反义寡核苷酸抑制TGFβ1诱导人肾小管上皮细胞表达CTGF

目的研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,AS)转染人肾小管上皮细胞(human renal tubular epithelial cells,HKC)后对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导CTGF表达的抑制作用.方法采用脂质体转染试剂DOTAP,包裹针对CTGF的反义寡核苷酸转染HKC.用MTT比色法检测DOTAP对细胞增殖的影响,用荧光显微镜和荧光分光光度计检测5′异硫氰酸荧光素(5′FITC)标记的AS在细胞内的分布,用RT-PCR和免疫组化分别检测TGFβ1和AS对CTGFmRNA和蛋白表达的影响.结果MTT比色:不同浓度(0、3.3、6.7、10μl/ml)的DOTAP对细胞增殖的影响无明显差异(P＞0.05).荧光检测:DOTAP能高效地介导AS转染入HKC.RT-PCR和免疫组化:浓度为40μg/ml的TGFβ1能诱导HKC表达CTGFmRNA和蛋白,同时加入DOTAP-AS复合物后(DOTAP浓度为6.7μl/ml,AS浓度为1μg/ml),CTGFmRNA和蛋白的表达明显下降(P＜0.01).结论DOTAP能高效低毒地把CTGF反义寡核苷酸转染入HKC,进而能有效地封闭TGFβ1所诱导的CTGF表达.     

转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子

目的　研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对人肾小管上皮细胞 (humanproximaltubularep ithelialcells ,HTECs)表达结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor ,CTGF)的影响。方法　体外培养的HTEC被根据随机数字表分为 3组 :对照组 (C组 ) :无血清培养基 (freeserummedium ,FSM)培养 ;TGFβ1a和TGFβ1b组 (Ta 组和Tb 组 ) :分别用含不同浓度TGFβ1(Ta 组 :2 0ng/ml,Tb 组 :40ng/ml)的FSM培养 ,96h后 ,分别用RT PCR和免疫组化方法检测HTEC表达CT GFmRNA和蛋白。结果　①C组 :CTGFmRNA和蛋白表达为阴性 ;②Tb 组和Ta 组 :CTGFmRNA和蛋白表达皆呈阳性。Tb 组和Ta 组相比 ,CTGF的mRNA和蛋白表达量皆显著增加 (P <0 .0 1)。结论　TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HTEC合成CTGF。     

CTGF反义寡核苷酸对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的研究结缔组织生长因子（CTGF）反义寡核苷酸（ASODN）对人肾小管上皮细胞（HKC）转分化的影响。方法用巨噬细胞趋化因子-1（MCP-1）和马兜铃酸Ⅰ（AAⅠ）联合诱导HKC转分化模型。实验设空白对照组、模型对照组、PEI组、CTGFASODN10ng/mL组和CTGF ASODN100ng/mL组,分别采用WST-8法、流式细胞术、RT-PCR法、细胞免疫组织化学法检测不同浓度的CTGF ASODN对HKC转分化模型细胞增殖和细胞周期的影响,以及α-SMA mRNA表达和α-SMA、TGF-β1、Fibronectin（FN）蛋白表达的变化。结果 100ng/mL的CTGF ASODN对MCP-1和AAⅠ联合诱导HKC转分化细胞具有促进细胞增殖的作用,并可减少实验模型导致的细胞S期阻滞,降低α-SMA mRNA表达,减少α-SMA、TGF-β1和FN蛋白的表达。结论 CTGFASODN能够抑制MCP-1和AAⅠ导致的人HKC转分化。     

CTGF反义寡核苷酸对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ASODN)对人肾小管上皮细胞(HKC)转分化的影响.方法 用巨噬细胞趋化因子-1(MCP-1)和马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)联合诱导HKC转分化模型.实验设空白对照组、模型对照组、PEI组、CTGF ASODN 10 ng/mL组和CTGF ASODN 100 ng/mL组,分别采用WST-8法、流式细胞术、RT-PCR法、细胞免疫组织化学法检测不同浓度的CTGF ASODN对HKC转分化模型细胞增殖和细胞周期的影响,以及α-SMA mRNA表达和α-SMA、TGF-β1、Fibronectin(FN)蛋白表达的变化.结果 100 ng/mL的CTGF ASODN对MCP-1和AAⅠ联合诱导HKC转分化细胞具有促进细胞增殖的作用,并可减少实验模型导致的细胞S期阻滞,降低α-SMA mRNA表达,减少α-SMA、TGF-β1和FN蛋白的表达.结论 CTGF ASODN能够抑制MCP-1和AAⅠ导致的人HKC转分化.     

内源性结缔组织生长因子介导转化生长因子β1对肾小管上皮细胞的转分化效应

目的：探讨内源性结缔组织生长因子（CTGF）在人肾小管上皮细胞（HK2）转分化过程中的作用。方法：将HK2细胞分为4组：对照组;转化生长因子β1（TGF-β1）5ng／ml刺激组;TGF-β1 5ng／ml刺激4-CTGF反义0DN 3 mmol／L干预组;TGF-β1 5ng／ml刺激＋CTGF正义ODN3mmol/L对照组。用倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化,用RT-PCR检测各组细胞中CTGF、上皮细胞钙粘蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤连蛋白（FN）mRNA表达变化。结果：TGF-β1刺激使HK2细胞形态由椭圆形转为梭形;下调E-cadherinmRNA表达。上调CTGF、α-SMA和FNmRNA表达．且CTGFmRNA表达变化在时间上早于E-cadherin、α-SMA和FNmRNA表达变化;CTGF反义ODN可对抗TGF-β1引起的细胞形态学改变和E-cadherin、CTGF、α-SMA、FiNmRNA表达变化效应。结论：内源性CTGF介导了TGF-β1对HK2细胞的转分化效应。     

酸性成纤维细胞生长因子诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用及机制

目的　探讨酸性成纤维细胞生长因子 (AcidfibroblastgrowthfactoraFGF)在大鼠肾小管上皮细胞株 (NRK)转分化中的作用 ,为肾小管 间质纤维化的防治提供理论依据。方法　在NRK细胞的培养基内加入不同剂量的重组人aFGF ,并在Ⅰ型胶原处理过及未处理的玻璃表面 ,无血清培养 6d。使用透射电镜、免疫细胞化学对肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞形态及表型的转变进行评估。结果　不同剂量的aFGF(1、1 0、50ng/ml)处理后的NRK细胞形态和表型发生不同程度的改变 :体积增大、失去尖端 基底极性和微绒毛、细胞延长、具有浸润特征的前后向双末端极性、出现肌动蛋白中间丝结构。免疫组化和Westernblot分析显示加入aFGF后角蛋白表达减少 ,有肌成纤维细胞的特异性标志物α 平滑肌动蛋白 (α SMA)的表达。α SMA阳性细胞的比例与aFGF的浓度呈正相关 ,亲和抗aFGF抗体可消除这种转分化现象。加入aFGF后 ,在玻璃表面α SMA阳性细胞数 (34 4± 0 0 90 ) %较Ⅰ型胶原处理培养表面α SMA阳性细胞数 (74 6± 0 1 0 1 ) %有显著差异 (P <0 0 5)。结论　aFGF在促进肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞转分化的过程中有重要的意义 ,该过程亦与细胞的生长环境有关 ,提示肾小管上皮细胞的表型转化是肾间质纤维化的重要原因     

结缔组织生长因子对人肾小管上皮细胞株生物学特性的影响

目的:观察重组人结缔组织生长因子(rhCTGF)对人肾小管上皮细胞株(HK-2)的作用.方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞分为三组:对照组、rhCTGF 5.0 ng/ml, rhCTGF 10.0 ng/ml.应用MTT法检测CTGF对HK-2增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态学的变化;间接酶标免疫组织化学方法检测E-钙粘蛋白(E-Cadherin),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;流式细胞术检测α-SMA阳性的HK-2细胞百分数.结果:在一定的浓度范围内,CTGF能促进HK-2细胞的增殖, CTGF促使HK-2细胞由椭圆形转变为梭形状,可下调E-Cadherin,上调α-SMA, 流式细胞测得三组细胞阳性百分率依次为1.54%,10.24%,25.8%(P＜0.05).结论:CTGF在体外促进HK-2转分化的同时促进HK-2的生长.     

CTGF反义寡核苷酸对AngⅡ诱导的人近曲肾小管上皮细胞转分化的影响

目的：探讨结缔组织生长因子（CTGF）反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的肾小管细胞转分化的可能影响.方法：采用体外培养的人近曲肾小管上皮细胞株（HK2）,分别观察CTGF反义寡核苷酸和AngⅡ干预细胞对细胞CTGF mRNA和蛋白质的表达、细胞内超微结构及细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响.结果：AngⅡ干预HK2细胞48 h后,细胞CTGF mRNA和蛋白的表达显著增高（P＜0.01）;AngⅡ干预96 h后,细胞超微结构显示出间质细胞样结构;这些作用都可被CTGF反义寡核苷酸显著抑制.AngⅡ可以呈时间依赖性地刺激HK2细胞表达α-SMA,这些作用可以被CTGF反义寡核苷酸显著抑制（P＜0.01）.对照组错义寡核苷酸无上述作用.结论：CTGF反义寡核苷酸对AngⅡ诱导HK2细胞转分化具有显著的抑制作用,提示CTGF可能介导了AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞转分化.     

高表达PTEN抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化

目的 研究PTEN高表达对TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化的抑制及其信号传导机制.方法 脂质体介导含人全长PTEN基因或空载体转染人肾小管上皮细胞(HKC细胞)48 h,倒置荧光显微镜检测PTEN转染组及空载体转染组绿色荧光蛋白表达;Western blot检测正常组、PTEN转染组、空载体转染组中PTEN蛋白表达;RT-PCR检测3组中PTEN mRNA表达.然后将实验分为正常组、TGF-β1刺激组(给予TGF-β1刺激)、PTEN+TGF-β1组(PTEN基因转染后给予TGF-β1刺激)、空载体+TGF-β1组(空载体转染后给予TGF-β1刺激),Western blot检测各组细胞E-cad-herin、α-SMA、Akt、p-Akt表达水平.结果 FTEN基因及空载体转染HKC细胞48 h后可见明显绿色荧光蛋白表达;PTEN转染组PTEN蛋白及PTEN mRNA表达较正常组及空载体转染组细胞均显著上升(均P<0.05).在正常组、TGF-β1刺激组、PTEN+TGF-β1组、空载体+TGF-β1组中,TGF-β1刺激组及空载体+TGF-β1组较正常组E-cadherin表达明显下降(均P<0.05),而a-SMA及p-Akt表达显著上升(均P<0.05);PTEN+TGF-β1组较TGF-β1刺激组及空载体+TGF-β1组a-SMA及p-Akt表达明显下降(均P<0.05).而E-cadherin表达上升(均P<0.05);各组细胞Akt表达水平差异不明显(P>0.05).结论 PTEN通过阻止PI3K/Akt通路活化而抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化.     

人胸腺素β4基因对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 研究胸腺素β4基因对人肾小管上皮细胞株(HKC)上皮-肌成纤维细胞转分化(EMT)的影响.方法 采用 RT-PCR和 T-A克隆技术,从SW480细胞中扩增胸腺素β4基因全长 cDNA,克隆到T载体中,再亚克隆到 pIRES2-EGFP质粒载体,得到表达胸腺素β4基因的真核表达载体和阴性对照载体,转染HKC,得到胸腺素β4表达增强的HKC-Tβ4和胸腺素β4表达未受影响的HKC-EGFP.分别采用RT-PCR和Western blot检测HKC、HKC-Tβ4和HKC-EGFP 3组细胞胸腺素β4、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏素表达.结果 与HKC组及HKC-EGFP组相比,HKC-Tβ4组胸腺素β4和α-SMA表达显著增高,E-钙黏素表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 胸腺素β4基因转染能诱导HKC发生EMT,提示胸腺素β4是诱导EMT的重要分子,可能成为肾纤维化治疗的靶目标.     

针对结缔组织生长因子的siRNA对高糖诱导人肾小管上皮细胞肥大的影响

目的 观测人肾小管上皮细胞转染针对结缔组织生长因子(CTGF)的siRNA后对高糖诱导细胞肥大的影响.方法 细胞分6组培养:正常对照组(培养基含D-葡萄糖1 g/L),等渗对照组(培养基含D-葡萄糖1 g,L、甘露醇3.5 g/L),高糖组(培养基含D-葡萄糖4.5 g/L),高糖+空白对照组(细胞转染空质粒后培养于高糖培养基中),高糖+阴性对照组(细胞转染含无关序列的质粒后培养于高糖培养基中),高糖+干扰组(细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒后培养于高糖培养基中).收集各组培养至24、48、96 h的细胞,以实时PCR检测CTGF mRNA水平;Western blotting检测CTGF蛋白水平;MTT法测定细胞增殖活力;流式细胞仪测定细胞周期分布;考马氏亮蓝法测定细胞总蛋白含量.结果 高糖刺激可上调HK-2细胞的CTGFmRNA及蛋白水平,使停留于G_1期的细胞比例升高,增殖活力受抑制,细胞肥大指标胞内总蛋白含量增加:而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,细胞的CTGF蛋白表达随时间延长进行性降低.细胞增殖活力增强,更多的细胞由G_1期进入S期,细胞内总蛋白含量降低.结论 证实了CTGF是高糖诱导HK-2细胞肥大的重要介质.针对CTGF的siRNA能明显改善高糖诱导的肾小管上皮细胞肥大,为进一步寻找DN防治的靶点提供了新的实验依据.

Abstract：

Objective To observe the effect of transfection with small interfering RNA (siRNA) targeting connective tissue growth factor (CTGF) on human tubular epithelial hypertrophy induced by high glucose. Methods HK-2 cells were cultured in DMEM/F12 medium containing 1 g/L glucose (normal control group), 4.5 g/L glucose (high glucose group), or 1 g/L glucose + 3.5 g/L mannitol (iso-osmolar control group). The cells were transfected with pGenesil-1, pGenesil/neg, or pGenesil/siRNA-CTGF and then cultured in DMEM/F12 medium containing 4.5 g/L glucose as the high glucose + blank control group, high glucose +negative control group and high glucose+ interference group, respectively. After cell culture for 24, 48 and 96 h, the cells were collected to detect the mRNA and protein levels of CTGF by real-time PCR and Western blotting, respectively. The proliferative activities of the cells were evaluated with MTT assay, and the total cellular protein contents were determined with Bradford method. Flow cytometry was employed to analyzed the cell cycle changes. Results High-glucose significantly up-regulated the CTGF mRNA and protein levels in HK-2 cells. The cell proliferation was inhibited after high-glucose exposure with increased cell percentage in G, phase and total cellular protein content suggesting cellular hypertrophy. Transfection with siRNA targeting CTGF significantly inhibited high glucose-induced up-regulation of CTGF mRNA and protein and promoted the cell proliferation, resulting also increased cells in S phase and lowered total cellular protein contents. Conclusion CTGF is an important mediator of high glucose-induced tubular epithelial hypertrophy, and transfection with siRNA targeting CTGF can alleviate the hypertrophy, suggesting the potential value of CTGF-targeted treatment in the management of diabetic nephropathy.     

CTGF反义寡核苷酸对肾小管上皮细胞胶原Ⅲ分泌的影响

目的 观察结缔组织生长因子（CTGF）反义寡核苷酸对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞NRK52E胶原Ⅲ分泌的影响。方法 采用脂质体介导的方法将CTGF反义寡核苷酸导入细胞，转化生长因子β1（TGF-β1）刺激48h后，用RT-PCR、ELISA法观察CTGF和胶原Ⅲ的表达。结果 TGF-β1能够诱导NRK52E细胞表达CTGF并进而促进胶原Ⅲ的分泌，CTGF反义寡核苷酸导入细胞后可以大部分取消TGF-β1，的作用，而对照组的寡核苷酸没有此作用。结论 CTGF反义寡核苷酸能够特异地抑制CTGF的表达，进而阻止细胞外基质的生成，这可能是治疗肾间质纤维化的一条新途径。     

针对CTGF的shRNA抑制TGFβ1诱导人肾小管上皮细胞合成胶原

目的研究针对结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞株(human renal tubular epithelial cell,HKC)合成胶原的抑制作用.方法设计和构建带有U6启动子的能产生针对CTGF的shRNA的RNA干扰表达质粒,转染至受TGF β1刺激的HKC,以RT-pCR和Western blot检测HKC转染前后CTGF表达,以3H脯氨酸掺入法检测总胶原合成量.结果和仅受TGFβ1刺激组相比,转染了RNA干扰表达质粒的受TGFβ1刺激的HKC CTGFmRNA和蛋白表达明显减弱,总胶原合成量下降(P＜0.01).结论针对CTGF的短发夹RNA能明显抑制TGF β1诱导HKC合成胶原.     

结缔组织生长因子反义寡核苷酸体外对人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响?

目的:观察结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ASODN)体外对人增生性瘢痕组织中成纤维细胞凋亡的影响并探讨其可能的作用机制.方法:体外培养的人增生性瘢痕组织中成纤维细胞, 分为CTGF-ASODN 脂质体治疗组(ASODN treatment, AT)、空白脂质体对照组(liposome control,LC) 和空白对照组(control,C),荧光显微镜观察各组CTGF-ASODN时相性分布,流式细胞术检测各组凋亡率随时相的变化,观察Fas受体表达;RT-PCR检测各组CTGF、Fas、 bcl-2 mRNA的表达.结果:AT组细胞转染24 h 后胞质内可见有大量黄绿色荧光,呈离散型、点状分布,而LC 和C 组成纤维细胞内未见荧光.转染24 h后LC组和C组成纤维细胞的凋亡率及Fas受体阳性表达率无显著差异;而AT组凋亡率及Fas受体阳性表达率明显增加,明显高于LC组和C组(P《0.01).RT-PCR结果表明,转染组CTGF mRNA相对表达量明显低于空白对照组(P《0.05),Fas mRNA表达明显高于空白对照组(P《0.01), 转染组bcl-2 mRNA与空白对照组无显著差异.结论:CTGF反义寡核苷酸体外能促进人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡,可能与其上调Fas mRNA及其蛋白表达有关.     

反义α肌动蛋白基因腺病毒载体对TGF-β1刺激的肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 观察大鼠血管平滑肌α肌动蛋白基因反义腺病毒载体(pAdanti-α-SMA)转染对转化生长因子β1(TGF-β1)所诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(TEMT)的影响.方法 pAdanti-α-SMA载体构建并鉴定,转染肾小管上皮细胞(TEC)后免疫荧光染色和Western blot检测α-SMA水平.实验分为5组,A组:正常肾小管上皮细胞(TEC,对照组);B组:TEC 2 μl pAdanti-α-SMA;C组:TEC 1 μg天然TGF-β1;D组:TEC 1 μg天然TGF-β1 2 μl pAdanti-α-SMA;E组:TEC 1 μg天然TGF-β1 10 μl pAdanti-α-SMA.结果 成功构建pAdanti-α-SMA,pAdanti-α-SMA转染TEC后抑制了TGF-β1诱导的TEC 的α-SMA水平并呈剂量依赖性.结论 pAdanti-α-SMA可有效地抑制肾小管上皮细胞的肌成纤维细胞转分化.     

人肾小管上皮细胞在转化生长因子β1诱导下桩蛋白表达研究

目的 探讨不同浓度重组人转化生长因子β1（human recombinant transforming growth factor β1,rhTGFβ1）对人近端肾小管上皮细胞株（human kidney proximal tubular epithelial cell line,HKC）表达桩蛋白（paxillin,Pax）的影响。方法 将体外培养的HKC随机分为3组：对照组（C组）：无血清培养基（free serum mudium,FSM）培养;TGFβ1培养组（T1、T2组）：分别用含不同浓度的TGFβ1（T1组：5ng／ml,T2组：10ng／ml）的FSM培养,48h后分别用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）、免疫组化方法和Western blot检测HKC的Pax mRNA及蛋白表达情况。结果 ①C组：Paxillin mRNA及蛋白有基础的表达;②T1和T2组：Pax mRNA及蛋白表达均明显增加,T2组和T1组相比,Pax的mRNA及蛋白表达量增加更显著（P〈0．01）。结论 TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HKC合成Pax。     

血管紧张素Ⅱ对的人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响

目的 :研究血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子mR NA表达的影响。方法 :采用体外培养人近端肾小管上皮细胞株 (HPTC) ,分别观察不同浓度(0、10 -9、10 -7、10 -5mol·L-1)AngⅡ处理 48h ,或用AngⅡ (浓度为 10 -7mol·L-1)处理不同时间 (0、12、2 4、48、72h)对HPTC结缔组织生长因子 (CTGF)mRNA表达的影响 ,CTGFmRNA表达采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法测定。结果 :AngⅡ (10 -7mol·L-1)作用于HPTC12h后 ,细胞CTGFmRNA的表达开始增加 ,72h达最高水平 ,与对照组相比 ,AngⅡ作用 48h后显著增加〔(0 0 97± 0 0 15 )vs(0 63 2± 0 0 41) ,P <0 0 1〕 ;无AngⅡ的DMEM培养HPTC ,72h内细胞CTGFmRNA水平未见明显改变 (P >0 0 5 )。不同浓度 (10 -9、10 -7、10 -5mol·L-1)AngⅡ作用于HPTC 48h ,CTGFmRNA的表达均有增加 ,分别是对照组 (0mol·L-1)的 1 5、5 5和 7 4倍 (P <0 0 1) ,对扩增产物进行测序证实与基因库中人CTGF的cDNA序列一致。结论 :AngⅡ呈时间和剂量依赖性地刺激HPTCCTGFmRNA表达 ,此结果提示AngⅡ可能通过促进CTGF表达而参与小管间质纤维化的发生     

人参皂苷Rg1抑制TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化实验研究

目的 :通过观察人参皂苷Rg1对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)细胞转分化的影响,探讨人参皂苷Rg1在肾小管纤维化形成方面的作用。方法 :将NRK52E细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养;实验分为空白对照组、TGF-β1诱导组(5 ng/mL TGF-β1),人参皂苷Rg1与TGF-β1共同干预组(5 ng/mL TGF-β1的基础上分别加入10、20、40μg/mL的人参皂苷Rg1),培养72 h。在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并通过CCK8法检测人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响。结果 :TGF-β1能显著诱导大鼠肾小管上皮细胞纤维样改变,与对照组相比有明显差异(P<0.05),人参皂苷Rg1能抑制TGF-β1的作用,且其作用随浓度增加而增加。结论 :人参皂苷Rg1能抑制TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化的作用,可以延缓或抑制肾间质纤维的过程。     

结缔组织生长因子介导高糖诱导肾小管 上皮细胞肥大的机制

 【目的】 研究高糖诱导肾小管上皮细胞肥大的作用途径及可能机制&#65377;【方法】 HK-2细胞分正常对照组(培养基含葡萄糖1 g/L),等渗对照组(葡萄糖1 g/L + 甘露醇3.5 g/L)和高糖组(葡萄糖4.5 g/L)培养&#65377;收集各组培养至24 h,48 h,96 h的细胞,检测结缔组织生长因子(CTGF)&#65380;p27kip的mRNA水平&#65380;CTGF&#65380;p27kip的蛋白水平&#65380;细胞增殖活力&#65380;细胞周期分布及细胞总蛋白含量&#65377;另外检测各组培养30 min&#65380;1 h&#65380;24 h&#65380;48 h时的磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)水平&#65377;每个检测指标设3个重复样本&#65377; 【结果】 高糖刺激可引起HK-2细胞的CTGF&#65380;p27kip的mRNA及蛋白表达水平显著升高,ERK1/2磷酸化激活,阻滞于G1期的细胞显著增多,细胞增殖活力受抑制,细胞肥大主要指标胞内蛋白总含量进行性增高&#65377; 【结论】 证实了高糖可通过上调CTGF激活ERK1/2信号转导,从转录水平上调p27kip,从而使增殖细胞阻滞于G1期诱导细胞肥大&#65377;