糖络宁含药血清对高糖环境下RSC96细胞Keap1/Nrf2/Bcl-2途径的作用机制研究

目的针对糖尿病周围神经病变氧化应激的核心发病机制,以Keap1/Nrf2/Bcl-2途径为切入点,观察糖络宁对高糖环境下雪旺细胞的氧化应激和细胞凋亡的影响,探讨糖络宁防治DPN的可能作用机制。方法采用150 mmol/L葡萄糖培养雪旺细胞,随机分为空白对照组(Control)、高糖组(High Glucose)、α-硫辛酸含药血清组(ALA)、糖络宁含药血清组(TLN)。干预36 h后,应用流式细胞仪检测高糖环境下雪旺细胞超氧自由基和细胞凋亡,应用JC-1探针观察高糖环境下雪旺细胞线粒体膜电势(MMP),应用高内涵分析(HCA)法和Western Blot分析高糖环境下雪旺细胞Keap1/Nrf2通路中Keap1、Nrf2、HO-1和γGCS蛋白表达的变化及细胞凋亡调节蛋白Bcl-2、Bax、Cyto C和Caspase-3的蛋白表达的变化。结果高糖干预36 h后,与空白对照组比较,高糖组细胞凋亡、ROS含量增加,MMP降低(P<0.01);与高糖组比较,糖络宁组能够降低细胞凋亡和ROS含量,增加MMP(P<0.05或P<0.01)。HCA和Western Blot分析结果显示,与空白对照组比较,高糖组Keap1、Nrf2、HO-1和γGCS增加(P<0.01或P<0.05);与高糖组比较,糖络宁组能进一步增加Keap1、Nrf2、HO-1和γGCS蛋白表达(P<0.01或P<0.05)。与空白组比较,高糖组Bcl-2、Bax、Cyto C和Caspase-3蛋白表达增加(P<0.01或P<0.05);与高糖组比较,糖络宁组能够增加Bcl-2蛋白表达,降低Bax、Cyto C和Caspase-3蛋白表达(P<0.01或P<0.05)。结论糖络宁能够抑制高糖环境下雪旺细胞的氧化应激和细胞凋亡,与上调Keap1/Nrf2通路的蛋白表达对抗氧化应激,调控Bcl-2相关细胞凋亡通路的蛋白表达从而抑制细胞凋亡有关。     

六味地黄丸通过Nrf2/HO-1通路抗氧化应激防治阿尔茨海默病的机制研究

目的 观察六味地黄丸通过Nrf2/HO-1通路对H₂O₂诱导海马神经元细胞(HT22)氧化损伤的保护作用,探讨其防治阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)的作用机制。方法 (1)以过氧化氢(Hydrogen peroxide,H₂O₂)诱导HT22细胞,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,DCFH-DA荧光染色法检测细胞内ROS含量,构建基于氧化应激损伤的早期AD细胞模型;(2)制备六味地黄丸含药血清(Medicated Serum of Liuwei Dihuang Pill,MSLDP),分别设置空白组、模型组、MSLDP组,检测细胞内SOD活力、MDA及ROS含量的变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞内Nrf2、HO-1及NQO1等因子的mRNA的转录水平及蛋白表达量的变化;(3)采用Nrf2的抑制剂(ML385)抑制细胞内Nrf2的激活,RT-qPCR及Western blot法检测各组细胞内Nrf2、H...     

神经复元方对原代大鼠海马神经元BDNF/TrKB信号通路影响的研究

目的:研究神经复元方含药血清对原代大鼠海马神经元BDNF/TrkB信号通路及突触可塑性的影响,探讨治疗PSD的部分分子机制。方法:采用原代大鼠海马神经元氧化应激损伤模型,引入BDNF/TrkB通路抑制剂(K252a),分为正常对照组、H₂O₂培养组、含药血清+H₂O₂培养组、含药血清+K252a+H₂O₂组、K252a+H₂O₂组,用定量RT-PCR、免疫印迹法检测BDNF/TrkB信号通路相关蛋白(基因)表达水平,观察海马神经元突触的超微结构。结果:H₂O₂加入含药血清组突触密度增大,突触后致密物厚度增厚。SYNA、GAP-43和SYN1 mRNA水平和蛋白表达水平在含药血清+H₂O₂培养组比H₂O₂组明显提高(P<0.01)。突触相关蛋白在含药血清+K252a+H₂O₂组显著低于对照组和含药血清+H₂O₂培养组(P<0.01)。结论:神经复元方能修复海马神经元氧化应激损伤模型的突触可塑性,可能是通过介导BDNF/TrKB信号通路调节SYNI、SYNA基因,促进相关蛋白表达。     

异鼠李素对H2O2诱导的肠上皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:评价异鼠李素对H₂O₂诱导的大鼠肠上皮细胞IEC-6氧化应激损伤的保护作用及机制。方法:MTT实验筛选异鼠李素对IEC-6细胞的安全作用浓度用于评价抗H₂O₂诱导的氧化应激损伤功效。设正常对照组、H₂O₂组、N-乙酰半脱氨酸(NAC)组(10μmol/L)、异鼠李素低剂量组(20μmol/L)、异鼠李素中剂量组(40μmol/L)及异鼠李素高剂量组(100μmol/L)。正常对照组常规培养，H₂O₂组用500μmol/L H₂O₂处理，NAC及异鼠李素组分别用10μmol/L NAC,20、40、100μmol/L异鼠李素预处理细胞相应时间后，用500μmol/L H₂O₂继续培养。流式细胞术检测细胞凋亡及ROS水平，试剂盒检测细胞中MDA含量及SOD活性，Western blot检测细胞中Nrf2/HO-1、PI3K/...     

黄芪甲苷对H2O2诱导心肌细胞凋亡及相关调控蛋白表达的影响

目的：研究黄芪甲苷对H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡及相关调控蛋白Hsp-70、Caspase-3、Bcl-2、Bax的影响。方法：培养乳大鼠心肌细胞,随机分为6组,正常对照组、H₂O₂模型组、黄芪甲苷(20、40、80、100 mg/L)组,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活力,检测黄芪甲苷预干预对H₂O₂诱导心肌细胞凋亡的影响;各组分别采用免疫组化法和Western-blotting法检测黄芪甲苷预处理对心肌细胞Hsp-70、Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响。结果：与正常对照组相比较,模型组LDH活力明显提高(P<0.01),SOD活力明显降低(P<0.01);黄芪甲苷不同浓度组与H₂O₂模型组比较,LDH活力明显降低(P<0.05或P<0.01),SOD活力明显提高(P<0.01),且随药物浓度的增加,SOD活力也随着增高,LDH活力也随着降...     

参莲提取物通过调控Nrf2/Keap1信号通路减轻TNF-α诱导的ECV304损伤

探讨参莲提取物对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的血管内皮细胞(ECV304)损伤的干预作用及可能的作用机制。以TNF-α诱导ECV304细胞损伤模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存活力;采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;生化法和酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;通过Western blot法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)、血红素加氧酶1(HO-1)、半胱天冬酶3(caspase-3)、半胱天冬酶9(caspase-9)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。结果显示,与对照组相比,50μg·L~(-1)的TNF-α能够导致ECV304细胞活力显著下降(P0.01),引起ECV304细胞ROS产生增加,SOD活性降低,MDA、NO、ET-1、IL-1β含量显著增加(P0.01),Keap1、caspase-9、Bax蛋白表达显著上调,NQO1、Bcl-2蛋白表达显著降低(P0.05);与模型组比较,参莲提取物可以提高ECV304细胞存活率,抑制细胞ROS产生,提高SOD活性,降低MDA、NO、ET-1、IL-1β含量(P0.01或P0.05),下调Keap1、caspase-3、caspase-9、Bax蛋白表达水平,提高Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2蛋白表达(P0.01或P0.05)。提示参莲提取物可能通过调控Nrf2/Keap1信号通路降低TNF-α诱导的ECV304细胞氧化应激损伤,减少炎症反应和细胞凋亡。     

基于Nrf2/BNIP3信号通路探讨苓桂术甘汤含药血清对心肌细胞线粒体氧化应激的影响

探讨苓桂术甘汤(Linggui Zhugan Decotion)含药血清通过调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/B淋巴细胞瘤-2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP3)信号通路对心肌细胞线粒体氧化应激的影响。制备苓桂术甘汤含药血清与空白血清,构建体外H₂O₂诱导H9c2心肌细胞氧化应激模型,将H9c2细胞分为正常对照组、H₂O₂模型组、20%空白血清组、20%苓桂术甘汤含药血清组。H9c2细胞按照分组分别预处理12 h后,加入100μmol·L^-1 H₂O₂继续培养6 h, DCFH-DA检测各组细胞内活性氧(ROS)的水平,calcein AM荧光探针检测线粒体通透性转换孔道(mPTP)的开放程度,Western blot法检测各组细胞中细胞质细胞色素C(CytC)、线粒体CytC、细胞质及细胞核中Nrf2的表达以及BNIP3的变化水平。siRNA-Nrf2转染制备Nrf2沉默的H9c2细胞,观察Nrf2沉默后苓桂术甘汤含药血清...     

人参皂苷Rg1对心肌细胞氧化应激损伤的抑制作用

目的 通过构建H₂O₂诱导的H9c2细胞氧化应激模型,观察人参皂苷Rg₁对氧化应激的抑制作用,并探讨mi R-499c是否参与人参皂苷Rg₁抑制氧化应激的作用机制。方法 采用600μmol/L的H₂O₂诱导H9c2细胞氧化应激模型,给予人参皂苷Rg₁预处理24 h,检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化;采用Western blotting检测凋亡相关蛋白表达。采用Lipofiter 3.0将miR-499c转染至H9c2细胞再制备H₂O₂诱导的氧化应激模型,给予人参皂苷Rg     

基于SIRT1/FoxO1通路探究小檗碱抑制卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的调节机制

目的：通过观察小檗碱(BBR)对卵巢颗粒细胞衰老的影响,探究其保护作用及调节机制。方法：应用H₂O₂诱导建立人卵巢颗粒样肿瘤(KGN)细胞衰老模型;设置空白组、模型组、BBR高剂量(1μmol·L^-1)组和BBR低剂量(0.5μmol·L^-1)组,模型组与BBR组加入浓度为10μmol·L^-1 H₂O₂,孵育40 min。通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)分析检测BBR对KGN细胞增殖的影响;通过β-半乳糖苷酶染色检测BBR对KGN细胞衰老状态的影响;应用流式细胞术检测BBR对KGN细胞凋亡和ROS含量的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BBR对KGN细胞抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)比值、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、叉头框转录因子O1(FoxO1)及过氧化氢酶(CAT)mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BB...     

芍药甘草复合精油对过氧化氢诱导鼠嗜铬细胞瘤细胞氧化损伤的保护作用研究

目的：探讨芍药甘草复合精油(SGO)对过氧化氢(H₂O₂)诱导鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞氧化损伤的保护机制。方法：采用200μmol/L的H₂O₂处理PC12细胞建立氧化应激损伤模型。将PC12细胞分为对照组、模型组(200μmol/L H₂O₂)、SGO低浓度组(1μmol/L SGO+200μmol/L H₂O₂)、SGO高浓度组(10μmol/L SGO+200μmol/L H₂O₂)。细胞处理结束后,采用CCK-8法检测细胞存活率;试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印迹法检测细胞中剪切化半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶-3 (C-Caspase3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果：与对照组比较,模型组的细胞存活率、GSH-...     

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??OBJECTIVE To observe the effect of Biochanin A (Bio A) on rat hippocampal neurons injuries impaired by H₂O₂ and Bcl-2, Bax and caspase-3 protein expression. METHODS Hippocampal neurons of newly born rat were cultured in vivo and were injured by H₂O₂. Different concentration of Bio A on cell viability was measured by CCK-8; cell apoptosis rate was tested by flow cytometry analysis; Bcl-2, Bax and caspase-3 protein expression were tested by Western blot method. RESULTS Compared with the model group, Bio A significantly improved hippocampal neurons cell viability and inhibited cell apoptosis and necrosis. In addition, Bio A clearly enhanced the protein expression of Bcl-2 and decrease the protein expression of Bax and caspase-3. CONCLUSION The protective effect of Bio A on rat hippocampal neurons injuries impaired by H₂O₂ may be related to the inhibition of hippocampal neurons apoptosis. The mechanism of Bio A against cell apoptosis may involve the increased Bcl-2 protein expression and reduced Bax,caspase-3 protein expression.     

红景天苷通过Nrf2-HO-1保护Aβ25-35诱导的原代皮层神经元损伤

目的探讨红景天苷对Aβ25-35诱导的皮层神经元损伤的保护作用。方法:随机将培养成熟的原代皮层神经分为5组:正常对照组、模型组、红景天苷5μmol·L^-1组、红景天苷10μmol·L^-1组、激动剂组。后3组分别使用5μmol·L^-1红景天苷、10μmol·L^-1红景天苷、10μmol·L^-1TBHQ培养24 h,余组正常换液。然后除正常对照组,将余组更换为终浓度为20μmol·L^-1Aβ25-35并维持各药物组终浓度的培养液,24 h后使用CCK8试剂盒测细胞活性、LDH试剂盒测细胞LDH释放量、免疫组化和Western Blot测Nrf2、HO-1、Caspase-3、Bax、Bcl-2等蛋白的表达水平。结果红景天苷5μmol·L^-1组、红景天苷10μmol·L^-1组、TBHQ组都能够提高Aβ25-35损伤后细胞的活性、减少LDH的释放改善细胞损伤,红景天苷10μmol·L^-1组、TBHQ组都能够增加Nrf2、HO-1的表达水平,下调Caspase-3蛋白表达水平、上调Bcl-2/Bax的蛋白表达水平。锌原卟啉ZnPP可逆转红景天苷及TBHQ对Aβ25-35诱导的皮层神经元的保护作用。结论红景天苷对Aβ25-35诱导的皮层神经元细胞的保护作用,可能主要通过改善凋亡相关蛋白、上调Nrf2/HO-1信号通路表达实现。     

三才连梅颗粒通过Nrf2/HO-1信号通路对糖尿病小鼠生精功能的影响

目的:探讨三才连梅颗粒通过核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路影响糖尿病小鼠生精功能的作用机制。方法:将2型糖尿病小鼠分为正常对照组、糖尿病模型组、三才连梅组、二甲双胍组。给药4周后,取小鼠附睾检测精子参数;透射电镜及HE染色观察睾丸病理改变,TUNEL染色检测睾丸生精细胞凋亡情况;qPCR及Western blot检测睾丸组织Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、P62的表达水平;ELISA检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的表达水平。结果:与糖尿病模型组比较,三才连梅组能显著提高大鼠精子密度、活力及存活率,上调糖尿病小鼠睾丸组织Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平,增加SOD生成,减少MDA的生成,下调自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、P62、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达(均P<0.05)。与糖尿病模型组比较,三才连梅组可显著抑制生精细胞过度自噬,减轻生精细胞凋亡。结论:三才连梅颗粒能有效提高...     

栝楼桂枝颗粒激活Nrf2信号通路减轻脑缺血再灌注损伤大鼠氧化应激损伤作用

目的:探讨栝楼桂枝颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠氧化应激的保护作用及分子机制。方法:建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,栝楼桂枝颗粒灌胃给药后,核磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)检测大鼠脑梗死面积,化学荧光法测定脑组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,硫代巴比妥酸法(TBA)测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,水溶性四唑蓝法(WST)测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,紫外法测定过氧化氢酶(catalase,CAT)和比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力;蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR法(Realtime PCR)分别检测脑组织中核转录因子-E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2),细胞质中血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1),醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]及Kelch样ECH联合蛋白1(Kelch-like ECHassociated protein1,Keap1)的蛋白表达和mRNA相对含量。结果:栝楼桂枝颗粒能够明显减小大鼠脑梗死面积,减少ROS和MDA的产生(P0.01),增加SOD,CAT和GSH-Px活力(P0.01)。此外,栝楼桂枝颗粒能够上调脑组织中Nrf2,HO-1,NQO1及Keap1的表达。结论:栝楼桂枝颗粒可能通过上调Nrf2信号通路,从而抑制脑缺血再灌注损伤引起的氧化应激反应。     

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??OBJECTIVE To study the effect mechanism of tempol against hypobaric hypoxia-induced heart damage in mice. METHODS One hundred and ten BALB/c mice were randomly divided into normal control group, hypoxia model group, acetazolamide group and tempol group. After single intraperitoneal injection for 30 min, the mice were exposed to a simulated high altitude of 8 000 m for 12 h. After hypoxic exposure, blood was collected from the eye sockets and separated into serum to measure the activities of lactic dehydrogenase (LDH)and creatine kinase (CK). Then the mice were sacrificed and the content of H₂O₂ and malondialdehyde (MDA) as well as ATPase and antioxidant enzyme activity in heart were determined. HIF-1, VEGF, Nrf2, and HO-1 were detected by immunohistochemistry. RESULTS Compared with normal control group, the activities of plasma CK and LDH in hypoxia model group significantly increased. In addition, the content of H₂O₂ and MDA in hypoxia model group significantly increased while ATPase and antioxidant enzymes activity markedly decreased compared with the normal control group. Moreover, the expression of HIF-1??, VEGF, Nrf2 and HO-1 increased. Prior administration of tempol effectively decreased the activities of plasma CK and LDH as well as the content of H₂O₂ and MDA in heart tissue. Tempol could increase ATPase and antioxidant enzyme activities and decreased the expression of HIF-1?? and VEGF compared with hypoxia model, while it could further increase the expression of Nrf2 and HO-1. CONCLUSION Tempol has protective effect on heart injury induced by hypobaric hypoxia in mice. Its mechanism may be attributed to the amelioration of energy metabolism, scavenging free radical, improvement of antioxidant enzyme activity the activation of the Nrf2/HO-1 pathway as well as alleviation of oxidative stress.     

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??OBJECTIVE To investigate the effects of the primary bioactive component diallyltrisulfide (DATS) contained in garlic on the activation of hepatic stellate cells (HSCs) induced by oxidative stress in vitro. METHODS Rat HSCs were cultured in vitro, and MTT assay was used to screen the effective dose of hydrogen peroxide (H₂O₂) for stimulating HSC proliferation. Then lactate dehydrogenase assay was used to examine the toxic effect of DATS on HSCs, and MTT assay to evaluate the anti-proliferative effects of DATS at non-toxic concentrations on HSCs. Flow cytometry was used to determine DATS effects on cell cycle. Hoechst33258 staining and flow cytometry were used to analyze apoptosis. Western blot assays were used to examine the expression of relevant proteins and fibrotic markers. RESULTS H₂O₂ at 5 ??mol??L^-1 significantly promoted HSC proliferation, and this concentration was selected to establish the oxidative stress-induced HSC activation model. MTT assay showed that DATS dose-dependently inhibited HSC proliferation in the presence of H₂O₂. DATS arrested the H₂O₂-treated HSC at G₂/M check point associated with downregulation of Cyclin B1 and CDK1. DATS also dose-dependently stimulated H₂O₂-treated HSCs to undergo apoptosis, which was associated with modulation of apoptosis-related molecules including Bax, Bcl-2, Caspase-9 and Caspase-3. Furthermore, DATS was found to reduce the protein abundance of a series of fibrotic marker proteins. CONCLUSION DATS effectively inhibits oxidative stress-induced HSC activation in vitro demonstrated by suppressed proliferation, arrests cell cycle, increases apoptosis and reduces fibrotic marker expression. These findings provide novel insights into DATS as a potential antifibrotic candidate for further development.     

清脂化瘀颗粒调控Keap-1/Nrf2/ARE介导的氧化损伤抗动脉粥样硬化的作用及机制研究

目的:基于对动脉粥样硬化(AS)防治,观察清脂化瘀颗粒对动脉粥样硬化的防治作用及机制.方法:将30只载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组、清脂化瘀颗粒组.10只C57BL/6J雄性小鼠作为对照组.除对照组外,各组给予高脂饲料喂养8周复制AS模型,后各组小鼠分别给予对应药物干预4周.分离各...     

基于 Keap1-Nrf2-ARE 通路探讨加味天雄散调节弱精症大鼠精子活力的作用机制

目的基于Kelch样相关蛋白1-核因子E2相关因子-抗氧化反应元件信号通路(Keap1-Nrf2-ARE)及下游Maf、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、血红素加氧酶(HO-1)蛋白表达探讨加味天雄散调节弱精症大鼠精子活力的作用机制。方法清洁级SD雄性大鼠60只随机分为对照组、模型组、安慰剂组、治疗组,每组15只。采用腺嘌呤[100 mg/(100 g·d)]灌胃10天造模,对照组灌胃等量生理盐水。造模结束后治疗组予以加味天雄散中药灌服,安慰剂组给予等量生理盐水,连续灌胃30天。RT-PCR检测附睾组织Keap1、Nrf2 m RNA表达;Western Blot检测附睾组织Keap1、Nrf2、Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达;检测附睾组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。结果与对照组比较,模型组Keap1 m RNA及蛋白表达、MDA水平升高(P<0.01),Nrf2m RNA、Nrf2、Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达及SOD水平降低(P<0.01)。与模型组和安慰剂组比较,治疗组Keap1m RNA及蛋白表达、MDA水平降低(P<0.01),Nrf2 m RNA、Nrf2、Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达及SOD水平升高(P<0.01)。结论加味天雄散能够通过调节弱精子症大鼠精子Keap1-Nrf2-ARE通路及下游Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达,调控氧化应激反应,从而改善精子活力。     

小柴胡颗粒激活Nrf2通路抗TAA致大鼠急性肝损伤的机制探讨

目的:观察小柴胡颗粒对硫代乙酰胺(TAA)致大鼠急性肝损伤(ALI)的治疗作用,探讨核转录因子(NF)-E2相关因子2(Nrf2)抗氧化损伤通路在其中的作用。方法:SD大鼠随机分为空白组,模型组,小柴胡颗粒低、中、高剂量组(1,2,4 g·kg-1),大鼠给予250 mg·kg-1TAA腹腔注射2 d制备肝损伤模型,从第3天各组分别给予等量双蒸水和不同剂量小柴胡颗粒,灌胃2周。末次给药后24 h取材,肝组织行苏木素-伊红(HE)染色;比色法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA)水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2通路相关mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2通路相关蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组ALT,AST,MDA水平显著增高,T-SOD活性明显降低(P 0. 05,P 0. 01),病理学呈现大片炎性浸润表现,肝脏组织Nrf2,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),醌氧化还原酶1(NQO1),血红素加氧酶-1(HO-1),谷氨酸半胱氨酸合成酶催化亚基(GCLC),谷氨酸半胱氨酸合成酶调节亚基(GCLM) mRNA及蛋白表达水平均明显下降(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,小柴胡颗粒各剂量组ALT,AST,MDA水平均明显降低,T-SOD活性明显升高(P 0. 05,P 0. 01),病理结果示大鼠肝脏病变范围与严重程度均有不同程度改善,肝脏组织Nrf2,Keap1,NQO1,HO-1,GCLC,GCLM的mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:小柴胡颗粒可能通过上调Nrf2信号通路上下游分子的表达,对TAA致急性肝损伤大鼠起到治疗作用。