Tideglusib对LPS刺激的人根尖牙乳头干细胞牙/骨向分化的影响

目的 探讨Tideglusib对LPS刺激的人根尖牙乳头干细胞(stem cells from the apical papilla, SCAPs)的牙/骨向分化的影响。方法 分离培养SCAPs,流式细胞术对SCAPs进行表面分子鉴定,检测Tideglusib对SCAPs细胞增殖是否有影响。通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性和ALP染色筛选Tideglusib促进SCAPs表达ALP活性的最佳浓度。用大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)模拟炎性微环境刺激SCAPs。采用Western blot及实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, RT-qPCR)等方法检测牙/骨向分化的相关蛋白(OSX、OCN、COL-Ⅰ、DSP、RUNX2)和基因(OSX、OCN、COL-Ⅰ、DSPP、RUNX2)表达变化。结果 CCK-8实验显示：Tideglusib浓度低于50 nmol/L时对细胞增殖无抑制作用;1 nmol/L Tideglusib处理LPS刺...     

Vitapex对根尖牙乳头干细胞成牙/骨向分化及自噬的影响

目的:研究Vitapex糊剂对根尖牙乳头干细胞(SCAPs)成牙/骨向分化的影响,初步讨论其潜在机制。方法:酶消化法分离并培养SCAPs;制备不同浓度Vitapex条件培养基,通过碱性磷酸酶(ALP)活性测定选取最适浓度;ALP染色、实时荧光定量PCR和Western blot检测成牙/骨向相关基因和蛋白的变化情况;Western blot检测自噬相关蛋白表达水平。结果:0.2 g/L Vitapex条件培养基组ALP活性最高,选取为最适浓度进行后续实验。与对照组比较,该浓度Vitapex条件培养基能显著促进SCAPs细胞ALP、核心结合蛋白因子2(RUNX2)、成骨相关转录因子(OSX)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因和蛋白表达(P<0.05)。同时,0.2 g/L Vitapex组中微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ及Beclin-1蛋白表达水平升高,P62蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论:Vitapex可促进SCAPs成牙/骨向分化,并激活自噬。     

肝细胞生长因子对根尖牙乳头干细胞增殖和矿化能力的影响

目的：探讨肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）对体外培养的根尖牙乳头干细胞（stem cells from apical papilla,SCAP）增殖和矿化能力的影响。方法：将SCAP细胞分别在标准培养液、含有10ng／mlHGF的培养液以及矿化诱导培养液中培养,分为空白对照组、HGF组、矿化诱导组和HGF＋矿化诱导组。通过MTF法、碱性磷酸酶（alkaline phosphotase,ALP）活性检测、茜素红染色和氯代十六烷基吡啶定量检测SCAP细胞增殖和矿化能力的改变。结果：MTT结果显示,HGF可以侧进矿化诱导下的SCAP细胞的增殖能力（P〈0．005）。与其他组相比较,HGF＋矿化诱导组SCAP细胞的ALP活性明显上调,矿化能力显著提高（P〈0．005）。结论：10ng／mlHGF可明显促进SCAP细胞的增殖和矿化能力。     

肝细胞生长因子对根尖牙乳头干细胞增殖和矿化能力的影响

目的:探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对休外培养的根尖牙乳头于细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)增殖和矿化能力的影响.方法:将SCAP细胞分别在标准培养液、含有10 ng/ml HGF的培养液以及矿化诱导培养液中培养,分为空白对照...     

bFGF对人根尖牙乳头干细胞成脂分化影响的研究

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在体外对人根尖牙乳头干细胞(stem cellsfrom apical papilla,SCAP)成脂分化的影响。方法:采用酶消化法获得原代SCAP,用含有5 ng/mL bFGF的成脂诱导液对其诱导培养不同时间,显微镜观察细胞形态变化、油红0染色观察SCAP成脂分化能力、RT-PCR检测PPAR-γ2 mRNA表达情况。结果:SCAP在含有5 ng/mL bFGF成脂诱导液中培养3周,细胞中脂滴形成数量多于对照组,而且细胞密度也相对较大,细胞体积小,未见拉长、变大等现象。RT-PCR检测显示,诱导培养1周时,实验组与对照组PPAR-γ2 mRNA表达无显著性差异(P>0.05);培养3周时,实验组PPAR-γ2 mRNA表达量明显高于对照组(P<0.05)。结论:bFGF具有促进SCAP成脂分化的潜能。     

血小板裂解液对人根尖牙乳头干细胞和牙周膜干细胞体内外增殖、矿化能力的影响

目的:研究血小板裂解液(Platelet Lysate,PL)在体内外对人根尖牙乳头干细胞(SCAP)和牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖、矿化的干预效应,以期找到PL应用于这两种细胞的最佳方式。方法:在矿化诱导培养体系中按一定体积比加入PL,分别作用于体内、外复合HA-TCP支架材料三维生长的SCAP和PDLSCs,扫描电镜(SEM)以及组织学观察细胞生长、分化情况。结果:体外三维培养模式下,PL能够促进SCAP和PDLSCs的增殖以及矿化细胞外基质的形成,并利于在支架材料上形成完整的细胞膜片(cell sheet)样结构,以上效应对于PDLSCs作用更为显著。而在体内移植模式下,经50 mL/L、10 mL/L PL培养体系预培养的SCAP能形成包含成牙本质细胞样细胞、牙本质样基质和牙髓组织的牙本质牙髓复合体样结构;而PDLSCs经50 mL/LPL干预后,可分化为成牙骨质细胞样细胞,并生成牙骨质样基质、牙周膜样组织。结论:一定体积浓度比的PL能促进SCAP和PDLSCs在体内外的增殖以及成骨、成牙本质分化。     

CD24基因调控根尖牙乳头干细胞的成骨分化功能

目的 研究干细胞表面标记CD24基因对根尖牙乳头干细胞成骨分化能力的影响。方法 利用CD24 shRNA基因敲除CD24进行丧失性功能研究;实时定量RT-PCR检测CD24的基因敲除效果;通过ALP活性检测、茜素红染色及钙离子定量分析明确根尖牙乳头干细胞体外成骨分化能力的变化;实时荧光定量RT-PCR检测成骨分化相关基因-I型胶原蛋白1A、I型胶原蛋白1B、骨涎蛋白、骨桥蛋白和成骨相关转录因子RUNX2的表达分析研究根尖牙乳头干细胞基因表达改变。结果 实时定量RT-PCR结果显示CD24可以在根尖牙乳头干细胞有效的被敲除;碱性磷酸酶活性结果显示敲除CD24抑制根尖牙乳头干细胞碱性磷酸酶活性;茜素红染色及钙离子定量分析结果显示敲除CD24明显抑制根尖牙乳头干细胞体外矿化能力;实时定量RT-PCR结果显示敲除CD24明显抑制I型胶原蛋白A、型胶原蛋白B、骨涎蛋白、骨桥蛋白和RUNX2的表达。结论 基因沉默CD24可以通过抑制转录因子RUNX2及成骨分化基因的表达,从而抑制根尖牙乳头干细胞体外成骨分化功能。     

过表达BCOR基因抑制根尖牙乳头干细胞成肌分化

目的：研究B细胞淋巴瘤因子6共抑制因子（BCL6co—repressor,BCOR）对根尖牙乳头干细胞成肌分化能力的影响。方法：利用HA—BCOR逆转录病毒载体过表达BCOR进行获得性功能研究;WesternBlot检测HA—BCOR的过表达效果;重组人肿瘤生长因子β1（TGF—β1）蛋白诱导根尖牙乳头干细胞体外成肌分化;通过检测成肌分化相关基因smoothened（SMO）、smoothmuscleactinalpha2（ACTA2）和caldeson（CALDl）的表达研究根尖牙乳头干细胞体外成肌分化能力。结果：WesternBlot结果显示HA-BCOR可以在根尖牙乳头干细胞有效的过表达;过表达BCOR抑制根尖牙乳头干细胞成肌分化相关基因SMO和CALDl的表达。结论：过表达BCOR基因抑制根尖牙乳头干细胞体外成肌分化,证实BCOR是根尖牙乳头干细胞成肌分化的抑制甚因。     

TGF-β1对人根尖牙乳头干细胞增殖和分化的影响

目的:研究转化生长因子(TGF-β1)在体外对根尖牙乳头干细胞(SCAP)增殖和分化的影响。方法:采用酶消化法获得原代培养人SCAP,并对获得克隆化的SCAP进行免疫组化染色和多向分化能力的初步鉴定。用MTT比色法观察不同浓度的TGF-β1对细胞增殖情况,并通过检测ALP活性和矿化诱导后COL1、DSPP、OCN mRNA表达,分析TGF-β1对SCAP分化能力的影响。结果:5、10、20、40 ng/mL组的TGF-β1在SCAP培养1周内可显著促进细胞增殖(P<0.05);在TGF-β1作用8 d后,细胞ALP活性增强(P<0.05);SCAP矿化诱导2周后,TGF-β1组中COL1、OCN、DSPP的mRNA表达上调(P<0.05)。结论:TGF-β1促进SCAP细胞增殖,并通过提高ALP活性和上调COL1,OCN、DSPP mRNA的表达促进SCAP分化。     

HOXC6同型蛋白2对根尖牙乳头干细胞成骨/成牙分化功能的影响

目的 探讨同源盒基因C6同型蛋白2对牙源性间充质细胞成骨/成牙分化的影响.方法 成骨诱导培养基诱导人根尖牙乳头干细胞体外成骨/成牙分化;逆转录病毒转染构建过表达HOXC6-ISO2稳定转染牙乳头干细胞进行HOXC6-ISO2获得性功能研究;碱性磷酸酶活性实验检测成骨/成牙早期分化指标-碱性磷酸酶活性;茜素红染色及钙离子定量分析检测干细胞体外矿化能力;实时荧光定量反转录PCR检测成骨/成牙分化相关基因-Sp7转录因子、Runt相关转录因子2和骨钙素及同源盒基因C6下游基因胰岛素结合蛋白5的表达.结果 结果显示过表达同源盒基因C6同型蛋白2明显抑制牙乳头干细胞的碱性磷酸酶活性;茜素红染色及钙离子定量分析结果显示过表达同源盒基因C6同型蛋白2明显抑制牙乳头干细胞体外矿化能力;实时荧光定量反转录PCR显示过表达同源盒基因C6同型蛋白明显抑制骨钙素的表达,并且抑制下游基因胰岛素结合蛋白5的表达.结论 同源盒基因C6同型蛋白2通过抑制下游基因胰岛素结合蛋白5抑制牙乳头干细胞体外成骨/成牙分化的功能.     

血小板裂解液对人根尖牙乳头干细胞体外增殖的影响

目的:评价血小板裂解液(PL)对根尖乳头干细胞(SCAP)增殖的影响,为PL代替胎牛血清(FBS)提供依据.方法:用显微镜观察SCAP的生长特征,用流式细胞仪检测细胞的表面标志物,用茜素红染色检测细胞的成骨分化能力.将SCAP分为四组,分别在培养基中加入PL(2％、5％和l0％)和10％ FBS.培养第1、3、5、7d后用MTT检测各组SCAP的增殖情况.结果:流式细胞分析表明SCAP表达CD73、CD90和CD105呈阳性,CD14、CD34和CD45呈阴性.SCAP骨向分化呈阳性.2％ PL与10％ FBS组之间细胞增殖差异不具有统计学意义(P＜0.05),5％ PL组与10％ FBS组之间细胞增殖差异有统计学意义(P＜0.05).结论:在对SCAP的增殖方面,2％ PL与10％ FBS的作用相近.5％ PL强于10％ FBS.     

组蛋白去甲基化酶KDM4B促进根尖牙乳头干细胞中成骨和成牙本质分化

目的 研究组蛋白去甲基化酶KDM4B对根尖牙乳头干细胞定向分化能力的影响.方法 人重组骨形成蛋白4(BMP4)刺激根尖牙乳头干细胞后检测KDM4B的表达;利用慢病毒转染过表达或者基因敲除KDM4B进行获得性或丧失性功能研究.通过检测碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色、钙离子定量分析研究根尖牙乳头干细胞体外成骨和成牙本质分化能力.结果 BMP4促进根尖牙乳头干细胞KDM4B的表达.基因敲除KDM4B抑制根尖牙乳头干细胞ALP活性及体外矿化能力、促进转录因子PPAR-gamma的表达.过表达KDM4B增强根尖牙乳头干细胞ALP活性和体外矿化能力.结论 组蛋白去甲基化酶KDM4B具有促进根尖牙乳头干细胞成骨和成牙本质分化的潜能.     

TNF-α对根尖乳头干细胞体外增殖及成牙成骨向分化能力的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对根尖乳头干细胞(SCAP)外增殖及成牙成骨向分化能力的影响。方法:采用酶消化法结合组织块法获得根尖乳头干细胞,免疫荧光免疫组化法鉴定细胞来源,通过不同浓度的TNF-α进行干预后检测对SCAP增殖,矿化成牙成骨能力的影响。结果:MTT检测显示各浓度组TNF-α均能刺激SCAP的体外增殖,10、50 mg/L的TNF-α实验组可明显促进SCAP增殖(P<0.05),差异具有统计学意义;茜素红染色显示与对照组(0 mg/L TNF-α)相比,实验组(5、10、50 mg/L TNF-α)染色明显变浅,矿化结节形成的较小,对照组形成红色结节范围大且呈深橘色;免疫组化染色显示SCAP胞浆中DSP、BSP均有表达,实验组部分细胞胞浆染色且染色较浅,呈褐色为阳性表达,对照组(0 mg/L TNF-α)细胞胞浆完全着色呈深褐色,为强阳性表达。结论:不同浓度TNF-α对SCAP的生长增殖均有促进作用,TNF-α在不同程度上对SCAP矿化及成牙成骨向分化有抑制作用。     

富血小板纤维蛋白对根尖牙乳头干细胞生物学性能的作用研究

目的　研究富血小板纤维蛋白（platelet rich fibrin，PRF）对根尖牙乳头干细胞（stem cells from apical papilla，SCAP）生物学性能的作用，探讨其应用于牙髓再生治疗（regenerative endodontic treatment，RET）、促进年轻恒牙牙根继续发育的机制。方法　原代分离培养SCAP，抽取静脉血获取PRF。实验按所用PRF的体积不同分为4组：1/8PRF组、1/2PRF组、1PRF组、0PRF组（对照组）。分别收集各组PRF上清液，制备条件培养基。通过MTT法检测PRF对SCAP增殖的影响；对经不同PRF条件培养基预处理的SCAP进行成骨诱导，应用Western Blot检测牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein，DSPP）、牙本质基质蛋白1（dentin matrix protein 1，DMP1）、骨钙素（osteocalcin，OCN）的表达水平，检测PRF对SCAP成牙本质或成骨分化的影响。结果　在条件培养基培养3 d和5 d时，与对照组相比，实验组PRF均显著促进SCAP的增殖（P < 0.05），3 d和5 d时，1/2PRF组促进SCAP增殖作用最强（P < 0.05）。PRF条件培养基预处理的SCAP经成骨诱导后，高表达DSPP和DMP1（P < 0.05）。结论　PRF可显著促进SCAP增殖和向成牙本质细胞分化，为PRF应用于RET奠定了生物学基础。     

可注射型富血小板纤维蛋白对人根尖牙乳头干细胞生物学行为的影响

目的 探讨可注射型富血小板纤维蛋白（injectable platelet rich fibrin,iPRF）对人根尖牙乳头干细胞（human stem cells from apical papilla,hSCAPs）生物学行为的影响。方法 酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定可注射型富血小板纤维蛋白提取液（injectable platelet rich fibrin extract,iPRFe）生长因子的含量;CCK 8、Transwell实验、茜素红染色分别检测iPRFe对hSCAPs增殖、迁移、矿化诱导的影响;荧光实时定量PCR检测与成骨/成牙向分化相关基因的mRNA表达水平。结果 iPRFe中可检测到血小板衍生生长因子 BB（platelet derived growth factor BB,PDGF BB)、胰岛素样生长因子1（insulin like growth factor 1,IGF1）和转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGFβ1）;iPRFe能促进hSCAPs的增殖,且在1/4×浓度时hSCAPs增殖效果最佳;1/4×浓度的iPRFe对hSCAPs的迁移和矿化也有明显的促进效果;iPRFe还可明显促进碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）、牙本质基质蛋白1（dentin matrix protein 1,DMP1）、牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein,DSPP）和骨钙素（osteocalcin,OCN） mRNA的表达（P<0.05）。结论 iPRF能够促进hSCAPs的增殖、迁移和矿化,有望为牙髓再生提供可能。     

生长因子对根尖牙乳头干细胞增殖及分化的影响

根尖牙乳头干细胞是近几年体外成功分离培养的新型牙源性干细胞,具有较强的增殖及多向分化能力,是组织工程牙再生研究中具有很大潜能的种子细胞。根尖牙乳头干细胞的生物学性能易受到许多外源性因素的影响,如生长因子、信号通路、物理因素、支架材料等。本文基于现有文献从生长因子对根尖牙乳头干细胞增殖及分化的影响方面做一综述。     

小分子混合物在神经诱导液中对根尖牙乳头干细胞成神经分化的影响

目的评估小分子混合物在神经诱导液中对根尖牙乳头干细胞（SCAP）向神经细胞分化能力的影响。 方法分别使用神经诱导液（对照组）和添加小分子混合物的神经诱导液（实验组）培养SCAP,8 d后在倒置显微镜下进行形态学观察,使用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）和免疫蛋白印迹法检测神经丝（NFM）、微管相关蛋白2（MAP2）和神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达情况,使用免疫荧光反应实验检测β3微管蛋白（TUBB3）的表达情况。采用SPSS 16.0软件包对数据进行统计学分析。 结果形态学观察结果显示,实验组SCAP形成了更多神经样突触。实时荧光定量PCR结果显示,实验组NFM、MAP2和NSE的mRNA相对表达量分别为6.608 ± 2.836、29.40 ± 6.645和6.428 ± 1.025,较对照组（1.074 ± 0.202、1.092 ± 0.115和1.140 ± 0.281）显著提高,差异均有统计学意义（t_NFM = 3.387,P_NFM = 0.0276;t_MAP2 = 7.490,P_MAP2 = 0.0017;t_NSE = 8.615,P_NSE = 0.0010）。免疫蛋白印迹实验结果显示,实验组NFM、MAP2和NSE印迹较对照组更为明显。免疫荧光反应实验结果显示,实验组SCAP中TUBB3表达明显强于对照组。 结论小分子混合物添加入神经诱导液中能够促进SCAP向神经细胞分化。