，并以全反式维甲酸及顺铂作为对照。结果：SPC－A－1细胞经丹参酮ⅡA处理后，细胞生长明显减慢，集落形成率显著降低。FCM细胞周期分析：S期细胞显著减少，G0／G1期细胞则明显增加。丹参酮ⅡA可使细胞p53、p21表达显著升高而CDKN2明显降低。结论：丹参酮ⅡA对SPC－A－1细胞增殖具有显著抑制作用，其分子机理可能是丹参酮ⅡA能显著上调p53、p21表达和下调CDKN2的表达而抑制DNA的合成。     

丹参酮诱导人肺癌细胞凋亡及其分子机理

目的 了解丹参酮对人肺癌细胞（SPC-A-1）的凋亡诱导作用，并探讨其可能的分子机理，方法 体外培养的SPC-A-1细胞经无毒剂量的丹参酮ⅡA（0.5mg/L)处理5天，光镜，电镜观察细胞凋亡情况，流式细胞仪检测凋亡指数及凋亡相关基因的蛋白表达，并以全反式维甲酸及顺铂作为对照。结果 SPC-A-1细胞经丹参酮ⅡA处理后，电镜观察可见多量凋亡细胞，流式细胞仪检测；丹参酮组凋亡指数显著高于顺铂组及对照组，而与维甲酸组比较无显著差异。丹参酮组促凋亡基因p53,Fas,Bax表达水平明显升高，而凋亡抑制基因Bcl-2的表达水平则显著降低。结论 丹参酮ⅡA具有诱导肺癌SPC-A-1细胞凋亡的作用。其分子机理可能是上调p53,Bax,Fas及下调Bcl-2的表达。     

阿帕替尼联合大剂量丹参酮IIA对肺腺癌A549细胞株凋亡及Bim异构体的影响

目的:观察阿帕替尼与丹参酮IIA单药及不同时序联合用药方案对人肺腺癌细胞A549凋亡的影响,并探究其作用机制。方法:培养肺癌A549细胞,用梯度浓度的阿帕替尼(0、5、10、20、40、80 μmol/L)及丹参酮IIA(0、5、10、20、40、80 μmol/L)分别处理A549细胞,应用CCK8法检测其对细胞增殖的抑制作用;流式细胞技术（Annexin V/PI 双染法）检测不同用药组作用48 h后的细胞凋亡率;半定量RT-PCR检测凋亡相关基因Bim异构体的表达情况。结果:阿帕替尼及丹参酮IIA单药对A549细胞的增殖均有抑制作用,且呈现浓度依赖性。两种药物联合使用时,联合用药组增殖抑制和凋亡率优于单药组和改变药物顺序的序贯组。结论:阿帕替尼与丹参酮IIA单药以及联合用药均可抑制A549细胞的增殖并促进凋亡;最佳联合方案为阿帕替尼联合丹参酮IIA同时使用,细胞凋亡率最高;其作用机制之一可能是联合用药通过转录和mRNA选择性剪接来上调Bim L基因的表达,从而促进细胞凋亡。     

α-干扰素与肉桂酸对人肺癌细胞增殖的抑制作用

背景与目的:有研究表明肉桂酸对肿瘤细胞有抑制作用。本实验拟进一步研究α-干扰素(alpha-interferon,α-IFN)与肉桂酸(cinnamicacid,CINN)单独及联合作用对人肺腺癌细胞增殖的抑制作用。方法:用α-IFN和CINN处理人肺腺癌A549细胞,通过绘制生长曲线、软琼脂集落形成实验、甲基绿-派洛宁染色、流式细胞术(FCM)测定等方法来研究其对细胞的增殖抑制作用。结果:与对照组相比,α-IFN和CINN能明显抑制A549细胞增殖(P<0.05),促进细胞分化(P<0.05),α-IFN和CINN联合应用时抑制作用较二者单独作用时强;细胞在软琼脂中集落形成率明显下降(P<0.05);FCM显示细胞周期移行被阻滞于G1/G0期。结论:CINN联合α-IFN能抑制肺腺癌细胞增殖,α-IFN和CINN两药联合作用效应强于α-IFN或CINN单独作用。     

诃子水提取物对肺癌A549细胞抑制作用的实验研究

目的：探讨诃子水提物对人肺癌细胞A549体外增值的影响和作用机制。方法：利用MTT法检测不同剂量组的诃子水提物对肺癌A549细胞增殖的影响,通过倒置显微镜观察肺癌A549细胞的形态学变化,流式细胞仪测定各浓度组诃子水提物对肺癌细胞A549作用后的周期变化。结果：诃子水提物对人肺癌细胞A549的增殖具有抑制作用,且有浓度和时间依赖性;在显微镜下观察到典型的凋亡细胞形态特征;流式方法测定的结果显示,诃子水提物阻滞肺癌A549细胞于G0／G1期。结论：诃子水提物对人肺癌细胞A549增殖具有抑制作用,其机制是诃子水提物使细胞周期阻滞于G0／G1期并诱导细胞凋亡。     

Lewis肺癌细胞诱导人血小板的聚集反应

已经发现人和动物的多种肿瘤细胞都能在体外引起血小板聚集,并且这种反应与恶性肿瘤的转移能力有关,但有关肿瘤细胞诱导血小板聚集的机理研究甚少。最近我们观察了Lewis肺癌细胞诱导人血小板聚集的作用,并且利用单克隆抗体与多种抑制剂研究了这种聚集的机理,现报告如下。     

丹参酮ⅡA对人肺癌细胞株A549/CDDP细胞增殖和凋亡的影响

目的研究丹参酮ⅡA（TanⅡA）对人耐药非小细胞肺癌细胞株（A549/CDDP）增殖与凋亡的影响。方法体外培养A549/CDDP,以不同剂量组TanⅡA干预A549/CDDP,在48、72、96小时后用四氮唑盐（MTT）法检测活细胞OD值;采用Heochst33258荧光染色观察TanⅡA干预后细胞凋亡的形态学变化;半定量RT-PCR检测用药后A549/CDDP survivin和Bax基因表达;流式细胞术检测TanⅡA干预后细胞周期分布。结果在0.6-5.0 mg/L浓度范围内,TanⅡA对A549/CDDP均有增殖抑制作用,并呈剂量依赖趋势,在96小时各组增殖抑制率达高峰;5.0mg/L 72小时组,形态学观察细胞凋亡明显;2.5、5.0 mg/L 72小时组,survivin DNA条带强度较对照组减弱,BaxDNA条带强度较对照组明显增强;流式细胞术检测显示TanⅡA明显抑制A549/CDDP进入增殖周期,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 TanⅡA可诱导凋亡抑制A549/CDDP增殖并影响细胞周期,其分子机制可能与survivin下调,Bax上调有关。     

紫杉醇对人胰腺癌细胞株BxPC-3增殖抑制作用的研究

目的:通过体外实验探讨紫杉醇(paclitaxel,TAX)对人胰腺癌细胞株Bx-PC-3的增殖抑制作用。方法:人胰腺癌细胞株BxPC-3经过不同浓度的TAX作用不同时间后,在倒置显微镜下观察细胞形态学改变;用甲基噻唑基四唑试验(MTT)检测细胞抑制率;用流式细胞仪分析细胞周期变化。结果:TAX对人胰腺癌细胞株BxPC-3有明显的生长抑制作用,且呈剂量、时间依赖关系。流式细胞仪分析结果显示,BxPC-3细胞经过1000nmol/LTAX分别作用24和48h后,G2～M期细胞比例分别为(66.39±0.23)%和(48.49±1.47)%,明显高于对照组(8.67±2.32)%和(10.85±2.43)%,t值分别为49.41和26.49,P值均为0.000,提示存在G2～M期阻滞。结论:TAX可使人胰腺癌细胞株BxPC-3的生长受到抑制,BxPC-3细胞经过TAX作用后被阻滞于G2～M期。     

维甲酸和甘草酸联合对人肺癌细胞增殖和侵袭抑制作用的研究

目的　探讨全反式维甲酸和甘草酸单独及联合作用对高转移人肺癌细胞 (PGCL3 )增殖和侵袭的抑制作用。方法　用维甲酸和甘草酸处理PGCL3细胞 ,通过细胞增殖抑制试验、软琼脂集落形成试验、侵袭、运动和黏附试验、以及组织蛋白酶B活性的测定 ,观察PGCL3细胞增殖和侵袭能力的变化。结果　维甲酸和甘草酸可减弱PGCL3细胞增殖能力 ,并呈剂量依赖性 ,半抑制浓度IC50 分别为 12 .6μmol/L和 1.8mmol/L。 2 .5 μmol/L和 5 .0 μmol/L维甲酸、0 .5mmol/L和 1.0mmol/L甘草酸能抑制PGCL3细胞的侵袭能力 (P <0 .0 5和P <0 .0 1) ,且有剂量依赖性。 5 .0 μmol/L维甲酸和 0 .5mmol/L甘草酸联合作用对PGCL3细胞的侵袭抑制率高于两药单独作用之和 ,呈协同作用。上述浓度甘草酸对细胞的运动、黏附、组织蛋白酶B分泌和软琼脂集落形成率均有显著抑制作用 (P <0 .0 1)。结论　维甲酸和甘草酸对PGCL3细胞的增殖和侵袭有抑制作用 ,两药有协同作用 ,甘草酸抗侵袭机理不是对侵袭的某一环节的阻断 ,而是对侵袭各个基本环节都有抑制作用     

Rb基因对肺腺癌细胞株生长的抑制作用

目的：探讨重组腺病毒载体的转染效率及其介导外Ｒｂ基因进肿瘤细胞的效果，观察外源Ｒｂ基因在肿瘤细胞内的表达及其对捉瘤细胞生长的抑制作用。为肿瘤的基因治疗提供实验依据。方法：构建Ｒｂ基因重组腺病毒载体。体外转染人肺腺癌细胞标ＧＬＣ－８２。应用免疫组化和聚合酶链反应等技术，观察Ｒｂ基因在细胞内的状态及表达情况。应用细胞计数及流式细胞仪检测肿瘤细胞的生长情况。结果：ＧＬＣ－８３细胞内存在基因组Ｒｂ基因，但     

胰岛素对人乳腺癌细胞影响的体外实验研究

目的:探讨胰岛素能否促进人乳腺癌细胞增殖。方法:将胰岛素直接作用于体外培养的人乳腺癌细胞株(MDA-MB-543),运用四氮唑盐,直接细胞计数及流式细胞仪测定等方法观察胰岛素对MDA-MB-543细胞株活力,细胞总数,细胞周期等的影响。结果:胰岛素(0.5~16mu/ml,8~18小时)使MDA-MB-543细胞株活力,细胞总数增加,呈明显的量效关系,流式检测证实胰岛素(7.5mu/ml)使S期细胞增多。结论:在体外,胰岛素可诱导人乳腺癌细胞株MDA-MB-543增殖。     

逆癌酮对肺癌细胞的生长抑制作用和机理的初步研究

目的　观察逆癌酮对A5 49细胞系和PLA 80 1D细胞系的生长抑制作用 ,并初步探讨其机理。方法　应用体外细胞培养技术 ,以逆癌酮作用于肺癌细胞株 ,绘制生长曲线和剂量效应曲线 ,进行克隆形成实验 ,并采用光镜和流式细胞仪进行观察和分析。结果　逆癌酮作用后 ,两个细胞系的生长明显受抑 ,克隆形成能力受抑。流式细胞仪分析表明经逆癌酮作用后 ,G0 /G1期细胞数目增多 (P <0 .0 1) ,凋亡指数增加 (P <0 .0 1)。结论　逆癌酮可抑制人肺癌细胞的生长 ,其作用可能是通过诱导细胞凋亡实现的。     

大黄素对人胃癌细胞MKN45增殖抑制作用及其分子机制的探讨

目的:研究大黄素(Emodin)对人胃癌细胞MKN45的作用及探讨其诱导MKN45凋亡的分子机制。方法:用MTT法观察大黄素对MKN45的生长抑制作用;荧光染色法及流式细胞仪分析诱导凋亡作用;蛋白质印迹法检测p53和p21蛋白水平的变化;细胞免疫化学法检测Fas的表达。结果:与对照组相比,大黄素能明显抑制MKN45细胞的生长且呈浓度、时间依赖性,其IC50(48h)为(47.5±0.3)μmol/L;大黄素处理胃癌细胞后,吖啶橙(AO)染色观察示,细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光、新月型改变、核固缩或片段化及凋亡小体的形成。流式细胞仪分析显示,大黄素能浓度依赖性诱导MKN45细胞凋亡和G2/M期阻滞。蛋白质印迹法检测显示,随着药物浓度的不断增加,p53和p21WAF1蛋白水平表现出明显增强的趋势;细胞免疫化学方法显示,大黄素处理后的细胞Fas/APO-1表达较对照组明显增多。结论:大黄素对人胃癌细胞MKN45有明显的生长抑制作用,且该作用与p53依赖性诱导凋亡以及Fas表达水平的上调有关。     

蛋白激酶C-δ阻断剂Rottlerin对人结肠癌细胞的影响及其机理

目的 研究蛋白激酶C-δ（PKC-δ）阻断剂Rottlerin对人结肠癌细胞的影响及其机理。方法 培养人结肠癌细胞SW1116,以Rottlerin 10μmol／L干预24h,并以DMSO为对照。以定量RTPCR检测DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase,Dnmt）1、3a、3b和抑癌基因APC、p21^WAF1和p16^INK4A基因转录水平;流式细胞仪分析细胞周期;光学显微镜下观察细胞形态学变化。结果 PKC-6阻断剂Rottlerin可抑制Dnmt1和Dnmt3a表达,上调APC、p21^WAF1和p16^1NK4A转录;Rottlerin明显增加G0／G1期细胞百分比（P=0．02）,显著降低G2／M期细胞百分比（P=0．01）;Rottlerin可使细胞胞浆增加,体积增大,细胞变得肿胀,轮廓模糊,细胞核分裂相明显减少。结论 PKC-δ阻断剂Rottlerin通过调控DNA甲基化水平以及阻断MAPK途径,抑制结肠癌SW1116细胞分裂、增殖。     

伊班膦酸对人肺癌细胞株A549生长及其对VEGF表达的影响

目的:观察伊班膦酸对人肺癌A549细胞株体外增殖抑制作用及对血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响. 方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度伊班膦酸对A549细胞的生长抑制作用;酶联免疫吸附试验(ELISA)和RT-PCR检测不同药物浓度下VEGF表达水平变化. 结果: 伊班膦酸对人肺癌细胞的生长抑制率随时间和浓度的增加呈明显的上升趋势,表现出一定的剂量时间依赖关系,差异有统计学意义;不同药物浓度作用后,A549细胞VEGF表达与对照组相比逐渐减少.结论: 伊班膦酸能抑制A549细胞的生长增殖,抑制VEGF表达可能为其机制之一.     

高温联合顺铂及多西他赛对肺腺癌A549细胞体外作用的研究

目的：研究高温联合顺铂（DDP）及多西他赛（TXT）对肺腺癌细胞株A549的体外作用。方法：不同处理因素作用于A549细胞后,应用四氮唑盐比色法（MTT法）测定细胞增殖情况,根据Veleriote法判断高温联合化疗药的作用效果;通过两药相互作用指数判断药物联合作用效果;流式细胞仪检测不同处理后细胞凋亡情况;光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态学变化。结果：高温和化疗药单独作用均对A549有生长抑制作用（P〈0．05）;化疗药有剂量依赖关系;高温有温度依赖关系;高温与药物联合对细胞生长抑制作用强于单独高温组或单独化疗组（P〈0．01）;DDP与高温联合为协同作用;TXT与高温联合为次加作用;DDP和rr）（T联合作用对细胞生长抑制为协同作用;42℃、DDP2μg/ml和TXT1IXg／ml三者联合凋亡率明显高于其他处理组（P〈0．01）;普通光镜和荧光显微镜下42％、DDP2μg/ml和TXT1μg/ml三者联合凋亡细胞数较对照组和42℃组明显增多,细胞形态学变化明显。结论：DDP、TXT、高温三者体外联合作用对A549有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。     

高温联合顺铂及多西他赛对肺腺癌A549细胞体外作用的研究

目的:研究高温联合顺铂(DDP)及多西他赛(TXT)对肺腺癌细胞株A549的体外作用.方法:不同处理因素作用于A549细胞后,应用四氮唑盐比色法(MTT法)测定细胞增殖情况,根据Veleriote法判断高温联合化疗药的作用效果;通过两药相互作用指数判断药物联合作用效果;流式细胞仪检测不同处理后细胞凋亡情况;光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态学变化.结果:高温和化疗药单独作用均对A549有生长抑制作用(P＜0.05);化疗药有剂量依赖关系;高温有温度依赖关系;高温与药物联合对细胞生长抑制作用强于单独高温组或单独化疗组(P＜0.01);DDP与高温联合为协同作用;TXT与高温联合为次加作用;DDP和TXT联合作用对细胞生长抑制为协同作用;42℃、DDP 2 μg/ml 和TXT 1μg/ml三者联合凋亡率明显高于其他处理组(P＜0.01);普通光镜和荧光显微镜下42℃、DDP 2 μg/ml 和TXT 1μg/ml三者联合凋亡细胞数较对照组和42℃组明显增多,细胞形态学变化明显.结论:DDP、TXT、高温三者体外联合作用对A549有明显的生长抑制和诱导凋亡作用.     

PD-L1对肺癌细胞迁移能力的影响

目的:探索PD-L1在肺癌细胞中的表达及其对细胞迁移能力的影响.方法:采用流式细胞术检测不同病理类型肺癌细胞株表面PD-L1分子表达水平,分别选择高、中、低表达的细胞株,后添加细胞因子诱导肺癌细胞株,采用免疫印迹术筛选出能够提高肺癌细胞株PD-L1分子表达水平的细胞因子;采用siRNA干扰技术,下调中、高表达PD-L1的肺癌细胞株中PD-L1的分子表达水平,transwell实验检测细胞迁移能力改变.结果:PD-L1在细胞株HCC827、H1299、A549(腺癌)、H226、H520(鳞癌)、H460(大细胞癌)、H446(小细胞癌)表面的表达水平分别为HCC827、H460(高表达),H1299、H226、H446、H520(中表达),A549(低表达).选择具有transwell迁移能力的腺癌细胞株H1299、A549,分别添加细胞因子IL-4、IL-6、IL-13、TGF-β-1、IFN-γ培养,筛选出TGF-β-1、IFN-γ两种因子能够上调肺癌细胞株PD-L1的表达水平,transwell实验结果显示细胞迁移能力较对照组显著增强.si-PD-L1干扰肺癌细胞株PD-L1表达后,PD-L1的表达水平明显下调,细胞迁移能力较对照组显著减弱;TGF-β-1、IFN-γ诱导细胞株PD-L1表达水平上调后能够引起细胞迁移能力增强,经siRNA干扰后,PD-L1表达水平下调,细胞迁移能力随之显著减弱.结论:PD-L1的表达能促进肺癌细胞的迁移,可能参与肺癌转移过程.