光动力作用对人乳腺癌细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的实验研究

目的：探讨光动力作用（PDT）对人乳腺癌细胞Bax和Bcl-2的影响。方法：体外培养的人乳腺癌细胞MDA—MB-231，分别在PDT作用不同时间后，用免疫组织化学法检测促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达情况。结果：Bax蛋白表达在所有组无明显差异（P〉0．05），Bcl-2蛋白表达自PDT后6h起显著下降（P〈0．01）；PDT后6hBax／Bcl-2比值依次递增，且有统计学意义（P〈0．05）。结论：光动力作用可诱导人乳腺癌细胞发生凋亡，其机制可能与Bax和Bcl-2蛋白表达的比值有关。     

HpD—PDT对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制

目的:研究血卟啉衍生物(hematoporphrphyrin derivative,HpD)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡的影响,探讨其可能的作用机制,为HpD-PDT治疗乳腺癌提供理论依据.方法:体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231分为4组:A组(空白对照)、B组(单纯激光)、C组(单纯光敏剂)、D组(激光+光敏剂).应用流式细胞术分析HpD-PDT对细胞周期的影响,免疫组织化学技术检测HpD-PDT对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.结果:HpD-PDT作用后,乳腺癌细胞内G0/G1期细胞比显著高于对照组(P<0.05);PCNA阳性表达率明显低于对照组(P<0.01);Bcl-2蛋白的阳性表达率明显下降(P<0.05);Bax蛋白阳性表达率各组间均无统计学差异;实验组HpD-PDT作用后Bax/Bcl-2比值增高,呈时间依赖性变化.结论:HpD-PDT的作用机制可能与抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡有关.     

Survivin与Caspase-3在光动力诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡中的作用

目的:探讨Survivin与Caspase-3在血卟啉化衍生物(hematoporphyrin derivative,HPD)光动力作用(photodynamic therapy,PDT)诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡中作用.方法:应用流式细胞术检测光动力作用后细胞凋亡率.用免疫组化法检测细胞内Survivin及Caspase-3蛋白表达情况,并用RT-PCR检测其基因水平.结果:血卟啉衍生物光动力组人肝癌细胞SMMC-7721凋亡率达(33.42±5.52)%,与对照组相比,差异有显著意义(P<0.05);光动力作用后Survivin的蛋白表达及基因水平显著低于对照组(P<0.05),而Caspase-3却显著高于对照组(P<0.05).结论:血卟啉衍生物光动力作用具有诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡的生物学效应,其作用机制可能与光动力作用抑制凋亡调控蛋白Survivin表达,并且直接或间接促进Caspase-3的表达,从而促进细胞凋亡.     

光动力学调控miR143激活Bcl-2/Bax的信号路径对人宫颈癌的治疗机制

目的 探讨在宫颈癌中光动力学调控对miR143激活Bcl-2/Bax的信号路径的影响,为光动力学联合miR143应用于宫颈癌的治疗机制奠定基础.方法 人宫颈癌HeLa细胞分别进行miR143干扰处理(miR143组)、光动力照射处理(PDT组)及miR143干扰联合光动力照射处理(PDT+miR143组),采用CCK8法、流式细胞术及Transwell小室侵袭模型对各组处理后HeLa细胞的抑制率、凋亡率及侵袭能力进行分析,同时采用荧光定量PCR检测不同处理前后各组细胞的miR143、Bcl-2和Bax的mRNA表达水平.结果 3组之间的细胞抑制率、凋亡率差异有统计学意义(P<0.05),PDT+miR143组细胞抑制率和凋亡率分别高于PDT组和miR143组,差异具有统计学意义(P<0.05),而PDT+miR143组穿膜细胞数显著高于miR143组和PDT组(P<0.05).处理后,3组miR143和Bcl-2 mRNA表达水平较处理前均显著升高(P<0.0001),且处理后PDT+miR143组miR143和Bcl-2 mRNA表达水平显著高于PDT组和miR143组(P<0.05),而处理后3组Bax mRNA表达水平无明显变化.结论 在宫颈癌中,光动力学治疗对miR143激活Bcl-2/Bax的信号路径起正向调控作用,为光动力学联合miR143治疗宫颈癌的机制奠定了基础.     

PML-RARα表达对细胞凋亡诱导剂敏感性差异的分子机制研究

目的 研究PML-RARα表达阴性的HL-60细胞和表达阳性的NB4细胞对三氧化二砷(As2O3)诱导细胞凋亡敏感性差异的分子机制.方法 经As2O3作用人急性早幼粒细胞白血病HL-60和NB4细胞后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术测定细胞凋亡水平的变化,RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Fas等基因在mRNA水平的表达变化.结果 As2O3可诱导NIM细胞出现明显的凋亡现象,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05),Bcl-2基因表达明显下调(P<0.05),但Bax、Fas基因表达没有明显变化(P>0.05),Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.05).而对于PML-RARa表达阴性的HL-60细胞,经小剂量As2O3作用后,对细胞的增殖抑制作用不明显(P>0.05),未出现明显凋亡现象,Bcl-2、Bax、Fas或Bcl-2/Bax表达水平及比值变化不明显(P>0.05).结论 Bcl-2/Bax表达比值变化与否,可能是小剂量As2O3诱导PML-RARα表达阴性的HL-60细胞和表达阳性的NB4细胞发生凋亡差异的分子机制.     

光动力作用对人乳腺癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨光动力疗法(PDT)对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法:以人乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象,以血卟啉衍生物(HpD)为光敏剂,630nm波长的激光为光源,MTT法绘制MDA-MB-231PDT后不同时间的生长曲线。流式细胞仪检测PDT对人乳腺癌细胞阻滞的细胞周期,免疫组化观察PDT对增殖细胞核抗原(PCNA)的影响。结果:生长曲线示PDT对人乳腺癌细胞增殖有明显的抑制作用;PDT作用后早期(12h)G0/G1期比例明显高于对照组(P<0.05),且呈时间依赖性变化;免疫组化示:实验组PDT后各时间段PCNA阳性细胞蛋白表达率较对照组阳性表达率明显下降(P<0.01)。结论:光动力疗法可阻滞人乳腺癌细胞增殖,其机制可能与PDT阻滞细胞于G0/G1期和降低PCNA的表达有关。     

三羟异黄酮诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用机制的研究

目的:探讨大豆异黄酮主要成分三羟异黄酮对体外培养人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:不同浓度三羟异黄酮处理MCF-7细胞后,采用流式细胞仪检测乳腺癌细胞凋亡、线粒体内膜损伤情况(线粒体跨膜电位的变化);其次,应用酶联免疫吸附方法检测了细胞凋亡中半胱天冬酶-3(Caspase-3)活性变化,并采用蛋白印渍技术检测Bcl-2家族凋亡蛋白表达的变化.结果:三羟异黄酮处理乳腺癌MCF-7细胞后,细胞发生凋亡,并呈明显的剂量、时间效应关系,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.01);同时,细胞线粒体跨膜电位明显下降,Caspase-3酶活性增加.另外,Bcl-2家族凋亡蛋白中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL表达明显减少,而促凋亡蛋白Bax表达明显增加.结论:三羟异黄酮可诱导乳腺癌细胞凋亡,其机制可能为触发了线粒体途径凋亡,同时抑制了Bcl-2、Bcl-XL表达,增加了细胞中Bax蛋白的表达,从而达到诱导细胞凋亡的作用.     

抑制人高迁移率族蛋白1基因表达对胰腺癌细胞凋亡影响的研究

目的:探讨反义人高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因转染对人胰腺癌细胞的凋亡诱导作用及对Bcl-2/bax mRNA表达水平的影响.方法:应用分子克隆技术构建反义HMGB1基因真核表达栽体pcDNA3.1/anti-HMGB1,脂质体介导转染人胰腺癌细胞pane1,G418筛选获得阳性克隆.RT-PCR方法检测HMGB1、Bcl-2和Bax表达水平,MTT法测定细胞增殖,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡及细胞周期情况.结果:成功构建pcDNA3.1/anti-HMGB1真核表达裁体,转染pcDNA3.1/anti-HMGB1可使pancl细胞HMGB1和Bcl-2 mRNA表达水平显著降低,P<0.01;Bax mRNA的相对表达量明显升高,P>0.05;与对照组相比,Bax/Bcl-2 mRNA的比值显著升高,P<0.05.肿瘤细胞增殖能力明显受到抑制,P<0.01;并出现G1期阻滞和凋亡细胞百分率增加.结论:反义HMGB1基因转染能抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,是胰腺癌基因治疗的策略之一.     

复方苦参注射液诱导胃癌细胞株MGC803增殖抑制和细胞凋亡的实验研究

目的:观察复方苦参注射液在体外抑制人胃癌细胞株MGC803增殖和诱导其凋亡的生物学效应,并对其分子机制作初步探讨.方法:分别采用不同浓度梯度的复方苦参注射液干预胃癌细胞MGC803,通过MTT比色法检测复方苦参注射液对该细胞系生长增殖的影响.TUNEL法分析经1、2、4 mg/mL复方苦参注射液作用24 h后的MGC803细胞凋亡率.Western blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况.结果:复方苦参注射液在体外能明显抑制人胃癌细胞株MGC803的增殖,且呈浓度、时间依赖性(P<0.001).TUNEL法检测实验组细胞凋亡率均明显高于未加复方苦参注射液的空白对照组(P<0.05);West?ern blot分析表明复方苦参注射液能下调Bcl-2蛋白表达,降低蛋白Bcl-2/Bax比值,并且可以促使Caspase-3原蛋白发热活化(P<0.05).结论:复方苦参注射液具有体外抑制胃癌细胞增殖的作用,并能诱导其凋亡,其机制可能与Bcl-2/Bax比值降低导致Cas?pase-3活化相关.     

桔梗皂苷D诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的:研究来自桔梗的天然单体化合物桔梗皂苷D(platycodin D,PD)对高转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的影响,初步探索其可能的作用机制.方法:以不同浓度(0、2.5、5、10 μmol/L)PD处理乳腺癌MDA-MB-231细胞后,采用MTT法检测细胞增殖率并计算IC50值,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达水平.结果:PD呈剂量依赖性显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P＜0.01),作用72 h的IC50值为(7.30±2.67) μmol/L.与对照组相比,10 μmol/L的PD可显著促进MDA-MB-231细胞的凋亡(P＜0.05).PD激活了caspase家族蛋白,上调有活性的cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved caspase-9的表达,下调无活性的caspase-8和caspase-9的表达;PD同时减少Bcl-2的表达,增加Bax的表达,使Bcl-2/Bax的比值降低.研究还发现PD使突变型P53蛋白的表达减少、E2F1的表达增加.结论:PD抑制乳腺癌细胞增殖具有明显的抗肿瘤效应,而诱导凋亡的发生可能是其发挥抗肿瘤效应的机制之一.