应用RT—PCR和基因扫描分析TCR Vβ谱系的CDR3长度了解急性单核细胞白血病病人克隆性增殖T细胞

目的：了解急性单核细胞白血病（AML-M5）病人TCR Vβ亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法：利用RT-PCR分别扩增9例M5病人外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3,了解TCR Vβ谱系的表达情况。PCR 产物进一步经基因扫描分析,确定T细胞克隆性。结果：9例AML-M5病人仅存在1-10个Vβ亚家族T细胞,而正常血标本则可检测到24个Vβ亚家族。基因扫描分析显示：8例病人的某些Vβ亚家族出现这一主峰图象（寡克隆性T细胞）。Vβ2寡克隆T细胞发现于6例病人中。结论：结果提示AML-M5病人存在克隆性增殖的T细胞,主要为Vβ2亚家族,推测这可能是对白血病细胞（M5）相关抗原的特异性免疫反应并可能具有抗白血病的活性。     

CML患者外周血TCR Vδ亚家族T细胞的谱系变化研究

目的 了解慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者慢性期(chronic phase,CP)和缓解期(complete remission,CR)外周血T细胞受体(T cell receptor,TCR)Vδ亚家族T细胞的分布和克隆性情况.方法 利用RT-PCR扩增8例CML-CP和8例CML-CR患者外周血T细胞中8个Vδ亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解TCR Vδ亚家族T细胞的分布和利用情况;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性.10例健康人外周血作为对照.结果 8例CML-CP患者外周血T细胞平均表达(3.25±0.89)个Vδ亚家族,主要以Vδ1、Vδ2和Vδ3的表达为主,而8例CR期患者则平均表达(3.50±0.76)个Vδ亚家族,主要集中在Vδ1、Vδ2、Vδ3和Vδ8中表达;两组与健康对照组(3.50±0.52)比较无统计学意义.此外,Vδ8表达频率在CML-CR患者(5/8)中略高于健康人(3/10)和CML-CP患者(2/8).基因扫描绝大多数患者和健康人外周血TCR Vδ亚家族T细胞均存在克隆性增殖现象,主要以Vδ1-Vδ3为主,但在CML-CR患者中,表达V87亚家族的两例样本均呈克隆性增殖,这在10例健康人中均未检测到.结论 3组样本的外周血T细胞中TCR Vδ谱系和克隆性增殖类似,提示CML患者T细胞免疫抑制可能并不主要累及TCR Vδ谱系变化,并在CML-CR期所出现了一些不同的Vδ表达和克隆模式.     

CML患者外周血TCR Vγ亚家族T细胞的谱系变化研究

目的 探讨慢性粒细胞白血病（CML）慢性期（CP）和缓解期（CR）病人外周血T细胞中T细胞受体（TCR）Vγ基因谱系的分布和克隆性情况。方法 利用RT-PCR检测8例CML-CP和8例CML-CR病人外周血T细胞3个TCR Vγ亚家族的表达,了解TCR Vγ亚家族T细胞的分布和利用情况;阳性产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性。10例健康成人外周血作为对照。 结果 8例CP期和8例CR期的CML病人外周血T细胞分别平均表达（1.88±0.64,2.13±0.83）个亚家族,两者比较尚无统计学差异,但均明显低于健康对照组（P=0.000,P=0.036）。CP和CR期病人TCR VγⅢ的表达率明显低于健康对照组（2.9±0.32）（P=0.013,P=0.043）,基因扫描显示CML-CP 和CML-CR出现克隆模式的改变主要集中在TCR VγⅡ亚家族。结论 CP期病人外周血 TCR Vγ基因谱系出现限制性利用和克隆性增殖T细胞,主要可能与病人处于细胞免疫抑制状态有关,即使CR期病人其T细胞仍处于一定程度的免疫抑制状态。     

肺癌患者TCR Vβ亚家族表达及记忆性T细胞表达的研究

目的 探讨肺癌患者外周血T细胞及胸水肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)的T细胞受体(TCR)Vβ亚家族及记忆性T细胞的表达情况.方法 分离健康人和肺癌患者的T细胞,采用流式方法检测Vβ24个亚家族及CD45RO和CD28的表达情况,统计分析Vβ24个亚家族及记忆性T细胞的特点.结果 43例肺癌患者外周血TCR Vβ亚家族主要...     

APL细胞诱导脐血TCR Vα和Vβ亚家族T细胞增殖和细胞毒性研究

目的 了解急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞体外诱导脐血T细胞的TCR Vα和Vβ亚家族克隆性增殖及针对APL细胞特异性杀伤情况.方法 采用混合淋巴细胞和肿瘤细胞培养(MLTC)方法,利用APL细胞体外诱导脐血T细胞增殖,用RT-PCR和基因扫描分析MLTC后T细胞的29个TCR Vα亚家族基因和24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解各亚家族的T细胞克隆性增殖特点,并应用LDH法分析诱导增殖的T细胞针对APL细胞特异性杀伤作用.结果 经APL细胞刺激后增殖的脐血T细胞表达部分Vα和Vβ谱系基因,并在Vα10、Vβ5和Vβ15出现有克隆增殖趋势,诱导后T细胞对APL细胞的杀伤性均高于未诱导组的T细胞.结论 APL细胞体外诱导脐血T细胞出现抗原相关的TCR Vα和Vβ亚家族优势利用和克隆性增殖;诱导后的T细胞对APL细胞具有特异性细胞毒性作用.     

再生障碍性贫血儿童TCR Vβ亚家族T细胞克隆性增殖及其与HLA—DRB1＊15的关系

【目的】探讨再生障碍性贫血（再障）儿童TCR Vβ24个亚家族T细胞克隆性及其与HLA—DRB1＊15的关系。【方法】再障儿童17例（SAA14例，MAA3例），采用RT—PCR和基因扫描分析外周血或骨髓TCR Vβ24个亚家族基因的表达和克隆性，SSP—PCR检测HLA—DR。【结果】再障儿童外周血T细胞仅表达4—22个Vβ亚家族，而正常儿童外周血T细胞几乎表达所有Vβ亚家族。12例（包括初诊SAA4例，CR4例，复发1例和MAA3例）再障儿童存在不同程度T细胞克隆性增殖，但个体间差异较大，正常外周血和骨髓均为多克隆性T细胞。5例HLA—DRB1＊15（＋）患儿中4例（80％）有寡克隆T细胞，而12例HLA—DRB1＊15（-）患儿中仅3例（25％）见寡克隆T细胞，两组比较差异具有显著意义（P〈0．05）。伴寡克隆T细胞的6例S从儿童经免疫抑制治疗后达CR；不伴寡克隆T细胞的5例SAA儿童接受免疫抑制治疗，其中CRI例，PR2例、无效1例，死亡1例。【结论】大多数再障儿童存在T细胞克隆性增殖，寡克隆T细胞多见于SAA，尤其是HLA—DRB1＊15（＋）的SAA儿童。TCR VβT细胞克隆的检测对进一步了解再障免疫功能状态、预测免疫抑制治疗效果具有一定的参考价值。     

再生障碍性贫血儿童TCR Vβ亚家族T细胞克隆性增殖及其与HLA—DRB1＊15的关系

 【目的】探讨再生障碍性贫血（再障）儿童TCR Vβ24个亚家族T细胞克隆性及其与HLA—DRB1＊15的关系。【方法】再障儿童17例（SAA14例，MAA3例），采用RT—PCR和基因扫描分析外周血或骨髓TCR Vβ24个亚家族基因的表达和克隆性，SSP—PCR检测HLA—DR。【结果】再障儿童外周血T细胞仅表达4—22个Vβ亚家族，而正常儿童外周血T细胞几乎表达所有Vβ亚家族。12例（包括初诊SAA4例，CR4例，复发1例和MAA3例）再障儿童存在不同程度T细胞克隆性增殖，但个体间差异较大，正常外周血和骨髓均为多克隆性T细胞。5例HLA—DRB1＊15（＋）患儿中4例（80％）有寡克隆T细胞，而12例HLA—DRB1＊15（-）患儿中仅3例（25％）见寡克隆T细胞，两组比较差异具有显著意义（P〈0．05）。伴寡克隆T细胞的6例S从儿童经免疫抑制治疗后达CR；不伴寡克隆T细胞的5例SAA儿童接受免疫抑制治疗，其中CRI例，PR2例、无效1例，死亡1例。【结论】大多数再障儿童存在T细胞克隆性增殖，寡克隆T细胞多见于SAA，尤其是HLA—DRB1＊15（＋）的SAA儿童。TCR VβT细胞克隆的检测对进一步了解再障免疫功能状态、预测免疫抑制治疗效果具有一定的参考价值。     

AML-M1型患者TCR Vβ T细胞家族表达抑制情况

目的 了解急性髓细胞白血病Ｍ１亚型（ＡＭＬ－Ｍ１）患者ＴＣＲ Ｖβ亚家族Ｔ细胞的分布特点。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ扩增８例Ｍ１患者外周血的单个核细胞的ＴＣＲ Ｖβ２４个亚家族基因,分析了其ＴＣＲ Ｖβ亚家族的利用情况。结果 不同标本中可检测到２～８Ｖβ亚家族的Ｔ细胞,不同患者中Ｖβ亚家族Ｔ细胞颁不尽相同。结论 Ｍ１患者外周血ＴＣＲ Ｖβ Ｔ细胞家族表达部分受抑制,提示患者细胞免疫功能的部分缺陷。     

甲氰咪呱对K562细胞诱导脐血T细胞TCR Vβ亚家族克隆性的影响

2细胞诱导组的T细胞对K562细胞的特异性杀伤作用显著增强(P<0.01).3组均呈现不同程度的T细胞TCR Vβ亚家族选择性利用,均有TCR Vβ21亚家族呈克隆性增殖.结论 甲氰咪呱可协助增强bcr-abl抗原刺激的特异性抗CML T细胞作用.     

基因扫描分析一例cGVHD病人稳定性克隆性扩增的TCR Vβ6，Vβ17和Vβ19T细胞

目的　分析慢性移植物抗宿主病 (cGVHD)中TCRVβ谱系的分布和克隆性。方法　应用RT PCR扩增一例CML异基因骨髓移植后cGVHD病人第 35,39,4 3和 4 5个月的外周血单个核细胞的TCRVβ 2 4个亚家族的CDR3,了解病人TCRVβT细胞的表达 ,PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性。结果　cGVHD病人每个标本存在 14 16个Vβ家族T细胞 ;寡克隆T细胞可见于Vβ6 ,16 ,17,19和 2 1亚家族 ,稳定性克隆性TCRVβ6、17和 2 1T细胞可见于全部标本。结论　cGVHD病人存在倾斜性分布和克隆性生长T细胞 ,它可能与cGVHD的发生有关     

晚期肺癌患者胸水及外周血中T细胞受体(TCR)Vβ亚家族表达的对比研究

目的探讨晚期肺癌患者(Ⅲ～Ⅳ期)胸水及外周血中T细胞受体Vβ亚家族的表达,比较二者的异同。方法收集2010年7月至2012年5月共89例临床诊断为肺癌晚期的患者胸水及外周血标本,采用流式细胞仪方法测定其T细胞受体Vβ亚家族的表达情况,统计分析胸水及外周血中Vβ亚家族表达的异同。结果 89例晚期肺癌外周血和胸水均主要高表达Vβ3和Vβ9,分别为Vβ3(16/89)、Vβ9(18/89)和Vβ3(20/89)、Vβ9(15/89);患者胸水与外周血Vβ亚家族存在差异,部分差异有统计学意义(P<0.05),部分差异无统计学意义(P>0.05),其中胸水中Vβ3的高表达相对于患者外周血和健康人差异均有统计学意义(P<0.05)。结论晚期肺癌患者胸水及外周血中Vβ亚家族的表达不全相同;晚期肺癌胸水中的高表达Vβ亚家族少于外周血,其中Vβ3在胸水中可能有特异性。此研究为晚期肺癌的生物治疗及T细胞过继免疫疗法在临床中的应用奠定理论基础。     

bcr-abl多肽诱导健康人外周血αβ+T细胞克隆性增殖

目的 分析bcr-abl多肽诱导健康人外周血T细胞TCR Vα和TCR Vβ基因选用和克隆性增殖情况,了解bcr-abl多肽相关的αβ+T细胞克隆.方法 利用T细胞液体培养法,应用bcr-abl多肽(KQSSKALQR)联合IL-2+抗CD3单抗+抗CD28单抗体外诱导T细胞(HLA-A0201限制性)扩增,同时设不...     

KG1a细胞体外诱导人外周血T细胞杀伤活性和TCR VβT细胞增殖的研究

【摘　要】　目的　了解急性髓系白血病KG1a细胞体外诱导人外周血T细胞的特异性细胞毒作用和T细胞受体(TCR) Vβ谱系表达和克隆性情况。方法　分别以Jurkat和Raji细胞作为阳性和阴性对照,建立TCR Vβ谱基因扫描技术,并用其检测5例健康个体T细胞克隆表型。采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养方法,以照射后的KG1a细胞作为刺激原体外诱导外周血单个核细胞增殖,应用LDH释放法检测不同效靶比时诱导前后T细胞杀伤KG1a细胞的活性,同时利用基因扫描技术分析诱导后TCR Vβ亚家族的克隆性增殖特点。结果　基因扫描显示5例健康人全部TCR Vβ谱型均呈高斯(钟型)分布,各亚家族表达频率接近,但呈现不同的多态性和长度分布。KG1a细胞可以诱导出呈单克隆、寡克隆或寡克隆趋势生长的亚家族T细胞,并具有特异性识别和杀伤KG1a细胞的功能。结论　KG1a细胞在体外可诱导T细胞呈克隆性增殖,此优势增殖的克隆性T细胞具有特异性细胞毒作用,对KG1a细胞具有选择性杀伤作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞受体β链V区家族的表达及意义

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血T淋巴细胞受体β链V区(TCR BV)各家族谱系的表达及其临床意义方法选择32例CHB患者(CHB组)及20例健康体检者(健康对照组),分别采集其外周血、肝素钠抗凝,分离单个核细胞,提取RNA并应用RT-PCR扩增TCR RV的24个家族,进行两组间扩增产物定量分析结果 CHB组△Ct5、△Ct7、△Ct15、△Ct22、△Ct23值与健康对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)结论 CHB组TCR BV 24个家族BV5、BV7、BV15、BV22、BV23的扩增产物含量均较健康对照组下降,提示T淋巴细胞免疫应答可能参与CHB的发病过程     

TCR Vβ7.1基因转染外周血单个核细胞后表达及抗癌作用

目的研究TCRVβ7.1基因在恢复肝癌病人细胞毒性T细胞(CTL)功能方面的作用。方法以RTPCR方法扩增TCRVβ7.1基因并构建Vβ7.1-pLXSN表达载体。重组体以脂质体转染外周血单个核细胞(PBLs),流式细胞仪检测转染效率,DNALadder实验和透射电镜观察转染后T细胞诱导肿瘤细胞凋亡情况。结果TCRVβ7.1基因转染PBLs后可有效表达并诱导肿瘤细胞凋亡。结论该方法为T细胞介导的肿瘤基因治疗提供了有效途径。     

应用RT-PCR和基因扫描分析TCRVβ谱系的CDR3长度了解急性单核细胞白血病病人克隆性增殖T细胞(英文)

目的　了解急性单核细胞白血病 (AML M5 )病人TCRVβ亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法　利用RT PCR分别扩增 9例M5病人外周血单个核细胞的TCRVβ2 4个亚家族基因的CDR3,了解TCRVβ谱系的表达情况。PCR产物进一步经基因扫描分析 ,确定T细胞克隆性。结果　 9例AML M5病人仅存在 1 10个Vβ亚家族T细胞 ,而正常血标本则可检测到 2 4个Vβ亚家族。基因扫描分析显示 :8例病人的某些Vβ亚家族出现一主峰图象 (寡克隆性T细胞 )。Vβ2寡克隆T细胞发现于 6例病人中。结论　结果提示AML M5病人存在克隆性增殖的T细胞 ,主要为Vβ2亚家族 ,推测这可能是对白血病细胞 (M5 )相关抗原的特异性免疫反应并可能具有抗白血病的活性。     

TCR Vβ17．1基因转染外周血单个核细胞后表达及抗癌作用

目的研究TCR Vβ7．1基因在恢复肝癌病人细胞毒性T细胞(CTL)功能方面的作用。方法以RT-PCR方法扩增TCR Vβ7．1基因并构建Vβ7．1-pLXSN表达载体。重组体以脂质体转染外周血单个核细胞(PBLs)，流式细胞仪检测转染效率，DNA Ladder实验和透射电镜观察转染后T细胞诱导肿瘤细胞凋亡情况。结果TCR Vβ7．1基因转染PBLs后可有效表达并诱导肿瘤细胞凋亡。结论该方法为T细胞介导的肿瘤基因治疗提供了有效途径。     

鼻咽癌细胞株体外诱导同种异体T细胞TCR VβCDR3谱型和细胞毒性分析

目的 用鼻咽癌细胞株CNE2体外负载同种异体树突状细胞(dendritic cell,DC)诱导T淋巴细胞,使之活化为细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL),观察其体外特异性杀伤和克隆性增殖.方法 用GM-CSF,IL-4和TNF-α体外诱导健康志愿者外周血单核细胞,用CNE2负载,使之分化为成熟DC,流式细胞仪检测负载前后DC的表型特征.在IL-2的作用下,用负载CNE2抗原的DC诱导自身T细胞生成特异性CTL.乳酸脱氢酶释放法检测其特异性杀伤活性;采用免疫谱型分析技术分析T细胞的克隆性.结果 健康志愿者外周血单核细胞体外在GM-CSF,IL-4和TNF-α诱导下获得具有典型表型特征的成熟DC,其诱导的CTL对CNE2有明显的特异性杀伤作用;PBMC的TCR Vβ CDR3谱型呈高斯分布,而诱导后的T细胞部分家族出现优势表达.结论 负载鼻咽癌抗原的同种异体DC所诱导的CTL在体外对鼻咽癌细胞有特异性杀伤作用,优势表达的TCR Vβ CDR3家族对鼻咽癌治疗有潜在的临床应用价值.     

整合素αVβ5在卵巢上皮性癌中的表达及临床意义

目的：探讨整合素αVβ5在卵巢上皮性癌中的表达及其与微血管密度(microvessel density,MVD)和临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学PV两步法,分别测定15例正常卵巢组织、15例良性卵巢上皮性肿瘤、10例交界性卵巢上皮性肿瘤、57例卵巢上皮性癌组织中整合素αVβ5的表达及MVD。结果：(1)卵巢上皮性癌中整合素αVβ5的阳性率及MVD值高于正常卵巢组织、良性卵巢上皮性肿瘤和交界性卵巢上皮性肿瘤(P＜0.01);(2)卵巢上皮性癌中整合素αVβ5的阳性率及MVD值随临床分期、组织分级的升高而增加(P＜0.05);(3)卵巢上皮性癌中整合素αVβ5的表达强度与MVD值之间呈正相关(r=0.545,P＜0.05);(4)卵巢上皮性癌中整合素αVβ5表达阳性组患者的生存率明显低于整合素αVβ5表达阴性组(P＜0.05)。结论：整合素αVβ5可能通过介导血管新生参与卵巢上皮性癌的发生、发展、侵袭和转移,整合素αVβ5是卵巢上皮性癌患者的不良预后指标。     

膜性肾病患者临床病理特点及外周血T及Th细胞亚群分析

100例膜性肾病患者,根据24 h蛋白尿、血清白蛋白水平分为中高危组78例,低危组22例。另取同期体检的健康志愿者66名为对照组。流式细胞术检测外周血T及Th细胞亚群水平。检测结果显示,间质炎性细胞浸润、肾小管急性病变区在中高危组与低危组之间差异有统计学意义(P<0.05)。膜性肾病患者中IgG4荧光强度最高,IgG2荧光强度最弱。T细胞亚群中中高危组和低危组CD3~+CD45~+、CD3~+CD4~+、CD4~+/CD8~+明显高于对照组(P<0.05)。Th细胞亚群中Th9、Th1、Th2、Th2/Th9在各组间差异有统计学意义(P<0.05);Th9、Th1、Th2水平明显低于对照组,Th2/Th9明显高于对照组(P<0.05)。结果证明,尿蛋白量越大,膜性肾病患者肾脏急性和慢性病变程度越严重;中高危组患者IgG4为主沉淀,低危组患者IgG1为主沉淀;膜性肾病患者外周血T细胞亚群以CD4~+T细胞为主,伴随Th9、Th1、Th2水平明显升高, Th2/Th9值下降。