miR-92a-3p靶向EZH2对IL-1β诱导软骨细胞合成基质降解酶的影响

目的研究miR-92a-3p靶向zeste基因增强子同源物2(EZH2)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞合成基质降解酶的影响。方法分离培养人软骨细胞,分成Normal、IL-1β(IL-1β处理)、miR-NC+IL-1β(mimics control转染后IL-1β处理)、miR-92a-3p+IL-1β(miR-92a-3p mimics转染后IL-1β处理)组,RT-PCR方法测定miR-92a-3p表达变化,Western blot检测MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达。靶基因预测软件发现EZH2可能为miR-92a-3p的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将p CDNA3.1-EZH2和miR-92a-3p mimics共同转染到软骨细胞中,检测MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达情况。结果与Normal比较,IL-1β组细胞中miR-92a-3p表达减少,MMP-13、MMP-1表达增多,COLⅡ表达减少(P0.05)。与miR-NC+IL-1β比较,miR-92a-3p+IL-1β组细胞中miR-92a-3p表达增多,MMP-13、MMP-1表达减少,COLⅡ表达增多(P0.05)。miR-92a-3p靶向负调控EZH2表达。p CDNA3.1-EZH2可以逆转miR-92a-3p mimics对IL-1β条件下软骨细胞中MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达影响。结论 miR-92a-3p靶向下调EZH2抑制IL-1β诱导的软骨细胞合成基质降解酶。     

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡的机制研究

目的探讨LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞损伤及细胞凋亡的影响与分子机制。方法体外培养大鼠关节软骨细胞,分为NC组、IL-1β组(IL-1β浓度为10 ng/m L)。采用qRT-PCR检测细胞中FGD5-AS1、miR-103a-3p的表达水平。分别将pc DNA-FGD5-AS1、miR-103a-3p mimics转染至软骨细胞,随后使用IL-1β处理48 h。采用ELISA检测IL-6、TNF-α、IL-8水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1与miR-103a-3p的靶向关系; Western blot检测Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达量。结果与NC组相比,IL-1β组软骨细胞中FGD5-AS1的表达水平显著降低(P0.05),miR-103a-3p、Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3的表达水平显著升高(P0.05),IL-6、TNF-α、IL-8水平显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05); FGD5-AS1过表达后可明显降低IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、p-IκBα水平(P0.05),降低细胞凋亡率(P0.05),抑制Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3表达(P0.05);双荧光素酶报告实验证实FGD5-AS1靶向结合miR-103a-3p并可负向调控miR-103a-3p的表达(P0.05); miR-103a-3p过表达可明显逆转FGD5-AS1过表达对细胞凋亡及炎症反应的抑制作用(P0.05)。结论 LncRNA FGD5-AS1可通过靶向负调控miR-103a-3p的表达从而抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞炎症反应及细胞凋亡,其作用机制可能通过抑制NF-κB信号通路激活有关。     

miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及SIRT1/Foxo1蛋白表达的影响

目的 探讨miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及细胞沉默信息调节因子1/叉头框转录因子o1(SIRT1/Foxo1)蛋白表达的影响。方法 将40只大鼠随机分为对照组(健康大鼠)、模型组(骨关节炎大鼠,造模后不做其他处理及干预)、miR-125a-3p组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后于大鼠左膝关节关节腔内注射miR-125a-3p抑制剂)、阿利吉仑组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后给予大鼠50 mg/kg阿利吉仑灌胃),每组10只。通过氧化应激反应检测超氧物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH),HE、番红O、Masson染色检查大鼠软骨损伤情况,TUNEL检测软骨细胞凋亡,RT-PCR与免疫印迹检测SIRT1、Foxo1基因及蛋白水平。结果 软骨细胞凋亡率模型组高于miR-125a-3p组与阿利吉仑组(P<0.05),miR-125a-3p组与阿利吉仑组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE、番红O、Masson染色显示,模型组大鼠关节软骨面骨裂隙形成;miR-125a-3p组与阿利吉仑组大鼠关节软骨表面...     

miR-140-3p靶向凋亡基因BAX减轻白细胞介素-1β诱导的软骨细胞损伤

目的 研究微小RNA(microRNA,miR)-140-3p靶向凋亡基因Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associatal X pro-tein,BAX)减轻白细胞介素(interleukin,IL)-1β诱导软骨细胞损伤的作用及机制.方法 培养大鼠骨关节软骨细胞ATDC5,采用不同浓度IL-1β(0、1、5、1...     

miR-642a-5p靶向KRT19调控甲状腺癌细胞TPC-1细胞周期的研究

目的：探讨miRNA调控甲状腺癌细胞TPC-1细胞周期的潜在机制。方法：通过过表达甲状腺癌中异常表达的miRNA,检测甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力和细胞周期。通过miRDB在线分析miRNA的潜在靶标。通过siRNA敲低潜在靶标,检测甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力和细胞周期。通过荧光素酶报告实验检测miRNA与潜在靶标之间的关系。结果：过表达miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力显著下降（P<0.05）。敲低miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力显著上升（P<0.05）。过表达miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1处于G1期的细胞数量上升（P<0.05）、G2-M期和S期的细胞数量下降（P<0.05）。敲低miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1处于G1期的细胞数量下降（P<0.05）、G2-M期和S期的细胞数量上升（P<0.05）。当敲低KRT19后,甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力显著下降（P<0.05）。过表达miR-642a-5p后,KRT19的蛋白水平下降（P<0....     

miR-124-3p靶向Axin1 调控糖尿病骨质疏松成骨的研究

目的 研究miR-124-3p靶向Axin1 调控糖尿病骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells ,BMSCs）成骨分化的作用。方法 20只糖尿病大鼠模型-SPF级SD雌性大鼠分为分组对照组10例、实验组10例,经过药物注射,测血生化指标,测骨密度。BMSCs培养,流式细胞学鉴定。检测对照组和实验组miR-124-3p mRNA的表达。过表达miR-124-3p（模拟物）7、14、21 d,检测ALP、茜素红染色成骨能力。第7天检测miR-124-3p mRNA表达水平。实验组细胞用miR-124-3p模拟物转染,分为高糖组和低糖组,检测中Axin1 mRNA水平。构建载体,与模拟物共转染,荧光素酶报告基因检测miR-124-3p和Axin1靶向结合。将实验组BMSCs分为高糖组和低糖组,检测实验组BMSCs高糖组及低糖组miR-124-3p、Runx2 mRNA的表达及茜素红染色和ALP染色结果。检测实验组模拟物在高糖组及低糖组miR-124-3p、Runx2 mRNA的表达及茜素红染色和ALP染色结果。结果 ELISA检测血生化指标,实验组TG、TC、FPG、HbA1C值上调,β-CTX和SOST上调,OC和骨密度下调。BMSCs培养,流式细胞学鉴定显示CD73和CD105的表达为阳性, CD34 和 CD45 的表达呈阴性。符合间充质干细胞的抗原特点,证实为BMSCs。实验组miR-124-3p表达明显低于对照组。过表达miR-124-3p（模拟物）7、14、21 d,ALP、茜素红染色随时间逐渐升高。第7天miR-124-3p表达水平显著升高。实验组细胞用miR-124-3p模拟物转染,结果高糖组Axin1 mRNA表达水平上调,但用miR-124-3p模拟物转染时水平下降。荧光素酶报告基因检测miR-124-3p和Axin1可以靶向结合。RT-qPCR检测实验组BMSCs高糖摄入显著降低了miR-124-3p、Runx2表达;高糖可抑制成骨分化,减少钙沉积,减少ALP表达。高血糖条件下miR-124-3p过表达（模拟物）中Runx2的表达显示,高糖+对照明显低于低糖+对照组;高糖+miR-124-3p模拟物明显高于高糖+对照组。茜素红染色和ALP染色显示,高糖+对照明显低于低糖+对照组;高糖+miR-124-3p模拟物明显高于高糖+对照组。结论 miR-124-3p能通过靶向抑制Axin1促进糖尿病骨质疏松症大鼠BMSC的成骨发生。     

LncRNA MEG3调控miR-133a-3p/TGF-β1/Smads轴促进骨髓间充质干细胞成骨分化的作用机制

目的 探究LncRNA MEG3调控miR-133a-3p/TGF-β1/Smads信号轴对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cell, hBMSC)成骨分化中的影响。方法 通过构建慢病毒载体及慢病毒包装,将含有目的基因的慢病毒感染细胞。将hBMSC分为Control组、NC组、MEG3、sh-MEG3、MEG3+miR-133a-3p sponge及MEG3+miR-133a-3p组,成骨诱导后,采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色和茜素红染色检测ALP活性及钙盐沉积,qRT-PCR检测各组细胞中MEG3、miR-133a-3p、TGF-β1、TGF-βR1、smad2、smad3、smad4、Runx2及OPN mRNA表达水平,Western blot检测TGF-β1、TGF-βR1、smad2、smad3、smad4、Runx2及OPN蛋白表达量。结果 与NC组比较,MEG3组的ALP活性及茜素红钙盐沉积明显减弱,MEG3 mRNA上调,miR-133a-3p mRNA表达显著升高,TG...     

hsa_circ_0005105靶向miR-508-3p对关节炎软骨细胞的影响

目的 探讨hsa_circ_0005105对关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎症因子分泌的影响及机制。方法 实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测软骨细胞中hsa_circ_0005105和miR-508-3p的表达水平;将软骨细胞分为NC组、IL-1β组、IL-1β+si-NC组、IL-1β+si-hsa_circ_0005105组、IL-1β+miR-NC组、IL-1β+miR-508-3p组、IL-1β+si-hsa_circ_0005105+anti-miR-NC组、IL-1β+si-hsa_circ_0005105+anti-miR-508-3p组;蛋白质印迹法检测凋亡蛋白表达;流式细胞术检测凋亡;CCK-8与平板克隆形成能力检测细胞增殖能力;酶联免疫吸附法检测TNF-α、IL-6水平;双荧光素酶报告实验检测hsa_circ_0005105和miR-508-3p的靶向关系。结果 IL-1β诱导的软骨细胞中hsa_circ_0005105表达水平升高,miR-508-3p表达水平降低（P<0.05）。低表达hsa_circ_0005105或过表达miR-508-3p可降低IL-1β诱导的软骨细胞Bax、Cleaved-caspase-9、Cleaved-caspase-3相对表达水平、细胞凋亡率,升高Bcl-2蛋白水平、细胞活性,细胞克隆形成数增多,TNF-α和IL-6水平降低（P<0.05）。hsa_circ_0005105靶向调控miR-508-3p;低表达miR-508-3p可以逆转hsa_circ_0005105低表达对IL-1β诱导的软骨细胞损伤及炎症因子分泌的影响。结论 低表达hsa_circ_0005105通过靶向上调miR-508-3p抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎症因子分泌,促进细胞增殖。     

microRNA125a-3p对滋养层细胞功能的调控作用及机制

目的 观察microRNA125a-3p(miR-125a-3p)在滋养层细胞中的表达,探讨其对滋养层细胞增殖、侵袭和凋亡的调控及机制。方法 荧光实时定量PCR检测人滋养层细胞系HTR-8/SVneo、绒癌细胞系JAR和JEG-3中miR-125a-3p的表达情况。以HTR-8/SVneo和JEG-3细胞为实验对象,分为3组：空白对照组(CK组),未做任何处理;阴性对照组(NC组),转染NC-inhibitor;实验组(inhibitor组),转染miR-125a-3p inhibitor。以Transwell、流式细胞仪、CCK8法分别检测细胞的侵袭、凋亡及增殖能力。Western blot检测Fyn蛋白表达情况及ERK1/2、STAT3磷酸化水平。荧光实时定量PCR检测Fyn mRNA水平,免疫共沉淀法检测Fyn活性水平。结果 miR-125a-3p mRNA表达水平在HTR-8/SVneo、JAR和JEG-3细胞中依次降低,两两比较均有统计学差异(P<0.01)。抑制HTR-8/SVneo和JEG-3中miR-125a-3p后,细胞的凋亡水平明显降低,侵袭和增殖能力均明显升...     

miR-31-5p靶向Notch1调节骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的作用

目的明确miR-31-5p在骨关节炎软骨细胞中的作用。方法采用Hulth法进行大鼠骨关节炎造模,并分离原代软骨细胞,白细胞介素(interleukin,IL)-1β诱导体外模型,检测miR-31-5p的表达变化;进一步通过在线数据库预测miR-31-5p靶点并验证,细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和流式细胞术检测miR-31-5p对原代软骨细胞增殖和凋亡的影响。结果骨关节炎大鼠中miR-31-5p表达下调;miR-31-5p mimics促进软骨细胞增殖,而miR-31-5p inhibitor诱导软骨细胞凋亡增加;此外,miR-31-5p inhibitor促进IL-6和基质金属蛋白酶13(matrix metalloprotein,MMP-13)表达增加;荧光素酶报告基因实验证实Notch1是miR-31-5p的直接靶点,Notch1过表达质粒会部分抵消miR-31-5p mimics对软骨细胞的增殖保护作用。结论miR-31-5p下调表达介导骨关节炎软骨细胞增殖受限和凋亡发生,可能参与骨关节炎的发病。     

miR-186-3p通过靶向调控MCM2对宫颈癌发生的作用机制研究

目的 探讨miR-18 6-3p通过靶向调控微染色体维持复合物组分2(MCM2)对宫颈癌发生的作用机制。方法 选取2019年9月至2021年3月在石家庄市妇幼保健院确诊的宫颈癌患者60例,收集其宫颈癌组织及相应正常组织。采用RT-q PCR检测患者宫颈癌、癌旁正常组织标本以及人宫颈癌细胞中miR-18 6-3p和MCM2的表达。采用MTT和Transwell检测宫颈癌He La细胞增殖与侵袭的变化;采用Western blot检测增殖相关蛋白和迁移侵袭相关蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因验证miR-18 6-3p与MCM2的靶向关系。结果宫颈癌组织中miR-18 6-3p和MCM2 m RNA表达水平与癌旁正常组织存在显著差异(P<0.05)。相关性分析显示,miR-18 6-3p和MCM2 m RNA的表达水平呈负相关(r=-0.984,P<0.05)。与正常宫颈上皮细胞相比,He La细胞中miR-18 6-3p的表达水平显著降低,MCM2的表达水平显著升高(均P<0.05)。双荧光素酶报告结果表明miR-18 6-3p能直接靶向调控MCM2的表达。MTT实验结...     

姜黄素调控miR-199a-3p基因抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的:探讨姜黄素调控miR-199a-3p的基因表达对前列腺癌C4-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:将miR-199a-3p抑制物及阴性对照转染至C4-2细胞中,并分别标记为anti-miR-199a-3p组和anti-miR-con组;将仅加入脂质体的C4-2细胞标记为对照组。运用MTT法检测通过姜黄素(0、20...     

miR-124-3p靶向作用于calpain 1抑制氧化应激对脊髓损伤后神经元凋亡的影响

目的 :探究microRNA(miR)-124-3p作用于calpain 1抑制氧化应激对脊髓损伤后神经元凋亡的影响及其分子机制。方法:选取成年雄性SD大鼠40只,随机分成A组(miR-124-3p agomir组)、B组(agomir-NC组)、C组(model组)以及D组(sham组),每组10只。构建脊髓损伤模型前1d,采用改良的Sloane法向大鼠的脊髓组织T10段蛛网膜下腔注射miR-124-3p agomir(A组)、agomir-NC(B组)或生理盐水(C组、D组)。Allen法建立脊髓损伤模型,D组行手术处理但不进行脊髓撞击。脊髓损伤术前及术后1d进行Basso-Beai-Bresnehan(BBB)量表评分,qRT-PCR检测术前及术后1d、3d、5d模型大鼠T10段脊髓中miR-124-3p水平。通过TUNEL染色和Western blot检测脊髓组织神经元细胞凋亡情况以及caspase 3、68KD神经丝蛋白(neurofilament protein,NFP)的表达。利用Elisa试剂盒检测总活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)。利用Targetscan和双荧光素酶报告实验预测并验证miR-124-3p下游靶点。通过流式细胞术和Western blot检测靶点蛋白对神经元细胞凋亡的影响。结果:A组术后1d的BBB评分(12.57±1.42)明显高于B组(6.31±1.03,P0.05)和C组(6.18±1.15,P0.05),A组脊髓组织中miR-124-3p表达水平(9.34±1.35)高于B组(0.81±0.16,P0.05)和C组(0.85±0.18,P0.05)。上调miR-124-3p表达水平显著降低了脊髓组织中凋亡神经元细胞数量(A组,28.31±5.43;B组,54.97±9.25;C组,56.31±8.11;D组,14.65±4.81)和激活的caspase 3水平(A组,1.65±0.17;B组,3.24±0.33;C组,3.26±0.34;D组,1.00±0.08),同时显著上调了68KD NFP水平(A组,0.69±0.08;B组,0.25±0.04;C组,0.23±0.03;D组,1±0.09,P0.05)。进一步检测发现,上调miR-124-3p能够显著下调ROS (A组,1.29±0.10;B组,1.67±0.13;C组,1.65±0.12,P0.05)和MDA水平(A组,1.43±0.12;B组,1.74±0.13;C组,1.77±0.16,P0.05),明显提高SOD (A组,0.72±0.08;B组,0.34±0.05;C组,0.36±0.06,P0.05)和CAT水平(A组,0.51±0.07;B组,0.26±0.03;C组,0.27±0.04,P0.05)。Targetscan预测发现miR-124-3p和calpain 1 mRNA的3′UTR端存在序列结合。转染miR-124-3p agomir和calpain 1野生序列后,与转染agomir-NC和calpain 1野生序列相比,荧光强度显著降低(91-97位点:35.16±4.39 vs 101.25±9.98;467-473位点:55.41±8.16 vs 98.84±10.45,P0.05)。下调calpain 1表达后,神经元细胞凋亡率和激活的caspase 3水平明显降低(shRNA-calpain1组,1.67±0.18;shRNA-con组,2.52±0.27;con组,1.00±0.12),而68KD NFP水平显著升高(shRNA-calpain1组,0.71±0.06;shRNA-con组,0.36±0.04;con组,1.00±0.14,P0.05)。结论:miR-124-3p通过3′UTR抑制calpain 1表达,从而抑制氧化应激导致的神经元凋亡,减轻脊髓损伤。     

miR-506-3p靶向Beclin-1调控烧伤后皮肤成纤维细胞的自噬和增殖机制研究

目的:探讨烧伤后皮肤成纤维细胞中miR-506-3p表达与Beclin-1的靶向关系及增殖调控作用,为烧伤后瘢痕的治疗提供新靶点.方法:采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测烧伤组织和热损伤皮肤成纤维细胞中miR-506-3p水平;Targetscan在线预测,双荧光素酶验证miR-506-3p与Beclin-...     

lncRNA SCAMP1靶向miR-197-3p对肝癌SNU-449细胞增殖和侵袭的影响

目的：研究lncRNA SCAMP1靶向miR-197-3p对肝癌SNU-449细胞增殖和侵袭的影响。方法：q RT-PCR方法测定肝癌组织及细胞内SCAMP1表达变化。肝癌SNU-449细胞分成Control组、si-NC组（转染si RNA control）、si-SCAMP1组（转染SCAMP1 si RNA）组,CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化,克隆形成实验测定各组细胞克隆能力的变化,Transwell小室检测各组细胞迁移和侵袭能力的变化,Western blot检测各组细胞中N-cadherin、E-cadherin蛋白表达水平的变化。在线靶基因软件预测SCAMP1的靶基因可能是miR-197-3p,经双荧光素酶报告系统鉴定两者之间的靶向关系。在肝癌SNU-449细胞中分别把SCAMP1 siRNA、miR-197-3p inhibitor共转染,利用上述方法检测细胞增殖、克隆、侵袭、迁移能力。结果：肝癌组织中SCAMP1表达水平高于癌旁组织,肝癌细胞内SCAMP1表达水平高于正常肝细胞,差异均有统计学意义（P<0.05）。与Control组、si-NC组比较,si...     

miR-520a-3p对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨miR-520a-3p在肾癌细胞系中的表达水平及其对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.方法 通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测miR-520a-3p在正常肾小管上皮细胞HK2和肾癌细胞系786-O、A498、OS-RC-2及ACHN中的表达水平.选取miR-520a-3p表达水平最低的肾癌细胞系786-O...     

SP1被鉴定为miR-122-5p的一个转录因子

目的:miR-122-5p跟精子发生相关,本研究主要是探究miR-122-5p在睾丸内的转录因子. 方法:采用生物信息学方法预测到miR-122-5p启动子的可能转录因子为SP1和GATA4,然后分别构建双荧光素酶pGL3-miR-122-5p promoter载体、pcDNA3.1(+)-SP1表达载体和pcDNA3...     

miR-340-5p靶向DNMT1对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及其机制研究

目的:探讨miR-340-5p靶向DNA甲基转移酶1(DNMT1)对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响和分子机制.方法:采用30 mmol/L的D-葡萄糖处理小鼠肾脏足细胞MPC5构建细胞损伤模型.将MPC5细胞分为正常对照(NG)组、高糖刺激(HG)组、HG+miR-NC 组、HG+miR-340-5p 组、HG+si-...     

miR-142-3p调控雌激素受体1在妊娠期糖尿病并发子痫前期中的作用机制

目的:探讨妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus,GDM）并发子痫前期（preeclampsia,PE）孕妇血清和胎盘组织中的miR-142-3p和雌激素受体1（estrogen receptor,ER1）在疾病发生、发展中的意义及调控机制。方法:选择2019年6月至2020年6月在临...