低氧诱导因子-1α和VHL对小鼠软骨内成骨过程的调控机制

目的 研究低氧诱导因子1α (HIF-1α)和von Hippel-Lindau (VHL)在成骨细胞水平对小鼠软骨内成骨过程的调控机制.方法 以HIF-1α或VHL基因条件性敲除小鼠为实验对象,分别于4、8、12周龄时,采用组织化学染色观察、显微CT扫描、骨小梁面积测量、钙元素含量检测、四环素荧光双标记观察、Real-time PCR及Western blotting等方法,观察和比较基因敲除小鼠与野生型小鼠(对照组)软骨内成骨过程的差异.结果 与野生型对照小鼠比较,HIF-1α基因敲除组小鼠在软骨内成骨过程中血管内皮生长因子(VEGF)表达减少,新骨形成速度减慢,钙元素含量和骨小梁面积减少(P<0.05);而VHL基因敲除组小鼠在软骨内成骨过程中VEGF表达增加,新骨形成速度加快,钙元素含量和骨小梁面积增加(P<0.001).结论 在小鼠软骨内化骨过程中,VHL/HIF-1α信号通路对VEGF表达具有调控作用,通过调节血管形成,最终影响骨量形成.     

低氧诱导因子-1α在骨形成过程中对成骨细胞功能的调控

目的探讨低氧诱导因子（HIF）-1α对成骨细胞功能的调控及其在骨形成过程中的作用。方法应用Cre-Loxp重组酶技术,在体内外条件性敲除成骨细胞中的HIF-1α基因及其上游调控VHL基因,在体外将成骨细胞在2％氧浓度培养48h后检测血管内皮生长因子（VEGF）、核结合因子a1（RunX2）、碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（OC）的表达,在体内取3个月龄小鼠股骨远端骨组织,应用组织切片和Micro-CT方法检测骨组织形态计量学指标和骨矿密度（BMD）。结果体外条件性敲除成骨细胞中的HIF-1α基因后,由于HIF-1α的表达下降导致VEGF、RunX2、ALP、OC的表达水平降低,而敲除VHL基因后由于HIF-1α的表达上调导致上述基因的表达升高。体内条件性敲除HIF-1α基因小鼠骨组织形态计量学指标和BMD均劣于野生型小鼠,而体内条件性敲除VHL基因小鼠以上指标均优于野生型小鼠。结论在生理和病理条件下,由于低氧环境的存在,HIF-1α能够通过促进成骨细胞的功能而调控骨形成过程。     

低氧对小鼠成骨细胞Cyr61/CCN1表达的影响

目的 探讨低氧环境对小鼠成骨细胞富含半胱氨酸61(Cyr61/CCN1)表达的影响.方法 分别在氧浓度和去铁敏诱导的低氧环境下培养小鼠成骨细胞,Real-time PCR和Western blotting于不同时间点检测成骨细胞低氧诱导因子- 1α(HIF-1α)、Cyr61/CCN1和血管内皮生长因子的表达.分别敲除小鼠成骨细胞中HIF-1α和VHL基因,检测细胞Cyr61/CCN1的表达.结果 两种低氧环境下,小鼠成骨细胞HIF-1α通路被激活,Cyr61/CCN1 mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.05或P<0.01).HIF-1α基因敲除小鼠成骨细胞Cyr61/CCN1 mRNA和蛋白表达均显著减少,VHL基因敲除成骨细胞Cyr61/CCN1 mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.05或P<0.01).结论 低氧环境通过激活HIF-1α通路来上调小鼠成骨细胞Cyr61/CCN1的表达.     

小鼠椎体发育中低氧诱导因子-1α的表达

目的探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在小鼠椎体发育过程中的表达.方法动态观察小鼠椎体发育的演变过程;应用逆转录-聚合酶链反应检测HIF-1α在各发育时段的表达.结果胚胎第13.5天(E13.5)时,软骨性脊柱形成,可检测到HIF-1α的mRNA表达;E14.5时,HIF-1α的表达水平达高峰(P＜0.05);E15.5时,椎体内形成小的骨化核,之后逐渐增大形成初级骨化中心,并向头尾两端延伸,HIF-1α仍高表达,其后快速降至低水平.结论椎体发育表现为软骨内成骨过程,存在低氧环境,伴随HIF-1αmRNA的规律性表达,这可能与椎体软骨内骨化过程启动有关.     

低氧/低氧诱导因子-1α通路对成骨细胞与破骨细胞耦联的调控作用

目的 探讨低氧/低氧诱导因子(HIF) -1α通路对成骨细胞与破骨细胞耦联的调控作用.方法 取出生2～3d条件性基因敲除小鼠颅盖骨的成骨细胞与4～8周龄C57BL/6小鼠股骨破骨细胞的前体细胞,建立基因敲除小鼠成骨细胞与破骨细胞前体细胞共培养体系(野生型、HIF-1α-/-、Vhl-/-、HIF - 1α-/-/Vhl -/-共培养).采用RT-PCR技术检测成骨细胞中核因子κB受体活化因子配体(RANKL) mRNA和骨保护素(OPG) mRNA的表达以及破骨细胞中标志酶基因TRAP mRNA的表达,甲苯胺蓝染色观察破骨细胞溶骨形成的骨陷窝.结果 RT-PCR检测结果显示:与野生型共培养比较,HIF-1α-/-共培养的成骨细胞中RANKL mRNA表达上调、OPG mRNA表达下调(均P＜0.05),破骨细胞TRAP mRNA表达上调;Vhl-/-共培养和HIF-1α-/-/Vhl-/-共培养的成骨细胞中RANKL mRNA表达下调、OPG mRNA表达显著上调(均P＜0.05),破骨细胞TRAP mRNA表达下调;随着共培养时间的延长,成骨细胞中RANKL mRNA和OPG mRNA表达均逐渐减少,而破骨细胞TRAP mRNA表达均逐渐增加.甲苯胺蓝染色倒置显微镜观察显示:共培养第9天,破骨细胞骨吸收陷窝出现;随着共培养时间的延长,骨吸收陷窝面积和深度逐渐增加;与野生型共培养比较,HIF-1α-/-共培养的破骨细胞骨吸收陷窝较大且较深,Vhl-/-和HIF-1α-/-/Vhl-/-共培养的破骨细胞骨吸收陷窝较小且较浅.结论 低氧/HIF-1α通路激活后,成骨细胞抑制破骨细胞的分化功能;低氧/HIF-1α通路阻断后,成骨细胞促进破骨细胞的分化功能.     

低氧诱导因子-1α通路在成骨细胞及破骨细胞耦联中的调控效果探讨

目的探讨成骨细胞及破骨细胞耦联中低氧诱导因子-1α通路调控效果。方法选取出生2~3d条件性基因敲除小鼠及SFP级4~8周龄C578B/L6小鼠,行破骨与成骨细胞共培养体系建立及培养。结果采用RT-PCR检查鉴定结果:HIF-1α基因条带长度经观察为112bp,依据净吸光值,对HIF-1α1/1成骨细胞对应的基因敲除率推算,结果90%。经观察Vhl基因条带长度为265bp,基因敲除率同上。相较野生型共培养,HIF-1α1/1共培养的成骨细胞中基因RANKL mRNA表达呈上调显示,HIF-1α1/1/Vhl1-1和Vh-1-共培养的成骨细胞中OPG mRNA表达上调,RANKL mRNA表达下调,有统计差异(P0.05)。结论激活低氧/HIF-1α通路后,成骨细胞对破骨细胞的分化功能抑制,阻断低氧/HIF-1α通路后,成骨细胞对破骨细胞的分化功能有促进作用。     

HIF-1α对颏舌肌发育和肌纤维类型的影响

目的 研究低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)对骨骼肌发育及肌纤维分型的影响。方法 将HIFflox/-转基因小鼠和骨骼肌环化重组酶(muscle creatine kinase-cyclization recombination enzyme, MCK-Cre)转基因小鼠交配,子代中获得HIFflox/- Cre⁺小鼠互交,得到骨骼肌HIF-1α条件性敲降的HIFflox/floxCre⁺基因型小鼠(C₅₇BL/6J),取新生小鼠尾尖与骨骼肌组织鉴定基因型及敲降效率。随机选取HIF-1α敲降小鼠(KO)和野生型小鼠(WT)各10只,取颏舌肌组织总RNA,使用荧光定量PCR检测4种肌纤维类型(Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅱx)在不同基因型小鼠骨骼肌中的表达差异。结果 HIF-1α在基因敲除小鼠(KO)的骨骼肌中的表达量较野生型小鼠(WT)有明显降低(P<0.05)。相对于野生型小鼠(WT),基因敲除小鼠(KO)颏舌肌的Ⅰ、Ⅱa、Ⅱx型肌纤维表达量有降低趋势,而Ⅱb型纤维表达量有升高趋势。结论 Cre-loxP系统成功构建骨骼肌特异性敲除HIF-1α的转基因小鼠模型。HIF-1α在成肌分化过程中能够促进肌纤维Ⅰ、Ⅱa、Ⅱx分化,抑制Ⅱb纤维分化。     

骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎氧化损伤及低氧诱导因子的作用

目的通过骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、脂质过氧化物(LPO)及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、低氧诱导因子-2α(HIF-2α)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨骨灵膏及其拆方制剂抗骨关节炎(OA)软骨损伤的作用机制。方法 60只雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、骨灵膏组、骨膏组、灵膏组及塞来昔布组6组,每组10只,除正常组外其余各组采用冷固法6周建立OA模型,造模成功后除正常组和模型组给予生理盐水灌胃外,其余组分别给予骨灵膏、骨膏、灵膏及塞来昔布灌胃,给药8周后,取大鼠血清、膝关节软骨组织,采用ELISA检测血清SOD、MDA、LPO的含量,免疫荧光法检测HIF-1α、HIF-2α、VEGF的阳性表达,FQ-RT-PCR检测HIF-1α、HIF-2α、VEGF mRNA的表达。结果模型组与正常组及骨灵膏组比较能显著增加血清MDA、LPO的含量(P0.01),增加SOD的含量(P0.01);骨灵膏组与骨膏及灵膏比较能增加SOD的含量(P0.01),降低MDA、LPO的含量(P0.01);模型组与正常组比较能显著增加软骨HIF-1α、HIF-2α、VEGF的阳性率(P0.01),骨灵膏组与模型组、骨膏组、灵膏组、塞来昔布组比较能降低HIF-1α、HIF-2α、VEGF的阳性率(P0.01);模型组与正常组比较能显著增加软骨HIF-1α、HIF-2α、VEGF mRNA的表达(P0.01),骨灵膏组与模型组、骨膏组、灵膏组、塞来昔布组比较能降低HIF-1α、HIF-2α、VEGF mRNA的表达(P0.01)。结论骨灵膏可能通过增加血清SOD含量,降低LPO、MDA的含量,纠正OA氧代谢失衡对软骨组织的氧化损伤,抑制组织HIF-1α、HIF-2αmRNA的表达,从而抑制异常低氧环境HIF-1α向HIF-2α的转化,降低其下游靶基因VEGF mRNA在软骨组织的表达,减轻了关节骨赘的形成,对抗OA软骨损伤,其作用明显优于骨膏、灵膏、塞来昔布。     

低氧诱导因子-1α在小鼠椎体发育中的表达及其意义

目的探讨低氧诱导因子（HIF）-1α在小鼠胚胎椎体发育过程中的表达规律及其调节作用。方法在解剖显微镜及光学显微镜下观察小鼠胚胎椎体骨发育的演变过程;应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和免疫组化方法,检测小鼠胚胎椎体在发育不同时段HIF—-1α表达状况,及与血管内皮生长因子（VEGF）、软骨和骨标记基因的表达关系。结果胚胎第13．5天（E13．5）时,软骨性脊柱形成;E15．5时,椎体内形成小的骨化核,之后初级骨化中心逐渐增大,并向头尾两端延伸。E13．5时。可检测到HIF—-1α的mRNA表达,E14．5时,HIF—-1α的表达水平达高峰（组间比较P〈0．05）。其后逐渐降低,至出生前只有很少量表达;VEGF mRNA表达时相同HIF—-1α表达一致;软骨和骨标记基因的表达与形态学演变相符。E14．5时,免疫组化检测到HIF—-1α蛋白在椎体中心表达,延续表达时间较mRNA长。结论椎体发育表现为软骨内成骨过程,存在低氧环境,伴随有HIF—-1α mRNA及蛋白量的增加及其下游基因VEGF的表达,这可能与HIF—-1α激活下游基因启动椎体软骨内骨化过程有关。     

严重烧伤对SRC-3基因敲除小鼠肝脏NF-κB表达及核转位的影响

目的研究烧伤对SRC-3基因敲除小鼠转录因子NF-κB表达及核转位的影响.方法以SRC-3基因敲除小鼠为实验组,以野生型小鼠为对照组,以小鼠15%～20%TBSAⅢ度烧伤为实验模型,观察两组在严重烧伤前、烧伤后1、6、12 h肝脏总蛋白NF-κB、IκB-α表达及核蛋白NF-κB转位情况.结果野生型小鼠致伤后肝脏总蛋白中NF-κB各时相点除伤后6 h有所下降外(P<0.05),其余相差不显著,而SRC-3基因敲除小鼠致伤后肝脏总蛋白中NF-κB有增加的趋势;野生型小鼠致伤后肝脏NF-κB核转位明显增加(P<0.01),6 h达到峰值,而SRC-3基因敲除小鼠致伤后肝脏NF-κB核转位亦有所增加,但明显低于野生型小鼠(P<0.01);野生型小鼠致伤后肝脏总蛋白中IκB-α表达变化不明显(P>0.05),而SRC-3基因敲除小鼠致伤后肝脏总蛋白中IκB-α表达伤后1 h明显下降(P<0.01),之后均高于正常(P<0.01).结论严重创伤后SRC-3基因敲除小鼠NF-κB的表达及核转位与野生型小鼠有明显的差异,SRC-3的缺失可能部分抑制了NF-κB对创伤应激的调控作用.     

乳腺癌组织中PTEN、VHL的表达及其对HIF-1α的影响

目的研究乳腺癌组织中肿瘤抑制基因PTEN、VHL的表达及其对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,并探讨其意义。方法将乳腺癌患者80例(观察组,包括浸润性乳腺癌67例、乳腺原位癌13例)和正常乳腺组织20份(名)(正常对照组)制成组织芯片,采用免疫组织化学方法对组织芯片进行肿瘤抑制基因PTEN、VHL及HIF-1α检测。结果观察组中浸润性乳腺癌患者肿瘤抑制基因PTEN、VHL的表达为31.3%和31.3%,均低于乳腺原位癌84.6%和61.5%及正常对照组80.0%和75.0%(χ2=12.87、11.92、12.10、14.37,均P<0.01),观察组中浸润性乳腺癌患者HIF-1α的表达为74.6%,高于乳腺原位癌23.1%和正常对照组5.0%(χ2=12.94、30.78,均P<0.05)。肿瘤抑制基因PTEN、VHL阳性者中HIF-1α的表达为40.6%和24.1%,低于阴性者中HIF-1α的表达83.3%和90.1%(χ2=15.66、36.08,均P<0.01)。结论肿瘤抑制基因PTEN、VHL的低表达及HIF-1α的高表达与乳腺癌的浸润有关,肿瘤抑制基因PTEN、VHL的表达与HIF-1α的表达呈负相关。     

LPS诱导的急性炎性肝损伤中HIF-1α的表达

目的观察急性炎性肝损伤组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其可能机制。方法采用卡介苗(BCG)配合LPS建立小鼠急性炎性肝损伤模型;肝组织石蜡切片HE染色法观察肝脏炎症反应情况;免疫组化染色法检测HIF-1α和VEGF的表达;ELISA检测小鼠血清中TNF-α的水平。结果炎症组小鼠HIF-1α、VEGF和TNF-α的表达均显著增加(均P<0.01)。结论急性炎性肝损伤时高表达HIF-1α及其靶基因VEGF,炎症组织中VEGF表达水平的上调与HIF-1α表达的增加可能相关,而HIF-1α表达的增加可能与TNF-α的水平升高有关。     

肾透明细胞癌组织中BNIP3的表达及意义

目的 研究肾透明细胞癌中BNIP3表达及意义。 方法 收集肾癌手术切除的肾癌组织和对应癌旁正常肾组织新鲜标本,共30例。运用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法（Western blot）检测各组BNIP3、von Hippel-Lindan(VHL)、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况。并分析BNIP3与VHL、HIF-1α、VEGF表达相关性,及各个基因表达与临床病理参数间关系。 结果 实时荧光定量PCR检测结果示:在RNA水平,BNIP3、VHL在肾癌组织中表达水平低于癌旁正常肾组织(P<0.05), HIF-1α和VEGF在肾癌组织中表达水平高于癌旁正常肾组织(P<0.05),BNIP3表达与VHL、HIF-1α、VEGF无相关性,肾癌组织中BNIP3低表达与各个临床病理学特征无相关性。Western blot检测结果示:在蛋白水平,BNIP3、VHL在肾癌组织中表达水平低于癌旁正常肾组织(P<0.05), HIF-1α和VEGF在肾癌组织中表达水平高于癌旁正常肾组织(P<0.05)。BNIP3蛋白表达与VHL、HIF-1α、VEGF蛋白亦无相关性（P>0.05)。 结论 可能存在某种调控机制使BNIP3在肾透明细胞癌表达下调,且BNIP3低表达与VHL、HIF-1α、VEGF表达无相关性。     

MMP-9在Mip-1α敲除小鼠和Mip-1α受体敲除小鼠炎性细胞的表达

目的 分别检测巨噬细胞炎症蛋白-1α(Mip-1α)敲除小鼠、Mip-1α受体CCR1敲除小鼠和CCR5敲除小鼠腹腔炎性巨噬细胞和粒细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,探讨Mip-1α及其受体对于炎性细胞MMP-9表达的影响.方法 硫代乙醇酸钠分别诱发野生型小鼠、Mip-1α敲除小鼠、CCR1敲除小鼠和CCR5敲除小鼠无菌型腹腔炎,分别提取腹腔巨噬细胞和粒细胞,鉴定、纯化后, real-time PCR测定MMP-9表达.结果 Mip-1α敲除、CCR1敲除、CCR5敲除小鼠的巨噬细胞MMP-9表达低于野生型小鼠 (P<0.05),Mip-1α敲除和CCR5敲除小鼠中性粒细胞的MMP-9表达低于野生型小鼠(P<0.05),而CCR1敲除小鼠的中性粒细胞MMP-9表达高于野生型小鼠(P<0.05).结论 Mip-1α敲除和CCR5敲除可降低巨噬细胞和粒细胞MMP-9表达;CCR1敲除可降低巨噬细胞MMP-9表达,升高中性粒细胞MMP-9表达.     

ASIC1基因敲除对佐剂性关节炎小鼠关节软骨损伤的影响

目的 利用ASIC1基因敲除小鼠构建佐剂性关节炎(AA)模型，探讨敲除ASIC1对关节炎发病程度及关节软骨损伤的影响。方法 将野生型小鼠和基因敲除小鼠分别分为：正常组、模型组。通过观察足爪炎症情况进行关节炎评分，并测定继发侧足爪肿胀度；通过HE染色、免疫组化、TUNEL法、ELISA法检测关节软骨损伤及关节炎炎症情况。结果 基因敲除小鼠模型组的关节炎评分及足爪肿胀度低于野生型小鼠模型组；HE结果显示敲除ASIC1可减轻AA小鼠关节软骨的破坏情况；免疫组化结果显示敲除ASIC1可提高AA小鼠关节软骨中Ⅱ型胶原的表达；TUNEL法结果显示基因敲除小鼠模型组中软骨细胞的凋亡水平低于野生型小鼠模型组；ELISA法结果表明，敲除ASIC1可下调AA小鼠血清中高表达的促炎细胞因子IL-1β、TNF-α的水平。结论 敲除ASIC1可降低佐剂性关节炎发病程度及关节软骨的破坏水平。     

低氧诱导因子促内皮祖细胞活性的可行性研究

目的探讨在体外低氧诱导因子-1α(HIF-1α)促血管内皮祖细胞(EPCs)成血管活性的可行性.方法密度梯度法分离人外周血EPCs,电穿孔技术转染HIF-1α质粒至EPCs,RT-PCR法观察未转染/转染质粒在转染后3、12、20、72 h,HIF-1α及下游靶基因血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达含量的变化;免疫组化法检测常氧中转染前后HIF-1α蛋白表达、VEGF受体Flk-1蛋白表达在不同组质粒转染后的差异;ELISA法测定各组质粒转染后VEGF在培养基上清中释放含量及VEGF依赖性一氧化氮合成酶(eNOS)含量的改变.结果HIF-1α基因有效转染入EPCs;HIF-1αmRNA在未转染时即有表达,在HIF-1α质粒转染后3、12、20、72 h,含量较未转染时增加(P＜0.05);HIF-1α过表达诱导VEGF表达上调(P＜0.05).Flk-1蛋白在常氧下有一定含量,在HIF-1α质粒转染后Flk-1蛋白表达进一步增加.VEGF释放含量在HIF-1α过表达组显著增加(P＜0.05);HIF-1α诱导eNOS含量增加,并与时间、VEGF刺激量成正比.结论HIF-1α质粒在体外能有效的转染入EPCs,促进其下游靶基因及受体表达,引起相应的功能学改变,促EPCs向内皮细胞分化、扩增,可进一步应用于基因治疗.     

缺氧诱导因子2α基因敲除对小鼠动脉粥样硬化发生的影响

目的 明确缺氧诱导因子（hypoxia inducible factor, HIF）-2α 对动脉粥样硬化病变的影响。方法 引进获得HIF-2α 基因LoxP 标记小鼠和Mx-Cre 转基因小鼠,利用Cre/LoxP 系统建立条件性HIF-2α 基因敲除的小鼠模型,同时以Mx-Cre 阴性的野生型小鼠和ApoE 基因缺陷小鼠为对照,高脂饲料喂养8 周后对小鼠主动脉进行HE 染色,观察动脉粥样硬化病变形成情况。结果 HIF-2α-LoxP 标记小鼠和Mx-Cre 转基因小鼠交配后,经过两次传代和基因型鉴定筛选,获得Mx-Cre阳性且HIF-2α 纯合LoxP 标记小鼠,采用聚肌胞腹腔注射后可成功建立HIF-2α 基因敲除小鼠模型。高脂喂养8 周后,ApoE 基因缺陷小鼠主动脉呈动脉粥样硬化样改变,野生型小鼠可见轻度内膜增生,而HIF-2α 基因敲除小鼠主动脉内膜未见增生。结论 HIF-2α 基因敲除可抑制小鼠动脉粥样硬化病变的形成,提示针对HIF-2α 的基因治疗可能是动脉粥样硬化防治策略的新方向。     

PTH敲除小鼠体内血管形成因素对骨折愈合的影响

目的:探究内源性甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)缺失是否通过降低血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,导致骨折愈合过程中血管再生减弱,延迟骨折愈合?方法:构建PTH基因敲除(PTHKO)小鼠的骨折模型,摄X线片观察骨折愈合情况,用免疫组化方式检测骨合成代谢以及血管形成指标?结果:PTHKO小鼠VEGF表达量下降,血小板内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhension molecule,PEGAM)免疫组化阳性减少,骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)活性下降,骨折愈合延迟?结论:内源性PTH缺失可能通过减少间充质干细胞或成骨细胞释放VEGF,导致骨折端血管减少,成骨活性受到抑制,从而影响软骨内成骨,最终导致骨折愈合延迟?     

小鼠椎体发育中低氧诱导因子-1α的表达

目的探讨低氧诱导因子-1α(H IF-1α)在小鼠椎体发育过程中的表达。方法动态观察小鼠椎体发育的演变过程;应用逆转录-聚合酶链反应检测H IF-1α在各发育时段的表达。结果胚胎第13.5天(E13.5)时,软骨性脊柱形成,可检测到H IF-1α的mRNA表达;E14.5时,H IF-1α的表达水平达高峰(P<0.05);E15.5时,椎体内形成小的骨化核,之后逐渐增大形成初级骨化中心,并向头尾两端延伸,H IF-1α仍高表达,其后快速降至低水平。结论椎体发育表现为软骨内成骨过程,存在低氧环境,伴随H IF-1αmRNA的规律性表达,这可能与椎体软骨内骨化过程启动有关。     

FGFR2功能增强对软骨内成骨作用的机制研究

目的：利用模拟人Apert综合征的FGFR2S252W／＋小鼠模型,研究ERK信号通路在成纤维细胞生长因子受体2（FG‐FR2）功能持续增强对软骨内成骨过程的影响。方法动物繁殖、鉴定后分为FGFR2功能获得突变型和同窝野生型。于出生后6周获取骨髓间充质干细胞（BMSCs）进行体外培养及2代BMSCs成软骨诱导,对ERK信号蛋白检测,并比较Col2、Col10、OC、OP基因的表达。加入ERK信号通路阻滞剂PD98059后再次培养观察相应基因的表达。胚胎骨体外培养技术比较 ERK信号通路在FGFR2功能持续增强对软骨内成骨过程的影响。结果在体外BMSCs成软骨诱导后观察发现,FGFR2功能突变小鼠BM‐SCs表达总ERK蛋白量无明显变化,但磷酸化增强。FGFR2S252W／＋小鼠BMSCs表达Col2、Col10较野生型弱,但OC、OP基因强于野生型小鼠。加入ERK信号通路阻滞剂PD98059培养后,对Col2、Col10基因影响不大,但OC、OP表达量增高。并且在胚胎骨体外培养过程中,发现PD98059治疗组能纠正FGFR2功能持续增强所致软骨内成骨发育障碍。结论 ERK信号通路是FG‐F R2下游影响软骨内成骨的关键通路,特别对软骨内成骨后期成骨过程影响巨大。其信号通路阻滞剂对软骨内成骨发育障碍有一定救治作用。