蜂毒素的SDS-PAGE质控方法研究

目的　建立以 SDS- PAGE进行蜂毒素质量控制的方法。方法　将通过凝胶色谱法从蜜蜂毒中分离纯化所得到的蜂毒素 ,以 SDS- PAGE法测定其相对分子质量 ,并通过凝胶成像扫描测定蜂毒素纯度。结果　蜂毒素样品电泳后在凝胶块上显示为均一条带 ,相对分子质量约为 2 80 0 ,含量为 (90 .5 9± 0 .85 ) % ,与 HPL C测定结果平行。结论　 SDS- PAGE法作为蜂毒素的质控方法 ,结果准确、可靠、简便     

广西产圆斑蝰蛇毒神经生长因子的分离纯化及鉴定

目的 从蝰蛇蛇毒中分离纯化神经生长因子(NGF)。方法 粗毒采用CM52阳离子交换柱层析，DEAE Sephadex A-50阴离子交换柱层析及Sephadex G-75凝胶过滤进行分离纯化。洗脱峰利用PCI2细胞测定活性，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦圆盘电泳(EFG)等方法，进行理化性质的鉴定。结果 从粗毒6．0g中得到电泳纯的神经生长因子3．64mg，分子量为36kD，由两个亚基通过二硫键交联组成二体结构。等电点pI为6．7，在0．5～5．0μg／mL时，对PCI2细胞有良好的促进分化作用。结论 本法可从广西产圆斑蝰蛇毒粗毒中得到电泳纯的神经生长因子。     

福建产舟山眼镜蛇毒细胞毒素的快速分离纯化及鉴定

目的 从舟山眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素(CTX)，并鉴定其理化性质。方法 采用SP—Sephadex C-25阳离子交换色谱及Sephasil Peptide C18反相高效液相色谱法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化CTX，SDS—PAGE(Tris—Tricine系统)鉴定纯度，Edman降解法测定N端氨基酸序列。结果 粗毒经阳离子交换色谱，得到14个蛋白峰，其中第X～XⅢ峰具CTX活性；再分别经反相色谱纯化，得到4个CTX．总得率为32.48％；SDS—PAGE显示为均一蛋白，分子量依次为：7．28，7．33，7．24和7．38kD；测定它们N端20个氨基酸序列。结论 采用阳离子交换和反相高效液相色谱可快速、高效地从眼镜蛇毒中获得4个CTX纯品。     

聚丙烯酰胺凝胶中分离纯化DNA片段方法的改进

聚丙烯酰胺凝胶中分离纯化ＤＮＡ片段方法的改进李树义金春元孙开来（基础医学院分子遗传学教研室，沈阳１１０００１）关键词分离；纯化；ＤＮＡ片段；聚丙烯酰胺凝胶在ＰＣＲ扩增目的基因片段时，经常出现引物二聚体，非特异扩增带以及扩增产物产量过低等问题。改变ＰＣ...     

根据SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳结果测定蛋白质分子量软件的研制及应用

0引言通常根据十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）结果推算未知蛋白质分于量步骤繁琐，用肉眼与标准品（Marker）比较来估计也不准确．我们编写的计算机软件-ProCac，可自动列出回归直线方程，计算未知蛋白质的分子量。1设计思想在SDS-PAGE中，当蛋日质的分子量在11．7－165．0kD之间时，蛋白质-SDS复合物的电泳迁移率与蛋白质分子量以10为底的对数符合直线方程：lgMW=a+b·mR（MW为蛋白质的分子量，mR为蛋白质-SDS复合物电泳相对迁移率，a和b为常数）首先，分别测出Marker各条带、未知蛋白质和它们各自的指示剂…     

无电极缓冲液的水平薄层SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳

无电极缓冲液的水平薄层ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳邵军，陈镔复，刘智广（中心实验室）关键词蛋白质，ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳，缓冲液，凝胶条中图法分类号Ｑ５１电泳已成为当代测定生物大分子特性和纯度的主要工具之一。它的高分辨率既能用于分析又能用于制备，设...     

积雪草中积雪草酸的分离、纯化及其含量测定

目的分离纯化积雪草中积雪草酸,并建立高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)测定积雪草酸的含量。方法超声提取积雪草中积雪草酸,将粗提物用石油醚-丙酮体系在硅胶柱上梯度洗脱,HPLC法测定积雪草酸的含量。色谱条件:采用Waters Symmetry C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-10 mmol.L-1乙酸铵溶液(38∶62,V/V),检测波长为210 nm,流速为1.0 mL.min-1,柱温25℃,进样体积为20μL。结果积雪草酸在浓度10～200 mg.L-1线性关系良好(R2=0.999 5),其日内、日间RSD均小于5.4%,回收率为100.5%。积雪草中积雪草酸含量为0.99 g.kg-1。经提取、分离、纯化得到积雪草酸白色粉末,纯度为79.0%。结论本实验所用分析方法简便、准确、重复性好,可用于积雪草酸的含量测定;所用提取分离及纯化积雪草酸的方法可使中药中积雪草酸得到有效富集。     

免疫亲和柱-HPLC柱后光化学衍生法测定中药饮片中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量

目的：建立中药饮片中黄曲霉毒素（ AF）B1、B2、G1、G2含量测定的方法。方法：收集中药饮片87批,用免疫亲和柱进行AF的分离处理,采用高液相色谱（ HPLC）柱后光化学衍生化法测定中药饮片中AFB1、AFB2、AFG1、AFG2含量并进行方法学分析。结果：被测定的AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的检出限分别为0.7、0.3、0.6和0.3μg/kg,在选定的范围内线性关系良好（ r≥0.999）,精密度试验、重复性试验、准确度试验及标准样品验证试验结果均良好,87批中药饮片均未检出黄曲霉毒素。结论：免疫亲和柱-HPLC柱后光化学衍生化法操作简便,专属性强、灵敏度高,检测中药饮片中AFB1、AFB2、AFG1及AFG2的含量准确可靠。     

大青叶中靛玉红的超临界萃取工艺及含量测定

目的: 建立用HPLC测定大青叶的超临界萃取物中靛玉红含量的方法,对萃取工艺进行优选. 方法: 采用超临界萃取法进行L9(34)正交实验. 以靛玉红含量考察萃取温度、萃取压力、分离温度及分离压力四个因素的影响. 采用HPLC法测定萃取物中靛玉红含量. 结果: 最佳萃取工艺为萃取温度50℃,萃取压力40 MPa,分离温度40℃及分离压力8 MPa. 靛玉红平均回收率为102.8%,RSD为1.48%. 结论: 萃取温度、萃取压力及分离压力对大青叶中靛玉红的萃取都有显著影响. HPLC法操作简便,结果准确,可作为超临界萃取大青叶中靛玉红的质量控制方法.     

南蛇藤中扁蒴藤素提取分离工艺研究

目的对南蛇藤中扁蒴藤素提取纯化工艺进行研究。方法南蛇藤根粉经丙酮冷浸提取后,采用聚酰胺柱层析及硅胶柱层析进行分离纯化;以HPLC法测定产品中扁蒴藤素的含量,并以其为指标对分离纯化的主要工艺参数进行优化。结果将待分离的南蛇藤丙酮浸膏和聚酰胺（60～100目）按物料比0．02（质量比）装入层析柱中,常压下用体积分数75％的甲醇洗脱至洗脱液近无色,收集流分,浓缩后得到粗品,经硅胶柱层析进一步纯化,再经重结晶后纯度提高到98．0％以上。结论该工艺简单、成本较低,适于工业化。     

不同产地、不同海拔红景天药材中红景天苷的含量测定

[目的]探讨不同产地、不同海拔红景天药材中的红景天苷含量.[方法]采用Kromasil C18柱(150.0mm×4.6mm,5μm);流动相以甲醇-水(15∶85),检测波长为275 nm,流动速度为1 mL/min,柱温为30℃,进样量为10μL.[结果]红景天苷在24.8～124.0 mg/L范围内线性关系良好,回归方程为Y=1.265×104 X+6.847×103,R=0.999 7,平均回收率为98.86%,RSD为1.38%(n=5).不同产地、不同海拔红景天药材中的红景天苷含量间有差异.[结论]红景天苷含量与产地、海拔及野生或栽培有一定的关系.     

五味子果实、藤茎及果柄的成分分析

[目的]对五味子果实、藤茎及果柄中的五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素及五味子乙素进行鉴别及含量测定.[方法]采用TLC法及RPHPLC法,在C18柱上,以甲醇水(73∶27)为流动相分别测定各成分的含量.[结果]五味子藤茎中五味子醇甲的含量与五味子果实相近,五味子乙素的含量约占五味子果实的50%,而五味子果柄中上述成分均较少.     

蜂毒素全氟碳纳米囊的制备及评价

目的 制备蜂毒素全氟碳纳米囊,考察其外观特征、粒径、Zeta电位、电镜形态、包封率及稳定性.方法 以全氟碳为纳米核心,通过高压均质法制备蜂毒素纳米囊.采用透射电镜和激光粒度分析仪检测纳米颗粒形态、粒径及Zeta电位,双波长考马斯亮蓝法测定纳米颗粒载药包封率.将制备的蜂毒素全氟碳纳米囊乳液置于4℃下密封贮藏30 d,以纳...     

高效液相色谱-紫外检测法同时测定染发剂中的20种染料成分

目的 建立高效液相色谱（HPLC）-二极管阵列检测器（DAD）法测定染发剂中20种染料成分的含量,对《化妆品卫生规范》中的氧化型染料的HPLC检测方法进行改进和补充。 方法 样品经乙醇-水超声提取,过滤后进样检测。色谱柱：Agilent Zorbax Bonus-RP （4.6 mm×250 mm,5 μm）; 流动相：A相为乙腈,B相为4 mmol/L磷酸盐缓冲液（pH 6.0,含0.1%的辛烷磺酸钠离子对试剂）,梯度洗脱：0～24 min,10% A; 24～26 min,10%~40% A; 26～45 min,40% A; 45～47 min,40%~80% A; 47～52 min,保持80% A不变; 流速1 mL/min; 柱温15℃,使用DAD进行检测,检测波长为280 nm,进样量5 μL。 结果 各染料成分在50 min内基线分离。在10.0～500.0 mg/L浓度范围内,线性关系良好,相关系数均高于0.999。日内及日间精密度均小于4%,加样回收率为81.90%～119.88%。 结论 该方法简便、快速、准确,适于氧化型染发剂中染料成分的检测。     

Isolation and purification of guinea pig inner ear antigens by preparative polyacrylamide gel electrophoresis

目的　分离与纯化豚鼠内耳抗原 ,为寻找内耳特异性抗原打下基础。方法　采用冻融法提取豚鼠内耳抗原 ,制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与纯化内耳抗原的亚组份 ,快速染色和脱色定位蛋白区带 ,将主要蛋白区带切下匀浆回收 ,并与分析性聚丙烯酰胺凝胶电泳比较。结果　豚鼠内耳抗原的加样量为 3mg时 ,各亚组份仍能有效分离 ,三种主要亚组份 (31、4 2 - 4 5和 60kD)的相对含量分别为 2 5 99%、2 1 91%和 2 1 1%。结论　制备性PAGE可以用于纯化内耳抗原的主要亚组份。     

发酵红景天中红景天苷的含量测定

[目的]比较红景天发酵前后红景天苷的含量变化．[方法]采用HPLC法测定红景天苷的含量,色谱条件为KroasilC18色谱柱（4．6mm×250．0mm,5μm）;流动相为乙腈一水梯度洗脱,流动速度为1．0mL／min,检测波长为276nm,柱温为25℃,进样量为20gL．[结果]发酵红景天中红景天苷的含量为2．39％,红景天提取物为1．61％,通过微生物发酵使得红景天中活性成分红景天苷含量增加48．45％．[结论]本方法简便、快速、准确．     

高效液相色谱法测定注射用阿魏酸钠含量

目的建立高效液相色谱法（HPLC）测定注射用阿魏酸钠含量的方法。方法色谱柱：Waters X Terra RP18（4．6mm×250mm,5um）,流动相为甲醇-水（62：38）,流速为1ml·min-1,检测波长为310nm。灵敏度2．000AUFS,柱温30℃,进样20ul。结果阿魏酸钠在44．08～220．4ug·ml-1范围内线性关系良好（r=0．9997）,平均回收率98．79％,相对标准偏差（RSD）为1．61％。结论本方法简便、准确、专属性强,可用于阿魏酸钠含量的测定。     

用HPLC法测定至灵胶囊中腺苷的含量

采用高效液相法测定至灵胶囊中腺苷的含量，选用ＹＷＧＣ１８柱，磷酸二氢钾（０００５ｍｏｌ／Ｌ）甲醇（８５∶１５）为流动相，检测波长为２６０ｎｍ，平均回收率９９４４％，Ｒｓ为１２８％（ｎ＝５）。