抗癌药物对体外胃癌细胞生长的抑制作用

目的；探讨8种抗癌药物对体外胃癌细胞的抑制作用。方法：选用不同剂量的抗癌药物与胃癌细胞株BGC－823孵育不同时间后，用MTT法测定其细胞增长抑制率。结果：8种抗癌药物对细胞抑制率顺序：顺铂（diamminedichloroplatinum,DDP)，足叶乙甙（etoposide,VP-16),5-氟脲嘧啶（5－fluorouracilum,5-Fu)，长春新碱（vincristin,VCR)，阿霉素（adriamycin,ADM)，丝裂霉素（mitomycin,MMC)，阿糖胞苷（arabinosylcytosine,Ara-c)；对氨甲喋methotrexate,MTX)不敏感。其抑制率有随药物浓度增加、作用时间延长而增高的趋势。结论：8种抗癌药物除MTX外，对BGC－823细胞均有明显的抑制作用，但存在一一差异；从本实验条件看出，以中等浓度、作用48h效果较为理想。     

阿司匹林抑制胃癌细胞生长及其机制探讨

目的　研究阿司匹林对 SGC- 790 1胃癌细胞生长的影响 ,并初步探讨其作用的分子机制。方法　采用 3H- Td R法及流式细胞术检测不同浓度阿司匹林对胃癌细胞 DNA合成及细胞周期的影响 ;用免疫细胞化学法检测阿司匹林对胃癌细胞 COX- 2表达的影响 ;Western blotting法及 EMSA法检测阿司匹林对胃癌细胞 c- fos表达及 AP- 1活化的影响。结果　胃癌细胞经不同浓度的阿司匹林作用后 ,其 3H- Td R掺入值明显降低 ,且与阿司匹林浓度呈高度负相关 ( r=- 0 .9,P<0 .0 5 )。细胞周期分析显示 ,阿司匹林主要作用于胃癌细胞 S期。免疫细胞化学染色显示 ,阿司匹林能下调胃癌细胞 COX- 2表达 ,且具有良好的量效关系。Western blotting检测表明 ,阿司匹林能降低胃癌细胞 c- fos蛋白的表达。EMSA分析显示 ,阿司匹林能有效抑制血清刺激的 AP- 1的 DNA结合活性。结论　阿司匹林能有效抑制胃癌细胞的生长 ,这种作用可能是其通过抑制胃癌细胞 c- fos表达以及 AP- 1活化 ,进而抑制COX- 2表达所致     

克癌7851对癌细胞的作用

经口连续给荷Ehrlich腹水癌的BALB/c小鼠克癌7851(AC 7851 160 mg/kg)15d,结果表明癌细胞死亡率明显增加,而腹水量明显减少,二者呈高度相关。AC 7851体外实验用扩散合细胞培养法,结果对空白对照组(不加任何药物)、阴性对照组(黄芪提取液0.6mg/ml)肝癌细胞无杀伤效应;而阳性对照组(阿霉素0.8μg/ml)明显地杀伤了癌细胞(死亡率为14.9±0.8％),AC 7851组(剂量为16μg/ml)也杀伤了大量的癌细胞(死亡率为6.9±1.3％)。扫描电镜下见癌细胞微绒毛大量脱落,许多细胞崩解破坏,破损的细胞粘连在一起形成团块。透射电镜观察到,胞膜、胞核、线粒体及异染色质等均有不同程度的损伤,乃至细胞崩解破坏,核内可见许多圆形的、电子密度高的致密颗粒,其杀伤效应有随AC 7851剂量增加而增加的趋势。在同样条件、同样剂量下,AC 7851对正常淋巴细胞损伤较轻。     

肾细胞癌源性exosomes体外诱导单核细胞分化为PD-L1髓源性抑制细胞

目的研究肾细胞癌源性exosomes诱导人外周血单核细胞分化为髓源性抑制细胞及该细胞PD-L1分子表达情况的效应。方法超滤和蔗糖重水密度梯度离心相结合的方法分离纯化肾细胞癌源性exosomes。Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,贴壁法获取外周血单核细胞。倒置显微镜观察获得的单核细胞形态。流式细胞仪检测单核细胞比例及活性、经exosomes诱导的单核细胞活性情况、髓源性抑制细胞(MDSCs)及其上PD-L1分子的表达情况。结果贴壁的单核细胞形状为圆形或类圆形具少许短小伪足状突起;贴壁法获得的单核细胞比例达83.5%,活细胞比例约90.0%;髓源性抑制细胞的生成较对照组明显增加[(8.91±0.21)%vs(3.19±0.91)%,P<0.05],且该髓源性抑制细胞表达PD-L1较对照组明显增高[(88.93±8.57)%vs(44.53±5.35)%,P<0.05];体外经exosomes诱导刺激的单核细胞损伤率较对照组明显升高[(39.93±16.51)%vs(12.87±2.43)%,P<0.05]。结论肾细胞癌源性exosomes在体外能够促进单核细胞损伤,诱导单核细胞分化为髓源性抑制细胞,且该髓源性抑制细胞表达PD-L1增高,可能是其抑制T细胞免疫功能的负性调节机制之一。     

胃泌素、生长抑素对人胃癌细胞生长的调节作用

采用ＭＴＴ比色法检测细胞增殖情况，用放免法（ＲＩＡ）测定胰岛素、胰高血糖素和胃泌素含量，氨基己糖含量用Ｎｅｕｈａｕｓ法测定，以期观察五肽胃泌素和生长抑素对体外培养的人胃癌细胞ＨＧＣ８０３和ＨＧＣ８２３生长的调节作用。结果显示，胃泌素对两株胃癌细胞增殖均有促进作用，以１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ浓度最为明显，并使胃癌细胞氨基己糖含量明显增加（７．５８±０．６６ｖｓ４．２±０．３９ｐｇ／细胞，Ｐ＜０．０５））。生长抑素对两株胃癌细胞增殖均有抑制作用。以１×１０－６ｍｏｌ／Ｌ浓度最为明显，同时还抑制胃癌细胞分泌胃泌素和胰高血糖素的能力，并使胃癌细胞氨基己糖含量明显减少（２．６２±０．２９ｖｓ４．２±０．３９ｐｇ／细胞，Ｐ＜０．０５）。胃肠激素可调节胃癌细胞的生长，但尚有许多问题待阐明。     

H22源exosomes瘤苗在小鼠体内的抗肿瘤及免疫调节作用

目的:探讨exosomes瘤苗对小鼠免疫功能及肝癌移植瘤生长的影响.方法:从培养的小鼠肝癌H22细胞上清中分离exosomes瘤苗,以H22细胞接种BALB/e小鼠建市动物模型,随机分为exosomes瘤苗接种组及PBS对照组.15 d后处死小鼠,测量移植瘤体重量,计算抑瘤率;分别称取脾重、胸腺重,检测荷瘤小鼠脾脏指数和胸腺指数;用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况和细胞毒活性;酶连免疫吸附试验(Enzyme-linked immunoabsorbent assay,ELISA)检测脾淋巴细胞产生IL-2、INF-γ的能力.结果:接种exosomes瘤苗能显著抑制肿瘤生长,抑瘤率达42.26%;与对照组比较,实验组荷瘤鼠胸腺指数、脾指数显著提高(P<0.05);exosomes促进脾淋巴细胞增殖并增强其细胞毒活性,同时脾淋巴细胞培养上清中IL-2、INF-γ的水平升高.结论:exosomes瘤苗可能通过增强小鼠的免疫功能抑制小鼠肝癌移植瘤生长.     

胃泌素,生长抑素对人胃癌细胞生长的调节作用

采用ＭＴＴ比色法检测细胞增殖情况，用放射法（ＲＩＡ）测定胰岛素、胰高血糖素和胃泌素含量，氨基己糖含量用Ｎｅｕｈａｕｓ法测定，以期观察五肽胃泌素和生长抑素对体外培养的人胃癌细胞ＨＧＣ８０３和ＨＧＣ８２３生长的调节作用。结果显示，胃泌素对两株胃癌细胞增殖均有促进作用，以１×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ浓度最为明显，并使胃癌细胞氨基己糖含量明显增加（７．５８±０．６６ｖｓ４．２±０．３９ｐｇ／细胞，Ｐ〈０．０５     

hsa-miR-518b反义寡核苷酸对胃癌细胞生长抑制作用的研究

目的:探讨hsa-miR-518b反义寡核苷酸(Antisense oligonucleotide,ASODN)对胃癌细胞生长和细胞周期的影响,以分析其在胃癌中的作用机制.方法:设计合成全硫代磷酸化修饰的hsa-miR-518b ASODN,将其转染于胃癌细胞株SGC7901.用Real time RT-PCR分析hsa-miR-518b在胃癌细胞转染前后的表达情况,MTT检测胃癌细胞转染后的生长情况,流式细胞仪分析细胞周期.结果:转染hsa-miR-518b ASODN后,胃癌细胞hsa-miR-518b表达显著降低(P=0.000),生长受到抑制(P=0.000),大量胃癌细胞阻滞于G1期(P=0.000).结论:hsa-miR-518b ASODN能使胃癌细胞阻滞于G1期,抑制胃癌细胞的生长.提示hsa-miR-518b可能通过促进细胞周期G1/S期转换而促进胃癌细胞生长.     

善得定对胃癌细胞生长增殖的抑制作用研究

本研究以体外培养胃癌细胞（ＭＧＣ－８０３）为研究对象，采用ＭＴＴ比色法检测了善得定对胃癌细胞生长增殖的抑制作用，扫描电镜观察了经善得定作用后胃癌细胞（ＭＧＣ－８０３）形态学变化特征。结果显示：善得定对胃癌细胞（ＭＧＣ－８０３）生长增殖有明显抑制作用，具有时效和量效关系。经善得定作用２４小时后，扫描电镜显示胃癌细胞胞膜起泡，表面纤毛消失，体积缩小。上述结果表明善得定对胃癌细胞（ＭＧＣ－８０３）生长增殖有明显抑制作用     

丁酸钠对胃癌细胞株SGC-7901体外生长分化的影响

目的 研究丁酸钠对人胃癌细胞系生长抑制及诱导分化的抗肿瘤作用.方法 以不同浓度的丁酸钠作用体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901,应用MTT法检测对细胞生长的抑制情况;应用分光光度法检测分化标志酶活力;应用流式细胞技术检测细胞周期分布.结果 丁酸钠可以使SGC-7901细胞发生形态学改变;可抑制细胞生长,2.5mmol/L和5.0 mmol/L两种浓度丁酸钠在24、48、72 h对细胞生长的抑制率分别为27.72%、39.25%、85.02%和39.05%、60.76%、93.63%,具有时间剂量依赖性(P<0.01);可使细胞分化标志酶乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶(ALP)活力降低;可使G0/G1期细胞大量增多,S期、G2/M期细胞相应减少,出现G0/G1期停滞.结论 丁酸钠可诱导SGC-7901细胞分化并抑制其恶性生长.     

人成纤维细胞产生的抑制因子对肿瘤和转化细胞增殖与分化的影响

对人成纤维细胞产生的抑制因子(HFDI)的细胞生长抑制效应进行研究,发现HFDI对肿瘤细胞~3H—TdR掺入抑制是由于使细胞变性坏死或促使细胞有限分化所致;并证明HFDI对PHA刺激的淋巴细胞转化的抑制,也是由于使转化细胞变性坏死或促使细胞向成熟方向发展所致。     

穿心莲中一种新二萜内酯甙的分离和鉴定

从穿心莲叶中分离得一种新的二萜内酯甙,C_(26)H_(40)O_9,M~ 496,mp187°～188℃,根据化学和光谱数据(UV,IR,NMR,MS),酶水解,确定其结构为19-O-β-D-吡喃葡萄糖基脱氧穿心莲内酯(19-O-β-D-glucopyranosyl-deoxyandrographolide),命名为宁穿心莲内酯(Ninandrographolide,V1)。     

滋阴化痰方调控肿瘤细胞来源外泌体对HUVECs管样分化的影响

目的:探讨滋阴化痰方(Ziyin Huatan Recipe,ZYHT)调控肿瘤细胞来源外泌体(exosomes,Exos)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)管样分化的影响.方法:①将2种不同剂量的ZYHT分别与胃癌细胞株SGC -7901和...     

恶性实体瘤患者外周血细胞因子诱导的杀伤细胞增殖与杀瘤活性

 【目的】探讨恶性实体瘤患者外周血来源的细胞因子诱导的杀伤细胞的增殖能力、免疫表型及杀瘤活性。【方法】用rhlFN-1，rhlL-2，Anti-CD3mAb与恶性实体瘤患者外周血单个核细胞共孵育。分别在培养第4、7、10、13天进行细胞计数，通过流式细胞术检测细胞免疫表型及MTT法检测对K562细胞的杀伤活性。【结果】恶性实体瘤患者外周血单个核细胞与rhIFN-γ，rhIL-2，Anti-CD3mAb孵育4、7、10、13d，细胞数分别增加（2．5±1．6）、（11．9±3．5）、（22．3±7．8）和（29．5±6．1）倍。CD3^＋、CD4^＋,CD8^＋和CD3^＋CD16^＋CD56^＋细胞在培养第13天分别从（62．8±7．6）％、（31．5±5．8）％、（44．9±8．2）％和（1．3±1．1）％增加到（89．3±9．5）％、（50．1±7．2）％、（57±9．0）％和（37．0±12．7）％。对K562细胞的杀伤效应在第4、7、13天分别为（23．6~8．5）％、（56．4±7．2）％和（80．1±4．5）％。【结论】rhIFN-γ,rhIL-2和Anti-CD3mAb诱导恶性实体瘤患者外周血单个核细胞活化为以CD34^＋CD16^＋CD56^＋为主的细胞因子诱导的杀伤细胞，细胞增殖力强，并对K562细胞有强大的杀伤活性。     

骨髓源性血管内皮祖细胞的分离培养及鉴定

目的：探索大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）的培养、诱导分化及鉴定方法。力法：取大鼠股骨并冲洗骨髓腔,梯度密度离心法获单个核细胞后内皮细胞培养液培养,通过细胞形态、免疫组化和免疫荧光检测CD34、vWF、CD133、VSF,以及摄取DiL-aeLDL的能力进行鉴定。结果：新分离的骨髓单个核细胞呈圆形,2d后细胞贴壁,呈梭形或纺锤形,7d呈集落或线状排列,10d接近融合,呈鹅卵石样排列;贴壁细胞CD34、ⅧF、vWF、CD133均表达阳性,能摄取Dil-acLDL并结合FITC-Lectin-UEA-1。结论：从大鼠骨髓中分离出EPCs,并初步建立了骨髓溽性EPCs分离培养、诱导分化及鉴定方法。     

胎儿心脏间充质干细胞的分离培养及鉴定

目的建立胎儿心脏间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)的分离培养方法,并检测其表面标志及多向分化潜能。方法取胎龄4~5月水囊引产胎儿心脏,用1.073 g/mL的Percoll密度梯度离心分离低密度细胞,MSC培养基纯化贴壁细胞,用流式细胞术检测其表面标志,成脂肪及成骨诱导鉴定多向分化潜能,并与胎儿骨髓MSC对比,研究其增生及生长特征。结果流式细胞术证明,胎心MSC表达干细胞标志,具有间充质细胞的特征及多向分化能力。原代及传代培养显示,同胎儿骨髓MSC一样,胎儿心脏MSC具有活跃增生的能力。结论胎儿心脏中可成功地分离MSC,为组织工程的种子细胞和基因工程的载体细胞提供了新的可行的来源。     

非小细胞肺癌EMPE来源树突状细胞的分离培养和鉴定

目的:建立非小细胞肺癌(NSCLC)渗出性恶性胸腔积液(EMPE)来源树突状细胞(PEDCs)的分离培养方法,研究PEDCs功能性抗原的表达规律。方法:用密度梯度离心的方法,从非小细胞肺癌EMPE中分离获得富含PEDCs的细胞群;用抗CD3免疫磁珠提纯PEDCs;用IL-4、GM-CSF、TNF-α,分1、2、4、8 d 4个时间段培养PEDCs;用荧光抗体标记、流式细胞仪检测不同培养时间PFDCs功能性抗原的表达。结果:建立了PEDCs的分离培养方法。培养2d PEDCs的功能性抗原HLA-ABC、HLA-DR、CD54、CD80、CD83、CD1a的表达率显著升高。结论:从EMPE中分离的PEDCs,体外培养2d多种功能性抗原的表达率显著升高。     

肌球蛋白轻链的调节及其对肿瘤细胞增殖、转移的影响

肌球蛋白作为一种超家族蛋白质,是细胞骨架的重要组成部分,通过各种调节因子对其轻链磷酸化和去磷酸化的调节,参与了几乎所有的细胞生理、病理过程,尤其在肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移中发挥重要作用。到目前为止,肿瘤的发生、发展机制还不是十分清晰,对肌球蛋白轻链的调节及其与肿瘤相关性的研究,将有助于阐明肿瘤的发生、发展机制,为肿瘤的靶向治疗提供依据。