胶质细胞源性营养因子和美金胺对脑室周围白质软化新生大鼠远期预后的影响

目的：评估胶质细胞源性营养因子（GDNF）和美金胺对脑室周围白质软化（PVL）新生Sprague-Dawley大鼠远期预后的影响。方法：32只5日龄新生大鼠随机分为假手术（Sham）组、PVL组、GDNF组以及美金胺（Mem）组。除Sham组外,其他3组均行右颈总动脉结扎及缺氧处理（PVL造模）。GDNF组和Mem组分别于造模后即刻注射GDNF 100 μg/kg 和Mem 20 mg/kg。每天对各组大鼠称重。于26日龄（造模后21 d）对各组大鼠进行Morris水迷宫测试及Rivlin斜板实验,记录水迷宫测试时的逃逸潜伏期（escape latency,EL）和游泳距离以及斜板测试时在斜板上至少停留5 s的最大倾斜角度。结果：术后PVL组大鼠的平均体重明显低于Sham组和两个用药组（P<0.05）;EI值和游泳距离均较Sham组和两个用药组显著延长（P<0.05或<0.01）;在斜板上至少停留 5 s 的最大倾斜角度明显低于Sham组和两个用药组（P＜0.05）。两个用药组和Sham组在体重、EI和游泳距离以及斜板的最大倾斜角度之间的差异均无统计学意义。结论：GDNF和Mem均可增强PVL大鼠的空间辨识、学习记忆和运动协调能力,促进体重增长,明显改善远期预后。     

胶质细胞源性神经营养因子联合神经干细胞移植治疗脑室周围白质软化新生大鼠的疗效观察

目的 探讨在移植物中加入胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF),能否增强外源性神经干细胞(neural stem cells,NSCs)经脑室移植治疗脑室周围白质软化(periven-tricularleukomalacia,PVL)新生大鼠的移植效果.方法 采用E14胎鼠大脑皮质制备NSCs.2日龄新生大鼠随机分为PVL对照组(PVL组),PVL+NSCs移植组(PVL+NSCs组),PVL+NSCs移植+GDNF组(PVL+NSCs+GNDF组),假手术对照组(Sham组).Sham+NSCs移植组(Sham+NSCs组),以及Sham+NSCs移植+GDNF组(Sham+NSCs+GDNF组).对PVL新生大鼠在建模后72 h进行立体定位仪下经脑室NSCs移植,分别于移植术后7、14、21 d进行免疫荧光、光镜及电镜病理检测,评估在NSCs中加入GDNF对移植效果的可能影响.结果 经脑室植入的外源性NSCs在脑内具有良好的迁移能力,3 d内大部分移行至脑室周围,2周左右在脑室周围主要分化为少突胶质细胞前体,部份分化为神经元及星形胶质细胞.三种分化细胞在加入GDNF移植组显著多于未加GDNF移植组(P均<0.05).移植后21 d光镜下脑病理显示,两个移植组的脑白质病理均获明显改善,尤其加人GDNF移植组的脑白质重度病变发生率较未加GDNF移植组下降了25.5%(P<0.01).移植后21 d的电镜显示,PVL组罕见髓鞘形成,两个移植组的髓鞘形成明显增加,尤其加入GDNF移植组的髓鞘形成明显多于未加GDNF移植组.结论 在外源性NSCs移植物内加入GDNF,可明显增强NSCs经脑室移植治疗PVL新生大鼠的移植疗效.     

经脑室神经干细胞移植治疗脑室周围白质软化新生大鼠电镜下脑病理评估

目的对经脑室植入神经干细胞(NSCs)的脑室周围白质软化(PVL)新生大鼠进行电镜下脑病理和髓鞘形成评估,探讨NSCs移植对治疗早产儿PVL的可行性,以及胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对NSCs治疗PVL的影响。方法采用颈部正中切开双侧颈总动脉结扎法制备PVL模型。采用孕14 d SD大鼠大脑皮质制备NSCs。2日龄新生大鼠随机分为PVL对照组(PVL组),PVL加NSCs移植组(PVL加NSCs组),PVL加NSCs移植及GDNF组(PVL加NSCs加GDNF组),假手术对照组(Sham组),Sham加NSCs移植组(Sham加NSCs组),以及Sham加NSCs移植及GDNF组(Sham加NSCs加GDNF组)。NSCs移植组将NSCs调整为5×107L-1,将2μL移植液以0.5μL/min注入侧脑室内。GDNF干预组以100μg/L GDNF加入NSCs移植液中注入侧脑室。对2日龄PVL新生大鼠在建模后72 h进行经脑室NSCs移植,分别于移植第21天行电镜下脑病理和髓鞘形成评估。结果移植第21天,电镜显示,PVL组可见部分神经元固缩变形,细胞器减少,罕见髓鞘形成。PVL加NSCs组皮质部位神经元形态基本正常,脑白质内髓鞘形成明显增加。PVL加NSCs加GDNF组皮质改善以及髓鞘形成增多情况较PVL加NSCs组则更为明显。假手术各组未见明显变化。结论经脑室NSCs移植对早产儿PVL具有很大的治疗潜力,GDNF可能具有增强NSCs的治疗作用。     

经脑室神经干细胞移植对脑室周围白质软化新生大鼠的脑病理评估

目的：对经脑室植入神经干细胞（NSCs）的脑室周围白质软化（Periventricular leukolamacia，PVL）新生大鼠进行光镜下脑病理评估，探讨NSCs移植对治疗早产儿PVL的可行性。方法：采用E14胎鼠大脑皮层制备NSCs。2日龄新生大鼠随机分为PVL对照组（PVL组），PVL＋DMEM/F12培养基对照组（PVL＋DMEM/F12组），PVL＋神经干细胞（NSCs）移植组（PVL＋NSCs组），假手术对照组（Sham组），Sham＋DMEM／F12培养基对照组（Sham＋DMEM/F12组），Sham＋NSCs移植组（Sham＋NSCs组），每组18～21只。对2日龄PVL新生大鼠在建模后72 h进行经脑室NSCs移植，分别于移植后7，14，21 d进行光镜下脑病理评估。结果：随着移植后时间的增加，脑白质病变呈进一步改善。移植后21 d光镜下病理证实，未移植组脑白质呈轻度和重度病变各占50％，神经元病理评分为1.28±0.86。移植组则有30％白质完全正常，轻度和重度病变各占40％和30％，神经元病理评分为0.32±0.16，两组在脑白质病变程度以及神经元病理评分之间的差异均呈非常显著性意义（χ2＝10.7，P<0.01；F=29.664, P<0.01）。结论：经脑室外源性NSCs移植可明显改善脑白质的病理损伤。经脑室NSCs移植对早产儿PVL具有很大的治疗潜力，为今后成功防治早产儿这一最常见的脑损伤顽症提供了新的可行性途径。     

缺氧缺血致低龄大鼠脑白质损伤和神经功能障碍的实验研究

目的建立未成熟鼠脑白质损伤模型并研究脑白质损伤与少突胶质细胞间关系。方法3日龄SD大鼠随机分为实验组和假手术组。实验组结扎左侧颈总动脉,术后吸6%氮氧混合气4h,假手术组仅分离左侧颈总动脉,分别于术后24h、48h、72h、11d取脑。采用HE染色、免疫荧光双标记观察新生大鼠脑组织病理变化、少突胶质细胞凋亡;>1月龄鼠测试行为、记忆能力的改变。结果缺氧缺血导致脑白质疏松和脑室扩大等病理变化,深部白质少突胶质细胞凋亡数在损伤后24、48、72h较对照组增多(P<0.05),48、72h两组差异有统计学意义,术后11d两组差异无统计学意义(P>0.05)。模型鼠出现生长发育延迟及神经行为功能缺陷。结论采用3日龄大鼠单侧颈总动脉结扎联合低氧模型研究早产儿脑白质损伤是可行的。     

姜黄素对缺血性脑室周围白质软化新生大鼠的脑保护作用

目的 体内评估姜黄素对缺血性脑室周围白质软化(PVL)新生大鼠的脑保护作用.方法 通过双侧颈总动脉结扎制备2日龄缺血型PVL新生大鼠动物模型.将新生大鼠分为假手术组(sham组)、缺氧缺血组(HI组)、缺氧缺血前用药组(HI前用药组)和缺氧缺血后用药组(HI后用药组).在双侧颈总动脉结扎前和后应用姜黄素50 mg/(kg·d),制模后48 h取材,分别观察脑病理组织学变化,检测氧化/抗氧化物质,检测Bcl-2、Bax以及剪切型Caspases-3、9蛋白表达.结果 脑病理显示两个用药组的脑白质病变较HI组明显改善,其中重度白质病变的发生率分别较HI组降低了62.5%和43.8%,另有12.5%的脑白质完全正常;免疫组化显示用药组脑内的O4阳性少突胶质细胞(OL)前体和髓鞘碱性蛋白(MBP)阳性成熟OL的积分光密度(IOD)值均较缺氧缺血组显著增高;姜黄素明显抑制由缺氧缺血引起的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和过氧化物酶(CAT)活性的下降、谷胱甘肽(GSH)含量减少,以及丙二醛(MDA)含量升高;用药组的Bcl-2合成量亦较HI组明显增加,Bax以及Caspases-3、9活化片段的合成量均较HI组明显减少.结论 姜黄素对缺氧缺血引起的脑白质损伤具有良好的保护作用,与其调节脑内的抗氧化系统、以及调节脑内的凋亡相关蛋白的表达有关.     

美金胺治疗对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠长期预后的影响研究

目的：动物实验已证明美金胺对缺氧缺血脑损伤具有神经保护作用,但是美金胺治疗能否改善脑缺氧缺血大鼠的长期预后,目前尚无有关研究资料。该研究应用Morris水迷宫测试探讨缺氧缺血后即刻使用美金胺对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠长期预后的影响,以期对美金胺的有效性做出全面而客观的评价,为今后建立安全有效的新生儿缺氧缺血性脑损伤的治疗方案提供依据。方法：60只7日龄SD大鼠随机分为对照组、缺氧缺血组(HI组)和美金胺20mg/kg治疗组(治疗组)。各组分别于23日龄始连续5d进行Morris水迷宫测试训练,于28日龄和35日龄正式测试,比较各组的逃逸潜伏期(EL)。结果：28日龄各组EL(s)值分别为:35.1±5.3(HI组)、20.6±3.4(治疗组)以及23.1±21.8(对照组),其中HI组与对照组在EL值之间的差异有显著性(P<0.05)。35日龄各组EL值(s)分别为:35.6±32.3(HI组)、16.3±13.2(治疗组)以及19.7±16.7(对照组),其中HI组与对照组EL值之间的差异有显著性(P<0.05),HI组和用药组则差异有非常显著性(P<0.01)。结论：新生大鼠在脑缺氧缺血后即刻使用美金胺可显著增强其空间辨识和学习记忆功能,改善其长期预后。     

缺血启动未成熟大鼠脑白质内源性修复功能的研究

目的：探讨缺血启动未成熟脑白质的内源性修复机制。方法：5日龄 Sprague-Dawley 新生大鼠随机分为假手术（Sham）组和PVL组。分别于建模后7 d及21 d光镜、电镜下评估脑白质病变及髓鞘形成情况,免疫组化检测脑白质O4+少突胶质细胞（OL）前体,观察SVZ区祖细胞的激活、增殖、迁移和分化情况。结果：与Sham组比较,PVL组在建模后7 d和21 d光镜下脑白质病理均呈轻或重度病变;病理评分均明显增高;髓鞘形成数量明显减少,厚度变薄;免疫组化显示O4+OL前体明显减少。建模48 h后,PVL组SVZ 区 BrdU、NG2共阳性祖细胞明显增殖并向脑室周围迁移,至7 d达到高峰;从72 h开始,脑室周围出现呈BrdU、O4共阳性OL前体,至21 d,新生OL前体明显多于同时段Sham组。结论：缺血可启动新生大鼠脑白质的内源性修复机制,诱导SVZ 区胶质源性神经祖细胞激活、增殖、迁移至脑室周围和分化为OL前体。     

缺氧/缺血对幼龄大鼠脑少突胶质细胞的影响

目的探讨缺氧和(或)缺血对幼龄大鼠脑白质损伤及脑损伤后少突胶质细胞(OL)的影响。方法选择3日龄同窝生SD低龄新生大鼠128只,随机分为4组:缺氧缺血组、单纯缺血组、单纯缺氧组、对照组。建立未成熟鼠缺氧缺血脑损伤模型,采用组织切片HE染色、OL抗体O4和细胞凋亡免疫组织化学双标记方法,观察各组脑损伤新生大鼠脑组织的形态学变化。结果缺氧和(或)缺血引起幼龄大鼠脑组织损伤,以白质损伤为主,出现白质疏松和脑室扩大等病理变化,深部脑白质OL凋亡数增多(P<0.05)。缺氧或缺血单因素均可诱导OL数减少,并发生凋亡,缺氧、缺血二因素存在协同作用(P<0.01),但缺血较缺氧对新生大鼠脑OL细胞的促凋亡作用更明显,术后48h和72h效应指数分别为7.34/2.42和7.15/1.89。结论缺氧和(或)缺血均可导致脑白质损伤及OL凋亡增多,缺血较缺氧促OL凋亡更明显,缺氧缺血存在协同作用。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠胶质细胞源性神经营养因子表达及调控机制探讨

目的 探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达水平的动态变化及托吡酯干预对其表达的影响和机制.方法 152只新生7日龄大鼠随机分为假手术组、单纯缺氧缺血组、托吡酯治疗组,后者根据损伤后托吡酯不同时间给药又分成预处理组,后处理组及延迟治疗组,通过建立HIBD动物模型,应用HE染色、免疫组织化学及Western blotting等方法,观察HIBD后不同时期大脑皮质GDNF的动态表达变化及托毗酯不同时间给药对其表达的影响.结果 [1]托吡酯预处理组和后处理组脑组织损伤较单纯缺氧缺血组明显减轻,预处理组作用又好于后处理组.[2]GDNF 的表达于缺氧缺血后12 h开始上升,2 d进一步增加,3 d达高峰,5 d时回落;其中预处理组和后处理组GDNF的表达较单纯缺氧缺血组同一时间点上相比增加显著,差异有统计学意义(X2分别为15.4,8.9,P均<0.05);而延迟处理组GDNF的表达与单纯缺氧缺血组相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 [1]HIBD后GDNF表达变化存在一定的时序性规律,于损伤后第3天达最高水平.[2]托吡酯的治疗时间窗较短,为缺氧缺血后2 h之内,且预防性用药(损伤前给药)对神经元的保护作用强于紧急用药(损伤后给药).[3]托吡酯脑保护作用机制之一通过增加胶质细胞分泌GDNF实现.     

脑源性神经营养因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑内脂质过氧化物、乳酸水平的影响

目的 探讨脑源性神经营养因子（BDNF）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑内脂质过氧化物（MDA）、乳酸（LA）水平的影响。方法 7d龄大鼠一侧结扎颈总动脉联合代氧吸入形成缺氧缺血性脑损伤,伤后立即向脑室注射BDNF 0.5μg,2h、24h后分别观察其对不同脑区MDA、LA水平的影响。结果 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后不同时间皮层、海马MDA、LA水平均显著升高。给予BDNF后,皮层、海马MDA水平的升高在给药2h和（或）24h部分逆转;给药后24h左右侧海马LA水平的升高也被部分逆转。结论 BDNF具有清除氧自由基作用,使脂质过氧化反应减弱;并在一定程度上改善脑组织的能量代谢状况,有利于脑损伤的恢复。     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞和髓鞘的保护作用

目的：以前的研究已经证实高压氧(HBO)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)有保护作用,但其确切机制尚不清楚。该研究从HBO对内源性神经干细胞(NSCs)和髓鞘的影响来探讨HBO保护作用的机制。方法：7日龄SpragueDawley新生大鼠随机分为4组:正常对照组、HIBD组、高压空气治疗组(HBA)和高压氧治疗组(HBO)。HBA组和HBO组于缺氧缺血后1h内分别行HBA和HBO处理,每日1次连续7d。BrdU免疫组化检测在体内源性神经干细胞(NSCs)。Westernblot测定nestin的表达。髓鞘碱性蛋白(MBP)免疫组化检测髓鞘损伤。结果：HIBD后3周,HIBD组缺血侧的室管膜下(SVZ)区和海马齿状回(DG)BrdU阳性细胞数目明显少于正常对照组(均P<0.01),HBO组SVZ区BrdU阳性细胞增多不明显,但DG区BrdU阳性细胞明显增多,与HIBD组比较差异有显著性意义(P<0.05)。HIBD组nestin表达较正常对照组下降,HBO组表达增加,HBA组增加不明显。HIBD后1周,HIBD组MBP免疫组化损伤评分增加,HBO组与HBA组损伤评分均有减轻,HBO组与HIBD组比较差异有显著性(P<0.01),但与HBA组比较差异无显著性(P>0.05)。结论：HBO可减少新生大鼠HIBD后内源性NSCs的死亡和减轻髓鞘损伤,这可能是HBO的保护作用机制之一。     

产前补充牛磺酸调节Rho家族因子活性促进生长受限新生大鼠神经干细胞增殖的研究

目的 探讨产前补充牛磺酸通过调节Rho家族因子活性促进生长受限 （FGR）新生大鼠神经干细胞增殖的可能性,为产前补充牛磺酸促进生长受限患儿脑发育提供实验依据。方法 将24只Sprague-Dawley孕鼠随机分为对照组、FGR组、牛磺酸组 （n=8）,通过全程饥饿法建立FGR模型。采用逆转录-聚合酶链反应法、免疫组化及免疫印迹法检测各组新生鼠脑组织神经干细胞特异性胞内标记物脂肪酸结合蛋白7 （FABP7）、Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶2 （ROCK2）、ras同源基因家族成员A （RhoA）、Ras相关的C3肉毒素底物 （rac）表达水平。结果 FGR组FABP7阳性细胞OD值、FABP7mRNA及蛋白的表达低于对照组,牛磺酸组FABP7阳性细胞OD值、FABP7mRNA及蛋白的表达高于FGR组 （P < 0.05）。FGR组中RhoA、ROCK2mRNA的表达高于对照组,牛磺酸组中RhoA、ROCK2mRNA表达高于对照组但低于FGR组 （P < 0.05）;FGR组中racmRNA的表达低于对照组,牛磺酸组中racmRNA表达高于FGR组及对照组 （P < 0.05）;FGR组中RhoA、ROCK2蛋白表达水平高于对照组,牛磺酸组中RhoA、ROCK2蛋白表达水平低于FGR组 （P < 0.05）。结论 产前补充牛磺酸可促进FGR新生大鼠神经干细胞增殖,其机制可能与调控Rho家族因子的活性有关。     

高压氧治疗对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型

目的：探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型脑组织神经细胞凋亡抑制蛋白Bcl2、促凋亡蛋白Bax的表达和胞浆线粒体细胞色素C(CytC)水平的关系及高压氧(HBO)对其的影响。方法：新生7日龄健康SD大鼠随机分为4组:空白对照组(n=34),假手术组(n=33,分离左颈总动脉后不结扎直接缝合皮肤),HIBD组(n=30,分离并结扎左颈总动脉联合8%低氧暴露2h),HBO组[n=33,HIBD后行HBO治疗(2个绝对大气压,1h/d,连续7d)]。免疫组织化学法检测脑组织神经细胞Bcl2和Bax的表达,Westernblot检测神经细胞胞浆线粒体CytC的水平。结果：HBO组Bcl2阳性细胞较HIBD组明显增多,阳性表达率分别为64%和47%(P<0.05),但较空白对照组(82%)和假手术组(79%)低,(P均<0.05);HBO组Bax免疫阳性细胞表达率(67%)与HIBD组(77%)比较差异无显著性(P>0.05),但明显高于空白对照组(15%)和假手术组(36%),(P<0.01和P<0.05)。空白对照组和假手术组神经细胞胞浆仅有弱阳性的CytC表达,HIBD组胞浆CytC的表达最强,HBO组的表达较HIBD组减轻。结论：HBO治疗可能通过诱导脑组织神经细胞Bcl2蛋白的表达,减轻线粒体CytC的释放,从而减轻缺氧缺血性脑损伤后神经细胞的凋亡。