新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时血红素氧化酶-1mRNA及其蛋白的表达

目的:探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemiabraindamage,HIBD)后海马区血红素氧化酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)mRNA和蛋白表达的变化及作用。方法:7d龄SD仔鼠72只,完全随机分为HIBD组和假手术对照组。用原位杂交及免疫组化观测两组在不同时间点海马区HO-1mRNA及蛋白阳性细胞数量的变化。结果:HIBD组右侧海马HO-1mRNA表达4h开始升高(42.8±6.1,t=25,P<0.05),12h达高峰(85.7±6.4),48h开始略有下降(67.7±6.1),72h后(52.3±5.2)仍高于对照组(25.0±5.1,t=9.2,P<0.01)。HO-1蛋白的表达与HO-1mRNA表达变化规律相一致。结论:HO-1mRNA及其蛋白表达的增加在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的发病机制中有重要作用。     

亚低温对缺血再灌注大鼠海马CA1区Bcl-2和Bax表达动态变化的影响

目的：研究脑缺血再灌注后全身亚低温的脑保护作用及其对Bcl-2和Bax表达的动态影响，探讨亚低温脑保护作用的机制。方法：实验于2002-01／12在江苏省麻醉医学研究所(省级重点实验室)完成。实验动物选择126只SD雄性大鼠随机分为假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组。采用Pulsinelli四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型，即刻全身亚低温4h，分别在再灌注后4，8，24，48，72，96h，7d，7个时间点取脑标本，进行Bcl-2和Bax免疫组织化学及苏木精-伊红染色。结果：与常温组相比，全身亚低温组海马CA1区死亡细胞数明显减少[常温比亚低温24h：(195&;#177;18)比(214&;#177;20)个／mm，P&;lt;0．05；48h：(185&;#177;17)比(215&;#177;21)个／min．P&;lt;0．01；72h：(130&;#177;20)比(200&;#177;17)个／mm，P&;lt;0．01)]；Bcl-2蛋白免疫反应强度峰值增高，持续时间延长[灰度值：常温比低温：24h(40&;#177;8比57&;#177;8，P&;lt;0．01)；48h(42&;#177;6比55&;#177;8，P&;lt;0．01)；72h(38&;#177;4比41&;#177;6，P&;lt;0．01)]。Bax蛋白免疫反应强度峰值减低，持续时间缩短[灰度值：常温比低温24h(32&;#177;4比24&;#177;5．P&;lt;0．05)；48h(30&;#177;7比24&;#177;6，P&;lt;0．05)；72h(26&;#177;4比22&;#177;5，P&;lt;0．05)]。结论：全身亚低温对缺血性锥体细胞损害有较好的保护作用。可增强具有抗凋亡的Bcl-2蛋白的表达，延长其表达持续时间，而减弱具有促凋亡的Bax表达，同时缩短其表达持续时间，此可能是亚低温对缺血性脑组织损害产生保护作用的分子机制之一。     

经鼻给予胰岛素样生长因子1对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的影响

目的：胰岛素样生长因子1具有非选择性神经营养作用，选择经鼻外源性中枢给药方式，观察其对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用及其机制。方法：实验于2000—01／03在南京医科大学儿科研究所实验室完成。取28只7日龄新生大鼠随机分为对照组，给药组和假手术组3组。给药组于缺氧后经鼻腔滴入胰岛素样生长因子12．5μg(溶于生理盐水0．1mL中)；对照组于缺氧缺血性脑损伤后给予等量的生理盐水经鼻腔滴入；假手术组仅分离颈总动脉，不结扎不缺氧。24h后处死动物取脑组织，应用组织学方法检查损伤部位变性神经细胞计数，应用免疫组化法检查脑组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达，评估胰岛素样生长因子1的脑保护作用。结果：脑组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达水平：假手术组个别皮质区域有少量表达。与对照组(7．27&;#177;0．48)相比，用药组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(2．03&;#177;0．64)表达减少(P&;lt;0．01)，神经细胞总数增加(P&;lt;0．01)，变性／坏死神经细胞数减少(P&;lt;0．01)。结论：鼻腔滴入胰岛素样生长因子1可能通过降低缺氧缺血性脑损伤脑组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达，从而对缺氧缺血性脑损伤脑组织损伤产生保护作用。     

幼鼠持续惊厥状态脑损伤时托吡酯的神经保护作用

目的：研究托吡酯对惊厥性脑损伤是否具有保护作用。方法：制作毛果芸香碱惊厥持续状态动物模型，给予托毗酯干预，检测海马区神经元坏死、凋亡、凋亡蛋白表达和胶质细胞增生变化情况。结果：毛果芸香碱惊厥持续状态模型鼠病理损伤特点为神经元坏死、细胞凋亡、凋亡蛋白表达增多，胶质细胞增生。托吡酯可减少海马区细胞坏死：CA3区坏死细胞百分比由(72．1&;#177;13．4)％降至(20．6&;#177;7．2)％(P&;lt;0．05)；CA1区由(67．1&;#177;9．3)％降至(18．3&;#177;4．8)％(P&;lt;0．05)；减少细胞凋亡：CA1区单位面积凋亡细胞数由9．4&;#177;6．1降至1．7&;#177;0．8(P&;lt;0．05)；减少凋亡蛋白表达：单位面积caspase-3阳性面积由1．49&;#177;0．25降至0．71&;#177;0．12(P&;lt;0．05)；缓解胶质细胞增生：单位面积胶质细胞数由47．3&;#177;3．6降至19．5&;#177;3．9(P&;lt;0．05)。结论：托吡酯对幼鼠惊厥性神经变性，可减少神经的死亡和凋亡，缓解胶质细胞增生。     

神经生长因子对缺氧缺血性脑损伤患者闪光视觉诱发电位的影响

背景：闪光视觉诱发电位(flash-visual evoked potential，F-VEP)是目前儿科临床评估中枢神经系统功能状态的一项新的易行方法。目的：探讨闪光视觉诱发电位(F-VEP)，反映新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage，HIBD)的敏感性，研究神经生长因子(nerve growth factor，NGF)对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用，为新生儿HIBD的早期诊断与干预提供理论依据。设计：完全随机设计，对照实验研究。地点与材料：研究地点为南京医科大学第二附属医院儿科，生后7dSD大鼠来源于南京医科大学实验动物中心，共60只，体质量约14—18g，雌雄不拘，饲养于屏障环境的SPF级实验动物。干预：40只大鼠制成HIBD动物模型后随机分成两组：HIBD模型未治疗组20只，HIBD模型NGF治疗组20只，另20只为正常对照组。主要观察指标：观察正常对照组及HIBD后F-VEP改变；NGF对HIBD模型的新生大鼠体质量增长情况、死亡率、左右脑质量及F-VEP波形影响。结果：HIBD模型NGF治疗组体质量增长(11．9&;#177;3．5)g，实验过程中死亡率为5％，患侧(左侧)脑质量(0．59&;#177;0．02)与未治疗组相比差异有显著意义(P均&;lt;0．01)；治疗组左右脑重量差异无显著意义，而未治疗组左右脑质量[(0．39&;#177;0．10)g，(0．57&;#177;0．05)g]差异的显著性意义(P&;lt;0．01)；HIBD后NGF治疗组与未治疗组即刻F-VEP潜伏期[(36．84&;#177;2．120)ms，(36．44&;#177;1．94)ms]均较对照组(30．27&;#177;1．52)ms明显延长(P&;lt;0．01)，波幅降低(P&;lt;0．01)；NGF未治疗组7d后与同期对照组相比F-VEP潜伏期-[(48．17&;#177;2．08)ms，(29．80&;#177;1．93)ms]明显延长，波幅降低[(3．75&;#177;0．69)mV，(4．22&;#177;0．87)mV](P均&;lt;0．01)；同期NGF治疗组与未治疗组相比F-VEP潜伏期(32．08&;#177;1．85，48．17&;#177;2．08)明显缩短，波幅升高[(3．97&;#177;0．75)mV，(2．75&;#177;0．69)mV，P均&;lt;0．01]。结论：F-VEP主波潜伏期、波幅可较迅速反映HIBD后脑功能状态；NGF治疗减轻了HIBD后脑萎缩、改善了脑功能。     

人参银杏复方制剂对缺氧复氧后大鼠海马CA1区Fos表达的影响

目的：观察人参银杏复方制剂对缺氧24h复氧后不同时段Fos表达时程变化的影响，探讨人参银杏复方制剂抗缺氧复氧性脑损伤机制。方法：35只清洁级SD大鼠随机分为常氧对照组，缺氧复氧实验组和人参银杏复方制剂给药组。应用低压氧舱仿海拔8000m高空缺氧模型，采用Nissl染色、Fos免疫组化方法结合图像分析技术，观察预防性应用人参银杏复方制剂对缺氧24h复氧0，24，72h不同时段海马CA1区锥体细胞层神经元形态及Fos免疫反应阳性神经元的影响。结果：全脑缺氧24h复氧72h后，海马CA1区锥体细胞层神经元数量锐减，Fos免疫反应阳性神经元数量在缺氧24h复氧0h时为(9．3&;#177;3．8)个，较常氧对照组(16．6&;#177;4．8)个减少，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)，复氧24h时显著减少甚至消失为(2．0&;#177;1．8)个，复氧72h为(13．7&;#177;5．1)个，时接近常氧对照组水平差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。预防性应用人参银杏复方制剂后缺氧24h复氧72h时海马CA1区锥体细胞层神经元数量未见明显减少，在缺氧24h复氧0，24，72h时段CA1区Fos免疫反应阳性神经元数量分别较缺氧复氧实验组相应时段增加，以复氧0h时增加最为显著，为(39．0&;#177;5．8)个，与常氧对照组比较差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：人参银杏复方制剂对缺氧复氧后海马CA1区神经元具有保护作用，其保护作用可能与增加缺氧复氧后海马CA1区Foa表达有关。     

地佐环平对缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl－2蛋白和Bax蛋白表达的影响

目的：观察N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体非竞争性拮抗剂MK-801对缺氧缺糖海马脑片CA1区：Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的影响。方法：新生6～9dSD大鼠断头取脑，制备海马脑片，将各孔脑片单纯随机分为3组，分别为正常对照组(HOTC)、单纯缺氧缺糖组(OGD)和预加MK-801再缺氧缺糖组(MK-801+OGD)。海马脑片进行缺氧缺糖培养，最后进行免疫组织化学染色和图像分析处理。结果：各组海马脑片CA1区均有不同程度Bcl-2，Bax蛋白表达。OGD组Bcl-2蛋白的表达(15．7&;#177;1．1)弱于HOTC组[18．5&;#177;O．9)和MK-801+OGD组(18．O&;#177;O．9)，差异均有显著性意义(F=6．495，P&;lt;O．05)；OGD组Bax蛋白的表达(13．1&;#177;2．5)强于HOTC组(7．3&;#177;1．1)和MK-801组(8．7&;#177;1．1)，其差异均有显著性意义(F=9．770，P&;lt;O．05)。同时，OGD组CA1区出现细胞缺失形成的空洞，其他两组与OGD组相比有所减少。结论：MK-801可增强缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl-2蛋白的表达，降低Bax蛋白的表达，并减轻该区锥体细胞损伤程度。     

新生大鼠脑缺氧缺血后热休克蛋白表达与KATP通道开放剂的脑保护作用

目的：观察KATP通道开放剂克罗吗啉对新生大鼠脑缺氧缺血后热休克蛋白70表达、病理学损伤变化的影响。从基础水平探讨KATP通道开放剂保护脑的作用机制，为其在实际应用上寻求依据。方法：实验选用72只7日龄新生大鼠，随机分为4组，分别为缺氧缺血组&;lt;结扎左颈总动脉后予8％氧2h)，给药组(缺氧缺血前给予克罗吗啉)，正常对照组，假手术组。每组再分为24，48，72h3个亚组，共12组，每组6只。每组分别在24，48，72h用免疫组织化学及苏木精一伊红染色方法检测缺氧缺血和克罗吗啉干预后不同时间点脑皮质热休克蛋白阳性细胞数表达情况及病理学改变。结果：干预后24，48，72h给药组大鼠脑皮质中热休克蛋白70阳性细胞数[(40．87&;#177;7．97)，(82．25&;#177;8．50)(77．75&;#177;10．35)个／视野]明显多于缺氧缺血组[(17．25&;#177;2．30)，(51．75&;#177;9．00)(44．37&;#177;6．14)个／视野](P&;lt;0．05)。干预后24，48，72h缺氧缺血组大鼠脑皮质中热休克蛋白70阳性细胞数明显多于正常组(P&;lt;0．01)。结论：KATP通道开放剂对缺氧缺血后脑损伤有保护作用，可能与其诱导神经元热休克蛋白70合成的增加，阻滞了细胞凋亡有关。     

电针对脑缺血再灌注大鼠海马Fos蛋白的影响

目的：探讨脑缺血再灌注后电针对大鼠海马Fos蛋白表达的影响：方法：SD大鼠18只，体质量250～280g，雌雄不限。动物随机分为3组．对照组、模型组和治疗组。采用夹闭大鼠双侧颈总动脉造成的脑缺血再灌注损伤模型，电针百会、风池、大钟及足三里穴，频率2～20Hz，强度2．0A，持续30min，4h后观察海马Fos蛋白的表达。结果：电针能明显加强脑缺血再灌注后海马各区Fos蛋白的表达：治疗组与模型组相比海马各区阳性细胞数显著增加，CA1区（236&;#177;26．126&;#177;19.P&;lt;0.05)；CA3(328&;#177;80，212&;#177;55．P&;lt;0.05)：CA4(594&;#177;104．381&;#177;92、P&;lt;0．01)：DG(621&;#177;111，341&;#177;89．P&;lt;0.01)。结论：缺血再灌注可诱导海马Fos蛋白的显著表达，电针可增强Fos蛋白的表达。     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织结构和功能的改变及AMPA受体拮抗剂的干预效应

目的：谷氨酸浓度过度升高和谷氨酸受体过度活化引起的兴奋毒性是缺氧缺血性脑损伤(hypoxic—ischemic brain damage，HIBD)发生发展的重要环节，α-氨基-3-羟基-5-甲基异恶唑-4-丙酸(aloha-amino-3-hvdroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid，AMPA)型谷氨酸受体起重要作用。研究选择性AMPA受体拮抗剂GYKI-52466对新生鼠HIBD的保护作用及机制。方法：实验于2003-04／2004-03在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。7日龄Wistar大鼠27只，随机分为4组：正常对照组；假手术组；缺氧缺血组；GYKI-52466干预组。正常对照组用于观察脑组织髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein，MBP)在正常新生鼠的表达情况；干预组在缺氧缺血后即刻开始予GYKI-52466 10mg／kg腹腔注射，1次／h，共4次；假手术组予等量生理盐水腹腔注射。缺血缺氧后l周取脑，免疫组化、图像分析法测双侧脑半球横截面积之比，检测脑组织。MBP、NF表达及积分吸光度值。结果：缺血缺氧后患侧脑组织横截面积下降。缺血缺氧后1周，缺氧缺血组患侧与对侧脑半球横截面积之比(L：RAREA)为(0．680&;#177;0.043)，较假手术组(0．985&;#177;0．023)明显降低(P&;lt;0．001)；GYKI-52466干预组L：RAREA值为(0．804&;#177;0.031)，明显高于缺氧缺血组(P&;lt;0.001)。MBP第8天无显著表达。生后第11天嗅束、纹状体、胼胝体、内囊、外囊染色阳性，可见少许突起延伸至皮层。生后第14天上诉部位表达更加丰富，前联合出现染色阳性。缺血缺氧后1周，缺氧缺血组患侧与对侧脑组织。MBP积分光密度之比(左侧：右侧，L：R MBP)为0．328，明显低于假手术组的0．986(P&;lt;0．02)，干预组L:R MBP值为0．544，高于缺氧缺血组(P&;lt;0．05)。结论：AMPA受体拮抗剂GYKI-52466可以减轻脑萎缩和MBP表达下降程度，对新生鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用。     

实验性大鼠急性脑缺血细胞凋亡与相关蛋白表达的关系

目的：研究大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡及p53，Bcl-2蛋白家族表达的变化，并探讨它们在细胞凋亡中的作用。方法：实验在华北煤炭医学院形态实验室完成。54只大鼠用随机数字表法随机分成3组：脑缺血组(42只)、假手术组(6只)和正常组(6只)。脑缺血组又分为7组：即缺血2h再灌注1，3，6，12，24，48和72h组(n=6)。采用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型，用TUNEL法检测细胞凋亡的变化，用免疫组化法检测p53，Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果：①缺血2h再灌注1h皮质区可见凋亡细胞[(7．83&;#177;1．72)个／高倍视野]，24～48h达高峰[(43．33&;#177;5．20)个／高倍视野，(48．50&;#177;6．25)个／高倍视野]，72h开始下降[(26．67&;#177;3．56)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见p53蛋白阳性细胞[(14．35&;#177;1．92)个／高倍视野]，24h达高峰[(48．00&;#177;6．42)个／高倍视野]，48h后开始下降[(31．00&;#177;6．60)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见Bcl-2蛋白阳性细胞[(28．62&;#177;6．80)个／高倍视野]，3h达高峰[(56．50&;#177;7．87)个／高倍视野]，6h后开始下降[(45．00&;#177;6．63)个／高倍视野](P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见Bax蛋白阳性细胞[(45．83&;#177;4．07)个／高倍视野]，24h达高峰[(61．00&;#177;8．88)个／高倍视野]，48h开始逐渐下降[(45．83&;#177;6．49)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)。②缺血再灌注后不同时间点细胞凋亡数与p53及Bax蛋白的阳性表达数呈正相关(r=0．843，P&;lt;0．001；r=0．840，P&;lt;0．001)，与Bcl-2蛋白的阳性表达数呈负相关(r=-0．387，P&;lt;0．05)。结论：大鼠脑缺血再灌注后，缺血周边区发生明显的细胞凋亡，同时伴有p53及Bax蛋白表达增加及Bcl-2表达降低，p53及Bax蛋白表达对细胞凋亡起促进作用，而Bcl-2蛋白表达则对细胞凋亡起抑制作用。     

AMPA受体拮抗剂对新生鼠缺氧缺血性脑损伤自由基的影响

目的：探讨α-氨基-3-羟基-5-甲基异恶唑-4-丙酸(alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid，AMPA)受体拮抗剂GYKI-52466对缺氧缺血新生鼠脑组织自由基的影响。方法：选用7日龄Wistar大鼠30只．随机分为3组，假手术组，缺氧缺血组和治疗组。治疗组在缺氧缺血后即刻开始予GYKI-5246610mg／kg腹腔注射，每小时注射1次，共4次。缺氧缺血组予等量生理盐水腹腔注射。于处置后24h检测脑组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase SOD)、谷胱甘肽、丙二醛水平。结果：缺氧缺血组脑组织SOD，GSH水平分别为(1．47&;#177;0．15)mkat、(75．03&;#177;5．22)mg／g，明显低于假手术组(2．51&;#177;0．16)mkat、(88．66&;#177;4．50)mg／g(t=3．237-15．573，P均&;lt;0．001)；MDA含量为(8．03&;#177;0．64)pmol／g，较假手术组(5．12&;#177;0．57)pmol／g显著升高(t=6．253～15．373，P&;lt;0．001)。而治疗组脑组织SOD、谷胱甘肽水平分别为(2．73&;#177;0．21)mkat、(83．47&;#177;6．38)mg／g，明显高于缺氧缺血组(P&;lt;0．001；P&;lt;0．005)；丙二醛含量为(6.07&;#177;0．68)pmol／g，较缺氧缺血组显著下降(P&;lt;0．001)。结论：AMPA拮抗剂可通过拮抗氧自由基发挥对缺氧缺血性脑损伤时脑的保护作用。     

雌二醇对骨形态发生蛋白受体表达的影响

目的：研究骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中，雌二醇对其骨形态发生蛋白受体(BMPR)IA，IB mRNA表达的影响，探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用，试阐明绝经后高转换骨代谢始动环节的可能机制。方法：SD大鼠骨髓基质细胞在生长培养基中传代培养后，用1，25(OH)2D3和地塞米松(DEX)诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化，17β-雌二醇(E2)处理培养细胞，观察E2对骨髓基质细胞分化过程中骨形态发生蛋白受体IA、IB mRNA、碱性磷酸酶(ALP)活性和Ⅰ型胶原合成的影响，β-actin作内对照半定量RT-PCR分析骨形态发生蛋白受体IA，IB mRNA的表达，以α-磷酸奈酚为底物，测定细胞碱性磷酸酶的活性，Van Gieson染色法显示Ⅰ型腔原的含量。结果：E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中BMPR-IA mRNA的表达，且呈剂量依赖性，随E2浓度增加(0～1&;#215;10^3nmol／L)BMPR-IA mRNA从(27．0&;#177;3．4)％降至(17．0&;#177;1．8)％(t=5．2，P&;lt;0．01)和(9．3&;#177;1．6)％(t=9．2，P&;lt;0．01)；BMPR-IB mRNA随E2浓度增加而增加，从(2．0&;#177;0．8)％增至(4．8&;#177;1．5)％(t=3．3，P&;lt;0．05)和(17．2&;#177;2．2)％(t=13，P&;lt;0．01)。Northernblot结果显示在上述E2浓度时BMPR-IA mRNA的表达从4．21&;#177;0．36降至1．24&;#177;0．10(t=18．2，P&;lt;0．01)；BMPR-IB mRNA的表达从1．72&;#177;0．11增至3．73&;#177;0．31(t=12．2，P&;lt;0．01)。ALP活性随E2浓度增加而降低，从(42．6&;#177;2．5)U／g蛋白降至(17．9&;#177;2．0)U／g蛋白(t=15，P&;lt;0．01)，(10．8&;#177;1．5)U／g蛋白（t=22，P&;lt;0．01)和(3．6&;#177;0．7)U原蛋白(t=30，P&;lt;0．01)；细胞I型胶原的含量随E2浓度增加而减少。VanGieson染色由鲜红、淡红到黄色，红色越深，表明胶原越多。绪论：E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中BMPR-IA mRNA的表达，降低ALP的活性和Ⅰ型胶原含量，增加BMPR-IB mRNA的表达)。     

白细胞介素18与新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的关系

目的：观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织白细胞介素18的表达变化及其意义。 方法：实验于2005-06／12在新乡医学院生理教研室和分子生物学实验室完成。选择7日龄SD大鼠112只，随机数字表法分为假手术组16只和缺氧缺血性脑损伤组96只，缺氧缺血性脑损伤组又分为术后3，8，24h，3，6，14d6个时相点，每个时相点16只。参照Rice等方法制备左脑缺氧缺血性脑损伤模型，采用western blot的方法检测白细胞介素18在缺氧缺血性脑损伤后不同的时相点的表达变化，同时对脑组织进行苏木精-伊红染色，光镜下观察其病理变化。 结果：纳入动物112只，均进入结果分析。①假手术组、缺氧缺血性脑损伤组术后3，8h白细胞介素18呈低水平表达，差异无显著性意义（分别为0．206&;#177;0．021，0．190&;#177;0．015，0．219&;#177;0．012，P〉0．05）。与假手术组相比，缺氧缺血性脑损伤组术后24h白细胞介素18蛋白水平开始增加，术后3，6d白细胞介素18蛋白水平继续增强，到术后14d达到高峰，差异均有显著性意义（分别为0．293&;#177;0．075，0．307&;#177;0．052，0．419&;#177;0．038，0．827&;#177;0．068，0．206&;#177;0．021，P〈0．01）。②苏木精-伊红染色结果表明，神经元细胞变性坏死在缺氧缺血性脑损伤后1～6d逐渐加重，14d坏死区胶质细胞增生明显。 结论：新生大鼠缺氧缺血脑损伤后白细胞介素18蛋白的表达增加，这一时期正发生着一系列的病理变化，提示白细胞介素18在缺氧缺血性脑损伤中发挥了促损伤作用。     

HD02对慢性前脑缺血大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：研究HD02在大鼠慢性前脑缺血过程中对神经细胞凋亡的作用。方法：16～18个月SD大鼠64只，雄性，体质量300-350g。利用末端标记法和流式细胞仪，测定HD02干预前后脑缺血大鼠脑组织神经细胞的凋亡情况，并检测Caspase-3免疫阳性细胞、Calcineurin和钙激活中性蛋白酶(Calpain)活性。结果：HD02有减少阳性凋亡细胞出现率[(5．404&;#177;1.38)％与模型对照组(12.72&;#177;3．45)％比较，t=4．84，P&;lt;0．01]及减少Caspase-3免疫阳性细胞表达(HD02组比模型对照组：缺血15d：7．10&;#177;1．90比12．55&;#177;3.30,t=3．86，P&;lt;0．01：缺血30d：4，60&;#177;1．15比9．50&;#177;4．20，t=4．67，P&;lt;0．01)，降低Calcineurin D02组比模型对照组：大脑皮质每克蛋白中含[(38．24&;#177;5．58)比(48．98&;#177;5.04)nmol／s，t=3.64，P&;lt;O．O1]；海马每克蛋白中含[(37．87&;#177;3．38)比(52．58&;#177;4．92)nmol／s，t=3．75，P&;lt;0．O1]和Calpain活性[大脑皮质每毫克蛋白中含(2．96&;#177;O．77)比(4．56&;#177;0．85)A／h，t=3．84，P&;lt;0．05]；海马每毫克蛋白中含[(2．90&;#177;0．28)比(4．91&;#177;0．94)A／h，t=3．97，P&;lt;0，01]的作用。结果：HD02有一定的抗神经细胞凋亡的作用．     

不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1和PPAR-γ2 mRNA表达的影响

背量：绝经后骨质疏松的病理生理机制尚未完全阐明，研究表明骨丢失与雌激素缺乏相关，后者可导致多种细胞因子生成增加，继而引起成骨细胞和破骨细胞生成增多。骨吸收增强。雌二醇能否改变骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1和PPAR-γ2 mRNA的表达进而影响其向成骨细胞分化尚不清楚。目的：研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中，17β-雌二醇对其核结合因子a1(Cbfa1)及过氧化物酶增殖活化受体γ2(PPAR-γ2)mRNA表达的影响，探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。设计：非随机对照研究。地点和对象：所有实验均在成都军区总医院检验科和成都百奥生物技术有限公司完成，分离骨髓基质细胞所需大鼠由成都中医药大学实验动物研究中心提供。干预：1，25(OH)2D3和地塞米松诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化，用不同浓度[(O-1)&;#215;10^-6mol／L]雌二醇对细胞分化过程进行干预。主要观察指标：应用半定量RT-PCR及Northern blot技术，观察不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1及PPAR-γ2 mRNA表达的影响。结果：雌二醇能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1 mRNA的表达，雌二醇浓度为[(O-1)&;#215;10^-6mol／L]时，Cbfa1 mRNA的表达量从(25．0&;#177;3．3)％降至(19．8&;#177;2．2)％(t=2．62，P&;lt;0．05)，(14．5&;#177;1．3)％(t=5．92,P&;lt;0．01)和(6．5&;#177;1．9)％(t=9．72，P&;lt;0．01)；雌二醇能明显促进骨髓基质细胞在分化介质中PPAR-γ2 mRNA的表达，在上述雌二醇浓度时。PPAR-γ2 mRNA的表达从(1．75&;#177;0．5)％增至(9．5&;#177;2．1)％(t=7．18，P&;lt;0．01)和(19．3&;#177;3．0)％(t=11．5，P&;lt;0．01)；Northern blot结果显示随着雌二醇浓度的增加，Cbfa1 mRNA的表达量从4．42&;#177;0．39降至1．88&;#177;0．16(t=12．0，P&;lt;0．01)和1．19&;#177;0．11(t=15．8，P&;lt;0．01)；PPAR-γ2 mRNA的表达量从1．31&;#177;0．12增至2．81&;#177;0．22(t=10．5,P&;lt;0．01)和4．02&;#177;0．36(t=14．2，P&;lt;0．01)。细胞ALP活性明显受雌二醇的抑制，在上述雌二醇浓度时ALP的活性从(42．6&;#177;2．5)降至(3．6&;#177;0．7)U／g蛋白(t=29，P&;lt;0．01)。Ⅰ型胶原含量均随雌二醇浓度增加而降低。结论：雌二醇抑制体外培养的骨髓基质细胞向成骨细胞分化而促进其向脂肪细胞分化。     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤早期肾上腺髓质素mRNA的表达变化

目的：探讨新生鼠缺氧缺血性脑损伤后早期不同时间点肾上腺髓质素基因表达的改变。方法：实验于2004—03／12在天津医科大学毒理实验室和天津市肿瘤医院中心实验室进行。①分组：取80只新生7d Wistar大鼠，随机分为10组，对照组、缺氧缺血0，2，4，6，8，10，12，24，48h组，每组8只。（爹造模：对照组不结扎也不缺氧，其他各组大鼠结扎左颈总动脉2h后置于2500mL密闭玻璃容器中，以2．0L／min的速度输入体积分数为0．08的氧气2h制备大鼠缺氧缺血性脑损伤模型。⑧观察指标：应用反转录-聚合酶链反应方法测定各组大鼠脑皮质肾上腺髓质素mRNA的表达，以肾上腺髓质素mRNA／B—actin比值来表示。结果：经补充后80只大鼠进入结果分析。对照组肾上腺髓质素mRNA少量表达，缺氧缺血4h组明显高于对照组，缺氧缺血后8h表达达到最高峰（0．406&;#177;0．092，0．680&;#177;0．165，1．180&;#177;0．218，P〈0．01），其后下降，缺氧缺血48h组与对照组无差异（0．518&;#177;0．153）。结论：新生大鼠发生缺氧缺血性脑损伤后肾上腺髓质素系统可能参与其后的病理生理过程，且肾上腺髓质素能作为早期判断缺氧缺血性脑损伤的一种诊断标志物。     

蒲金口服液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠一氧化氮合酶的影响

目的：通过蒲金口服液对缺氧缺血性新生大鼠脑组织一氧化氮合酶(nitric oxido synthase，NOS)的影响，探讨缺氧缺血性脑病的发病机制和化痰活瘀治疗的作用机制。方法：采用7日龄SD大鼠结扎右侧颈总动脉和置入低氧环境中诱发的缺氧缺血性脑损伤模型，于造模后即刻、2，4，6，8和10h，将1日药量共分为6次灌胃[1．25mg／(kg&;#183;d)]；假手术组术后给予生理盐水灌胃；缺氧缺血性脑损伤模型术后给予生理盐水灌胃；银杏叶提取物组术后给予银杏叶提取物混悬药液灌胃[40mg／(kg&;#183;d)]，造模后24h处死大鼠，取右侧顶枕区脑组织制成10％脑组织匀浆，用可见光分光光度计通过比色法测定NOS含量。结果：蒲金口服液高剂量组NOS含量为(37．60&;#177;5．47)μkat／L，与缺氧缺血性脑损伤模型组NOS含量为(49．97&;#177;5．53)μkat／L相比较，差异有极显著性意义(P&;lt;0．01)；蒲金口服液高剂量组与银杏叶提取物组NOS含量为(42．92&;#177;2．70)μkat／L相比较，差异有显著性意义(F=10．22，P&;lt;0．05)。结论：蒲金口服液高剂量组能显著降低缺氧缺血性脑损伤大鼠NOS含量，且效果优于银杏叶提取物组。     

神经肽Y2受体促进大鼠学习记忆的机制

目的：观察双侧海马插管注射神经肽Y2受体的反义寡核昔酸对大鼠海马c-fos基因mRNA和蛋白表达的影响，探讨Y2受体在学习记忆中可能的作用机制。方法：双侧海马插管注射Y2受体的反义、错义寡核苷酸或生理盐水，应用RT-PCR和免疫组化方法检测大鼠海马中c-fos基因在跳台法训练后的表达水平变化。结果：①反义组大鼠海马珊基因mRNA表达水c-fos平23．40&;#177;8．87明显低于生理盐水组60．38&;#177;15．52和错义组53．14&;#177;11．71，差异有显著性意义(F=22．54，P&;lt;0．001)。但错义组与生理盐水组之间大鼠海马c-fos基因的mRNA表达水平差异无显著性意义，(P&;gt;0．05)。②反义组大鼠海马c-fos蛋白阳性细胞数在海马CA1，CA3和齿状回分别为16．33&;#177;6．18，27．00&;#177;9．72和109．67&;#177;23．44，均低于生理盐水组和错义组，而错义组与生理盐水组之间。c-fos蛋白表达水平差异无显著性意义。结论：神经肽Y2受体可能是通过调节。如c-fos基因的表达参与大鼠的记忆形成过程。     

促红细胞生成素对大鼠脑组织缺血再灌注海马CA1区神经元的作用

目的：观察促红细胞生成素对缺血再灌注大鼠脑组织海马CA1区神经元数量以及凋亡细胞数量变化、热休克蛋白70表达的影响。方法：实验于2003—03／2004-12在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。选择健康清洁级Wistar大鼠66只，随机分为正常对照组6只、缺血再灌注生理盐水组30只(生理盐水对照组)、缺血再灌注促红细胞生成素组30只(促红细胞生成素治疗组)。线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断局灶性脑缺血模型，缺血2h后再灌注，促红细胞生成素治疗组经腹腔按200U／b注入生理盐水稀释的重组人红细胞生成素(200U／mL)，生理盐水对照组经腹腔注入等量的生理盐水。再灌注后观察时相点为2，6，12，24，48h，应用苏木精-伊红染色观察脑海马CA1区细胞数量情况，应用末端脱氧核苷酸转移酶缺口标记法检测海马CA1区神经元凋亡情况，应用免疫组织化学法测定热休克蛋白70表达情况。结果：66只大鼠全部进入结果分析。①脑海马CA1区细胞的计数：生理盐水对照组再灌注后12，24，48h比正常对照组细胞数明显减少[(268．6&;#177;44．5)个／视野。(240．8&;#177;22．5)个／视野，(201．8&;#177;30．7)个／视野，(337．3&;#177;45．3)个／视野，t=2．845—5．587，P&;lt;0．01]，促红细胞生成素治疗组再灌注后12，24，48h比生理盐水对照组细胞数明显增加[(286．7&;#177;33．8)个／视野，(271．9&;#177;30．4)个／视野，(258．3&;#177;29．5)个／视野，t=3．189—5．589，P&;lt;0．01]。②脑海马CA1区凋亡细胞计数：生理盐水对照组再灌注后2，6，12，24、48h比正常对照组脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞数明显增多[(16．5&;#177;3．5)个／视野，(28．4&;#177;6．5)个／视野，(48．8&;#177;7．6)个／视野，(60．7&;#177;10．2)个／视野，(81．6&;#177;12．3)个／视野，(8．8&;#177;2．1)个／视野，t=2．985—6．324，P&;lt;0．01]，促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6，12，24，48h比生理盐水对照组脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞数明显减少[(12．7&;#177;3．4)个／视野，(21．5&;#177;5．8)个／视野，(32．7&;#177;4．6)个／视野，(42．8&;#177;6．6)个／视野，(51．8&;#177;9．5)个／视野，t=3．457—6．347，P&;lt;0．01]。③脑海马CA1区热休克蛋白70表达水平：生理盐水对照组再灌注后2，6，12，24，48h比正常对照组热休克蛋白70表达明显增多(0．264&;#177;0．027，0．328&;#177;0．053，0．475&;#177;0．067，0．587&;#177;0．095，0．512&;#177;0．063，0．225&;#177;0．024，t=3．254—6．028，P&;lt;0．01)，促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6，12h比生理盐水对照组热休克蛋白70表达明显增多(0．335&;#177;0．033，0．448&;#177;0．055，0．647&;#177;0．078，t=3．262—5．483．P&;lt;0．01)。结论：促红细胞生成素治疗可增加大鼠局灶性脑缺血再灌注组织海马CA1区细胞存活数量，对海马CA1区细胞凋亡具有阻抑作用，使热休克蛋白70表达上调，从而起到了对神经细胞的保护作用。